Annales de Toxicologie Analytique, vol. XVII, n° 3 ... ?· des vérifications expérimentales, des…

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    16-Sep-2018

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<ul><li><p>1</p><p>Annales de Toxicologie Analytique, vol. XVII, n 3, supplment 1, 2005</p><p>SOMMAIREI. IntroductionII. tat des lieux - Contexte rglementaire et normatifIII. Quelles sont les informations pertinentes connatre ?IV. Choix pralable la vrification des critres de performance et limites dacceptabilit de la mthode, </p><p>des vrifications exprimentales, des vrifications bibliographiquesV. Vrification dune mthode danalyse quantitative - Contenu du dossier</p><p>V.1 Vrification initiale dune mthode quantitativeV.2 Confirmation des performances en routine</p><p>VI. Vrification dune mthode danalyse qualitative - Contenu du dossierVI. 1 Vrification initiale dune mthode qualitative VI. 2 Confirmation des performances en routine</p><p>VII. Vrification dune mthode danalyse assimilable au quantitatif rsultat qualitatif - contenu du dossierVII. 1 Vrification initiale dune mthode assimilable au quantitatifVII. 2 Confirmation des performances en routine</p><p>VIII. Matrise de la documentation - MthodologieIX. Exemples mthodologiques</p><p>IX.1 FidlitIX.2 Justesse (biais)IX.3 ContaminationIX.4 Limite de dtection et limite de quantificationIX.5 LinaritIX.6 StabilitIX.7 Corrlation de mthodes</p><p>X. Terminologie - Autres dfinitionsXI. Bibliographie</p><p>Aide la validation des mthodes en Toxicologieet Suivi Thrapeutique Pharmacologique</p><p>Help for validation of analytical procedures inToxicology and Therapeutic Drug Monitoring</p><p>Groupe de travail Accrditation de la Socit Franaise de Toxicologie Analytique</p><p>Coordonnateur : Anne GRUSON, Laboratoire de Biochimie-Toxicologie, Centre Hospitalier,57, avenue Winston Churchill - 62022 ARRAS Cedex - Tl : 03 21 21 10 85 - E-mail : anne.gruson@ch-arras.fr</p><p>Membres du groupe de travail : Bernard DINGEON, Marie-Franoise DREYFUSS, Yvan GAILLARD, Anne LE BOUIL,Michel LHERMITTE, Stphanie MAZZEGA, Mustapha MOULSMA, Gilbert PPIN, Martine PERRIN, JocelynePLESSE, Olivier ROUSSEL, Marie-Thrse THEVENOT, lisabeth VINNER, Marc DEVEAUX (membre associ)</p><p>(Accept pour publication le 31 octobre 2005)</p></li><li><p>2</p><p>I. IntroductionCe document a pour but dexpliciter ce qui est entendu par les aspects de validation de mthode dans le cadre pr-cis des laboratoires engags ou souhaitant sengager dans une dmarche de qualit dans le domaine des analyses enToxicologie et Suivi Thrapeutique Pharmacologique, et notamment dans une dmarche daccrditation COFRACselon le programme 168. Dans ce domaine, la problmatique de la validation repose sur le fait que les mthodesdanalyses ne sont pas issues de normes publies. Cette validation sinscrit alors dans une vrification des perfor-mances annonces par le fabricant ou souhaites par le laboratoire, lors de la mise en application des mthodesdanalyses dans son laboratoire. Ceci afin de lui apporter confirmation et preuve de la validit des rsultats rendus(phase de qualification), par rapport ses propres besoins. Cette validation est prendre en terme de matrise duprocessus analytique, au niveau initial.</p><p>La validation dune mthode devra senvisager en fonction des diffrents contextes auxquels sera confront le bio-logiste ou le responsable technique. La validation est toujours un quilibre entre les cots, les risques et les possi-bilits techniques (extrait de lISO/CEI 17025, 5.4.5.3 note 3, et NF EN ISO 15189), et le temps. On entend parvalidation, [...] la confirmation par examen et apport de preuves objectives du fait que les prescriptions particuliresen vue dune utilisation dtermine sont remplies. (extrait de lISO/CEI 17025, 5.4.5.1).</p><p>Au pralable, le biologiste ou le responsable technique devra lire attentivement le dossier des fournisseurs (notices,fiches techniques, rfrences bibliographiques, ...). Il devra valuer et apprcier ces informations la lueur derecommandations ou de textes rglementaires, des critres de performance proposs par des socits savantes, desattentes du prescripteur ou du requrant.</p><p>Dans un deuxime temps la validation sera effectue. Le champ et la profondeur de cette valuation dpendront descirconstances et de chaque cas particulier. Cette validation devra tre initiale, puis se continuer dans le temps (chan-gement de lots de ractifs [si effet de lot connu], extensions analytiques, maintenance lourde,...). Dans certains cascette validation sera une confirmation des performances dune mthode dj en cours dutilisation. </p><p>Les critres fondamentaux de lvaluation de la mthode (exemple dossier de marquage CE) sont en principe dter-mins par le fabricant. Si les coffrets ractifs et systmes sont utiliss strictement dans les conditions prconisespar le fabricant, les mthodes qui y font appel sont prises en compte comme des mthodes normalises. Dans ce cas,le laboratoire doit uniquement valider (vrifier) la mise en application dans son environnement propre par rapport des critres et des limites acceptables (spcifications) quil sest fix, pour correspondre aux besoins de ses clients.Il nest en effet pas demand aux laboratoires deffectuer de nouveau lvaluation des mthodes ou des automates,tudes qui ont dj t ralises par le fournisseur ou le fabricant, qui eux ne connaissent pas ces besoins.</p><p>Note 1 : De la dfinition de la validation dcoule la mthodologie de la conduite dun processus de validation. Lesprescriptions particulires identifient les caractristiques, par exemple les spcifications pralablement dfinies surcertains critres galement choisis, conditions qui doivent tre remplies pour dclarer la mthode valide.</p><p>Note 2 : Ce document a t labor partir du guide de validation des mthodes en biologie mdicale : documentLAB GTA 04 (juin 2004).</p><p>II. tat des lieux - Contexte rglementaire et normatifCe guide sert tablir un protocole dvaluation des mthodes utilises dans un laboratoire. Cette valuation per-met de constituer le dossier de validation des mthodes utilises dans le laboratoire.</p><p>Cette validation est une exigence de la norme NF EN ISO/CEI 17025 dans son paragraphe 5.4 traitant desMthodes dessai et dtalonnage et validation des mthodes, et plus prcisment au 5.4.5 Validation desmthodes, qui est dfinie au 5.4.5.1 : La validation est la confirmation par examen et lapport de preuves objec-tives du fait que les prescriptions particulires en vue dune utilisation prvue dtermine sont remplies.</p><p>Le paragraphe 5.4.2 indique que : Lorsque le client ne spcifie pas la mthode utiliser, le laboratoire doit slec-tionner des mthodes appropries qui ont t publies dans des normes internationales, rgionales ou nationales,</p><p>Annales de Toxicologie Analytique, vol. XVII, n 3, supplment 1, 2005</p></li><li><p>par des organisations techniques de renom ou dans des textes ou revues scientifiques spcialiss, ou spcifies parle fabricant de lquipement. Des mthodes dveloppes par le laboratoire ou des mthodes adoptes par le labo-ratoire peuvent galement tre employes si elles conviennent lusage prvu et quelles ont t valides. Le clientdoit tre inform de la mthode choisie. Le laboratoire doit confirmer quil peut correctement appliquer desmthodes normalises avant de les mettre en uvre pour des essais ou des talonnages. En cas de changement dela mthode normalise, la confirmation doit tre rpte.</p><p>Cette exigence figure dans le Guide de Bonnes Excutions des Analyses de Biologie Mdicale (Arrt du 26novembre1999 relatif la bonne excution des analyses de biologie mdicales) : Dfinition des termes Evaluation( 2.6), Qualification ( 2.11), Transfrabilit ( 2.13), Valeurs de rfrence (2.14), Validation ( 2.15) ; dans le 1.1c concernant les installations, lquipement, linstrumentation, les produits fongibles et les ractifs ... sassurerque les installations, lquipement et linstrumentation du laboratoire sont fonctionnels.</p><p>Dans la nouvelle norme ISO 15189, la validation est retrouve au niveau du 5.3.2, 5.3.4 et son point. h) maissurtout dans le paragraphe 5.5.1 : Le laboratoire doit utiliser des procdures analytiques, incluant celle de slec-tion et daliquotage dchantillons, qui correspondent aux besoins des utilisateurs des prestations de laboratoire etqui conviennent chaque type danalyse. Les procdures analytiques conseilles sont celles qui ont t publiesdans des manuels bien tablis et faisant autorit, dans des textes et des journaux revus par des experts ou des recom-mandations rgionales, nationales ou internationales. Si des procdures internes sont utilises, elles doivent trevalides de manire approprie pour lutilisation prvue et parfaitement documentes., et le paragraphe 5.5.2 :Le laboratoire doit utiliser uniquement des procdures valides pour sassurer quelles conviennent lutilisationprvue. Les validations doivent tre aussi approfondies que ncessaires pour rpondre aux besoins de lapplicationou du domaine dapplication concern(e). Le laboratoire doit enregistrer les rsultats obtenus et la procdure uti-lise pour la validation.Les mthodes et les procdures slectionnes doivent tre values et donner des rsultats satisfaisants avant dtreutilises pour les analyses mdicales. Une revue des procdures par le directeur du laboratoire ou une personnedsigne doit tre ralise lorigine intervalles dfinis. Ces revues sont gnralement effectues une fois par an.Ces revues doivent tre documentes. Le paragraphe suivant ( 5.5.3) dveloppe cet aspect de validation en prci-sant [...] Les performances et laptitude lemploi prvu de chaque nouvelle version des trousses de ractifs prts lemploi prsentant des modifications importantes en termes de ractifs ou de procdure doivent tre vrifies.Tout changement de la procdure doit tre dat et faire lobjet dune autorisation comme pour les autres proc-dures.</p><p>Le paragraphe 5.3.2 quant lui indique que Il doit tre dmontr (lors de linstallation et au cours de lutilisationcourante) que le matriel est capable datteindre les performances requises et quil est conforme aux spcificationsse rapportant aux analyses.</p><p>La direction du laboratoire doit laborer un programme de surveillance rgulire permettant de dmontrer lad-quation de ltalonnage et du fonctionnement des instruments, des ractifs, et des systmes analytiques. Elle doitgalement instaurer un programme de maintenance prventive document et enregistr [...] respectant, au mini-mum, les recommandations du fabricant.</p><p>Note : Cette nouvelle norme ISO 15189 se situe dans le prolongement des travaux mens par EC4 (EuropeanCommunities Confederation of Clinical Chemistry) publis dans larticle : Essential Criteria for Quality Systems ofMedical Laboratories (Eur J Clin Chem Clin Biochem 1997 ; 35(2) : 123-132 1997 by Walter de Gruyter BerlinNew York). Cet article est consultable partir du site : http://www.uni-oldenburg.de/ec4/ec4qual.htm#ECText.</p><p>Outre la comptence du biologiste ou du responsable technique, lutilisation et la gestion correcte des Contrles deQualit (CQI, CQE), la validation permet dassurer la qualit de la prestation danalyse et du rsultat. Cette valida-tion sera mise profit pour estimer les incertitudes des mesures du laboratoire, notion prsente dans le GBEA : 4. Expression des rsultats et comptes rendus danalyses, 4.1. Expression des rsultats : Lexpression des rsultatsdoit tre prcise et sans quivoque. Les valeurs de rfrence doivent tre indiques. La mthode danalyse et/ou lesractifs utilis(e)(s) doivent tre mentionn(e)(s) chaque fois quils peuvent influer sur lexpression du rsultat ainsique lorsque la rglementation lexige. Pour les rsultats quantitatifs, le cas chant, les performances analytiquesde la mthode peuvent tre indiques. Les units du systme international (SI) doivent tre utilises quand ellesexistent.</p><p>3</p><p>Annales de Toxicologie Analytique, vol. XVII, n 3, supplment 1, 2005</p></li><li><p>4</p><p>Cette estimation de lincertitude de mesure se retrouve dans la norme ISO/CEI 17025 au 5.4.6 Estimation de lin-certitude de mesure, avec au 5.4.6.2 Les laboratoires dessais doivent aussi possder et appliquer des proc-dures pour estimer lincertitude de mesure. Dans certains cas, la nature de la mthode dessai exclut un calculrigoureux, mtrologiquement et statistiquement valable, de lincertitude de mesure. Dans de tels cas, le laboratoiredoit au moins tenter didentifier toutes les composantes de lincertitude et faire une estimation raisonnable, tout enassurant que la manire den rendre compte ne donne pas une impression errone de lincertitude. Une estimationraisonnable doit se baser sur une connaissance de la performance de la mthode et sur le domaine de la mesure etfaire appel, par exemple, lexprience acquise et aux donnes de validation antrieures.</p><p>Cette approche des incertitudes est aussi une exigence de la nouvelle norme ISO 15189. Dans le paragraphe traitantde la validation, 5.5.3, son point h) indique les sources potentielles de variation des rsultats. En outre, dans le 5.6.2, il est indiqu : Le laboratoire doit dterminer lincertitude des rsultats, dans le cas o cela est pertinentet possible. Toutes les composantes importantes de lincertitude doivent tre prises en compte. Les sources contri-buant lincertitude peuvent inclure lchantillonnage, la prparation des chantillons, la slection des aliquotesdchantillon, les calibrateurs, les matriaux de rfrence, les grandeurs dentre, lquipement utilis, les condi-tions exprimentales, ltat de lchantillon et les changements de manipulateurs.</p><p>Le biologiste, ou le responsable technique, doit pouvoir mettre disposition du demandeur danalyses, en cas debesoin, une approche de lvaluation des incertitudes de mesure.</p><p>III. Quelles sont les informations pertinentes connatre ?Dune manire gnrale, une mthode danalyse prsente plusieurs caractristiques essentielles que le laboratoire sedoit de connatre. La connaissance de ces paramtres peut tre acquise par la bibliographie et/ou par lexprimenta-tion sur site.</p><p>Schmatiquement, on distinguera trois types de mthodes danalyse que lon sera amen traiter diffremment :</p><p>1. Les analyses de type quantitatif vrai :</p><p>Elles fournissent un rsultat chiffr, sur une chelle continue dont les limites basses et hautes sont connues, en rela-tion directe avec une quantit ou une activit donne de lanalyte mesurer.</p><p>Ex : Dosage de mdicaments dans le cadre du Suivi Thrapeutique Pharmacologique et dosage dautres xnobio-tiques en Toxicologie. Analyses ralises par mthodes immunologiques et/ou chromatographiques.</p><p>2. Les analyses de type qualitatif :</p><p>Le rsultat de ce type danalyse napporte pas dinformation sur la quantit de lanalyte, mais seulement sur sa pr-sence ou sa non dtection (positif ou non dtect).</p><p>Ex : Dpistage de xnobiotiques par mthodes chromatographiques. Les pics des chromatogrammes obtenus sontidentifis par les temps de rtention et par les spectres UV et/ou de masse. Ils peuvent tre compars une biblio-thque prdfinie de spectres.</p><p>3. Les analyses assimilables des analyses quantitatives :</p><p>Dans ce cadre seront regroupes des analyses fournissant un rsultat de type qualitatif, extrapol partir de la mesu-re dune donne quantifiable (Absorbance par exemple) avec un effet de seuil. </p><p>Ex : En Toxicologie, dtermination dune classe de molcules mdicamenteuses (benzodiazpines, antidpresseurstricycliques...), ou de substances illicites (amphtamines, opiacs, cannabinodes, cocaniques...) avec des seuils pr-dfinis. En Suivi Thrapeutique Pharmaco...</p></li></ul>

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