CC reactivos

CONTROL DE CALIDAD DE SUEROS HEMOCLASIFICADORES ABO, Rh Y

SUERO DE COOMBS

Q.B.P. MA. LUISA TAVIRA MENDOZA

CONTROL DE CALIDAD DE SUEROS HEMOCLASIFICADORES ABO, Rh Y SUERO DE COOMBS

Las pruebas de control de calidad se realizan para determinar las especificaciones mínimas que deben tener los sueros hemoclasificadores ABO y Rh así como para la antiglobulina humana ( suero de Coombs ).


¿Quiénes establecen estos criterios?Existen normas que establecen cuales son las

especificaciones que deben cumplirse en estos reactivos.* NOM-003-SSA2-93* NOM-017-SSA1-93 (ABO)* NOM-018-SSA1-93 (Rh)* NOM-019-SSA1-93 (Suero de Coombs)


* Anti-A* Anti-B* Anti-AB* Anti-D* Antiglobulina Humana

¿ Lectinas ?- Potenciadores:

¿ Albúmina ?¿ LISS ?¿ Bromelina ?

Reactivos a evaluar:


¿Cuales son los criterios para valorar y aceptar estos reactivos?

Se revisarán los siguientes aspectos:

FisicoquímicosTécnicos


Aspectos Fisicoquímicos:* Nombre del producto* Lote y fecha de caducidad* Temperatura de almacenaje* Volumen* pH* Olor y color del suero * Color de la etiqueta, rosca y bulbo* Instructivo


Suero Color del suero

Color de la etiqueta

Color del bulbo

Anti-A Azul Azul Azul

Anti-B Amarillo Amarillo Amarillo

Anti-AB Ámbar Blanco Blanco


Aspectos Técnicos:

* Avidez

* Especificidad

* Título ( potencia )


Avidez:

- Es la fuerza global de la interacción entre dos moléculas.

- Es el tiempo en que se inicia la aglutinación.

- La avidez depende tanto de la afinidad como de la valencia de las interacciones.


IgM tiene 10 sitios de unión idénticos que podrían unirse a 10 determinantes antigénicos en una superficie celular dando lugara una interacción polivalente con una mayor avidez.

Tiempo promedio de avidez

Anti-AA1A2

A1BA2B|

2212

15201530

Anti-BB

A1BA2B

A1A2B

R1rR2r

D débil

311

151515

ANTI-AB223

152015

Anti-D331

303030

Antisuero Grupo sanguíneo Tiempo de inicio de aglutinación (seg)

Número muestras a probar


Especificidad:Capacidad de un Ac para reconocer un Ag distinguiendo pequeñas diferencias en la estructura química.Cada antisuero se hace reaccionar con las diferentes células y no debe existir aglutinación inespecífica.


REATIVO

CEL. A1

CEL. A2

CEL. B

CEL. O R1r rr

Anti-A POS POS NEG NEG

Anti-B NEG NEG POS NEG

Anti-AB POS POS POS NEG

Anti-D POS NEG

Control Rh

NEG NEG

Lectina A1

POS NEG NEG NEG

Lectina H ? ? ? POS

Coombs

E+ E-

POS NEG

ESPECIFICIDAD

Antígenos Eritrocitarios

Ag A

Tipo 2

Ag A

Tipo 3

Ag A

Tipo 4

Ag H

Grupo A1

Ag A

Tipo 2

Ag H

Grupo A2 Grupo B

Ag H

Ag B

Ag H

Grupo O

Ag A

Tipo 4

Ag A

Tipo 3Ag H

Ag A

Tipo 2

Ag B

Ag A

Tipo 2Ag B

Ag H

Grupo A1B Grupo A2B

CONTROL DE CALIDAD DE SUEROS HEMOCLASIFICADORESABO, Rh Y SUERO DE COOMBS

TÍTULO:La concentración de un Ac específico en el

suero para un Ag en particular se calcula determinando cuántas diluciones seriadas del suero se pueden realizar antes de que se dejen de observar uniones.Mide la capacidad del antisuero para

reaccionar con sus respectivas células (Ag).

TÍTULOS MÍNIMOS QUE DEBEN TENER LOS DIFERNTES ANTISUEROS

Antisuero Grupo sanguíneo Título mínimo

Anti-AA1A2

A1BA2B

256128128

8

Anti-BB

A1BA2B

25664

128

Anti-ABA1A2B

25664

256

Anti-A1 Lectina A1A1B

6464

Anti-H LectinaA2 8

CoombsE+ 32

Anti-Rh R1R2 64


Potencia:Mide la fuerza del antisuero con la que es

capaz de reaccionar con los Ags respectivos.

A partir del resultado de las aglutinaciones en la titulación, se anota lectura por grado de aglutinación de 0 a 4+, a cada uno de estos se les asigna un valor numérico (computo).


Lectura

Aglutinación Puntos

4+ Total en un solo cúmulo grande 12

3+ Grandes aglomerados con pocos eritrocitos libres10

2+ Gran cantidad de conglomerados pequeños con número moderado de eritrocitos libres 08

1+ Conglomerados definidos pero finos (cúmulos de 20 eritrocitos o menos) 05

+/- Eritrocitos dispersos que pueden contener ocasionalmente algún conglomerado pequeño 02

- Los eritrocitos se mueven libremente. No hay conglomerados visibles 0

LA CALIDAD EMPIEZA DESDE QUE AMANECE Y YO AUN SE EN QUE

MOMENTO SE TERMINA

¿USTEDES SI?

RECORDEMOS QUE SOMOS

LO QUE HACEMOS

TÉCNICAS PARA EL CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS DE INMUNHEMATOLOGIA

* Avidez:Se determina usando la técnica en placa y a

temperatura ambiente. La aglutinación se debe iniciar en el tiempo máximo que se especifica para cada subgrupo, contando a partir del momento en que se pone en contacto suero y eritrocitos.

Las pruebas de avidez se realizarán de rutina a los antisueros en uso diariamente antes de empezar a trabajar y a una muestra de antisuero de cada nuevo lote.

TÉCNICAS PARA EL CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS DE INMUNOHEMATOLOGIA

Eritrocitos al

10% ( ABO )

40% ( Rh ) calentar previamente la placa a 37-45°C

1 gota eritrocitos+

1 gota de antisuero

Mezclar en un área de ≈ 25mm diam.

Rotar la placa de lado a lado

Nota: Tomar el tiempo con un cronometro desde el momento de la mezcla hasta

el momento de inicio de la aglutinación.

AVIDEZ


El producto debe estar libre de aglutininas diferentes a las especificadas en la etiqueta y libre de partículas, de efectos o sustancias indeseables.Se debe realizar diariamente a los antisueros de rutina, antes de empezar a trabajar y a una muestra de cada nuevo lote.

ESPECIFICIDAD

A1 A2 B O R1r rr

Eritrocitos 2-5%

ReactivoAnti-A

Anti-AB

Anti-B

Anti-DControl RhSuero de Coombs

E+ E-

- Colocar igual volumen de la suspensión de eritrocitos y del reactivo.

- Centrifugar 30 seg a 3400 rpm.

- Leer. Los reactivos deberán contener únicamente las aglutininas especificadas en la etiqueta.

- El Rh se llevará hasta Coombs.

+ +

+ + +

- -

- - + -

-+ -

- -+ -

Especificidad

Título (Potencia):

La titulación se hará a una muestra de antisuero de cada nuevo lote.

La titulación se realiza siempre por duplicado y los resultados deberán ser reproducibles. Si existen diferencias en las lecturas de 2 tubos con la misma dilución, deberá repetirse la prueba.



1:1 1:2 1:641:4 1:321:161:8 1:128 1:256

Realizar diluciones seriadas del Antisuero con SS

50μl del reactivo diluido+

50μl de eritrocitos ( 2 – 5 % )

Mezclar y

30 seg 3400 rpm

Títulación( ABO Y Rh )

1:512


Título ( Potencia )Resuspender suavemente las células y bajo iluminación apropiada, leer macroscópicamente y sin demora ( los negativos se llevaran hasta Coombs )

El título es el recíproco de la mayor dilución del suero que da una lectura de 1+.

Ej. Si la dilución es 1:512 el título es de 512.•• •

DILUCIONES

Ej. 1

Eritrocitos al 5%5 ml E + 95 ml SS

5 ml E --------- 95 ml SSX --------- 3 ml SS

3 x 5 95

X = 0.15 ml E

Ej. 2

Eritrocitos al 10 %10 ml E + 90 ml SS

10 ml E --------- 90 ml SSX --------- 2 ml SS

2 x 10 90

X = 0.22 ml E

Ej. 3

Eritrocitos al 40 %40 ml E + 60 ml SS

40 ml E --------- 60 ml SSX --------- 3 ml SS

3 x 40 60

X = 2.0 ml E

Ej. 4

Eritrocitos al 0.8 %0.8 ml E + 99.2 ml SS

0.8 ml E --------- 99.2 ml SSX --------- 3 ml SS

3 x 0.8 99.2

X = 0.02 ml E

DILUCIONES

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