Aide à la validation des méthodes en Toxicologie et Suivi ...

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  • Annales de Toxicologie Analytique, vol. xvn, n 3, supplment 1, 2005

    Aide la validation des mthodes en Toxicologie et Suivi Thrapeutique Pharmacologique

    Help for validation of analytical procedures in Toxicology and Therapeutic Drug Monitoring

    Groupe de travail "Accrditation" de la Socit Franaise de Toxicologie Analytique

    Coordonnateur: Anne GRUSON, Laboratoire de Biochimie-Toxicologie, Centre Hospitalier, 57, avenue Winston Churchill- 62022 ARRAS Cedex - Tl: 03 21 211085 - E-mail: anne.gruson@ch-arras.fr

    Membres du groupe de travail: Bernard DINGEON, Marie-Franoise DREYFUSS, Yvan GAILLARD, Anne LE BOUIL, Michel LHERMITTE, Stphanie MAZZEGA, Mustapha MOULSMA, Gilbert PPIN, Martine PERRIN, Jocelyne PLESSE, Olivier ROUSSEL, Marie-Thrse THEVENGr, lisabeth VINNER, Marc DEVEAUX (membre associ)

    (Accept pour publication le 31 octobre 2005)

    SOMMAIRE 1. Introduction IT. tat des lieux - Contexte rglementaire et normatif m. Quelles sont les informations pertinentes connatre ? IV. Choix pralable la vrification des critres de performance et limites d'acceptabilit de la mthode,

    des vrifications exprimentales, des vrifications bibliographiques V. Vrification d'une mthode d'analyse quantitative - Contenu du dossier

    V.1 Vrification initiale d'une mthode quantitative V.2 Confirmation des performances en routine

    VI: Vrification d'une mthode d'analyse qualitative - Contenu du dossier VI. 1 Vrification initiale d'une mthode qualitative VI. 2 Confirmation des performances en routine

    VIT. Vrification d'une mthode d'analyse assimilable au quantitatif rsultat qualitatif - contenu du dossier VII. 1 Vrification initiale d'une mthode assimilable au quantitatif VII. 2 Confirmation des performances en routine

    vm. Matrise de la documentation - Mthodologie IX. Exemples mthodologiques

    IX.1 Fidlit IX.2 Justesse (biais) IX.3 Contamination IX.4 Limite de dtection et limite de quantification IX.5 Linarit IX.6 Stabilit IX.7 Corrlation de mthodes

    X. Terminologie - Autres dfinitions XI. Bibliographie

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  • Annales de Toxicologie Analytique, vol. xvn, n 3, supplment 1, 2005

    1. Introduction Ce document a pour but d'expliciter ce qui est entendu par les aspects de "validation de mthode" dans le cadre pr-cis des laboratoires engags ou souhaitant s'engager dans une dmarche de qualit dans le domaine des analyses en Toxicologie et Suivi Thrapeutique Pharmacologique, et notamment dans une dmarche d'accrditation COFRAC selon le programme 168. Dans ce domaine, la problmatique de la "validation" repose sur le fait que les mthodes d'analyses ne sont pas issues de normes publies. Cette "validation" s'inscrit alors dans une vrification des perfor-mances annonces par le fabricant ou souhaites par le laboratoire, lors de la mise en application des mthodes d'analyses dans son laboratoire. Ceci afin de lui apporter confirmation et preuve de la validit des rsultats rendus (phase de "qualification"), par rapport ses propres besoins. Cette validation est prendre en terme de matrise du processus analytique, au niveau initial.

    La validation d'une mthode devra s'envisager en fonction des diffrents contextes auxquels sera confront le bio-logiste ou le responsable technique. "La validation est toujours un quilibre entre les cots, les risques et les possi-bilits techniques" (extrait de l'ISO/CEl 17025, 5.4.5.3 note 3, et NF EN ISO 15189), et le temps. On entend par validation, ''[ ... ] la confirmation par examen et apport de preuves objectives du fait-que les prescriptions particulires en vue d'une utilisation dtermine sont remplies." (extrait de l'ISO/CEl 17025, 5.4.5.1).

    Au pralable, le biologiste ou le responsable technique devra lire attentivement le dossier des fournisseurs (notices, fiches techniques, rfrences bibliographiques, ... ). Il devra valuer et apprcier ces informations la lueur de recommandations ou de textes rglementaires, des critres de performance proposs par des socits savantes, des attentes du prescripteur ou du requrant.

    Dans un deuxime temps la validation sera effectue. Le champ et la profondeur de cette valuation dpendront des circonstances et de chaque cas particulier. Cette validation devra tre initiale, puis se continuer dans le temps (chan-gement de lots de ractifs [si effet de lot connu], extensions analytiques, maintenance lourde, ... ). Dans certains cas cette validation sera une confirmation des performances d'une mthode dj en cours d'utilisation.

    Les critres fondamentaux de l'valuation de la mthode (exemple dossier de marquage CE) sont en principe dter-mins par le fabricant. Si les coffrets ractifs et systmes sont utiliss strictement dans les conditions prconises par le fabricant, les mthodes qui y font appel sont prises en compte comme des mthodes normalises. Dans ce cas, le laboratoire doit uniquement valider (vrifier) la mise en application dans son environnement propre par rapport des critres et des limites acceptables (spcifications) qu'il s'est fix, pour correspondre aux besoins de ses clients. Il n'est en effet pas demand aux laboratoires d'effectuer de nouveau l'valuation des mthodes ou des automates, tudes qui ont dj t ralises par le fournisseur ou le fabricant, qui eux ne connaissent pas ces besoins.

    Notel: De la dfinition de la validation dcoule la mthodologie de la conduite d'un processus de validation. "Les prescriptions particulires" identifient les caractristiques, par exemple les spcifications pralablement dfinies sur certains critres galement choisis, conditions qui doivent tre remplies pour dclarer la mthode valide.

    Note 2 : Ce document a t labor partir du guide de validation des mthodes en biologie mdicale: document LAB GTA 04 (juin 2(04).

    " II. Etat des lieux - Contexte rglementaire et normatif Ce guide sert tablir un protocole d'valuation des mthodes utilises dans un laboratoire. Cette valuation per-met de constituer le dossier de validation des mthodes utilises dans le laboratoire.

    Cette validation est une exigence de la norme NF EN ISO/CEl 17025 dans son paragraphe 5.4 traitant des "Mthodes d'essai et d'talonnage et validation des mthodes", et plus prcisment au 5.4.5 Validation des mthodes, qui est dfinie au 5.4.5.1 : "La validation est la confirmation par examen et l'apport de preuves objec-tives du fait que les prescriptions particulires en vue d'une utilisation prvue dtermine sont remplies."

    Le paragraphe 5.4.2 indique que: "Lorsque le client ne spcifie pas la mthode utiliser, le laboratoire doit slec-tionner des mthodes appropries qui ont t publies dans des normes internationales, rgionales ou nationales,

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    par des organisations techniques de renom ou dans des textes ou revues scientifiques spcialiss, ou spcifies par le fabricant de l'quipement. Des mthodes dveloppes par le laboratoire ou des mthodes adoptes par le labo-ratoire peuvent galement tre employes si elles conviennent l'usage prvu et qu'elles ont t valides. Le client doit tre inform de la mthode choisie. Le laboratoire doit confirmer qu'il peut correctement appliquer des mthodes normalises avant de les mettre en uvre pour des essais ou des talonnages. En cas de changement de la mthode normalise, la confirmation doit tre rpte."

    Cette exigence figure dans le Guide de Bonnes Excutions des Analyses de Biologie Mdicale (Arrt du 26 novembre1999 relatif la bonne excution des analyses de biologie mdicales) : Dfinition des termes Evaluation ( 2.6), Qualification ( 2.11), Transfrabilit ( 2.13), Valeurs de rfrence (2.14), Validation ( 2.15) ; dans le l.lc concernant les installations, l'quipement, l'instrumentation, les produits fongibles et les ractifs " ... s'assurer que les installations, l'quipement et l'instrumentation du laboratoire sont fonctionnels. "

    Dans la nouvelle norme ISO 15189, la validation est retrouve au niveau du 5.3.2, 5.3.4 et son point. h) mais surtout dans le paragraphe 5.5.1 : "Le laboratoire doit utiliser des procdures analytiques, incluant celle de slec-tion et d'aliquotage d'chantillons, qui correspondent aux besoins des utilisateurs des prestations de laboratoire et qui conviennent chaque type d'analyse. Les procdures analytiques conseilles sont celles qui ont t publies dans des manuels bien tablis et faisant autorit, dans des textes et des journaux revus par des experts ou des recom-mandations rgionales, nationales ou internationales. Si des procdures internes sont utilises, elles doivent tre valides de manire approprie pour l'utilisation prvue et parfaitement documentes.", et le paragraphe 5.5.2 : "Le laboratoire doit utiliser uniquement des procdures valides pour s'assurer qu'elles conviennent l'utilisation prvue. Les validations doivent tre aussi approfondies que ncessaires pour rpondre aux besoins de l'application ou du domaine d'application concern(e). Le laboratoire doit enregistrer les rsultats obtenus et la procdure uti-lise pour la validation. Les mthodes et les procdures slectionnes doivent tre values et donner des rsultats satisfaisants avant d'tre utilises pour les analyses mdicales. Une revue des procdures par le directeur du laboratoire ou une personne dsigne doit tre ralise l'origine intervalles dfinis. Ces revues sont gnralement effectues une fois par an. Ces revues doivent tre documentes." Le paragraphe suivant ( 5.5.3) dveloppe cet aspect de validation en prci-sant "[ ... ] Les performances et l'aptitude l'emploi prvu de chaque nouvelle version des trousses de ractifs prts l'emploi prsentant des modifications importantes en termes de ractifs ou de procdure doivent tre vrifies. Tout changement de la procdure doit tre dat et faire l'objet d'une autorisation comme pour les autres proc-dures."

    Le paragraphe 5.3.2 quant lui indique que "Il doit tre dmontr (lors de l'installation et au cours de l'utilisation courante) que le matriel est capable d'atteindre les performances requises et qu'il est conforme aux spcifications se rapportant aux analyses.

    La direction du laboratoire doit laborer un programme de surveillance rgulire permettant de dmontrer l'ad-quation de l'talonnage et du fonctionnement des instruments, des ractifs, et des systmes analytiques. Elle doit galement instaurer un programme de maintenance prventive document et enregistr [ ... ] respectant, au mini-mum, les recommandations dufabricant."

    Note: Cette nouvelle norme ISO 15189 se situe dans le prolongement des travaux mens par EC4 (European , Communities Confederation of Clinical Chemistry) publis dans l'article : Essential Criteria for Quality Systems of

    Medical Laboratories (Eur J Clin Chem Clin Biochem 1997 ; 35(2) : 123-132 1997 by Walter de Gruyter Berlin New York). Cet article est consultable partir du site: http://www.uni-oldenburg.de/ec4/ec4qua1.htm#ECText.

    Outre la comptence du biologiste ou du responsable technique, l'utilisation et la gestion correcte des Contrles de Qualit (CQI, CQE), la validation permet d'assurer la qualit de la prestation d'analyse et du rsultat. Cette valida-tion sera mise profit pour estimer les incertitudes des mesures du laboratoire, notion prsente dans le GBEA : " 4. Expression des rsultats et comptes rendus d'analyses, 4.1. Expression des rsultats: L'expression des rsultats doit tre prcise et sans quivoque. Les valeurs de rfrence doivent tre indiques. La mthode d'analyse et/ou les ractifs utilis( e)( s) doivent tre mentionn( e)( s) chaque fois qu'ils peuvent influer sur l'expression du rsultat ainsi que lorsque la rglementation l'exige. Pour les rsultats quantitatifs, le cas chant, les performances analytiques de la mthode peuvent tre indiques. Les units du systme international (SI) doivent tre utilises quand elles existent."

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  • Annales de Toxicologie Analytique, vol. xvn, nO 3, supplment 1,2005

    Cette estimation de l'incertitude de mesure se retrouve dans la norme ISO/CEl 17025 au 5.4.6 "Estimation de l'in-certitude de mesure", avec au 5.4.6.2 "Les laboratoires d'essais doivent aussi possder et appliquer des proc-dures pour estimer l'incertitude de mesure. Dans certains cas, la nature de la mthode d'essai exclut un calcul rigoureux, mtrologiquement et statistiquement valable, de l'incertitude de mesure. Dans de tels cas, le laboratoire doit au moins tenter d'identifier toutes les composantes de l'incertitude etfaire une estimation raisonnable, tout en assurant que la manire d'en rendre compte ne donne pas une impression errone de l'incertitude. Une estimation raisonnable doit se baser sur une connaissance de la performance de la mthode et sur le domaine de la mesure et faire appel, par exemple, l'exprience acquise et aux donnes de validation antrieures."

    Cette approche des incertitudes est aussi une exigence de la nouvelle norme ISO 15189. Dans le paragraphe traitant de la validation, 5.5.3, son point h) indique "les sources potentielles de variation des rsultats." En outre, dans le 5.6.2, il est indiqu: "Le laboratoire doit dterminer l'incertitude des rsultats, dans le cas o cela est pertinent et possible. Toutes les composantes importantes de l'incertitude doivent tre prises en compte. Les sources contri-buant l'incertitude peuvent inclure l'chantillonnage, la prparation des chantillons, la slection des aliquotes d'chantillon, les calibrateurs, les matriaux de rfrence, les grandeurs d'entre, l'quipement utilis, les condi-tions exprimentales, l'tat de l'chantillon et les changements de manipulateurs."

    Le biologiste, ou le responsable technique, doit pouvoir mettre disposition du demandeur d'analyses, en cas de besoin, une approche de l'valuation des incertitudes de mesure.

    III. Quelles sont les informations pertinentes connatre ? D'une manire gnrale, une mthode d'analyse prsente plusieurs caractristiques essentielles que le laboratoire se doit de connatre. La connaissance de ces paramtres peut tre acquise par la bibliographie et/ou par l'exprimenta-tion sur site.

    Schmatiquement, on distinguera trois types de mthodes d'analyse que l'on sera amen traiter diffremment:

    1. Les analyses de type quantitatif vrai:

    Elles fournissent un rsultat chiffr, sur une chelle continue dont les limites basses et hautes sont connues, en rela-tion directe avec une quantit ou une activit donne de l'analyte mesurer.

    Ex : Dosage de mdicaments dans le cadre du Suivi Thrapeutique Pharmacologique et dosage d'autres xnobio-tiques en Toxicologie. Analyses ralises par mthodes immunologiques et/ou chromatographiques.

    2. Les analyses de type qualitatif:

    Le rsultat de ce type d'analyse n'apporte pas d'information sur la quantit de l'analyte, mais seulement sur sa pr-sence ou sa non dtection (positif ou non dtect).

    Ex : Dpistage de xnobiotiques par mthodes chromatographiques. Les pics des chromatogrammes obtenus sont identifis par les temps de rtention et par les spectres UV et/ou de masse. Ils peuvent tre compars une biblio-thque prdfinie de spectres.

    3. Les analyses assimilables des analyses quantitatives :

    Dans ce cadre seront regroupes des analyses fournissant un rsultat de type qualitatif, extrapol...

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