45
Burza mentora Poslijediplomski doktorski studij «BIOLOGIJA NOVOTVORINA» Dubrovnik 26.-27.10.2007. Doc.dr.sc. Srđana Čulić Klinika za dječje bolesti KBC Split Medicinski fakultet Sveučilišta u Splitu 2007

Burza mentora Poslijediplomski doktorsk studij «BIOLOGIJA ... mentorstva Culic.pdf · Burza mentora Poslijediplomski doktorski studij «BIOLOGIJA NOVOTVORINA» Dubrovnik 26.-27.10.2007

  • Upload
    others

  • View
    16

  • Download
    0

Embed Size (px)

Citation preview

Burza mentora Poslijediplomski doktorski studij «BIOLOGIJA NOVOTVORINA»Dubrovnik 26.-27.10.2007.

Doc.dr.sc. Srđana ČulićKlinika za dječje bolesti KBC SplitMedicinski fakultet Sveučilišta u Splitu2007

Područje znanstvenog interesa:

AAngiogenezngiogenezaa tumorskog tkivatumorskog tkiva kod:kod:

NNefroblastomefroblastomaa

LLimfomimfomaa djedječčje dobi je dobi

Angiogeneza

Proces nastanka krvnih žila od svojih predhodnicaRazvoj novih krvnih žila nastaje koordiniranom regulacijom različitih procesa koji ovise o:AktivatorimaInhibitorimaangiogeneze

Normalna angiogeneza u djece

U U embriogeneziembriogeneziZaraZarašštavanju tavanju ranarana

Normalna angiogeneza u odraslih

Uterus za vrijeme Uterus za vrijeme menstrualnog menstrualnog ciklusaciklusa

ZaraZarašštavanjetavanje ranarana

Razlikujemo dva vaskularna sustavaRazlikujemo dva vaskularna sustava

Krvni Krvni –– nastaje nastaje angiogenezomangiogenezom

LimfatiLimfatiččkiki –– nastaje nastaje limfangiogenezomlimfangiogenezom

Angiogeneza

VaVažžan fizioloan fiziološški proces ki proces u:u:Razvoju embrionaRazvoju embrionaMorfogeneziMorfogeneziReprodukcijiReprodukcijiZaraZarašštavanjutavanju ranarana

Nekontrolirana angiogeneza

MoMožže doprinijeti razvoju razlie doprinijeti razvoju različčitih bolesti:itih bolesti:

MakularneMakularne degeneracije i degeneracije i dijabetidijabetiččne ne retinopatijeretinopatijeUpale kod Upale kod aterosklerozeaterosklerozePsorijazePsorijazeReumatoidnogReumatoidnog artritisaartritisaRasta tumora i metastazaRasta tumora i metastaza

Tumori ne mogu Tumori ne mogu rasti virasti višše od 2e od 2--3 3 mm ako ih ne prati mm ako ih ne prati angiogenezaangiogeneza

Kada tkivo treba više kisika ispušta molekule koje potiću rast krvnih žilaTumori koriste isti proces da bi mogli osigurati svoj rastFerrara i sur. iz Genetecha su dokazali da inhibicija angiogeneze može dovesti do odumiranja tumora inhibirajući njihov rast

Stvaranje krvnih žila i tumorska angiogeneza

Za vrijeme tumorske Za vrijeme tumorske angiogeneze angiopoietinangiogeneze angiopoietin--2 2 ((AngAng--2) destabilizira zidove 2) destabilizira zidove zrelih krvnih zrelih krvnih žžilailaMirne Mirne endotelne endotelne stanice stanice postaju osjetljive na VEGF i postaju osjetljive na VEGF i ostale ostale angiogeneangiogene faktorefaktoreProliferirajuProliferiraju i migriraju da bi i migriraju da bi stvorile nove krvne stvorile nove krvne žžileileProgenitori endotelnih Progenitori endotelnih stanica iz kostanica iz košštane srtane sržži i odlaze u perifernu krv i odlaze u perifernu krv i mobiliziraju se na mjestima mobiliziraju se na mjestima nove nove angiogenezeangiogeneze

Proces angiogeneze-tumorska angiogeneza

Aktivacija endotelnih stanica pomoću faktora stimulacije rastaDegradacija bazalne membrane krvne žileMigracija i proliferacija endotelnih stanica prema angiogenom stimulusuNastanak nove bazalne membrane oko imaturne krvne žileTumorska vaskularizacija stimulira tumorski rast

Danas znanstvenici proučavaju posljedice:

Inhibicije VEGF Stimulacije i porasta VEGF na:Zaraštavanje ranaCijeljenje kostijuLiječenje nakon infarkta miokarda

Terapijska stimulacija angiogeneze

Stimulacija ili pro-angiogeneza može biti od terapijske koristi u:Zacijeljivanju muskuloskeletalnog tkiva (kost, hrskavica i tetive)Zacijeljivanju rana (kirurške rane, opekline, ožiljci) Stvaranju novih krvnih žila kod infarkta miokardakoronarnih arterije i bolesti mikrovaskulatureU regeneraciji organa (jetra, bubreg i motorni neuroni)

Vaskularni endotelni čimbeni rasta - VEGF

Inducira diferencijaciju i proliferaciju endotelnih stanica iz njhovih progenitora (hemangioblasti i angioblasti)Formira se slabo diferencirani primitivni vaskularni pleksus (vasculogeneza)Angiopoietin-1 (Ang-1) remodelira vaskularni pleksus u zreli vaskularni sustav (angiogeneza)

VEGF

VEGF snažan faktor rastaStimulira proliferaciju i migraciju endotelnih stanicaVeže se na dva receptora tirozinkinazeVEGF receptor-1 (VEGFR1)VEGF receptor-2 (VEGFR2)Angiogeni utjecaj VEGF na endotelne stanice odvija se preko VEGFR2

VEGF protein

Najvažniji regulator fiziološke angiogeneze u razvoju embriona, reproduktivnoj biologiji, enhondralnom formiranju kosti i zacijeljivanju ranaKljučni medijator patološke angiogeneze kod određenih tumora i bolesti okaOtkriće humaniziranog anti-VEGF antitijela, Avastin® (bevacizumab) za liječenje solidnih tumora

Histološki je građen od tri komponente:

1.1. 1.1. BBlastemalastema2.2. MMezenhimaezenhima

1.1. 3.3. EpitelaEpitela

MakroskopskiMakroskopski vidimo vidimo lobuliranulobuliranu smesmeččkastokastobijelu masu u bijelu masu u bubregububreguVezan je za rani Vezan je za rani razvoj bubregarazvoj bubrega

Genetski sindromi i nefroblastom

10% j10% je vezano uz e vezano uz određene genetske određene genetske sindrome kao sindrome kao ššto su:to su:BeckwithBeckwith--WiedemannWiedemannsindromsindromDenisDenis--DrashDrash sindromsindromWAGR kompleksWAGR kompleks--aniridijaaniridija, mentalna , mentalna retardacija, retardacija, genitourinarne genitourinarne malformacije malformacije

Histologija-prognoza

Prema histološkoj slici se može podijeliti u dvije prognostičke skupine:

1. Povoljne prognoze (sadrži dobro diferencirane gore navedene histološke komponente)

2. Nepovoljne prognoze (sadrži difuznu anaplaziju)

Obzirom da je nefroblastom zloćudni tumor, a angiogeneza je neophodna u ekspanziji malignog tumorskog tkiva, naš je interes proučiti utjecaj angiogenih čimbenika na rast i prognozu ove neoplazme

Hipoteza

EEkspresijakspresija angiogenih angiogenih faktora bi se faktora bi se mogla razlikovati unutar histolomogla razlikovati unutar histološških kih subtipova nephroblastomasubtipova nephroblastoma obzirom na obzirom na prognozu bolestiprognozu bolesti

Usporediti ekspresiju:

Vaskularnog Vaskularnog endotelnogendotelnog ččimbenika rasta imbenika rasta VEGFVEGF--aa u:u:EEmbrionalnom tkivu i unutar histolombrionalnom tkivu i unutar histološških kih subtipova nesubtipova neffroblastomaroblastoma, budu, budućći da se radi i da se radi o embrionalnom tumoruo embrionalnom tumoruBBazaziiččnnogog fibroblastifibroblastiččnognog ččimbenika rasta imbenika rasta ((bFGFbFGF)) uu::EEmbrionalnom tkivu mbrionalnom tkivu istraistražžiti iti i usporediti i usporediti ekspresiju ekspresiju bbFGFFGF--a u embrionalnom tumorua u embrionalnom tumoru((nefroblastomnefroblastom)) i tkivu u razvojui tkivu u razvoju

FGF Mezenhimalna stem stanica se samoobnavlja i stvara jedinice za formiranje kolonija fibroblast

Nastaju:Nastaju:HondroblastHondroblastOsteoblastOsteoblastAdipoblastAdipoblastMyoblastMyoblastKardiomioblastKardiomioblastTenoblastTenoblast

Embrionalne Embrionalne matimatiččne stanice ne stanice izraizražžavaju receptor avaju receptor za FGF za FGF -- zelena zelena bojaboja

Ustanoviti

PPostoji li razlika u ekspresiji ostoji li razlika u ekspresiji angiogenihangiogenihččimbenika u imbenika u kod kod nephroblastomanephroblastoma koji sukoji su::PPrimali rimali preoperativnupreoperativnu kemoterapiju kemoterapiju OOninihh koji su operirani bez koji su operirani bez predhodnepredhodnekemoterapije ili zrakemoterapije ili zraččenjaenjaInteres je da razluInteres je da razluččimo da li i koliko imo da li i koliko konvencionalna kemoterapija utjekonvencionalna kemoterapija utječče na e na angigenezuangigenezu

Drugo moguće područje istraživanja

Procjena značaja angiogeneze i limfangiogeneze u limfomima dječje dobi:

Non Hodgkin limfomaHodgkin limfoma

Ovakvih ispitivanja nema dovoljno kod dječjih hematoloških malignih bolesti

AngiogenezaAngiogeneza i i limfangiogenezalimfangiogeneza su su neophodne za progresiju neophodne za progresiju limfomalimfomaCirkulirajuCirkulirajućći i i i celularnicelularniVEGF su poveVEGF su poveććani kod ani kod hematolohematološških malignih kih malignih bolestibolestiVEGF moVEGF možže doprinijeti e doprinijeti rastu rastu limfomalimfoma poticanjem poticanjem angiogeneze angiogeneze

Također bi ispitivali stvaranje angiopoetina -1 i -2 i njihovu povezanost u angiogenezikod limfoma dječje dobi

Ispitivanja bi se radila u laboratorijuZavoda za patologiju, citologiju i sudsku medicinu KBC Split

VEGF-D poticana angiogeneza u vrijeme rasta tumoraKrvne i limfne žile su prikazane imunoflorescentnim metodama pomoću protutijela CD31 i LYVE-1

Suradnici u istraživanju:

1.1. KlinikaKlinika zaza djedječčjeje bolestibolesti KBC SplitKBC Split, 21000 , 21000 SplitSplit , , SpinSpinččiiććevaeva 1.1.

2.2. Zavod za patologiju, citologiju i sudsku Zavod za patologiju, citologiju i sudsku medicinu medicinu KBC SplitKBC Split, 21000 , 21000 SplitSplit , , SpinSpinččiiććevaeva 1.1.

3.3. Zavod za anatomiju, histologiju i Zavod za anatomiju, histologiju i embriologiju Medicinskog fakulteta embriologiju Medicinskog fakulteta SveuSveuččiliiliššta u Splitu, 21000 ta u Splitu, 21000 SplitSplit, , KiKiššpatipatiććevaeva 2.2.

Djelatni tim:

1. Doc.dr.sc.Srđana Čulić, viši znanstveni suradnik2. Prof.dr.sc.Ivana Kuzmić-Prusac, viši znanstveni suradnik3. Prof.dr.sc.Mirna Saraga-Babić, znanstveni savjetnik4. Prof.dr.sc.Marjan Saraga, viši znanstveni suradnik5. Mr.sc.Ivo Jurić, znanstveni asistent6. Darko Alfirević, dr.med, znanstveni asistent 7. Sandra Zekić, znanstveni novak8. Branka Braovac, tehničarka9. Vanja Matas, tehničarka10. Arijana Vuko, tehničarka

Uvjeti rada u laboratoriju Zavoda za patologiju, citologiju i sudsku medicinu KBC Split

NaNašš imunohistokemijski imunohistokemijski lablabooratorij ratorij opremljen je potrebnim uređajima i opremljen je potrebnim uređajima i opskrbljen reagensima za provedbu opskrbljen reagensima za provedbu istraistražživanjaivanja

Uvjeti rada laboratorija Zavoda za anatomiju, histologiju i embriologiju

Zavod Zavod ččine ine ččetiri laboratorija ukupne etiri laboratorija ukupne povrpovrššine 270 metara kvadratnih ine 270 metara kvadratnih opremljenih uobiopremljenih uobiččajenom opremom za ajenom opremom za sve klasisve klasiččne, ne, imunohistokemijskeimunohistokemijske i i imunofluorescencijskeimunofluorescencijske tehnike tehnike ukljuuključčujuujućći uklapanje i pripremu i uklapanje i pripremu ultratankihultratankih rezova za transmisijsku rezova za transmisijsku elektronsku mikroskopiju (TEM)elektronsku mikroskopiju (TEM)

Posjeduje:

OOpremu za stanipremu za staniččnu kulturu, nu kulturu, elektrofiziologijuelektrofiziologijuPPoseban odsjek za mikroskopiju oseban odsjek za mikroskopiju NNekoliko ekoliko mikrotomamikrotoma, , kriotomkriotom i i ultramikrotomultramikrotomJJedan edan konfokalnikonfokalni sustav, dva uspravna i sustav, dva uspravna i jedan jedan invertniinvertni fluorescencijski mikroskopfluorescencijski mikroskopMikroskopi su opremljeni konvencionalnim i Mikroskopi su opremljeni konvencionalnim i hlađenim digitalnim kamerama upravljanim hlađenim digitalnim kamerama upravljanim MetamorfMetamorf raraččunalskim programom unalskim programom

Elektrofiziološka oprema uključuje:

Uređaje za izradu i poliranje pipeta,Pojačalo za elektrofiziologiju Mikromanipulator visoke preciznostiInkubator za staničnu kulturu, zamrzivače, nekoliko hladnjakaVage i svu sitnu laboratorijsku opremu (kupelji, vruće ploče, centrifuge, tresilice, vlažne komore, itd.)