Upload
others
View
16
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
Burza mentora Poslijediplomski doktorski studij «BIOLOGIJA NOVOTVORINA»Dubrovnik 26.-27.10.2007.
Doc.dr.sc. Srđana ČulićKlinika za dječje bolesti KBC SplitMedicinski fakultet Sveučilišta u Splitu2007
Područje znanstvenog interesa:
AAngiogenezngiogenezaa tumorskog tkivatumorskog tkiva kod:kod:
NNefroblastomefroblastomaa
LLimfomimfomaa djedječčje dobi je dobi
Angiogeneza
Proces nastanka krvnih žila od svojih predhodnicaRazvoj novih krvnih žila nastaje koordiniranom regulacijom različitih procesa koji ovise o:AktivatorimaInhibitorimaangiogeneze
Normalna angiogeneza u odraslih
Uterus za vrijeme Uterus za vrijeme menstrualnog menstrualnog ciklusaciklusa
ZaraZarašštavanjetavanje ranarana
Razlikujemo dva vaskularna sustavaRazlikujemo dva vaskularna sustava
Krvni Krvni –– nastaje nastaje angiogenezomangiogenezom
LimfatiLimfatiččkiki –– nastaje nastaje limfangiogenezomlimfangiogenezom
Angiogeneza
VaVažžan fizioloan fiziološški proces ki proces u:u:Razvoju embrionaRazvoju embrionaMorfogeneziMorfogeneziReprodukcijiReprodukcijiZaraZarašštavanjutavanju ranarana
Nekontrolirana angiogeneza
MoMožže doprinijeti razvoju razlie doprinijeti razvoju različčitih bolesti:itih bolesti:
MakularneMakularne degeneracije i degeneracije i dijabetidijabetiččne ne retinopatijeretinopatijeUpale kod Upale kod aterosklerozeaterosklerozePsorijazePsorijazeReumatoidnogReumatoidnog artritisaartritisaRasta tumora i metastazaRasta tumora i metastaza
Tumori ne mogu Tumori ne mogu rasti virasti višše od 2e od 2--3 3 mm ako ih ne prati mm ako ih ne prati angiogenezaangiogeneza
Kada tkivo treba više kisika ispušta molekule koje potiću rast krvnih žilaTumori koriste isti proces da bi mogli osigurati svoj rastFerrara i sur. iz Genetecha su dokazali da inhibicija angiogeneze može dovesti do odumiranja tumora inhibirajući njihov rast
Stvaranje krvnih žila i tumorska angiogeneza
Za vrijeme tumorske Za vrijeme tumorske angiogeneze angiopoietinangiogeneze angiopoietin--2 2 ((AngAng--2) destabilizira zidove 2) destabilizira zidove zrelih krvnih zrelih krvnih žžilailaMirne Mirne endotelne endotelne stanice stanice postaju osjetljive na VEGF i postaju osjetljive na VEGF i ostale ostale angiogeneangiogene faktorefaktoreProliferirajuProliferiraju i migriraju da bi i migriraju da bi stvorile nove krvne stvorile nove krvne žžileileProgenitori endotelnih Progenitori endotelnih stanica iz kostanica iz košštane srtane sržži i odlaze u perifernu krv i odlaze u perifernu krv i mobiliziraju se na mjestima mobiliziraju se na mjestima nove nove angiogenezeangiogeneze
Proces angiogeneze-tumorska angiogeneza
Aktivacija endotelnih stanica pomoću faktora stimulacije rastaDegradacija bazalne membrane krvne žileMigracija i proliferacija endotelnih stanica prema angiogenom stimulusuNastanak nove bazalne membrane oko imaturne krvne žileTumorska vaskularizacija stimulira tumorski rast
Danas znanstvenici proučavaju posljedice:
Inhibicije VEGF Stimulacije i porasta VEGF na:Zaraštavanje ranaCijeljenje kostijuLiječenje nakon infarkta miokarda
Terapijska stimulacija angiogeneze
Stimulacija ili pro-angiogeneza može biti od terapijske koristi u:Zacijeljivanju muskuloskeletalnog tkiva (kost, hrskavica i tetive)Zacijeljivanju rana (kirurške rane, opekline, ožiljci) Stvaranju novih krvnih žila kod infarkta miokardakoronarnih arterije i bolesti mikrovaskulatureU regeneraciji organa (jetra, bubreg i motorni neuroni)
Vaskularni endotelni čimbeni rasta - VEGF
Inducira diferencijaciju i proliferaciju endotelnih stanica iz njhovih progenitora (hemangioblasti i angioblasti)Formira se slabo diferencirani primitivni vaskularni pleksus (vasculogeneza)Angiopoietin-1 (Ang-1) remodelira vaskularni pleksus u zreli vaskularni sustav (angiogeneza)
VEGF
VEGF snažan faktor rastaStimulira proliferaciju i migraciju endotelnih stanicaVeže se na dva receptora tirozinkinazeVEGF receptor-1 (VEGFR1)VEGF receptor-2 (VEGFR2)Angiogeni utjecaj VEGF na endotelne stanice odvija se preko VEGFR2
VEGF protein
Najvažniji regulator fiziološke angiogeneze u razvoju embriona, reproduktivnoj biologiji, enhondralnom formiranju kosti i zacijeljivanju ranaKljučni medijator patološke angiogeneze kod određenih tumora i bolesti okaOtkriće humaniziranog anti-VEGF antitijela, Avastin® (bevacizumab) za liječenje solidnih tumora
Nefroblastom (Tumor Wilms)
EEmbrionalni tumor mbrionalni tumor bubregabubregaNastaje iz Nastaje iz pluripotentnih pluripotentnih embrionalnih embrionalnih renalnih renalnih prekursoraprekursoraJJavlja avlja se se uglavnom u uglavnom u djedječčjoj dobijoj dobiManifestira se najManifestira se najččeeššćće e abdominalnom masomabdominalnom masom(80%)(80%) i i hematurijomhematurijom
Histološki je građen od tri komponente:
1.1. 1.1. BBlastemalastema2.2. MMezenhimaezenhima
1.1. 3.3. EpitelaEpitela
MakroskopskiMakroskopski vidimo vidimo lobuliranulobuliranu smesmeččkastokastobijelu masu u bijelu masu u bubregububreguVezan je za rani Vezan je za rani razvoj bubregarazvoj bubrega
Genetski sindromi i nefroblastom
10% j10% je vezano uz e vezano uz određene genetske određene genetske sindrome kao sindrome kao ššto su:to su:BeckwithBeckwith--WiedemannWiedemannsindromsindromDenisDenis--DrashDrash sindromsindromWAGR kompleksWAGR kompleks--aniridijaaniridija, mentalna , mentalna retardacija, retardacija, genitourinarne genitourinarne malformacije malformacije
Histologija-prognoza
Prema histološkoj slici se može podijeliti u dvije prognostičke skupine:
1. Povoljne prognoze (sadrži dobro diferencirane gore navedene histološke komponente)
2. Nepovoljne prognoze (sadrži difuznu anaplaziju)
Obzirom da je nefroblastom zloćudni tumor, a angiogeneza je neophodna u ekspanziji malignog tumorskog tkiva, naš je interes proučiti utjecaj angiogenih čimbenika na rast i prognozu ove neoplazme
Hipoteza
EEkspresijakspresija angiogenih angiogenih faktora bi se faktora bi se mogla razlikovati unutar histolomogla razlikovati unutar histološških kih subtipova nephroblastomasubtipova nephroblastoma obzirom na obzirom na prognozu bolestiprognozu bolesti
Usporediti ekspresiju:
Vaskularnog Vaskularnog endotelnogendotelnog ččimbenika rasta imbenika rasta VEGFVEGF--aa u:u:EEmbrionalnom tkivu i unutar histolombrionalnom tkivu i unutar histološških kih subtipova nesubtipova neffroblastomaroblastoma, budu, budućći da se radi i da se radi o embrionalnom tumoruo embrionalnom tumoruBBazaziiččnnogog fibroblastifibroblastiččnognog ččimbenika rasta imbenika rasta ((bFGFbFGF)) uu::EEmbrionalnom tkivu mbrionalnom tkivu istraistražžiti iti i usporediti i usporediti ekspresiju ekspresiju bbFGFFGF--a u embrionalnom tumorua u embrionalnom tumoru((nefroblastomnefroblastom)) i tkivu u razvojui tkivu u razvoju
FGF Mezenhimalna stem stanica se samoobnavlja i stvara jedinice za formiranje kolonija fibroblast
Nastaju:Nastaju:HondroblastHondroblastOsteoblastOsteoblastAdipoblastAdipoblastMyoblastMyoblastKardiomioblastKardiomioblastTenoblastTenoblast
Embrionalne Embrionalne matimatiččne stanice ne stanice izraizražžavaju receptor avaju receptor za FGF za FGF -- zelena zelena bojaboja
Ustanoviti
PPostoji li razlika u ekspresiji ostoji li razlika u ekspresiji angiogenihangiogenihččimbenika u imbenika u kod kod nephroblastomanephroblastoma koji sukoji su::PPrimali rimali preoperativnupreoperativnu kemoterapiju kemoterapiju OOninihh koji su operirani bez koji su operirani bez predhodnepredhodnekemoterapije ili zrakemoterapije ili zraččenjaenjaInteres je da razluInteres je da razluččimo da li i koliko imo da li i koliko konvencionalna kemoterapija utjekonvencionalna kemoterapija utječče na e na angigenezuangigenezu
Drugo moguće područje istraživanja
Procjena značaja angiogeneze i limfangiogeneze u limfomima dječje dobi:
Non Hodgkin limfomaHodgkin limfoma
Ovakvih ispitivanja nema dovoljno kod dječjih hematoloških malignih bolesti
AngiogenezaAngiogeneza i i limfangiogenezalimfangiogeneza su su neophodne za progresiju neophodne za progresiju limfomalimfomaCirkulirajuCirkulirajućći i i i celularnicelularniVEGF su poveVEGF su poveććani kod ani kod hematolohematološških malignih kih malignih bolestibolestiVEGF moVEGF možže doprinijeti e doprinijeti rastu rastu limfomalimfoma poticanjem poticanjem angiogeneze angiogeneze
Također bi ispitivali stvaranje angiopoetina -1 i -2 i njihovu povezanost u angiogenezikod limfoma dječje dobi
Ispitivanja bi se radila u laboratorijuZavoda za patologiju, citologiju i sudsku medicinu KBC Split
VEGF-D poticana angiogeneza u vrijeme rasta tumoraKrvne i limfne žile su prikazane imunoflorescentnim metodama pomoću protutijela CD31 i LYVE-1
Suradnici u istraživanju:
1.1. KlinikaKlinika zaza djedječčjeje bolestibolesti KBC SplitKBC Split, 21000 , 21000 SplitSplit , , SpinSpinččiiććevaeva 1.1.
2.2. Zavod za patologiju, citologiju i sudsku Zavod za patologiju, citologiju i sudsku medicinu medicinu KBC SplitKBC Split, 21000 , 21000 SplitSplit , , SpinSpinččiiććevaeva 1.1.
3.3. Zavod za anatomiju, histologiju i Zavod za anatomiju, histologiju i embriologiju Medicinskog fakulteta embriologiju Medicinskog fakulteta SveuSveuččiliiliššta u Splitu, 21000 ta u Splitu, 21000 SplitSplit, , KiKiššpatipatiććevaeva 2.2.
Djelatni tim:
1. Doc.dr.sc.Srđana Čulić, viši znanstveni suradnik2. Prof.dr.sc.Ivana Kuzmić-Prusac, viši znanstveni suradnik3. Prof.dr.sc.Mirna Saraga-Babić, znanstveni savjetnik4. Prof.dr.sc.Marjan Saraga, viši znanstveni suradnik5. Mr.sc.Ivo Jurić, znanstveni asistent6. Darko Alfirević, dr.med, znanstveni asistent 7. Sandra Zekić, znanstveni novak8. Branka Braovac, tehničarka9. Vanja Matas, tehničarka10. Arijana Vuko, tehničarka
Uvjeti rada u laboratoriju Zavoda za patologiju, citologiju i sudsku medicinu KBC Split
NaNašš imunohistokemijski imunohistokemijski lablabooratorij ratorij opremljen je potrebnim uređajima i opremljen je potrebnim uređajima i opskrbljen reagensima za provedbu opskrbljen reagensima za provedbu istraistražživanjaivanja
Uvjeti rada laboratorija Zavoda za anatomiju, histologiju i embriologiju
Zavod Zavod ččine ine ččetiri laboratorija ukupne etiri laboratorija ukupne povrpovrššine 270 metara kvadratnih ine 270 metara kvadratnih opremljenih uobiopremljenih uobiččajenom opremom za ajenom opremom za sve klasisve klasiččne, ne, imunohistokemijskeimunohistokemijske i i imunofluorescencijskeimunofluorescencijske tehnike tehnike ukljuuključčujuujućći uklapanje i pripremu i uklapanje i pripremu ultratankihultratankih rezova za transmisijsku rezova za transmisijsku elektronsku mikroskopiju (TEM)elektronsku mikroskopiju (TEM)
Posjeduje:
OOpremu za stanipremu za staniččnu kulturu, nu kulturu, elektrofiziologijuelektrofiziologijuPPoseban odsjek za mikroskopiju oseban odsjek za mikroskopiju NNekoliko ekoliko mikrotomamikrotoma, , kriotomkriotom i i ultramikrotomultramikrotomJJedan edan konfokalnikonfokalni sustav, dva uspravna i sustav, dva uspravna i jedan jedan invertniinvertni fluorescencijski mikroskopfluorescencijski mikroskopMikroskopi su opremljeni konvencionalnim i Mikroskopi su opremljeni konvencionalnim i hlađenim digitalnim kamerama upravljanim hlađenim digitalnim kamerama upravljanim MetamorfMetamorf raraččunalskim programom unalskim programom
Elektrofiziološka oprema uključuje:
Uređaje za izradu i poliranje pipeta,Pojačalo za elektrofiziologiju Mikromanipulator visoke preciznostiInkubator za staničnu kulturu, zamrzivače, nekoliko hladnjakaVage i svu sitnu laboratorijsku opremu (kupelji, vruće ploče, centrifuge, tresilice, vlažne komore, itd.)