Bacili G Negativi II

Familia Enterobacteriaceae

Caractere generale:

enterobacterium = bacterie intestinal

habitat: tractul intestinal om/animale

Caractere morfo-tinctoriale:

Bacili Gram-negativ

Mobili/imobili

Unii au capsul: Klebsiella pneumoniae

Nu formeaz endospori

Caractere de cultur: Facultativ anaerobe Tulbur uniform mediul de cultur lichid Au necesiti nutriionale reduse se

dezvolt i pe geloz nutritiv Colonii tip S Uneori colonii mucoase: Klebsiella

pneumoniae Medii selective, majoritatea au lactoz:

Drigalski, Levin, Leifson, Istrate-Meitert, MacConkey

Mediul Levine

Categoria: Mediu selectiv i diferenial

Componente: geloz simpl + eozin + lactoz + albastru de metilen

Utilizare: cultivarea enterobacteriilor (E.coli)

ADCL (Leifson)

Categoria: Mediu selectiv i diferenial

Componente: geloz simpl + sruri biliare + lactoz + rou neutru

Utilizare: cultivarea shigelelor i salmonelelor

Caractere biochimice:~ ncadrarea n familie pe baza a trei

teste biochimice: Fermentez glucoza cu producere de acid

i gaz Testul oxidazei negativ Reduc nitraii la nitrii

~Pe baza testelor biochimice i a caracterelor antigenice genuri specii variante serologice

OXIDAZA Scop: evidentierea citocromoxidazei Substrat: benzi indicatoare (alfanaftol- clorhidrat

de dimetilparafenilendiamina) Tehnica:

- se umecteaza banda indicatoare cu apa distilata - se descaraca o colonie bacteriana cu ajutorul ansei pe banda indicatoare

Interpretare: test+ coloratie albastra

Testul oxidazei

REDUCEREA NITRATILOR LA NITRITI

Substrat: apa peptonata + KNO3

Incubare: 24h la 37 C

Substanta indicatoare: ac sulfanilic/acid acetic, alfanaftilamina/ac acetic

Interpretare: test + viraj spre rosu al indicatorului (Enterobacteriaceae)

CoproculturaIzolarea- Medii de cultur pentru enterobacterii - Medii selective i de difereniere

*Drigalski*Levin*Leifson*Istrate-Meitert*MacConkey

Caractere morfo-tinctoriale

Bacili Gram-negativ

Proprieti de cultur

Colonii S Lactozo-negative

Proprietati biochimice

TSI

UTILIZAREA CITRATULUI SIMMONS

Substrat: mediu minimal cu citrat de sodiu solidificat in eprubeta in pozitia inclinata

Tehnica: inocularea bacteriei de testat pe panta agarului. Incubare 18h la 37 C

Interpretare: test +dezvoltarea coloniilor bacteriene si viraj verdealbastru al culorii mediului

testul citrat mediul Simmons

UTILIZAREA CITRATULUI SIMMONS

Structura antigenic

- Aglutinri pe lam cu seruri anti-O

Teste de patogenitate

Testul Srny

Caractere morfo-tinctoriale

Bacili Gram-negativMobili (preparat nativ)

Proprieti de cultur

Colonii S Geloz nutritiv

Proprieti de cultur

Mediul DrigalskiColonii lactozo-negative

Proprieti de cultur

- lactozo-negativ- Agar EMB (Levin)

Proprieti de cultur

- Agar McConkey

Proprietati de cultura

Geloza HektoenH2S

GENUL SALMONELLAAGAR AGAR CROMOGENICCROMOGENICADCLADCL--HH22SS

Genul Salmonellapeste 2200 serotipuri

Infecii (salmoneloze): ~ Febra tifoid S.typhi~ Febra paratifoid S.paratyphi A, B~ Toxiinfecii alimentare i enterite (copii)

S.typhymuriumS.enteritidisS.paratyphi BS.panama

~ Stri septico-piemiceS.paratyphi CS.choleraesuis

Clasificarea serotipurilor de Salmonella

1. Adaptate la om

S.schottmuelleri S.typi S.paratypi A,B

S.hirschfeldii S.paratypi C

2. Adaptate la gazde altele dect omul

exc. tulpini boli om S.dublin S.choleraesuis

3. Fr adaptate la o gazd specific

S.enteritidis >2000 serotipuri gastroenterite

Caractere generale:

~ bacili Gram-negativ~ mobili (flageli peritrichi)~ lactozo-negativi~ identificarea antigenelor O, H, Vi

reacii de aglutinare

Recoltarea produselor patologice:

1) Febre tifo-paratifoide:

S1 hemocultur

S2 urocultur, coprocultur

2) Gastroenterite coprocultur lichid de

vrstur alimente

Teste biochimice

H2S

Teste biochimice

Creste pe mediul Simmons, cu citrat

Proprieti antigenice

- Schema de identificare antigenic Kauffmann-White

Ag O caracteristic de GRUP Ag H - caracteristic de TIP (variaie de

faz)Ag Vi Ag K de suprafa Serotip = enumerarea complet a Ag O, Vi

i H1,2

Reacia Widal

- r. aglutinare n tuburi

- Febre tifo-paratifoide - Creterea titrului de anticorpilor

aglutinani anti-O i anti-H

Enterobacterii oportuniste

Escherichia

Klebsiella Enterobacter Hafnia Serratia

Proteus Providencia Morganella

Arizona Edwarsiella Citrobacter

Enterobacterii oportuniste

Escherichia coli~ 80% flora normal a colonului~ bacili Gram-negativi~ lactozo-pozitivi ~ luciu metalic mediul Levin

Escherichia coli

~ Tipuri de mbolnviri:

~ boli diareice

~ infecii urinare

~ infecii ale plgilor

~ septicemii

Escherichia coli

Tulpini care produc boli diareice:

~ ETEC (E.coli enterotoxigen)

~ EIEC (E.coli enteroinvaziv)

~ EPEC (E.coli enteropatogen)

~ EHEC (E.coli enterohemoragic)

~ VTEC (E.coli produce toxin Shiga-like) O157:H7

GENUL ESCHERICHIA

E. coli non pathogenE. coli - EPEC

- EHEC- EIEC- ETEC

pathogenpathogen

GENUL ESCHERICHIAE. coliE. coli

Cultura puraCultura pura

E. coli E. coli --ADCLADCL

E. coliE. coli

LEVINELEVINEDRIGALSCHIDRIGALSCHI

Fermentarea lactozei pe geloz lactozat

E. coliE. coli

MEDIU CROMOGENMEDIU CROMOGEN

COLONII ROZCOLONII ROZ

Escherichia coliIdentificare biochimic

IMViC~ Testul indol~ Testul rou metil~ Reacia Voges-Proskauer~ Testul citrat

OXIDATIE-FERMENTATIE

DEGRADARE MIXTADEGRADARE MIXTA

MEDIU NEDAGRADATMEDIU NEDAGRADAT

TESTE REZULTATE DIN TIPURILE DE FERMENTATIE

TESTUL ROSU-METIL

TESTUL VOGES-PROSKAUER

TESTUL ROSU-METIL

Scop: fermentarea substratului si scaderea pH-ului sub 5 Tehnica:

tulpina bacteriana testata se insamanteaza in apa peptonata glucozata. Incubare 18h la 37 C. Developare cu solutie rosu fenol

Interpretare: Test + culoare rosie (pH5): Klebsiella


Scop: evidentierea fermentatiei acetoinice

Tehnica: tulpina bacteriana se insamanteaza in apa peptonata glucozata. incubare 18h la 37 C. Se alcalinizeaza. Developare cu alfanaftol.

Interpretare: test + inel rosu-violaceu la interfata de contact: Klebsiella Test - : E.coli

TESTUL INDOL Scop: evidentiaza prezenta triptofanazei Tehnica:

cultura bacteriana de 24h in apa peptonata benzi indicatoare cu reactiv indol.

Interpretare: test + culoare rosu-violaceu (E.coli)

TESTUL INDOL

Grupul Klebsiella Enterobacter Hafnia Serratia

Klebsiella pneumoniaeKlebsiella rhinoscleromatisEnterobacter cloacaeEnterobacter aerogenesHafnia alveiSerratia marcescens

Grupul KEHSTipuri de mbolnviri:

~ Dobndite n spital~ Infecii cu localizri E.coli~ Cauze imp. de bacteriemii~ Klebsiella pneumoniae inf. pulmonar~ Majoritatea tulpini cu rezisten multipl

la antibiotice

Klebsiella pneumoniae

~ cantiti moderate n intestinul omului /animalelor

~ infecii respiratorii, urinare, otite~ bacili Gram-negativi~ capsul polizaharidic ~ colonii mari mucoase , fenomen de

cameleonaj

KLEBSIELLAKLEBSIELLA

Frotiu coloratia tu de China

Klebsiella pneumoniae

KLEBSIELLAKLEBSIELLAColonii mucoaseColonii mucoase

KLEBSIELLA

Proprietati biochimiceProprietati biochimice

Proteus vulgaris, P.mirabilis

~ saprofii (materie organic n descompunere)

~ flora intestinal normal~ infecii urinare, alte tipuri de infecii~ bacili Gram-negativi, mobili~ lactozo-negativi~ invadeaz suprafaa mediilor gelozate

GENUL PROTEUS

Proteus Proteus vulgarisvulgaris

FlageliFlageli

GENUL PROTEUS GENUL PROTEUS -- migrare

PROTEUS

Proteus spp.

PRODUCEREA DE H2S

TESTUL UREAZEI

Scop : evidentierea ureazei, enzima ce scindeaza ureea cu formare de amoniac

Substrat: mediu de cultura ce contine uree si indicator colorimetric (de Ph).

Tehnica: tulpina bacteriana testata se inoculeaza in mediu. Se incubeaza 18h la 37 C.

Interpretare: test+ viraj corespunzator al zonei bazice: Proteus

Proteus spp.Ureaza +

H2S

TESTUL FENILALANINDEZAMINAZEI

Scop: evidentierea prezentei FAD

Substrat: agar inclinat ce contine fenil-alanina

Tehnica: tulpina bacteriana se insamanteaza pe panta agarului. Developarea reactiei cu FeCl3

Interpretare: test+ aparitia culorii verzi (Proteus)

TESTUL FENILALANINDEZAMINAZEI

Yersinia pestis

~ ciuma (pesta)

~ bacili Gram-negativ

~ capsul proteic

Yersinia enterocolitica

~ Sdr. Diareic febril

Yersiniapseudotuberculosis~ Inf. la psri,

roztore, rar om~ Lez. tipic: noduli

asemntori celor tbc n intestin, org. parenchimatoese

Bacili Gram negativi aerobi glucozo-nefermentativi

Pseudomonade

- bacili Gram negativi

- strict aerobe, metabolism oxidativ

- catalazo-pozitivi si oxidazo-pozitivi

Bacili Gram negativi aerobi glucozo-nefermentativi

Pseudomonadespecii fluorescente, care produc pigmenti difuzibili fluorescenti:

P. aeruginosa (bacilul piocianic)P. putida, P. fluorescens;

specii non-fluorescente: P. alcaligenes, P. pseudoalcaligenes.

Pseudomonas aeruginosa (b. piocianic)

patogen nosocomial (10% din totalul infectiilor nosocomiale)

Bacterie oportunist Habitat:

sol, ap Poate coloniza tubul digestiv i pielea

persoanelor sntoase


ITU infectii de tract respirator infectii ale plagilor, suprainfectii ale

arsurilor bacteriemie, septicemie, infectii sistemice,

mai ales la pacientii imunocompromisi otite externe la inotatori ; infectii oculare dupa interventii chirurgicale


Proprietati microscopice:

bacili Gram negativi

mobili


Proprietati de cultura:

pigment difuzibil fluorescent de mai multe tipuri:* piocianina, albastra, cu proprietati antibacteriene fata de alte specii bacteriene* pioverdina, galben-verde culoarea verde, stralucitoare* piorubina, rosie, ocazional*piomelanina, bruna, ocazional

cultura degaja o aroma caracteristica, aromata, asemanatoare cu florile de tei, iasomie, mere verzi

strict aeroba

Pseudomonas spp. Bacil Gram-negativ,

mobil Nefermentativ

Se dezvolt pe medii simple, geloz nutritiv producere de pigment difuzibil


Antibiograma obligatorie foarte rezistenta la antibiotice; are rezistente naturale multiple, datorate structurii

peretelui celular. Carbapenemi Penemi Unele Cefalosporine gen. III; gen. IV Quinolone Aminoglicozide Polimixine. In caz de monoterapie dezvolta rapid rezistenta.

Genul Vibriobacterii Gram-negative

foarte mobile (cil polar)

form de bastona ncurbat

facultativ anaerob

majoritatea speciilor saprofite, unele produc mbolnviri uoare

Specia tip: Vibrio cholerae

dou biotipuri holerigene: cholerae clasic El Tor

V. cholerae O139 "Bengal" (1992, Bangladesh derivate din biotipul El Tor

mai multe biotipuri neholerigene (sindroame diareice benigne)

Habitat: apa de mare, apa de suprafa

Contaminare: ap, alimente

contaminate fecal-oral

Infecie:Holera = infecie

acut, intestinal

diaree deshidratare

masiv stare general

alterat evoluie sever

Structuta antigenic

variaia antigenic rol n epidemiologia

holerie i virulena vibrionilor holerici

Ag H (flagelar) specificitate larg

Ag O (somatic) strict specific

ase serogrupuri O1 O6 Vibrionii holerigeni = serogrup O1 conin trei factori antigenici: A, B, C

3 serotipuri: Ogawa (AB) Inaba (AC) Hikojima (ABC)

Fiecare serotip poata exprima fenotip clasic sau El Tor

V. cholerae O139 "Bengal" este singurul serotip non-O1

Recoltarea produselor patologice

Materii fecale mediu de transport Cary-Blair

Lichid de vrstur

Ap potabil, alimente

Izolare

ap peptonat alcalin (mediu de mbogire)

mediu cu sruri biliare (BSA)

a) Caractere morfo-tinctoriale:bacili Gram-negativincurbai

b) Caractere de cultur: Mediul BSA: Colonii tip S, transparente

c) Caractere antigenice: vibrionii holerigeni aglutineaz cu ser

anti-O1 vibrionii neholerigeni nu aglutineaz cu

ser anti-O1 (neaglutinabili NAG)

d) Caractere de patogenitate:testul ansei ligaturate

Tratament

reechilibrare hidro-elecrolitic

antibiotice: ex. Tetraciclin

Genul Helicobacter

bacili Gram negativi, incurbati pana la spiralati

mobili prin unul/mai multi flageli microaerofili speciile gastrice se caracterizeaza prin

producerea de ureaza in cantitati mari.

Helicobacter pylori

Recoltarea produselor patologice: biopsie din mucoasa gastrica (endoscopie); prelevarea de probe multiple=>4 fragmente din antru, regiunea fundica.

Important: cel putin o luna fara tratament inainte de recoltarea probei.

un fragment plasat direct in mediu cu uree si indicator de pH (rosu fenol)+ureaza preformata a HP =>virarea indicatorului de pH in galben;

examen histopatologic

Helicobacter pylori

Recoltarea produselor patologice: biopsiedin mucoasa gastrica (endoscopie); prelevarea de probe multiple=>4 fragmente din antru, regiunea fundica.

frotiu: bacili Gram negativi, incurbati; IF pentru diagnostic diferential cu Campylobacter

cultura: colonii mici, transparente, apar in 3-7 zile; permite testarea sensibilitatii la antibiotice.

Helicobacter pylori

Metode neinvazive: testul respirator cu uree marcata :

ingerare uree marcata cu C13 (neradioactiv) sau C14 (radioactiv) => intensa activitate a ureazei, daca exista HP in stomac => eliberare de CO2 marcat, absorbit in circulatia sanguina si eliminat prin respiratie => detectat si cuantificat in aerul expirat (spectroscopie de masa);

dezavantaj: este foarte costisitor.

Helicobacter pylori

detectarea anticorpilor specifici, in special de tip IgG;

ELISA; cost relativ scazut, indicat preferential in studii epidemiologice.

Helicobacter pylori - Tratament

Macrolide (Claritromicina), Amoxicilina, Metronidazol, Quinolone.

Documents

Bacili G Negativi II