faze@ of Ci;ronrafagraphy, 129 (f976) 472-472 -8 EIsevier Scientific Publishing Company, Amsterdam - Printed in The Netherlands

CHROM. 9350

Note

Chromatographie des stbro;ides gonadiques sur Sephadex bH-20

P. GERMEAU et J. DUVMER

Service de Chimie d&de, Universire’ de Li&ge, i34020 Li2ge (Reigique)

(Rqu Ie 2 avril 1976; manuscrit modifid wu le 17 mai 1976)

- Le radioimmunoessai des hormones steroides permet une ‘surveillance plus facile de la fonction gonadique tant chez la femme que chez l’hpmme. L’exploration hormonale de I’ovaire Porte Q la fois sur la fonction folliculaire, lut&Ae et Ies andro- gknes. Toutefois, certains sthoides, tel l’oestradiol, sont parfois pr&ents en quantit& tel!ement faible qu’il est n&ssaire, compte tenu de la sensibilite du radioimmuno- essai, d’extraire 2 B 3 ml de sCn.un ou de plasma, si on d&ire obtenir des rCsultats stisamment fiables. Des lors, dans ces conditions, le dosage simtlltane de plusieurs st&oides gonadiques (progest&one, androst&nedione, testosterone, dihydrotestoste- rone, oestrone, oestradiol, oestriol) reali& sur des prel&ements GparCs, exige des quantites importantes de sang et rend difficile leur dosage rep& dans un laps de temps relativement bref.

De nombreux papiers ont &t publiCs, qui presentent une sCparation simultan& 1 de plusieurs steroiides SW un &iiantillon unique de plasma’-6. Shapiro et Peron et Sippell et ai? ont @sent6 des modes de separation de corticostCroides sur Sephadex LH-20. Carr et aL3 prCsentent de nombreux systemes mais aucun ne donnenne separa- tion commune des androgenes et des oestrogcnes. Par contre, Parker et ~1.~ donnent une Gparation jumelke d’androggnes et d’oestrog&nes. Toutefois, la separation est rQlis& sur colonne de CClite, dont la manipulation est plus laborieuse que le Sepha- dex LM-20, ne ffit-ce que par la pression d’azote qu’il r&lame pour hgter l’Clution.

Cette courte note pr&ente une mdthode originale de sCparation des sept princi- paux stCroides gonadiques impliquis dans l’exploration biologique des hirsutismes. La mCthode chromatographique proposCe permet de les doser sur un khantillon de sang n’ex&dant pas 5 ml.

MAT&KEL ET -THODES

On place 2 g de Sephadex LH-20 sur une colonne de chromatographie en verre (190 x 10 msn D.I.). Le solvaxk dluant utilise est constituC d’un mklange de solvant isooctane-betine-m&hanol dont Ies proportions varient au tours de I’&tion; 90:3 :3 entre 142 ml, 90:15:15 entre 43-72 ml, 90:40:40 entre 73-102 ml.

Les st&oiides hormonaux sent parfaitement fraction& et peuvent Etre do&s

472. NOi?

avec prkcision sur une seule prise de sang de 5 ml. Les stkroides son! &ks de Ia colonne dans l’ordre repris au Tableau I.

Cette separation chrornatographique peut servir non seulement dans f’explora- tiotiiormonale de la grossesse et des hirsutismes pour lesquels elle fournit ie fraction- nement des principaux androgenes concern&, mais aussi pour &parer les diErents androgCnes pour Ctablir leur taux de production. Chez l’homme, elle p&met notam- ment une exploration a%e des troubles de la spermatog&be.

TABLEAU I

l?LIJl-ION DES SdROPDES GONADIQUES SUR SEPHADEX LH-20

SterDide Volume d’&tion (ml)

Progestbone 14-19 Androstinedione 23-29 Dihjrdrotestost&one

1 32-42

Testost&one 49-5s :.

Gestrone 59-68 Oestradiol 73-78 oestrio1 85-91 Oes&roI 94-102

BIBLIOGFWPHIE

1 B. H. Shapiro et F. G. P&on, J. Chromatogr., 65 (1972) 568. 2 W. G. Sippell, P. Lehmann et G. Holhnarm, J. Chromatogr., 108 (1975) 305. 3 B. R. Carr, G. Mikhail et 6. L. Flincklinger. J. Clin. Ekdocriflo!. Metab., 33 ($971) 3.58. 4 G. E. Abraham, D. TuIchmsky et S. G. Korenman, Biochem. Med., 3 (1971) 365. 5 N. Nagai et C. Longcope, .St2roi&, 17 (1971) 631. 6 C. R. Parker, Jr., J. 0. Eilegood et V. B. Mahesh, J. Steroid Biochem., 6 (1975) 1.