COLORACIN HEMATOXILINA- EOSINA

8/9/2019 COLORACIN HEMATOXILINA- EOSINA

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Coloración

Hematoxilina-

Eosina


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INTEGRANTES

CORONADO CUSI STEFANIA

FABIAN AMBROSIO YELSIN

DAVILA DAVILA JORDAN

EVANGELISTA REQUEJO CLAUDIA

FRANCIA REYES YOLANDA

GONZALES BARRON ROCIO


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MATERIALES

LAMINA HISTOLOGICA EN BLANCOBATERIA DE COLORACION H-EBALSAMO DE CANADALAMINILLA CUBREOBJETOSCAJA PORTALAMINALAPIZ CON BORRADORGUANTES QUIRURJICOS

PAPEL HIGIENICOCRONOMETROCAMPO DE TRABAJO


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En la batería de coloración H-E se pudoobservar :

• Se puede observar tres baterías la primera lacual estaba conformada por


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A. CARBONATADA

HEMATOXILINA

LA SEGUNDA BATERIA ESTA CONFORMADAPOR:


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EOSINA E

A. ACIDO A


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La tercera batería esta conformadapor:

ALCOHOL 96 %

A. ABSOLUTO 2


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A. ABSOLUTO 3

XILOL 1


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Introducir las láminas portaobjetos en el xilol 2 durante 10 minutos


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Realizar 10 inmersiones en alcohol absoluto 1


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AGUA DE CAÑO

Lavar con agua corriente ( de caño)


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COLORACIÓN

Procedimiento en práctica


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En este primer paso, procedemos a colorear comohematoxilina de Harris durante un tiempo de 15

minutos. Esta coloración va actuar a nivel nuclear.


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Procedemos al lavado en aguacorriente.

En la imagen observamos como

se torna de un color entre

morado y rosado aunque aún no

muy notorio.


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Como se visualiza en la imagenprocedemos a introducir las muestras enagua carbonatada, nos aseguramos de

que estén totalmente sumergidas, luegotomamos un tiempo de 3 minutos. Estatiene la propiedad de intensificar el color( auxocroma).


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Procedemos a lavar una sola vez, adiferencia de la anterior ( 3 veces) , notamos

que la coloración es más notoria, gracias a lapropiedad ya mencionada.


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Por último procedemos a sumergirlocompletamente en eosina durante un tiempo de 3

minutos, la cual actúa como colorantecitoplasmático de contraste o de fondo.


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Finalizando lavamos en aguacorriente tres veces hasta lograrquitar el colorante sobrante.

Podemos observar ya

la muestra un pocomás notoria, luego de

ser introducida en las

tres sustancias ya

mencionadas.


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DESHIDRATACIÓNHacer 10 inmersiones con las laminas de porta objetos en el

alcohol al 96%


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DESHIDRATACIÓN

Observamos que el colorante le falta intensificar la coloración y exceso


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DIAFANIZACIÓN

Introducir las laminas porta objeto en el XIOL 1 durante 5 minutos


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DIAFANIZACIÓN Observamos que las estructuras están definidas y coloreas , elexceso del colorante esta desaparecido.


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Dejar secar para eliminar el exceso de xilol

DIAFANIZACIÓN


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Montaje:

• Montar con bálsamo de Canadá:


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• Luego con un lápiz que tenga borrador,

presionamos sobre el cubreobjetos deadentro hacia afuera .


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Secar:

• Dejar la lámina histológica por 24 horas


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La tinción hematoxilina y eosina es el método mas popular detinción utilizado en histología y medicina diagnostica.

El método supone la aplicación de la tinción de hematoxilina,que por ser catiónica o básica, tiñe estructuras ácidas (basófilas)en tonos azul y púrpura,como por ejemplo los núcleoscelulares; y el uso de eosina que tiñe componentes básicos(acidófilos) en tonos de color rosa, gracias a su naturalezaaniónica o ácida, como el citoplasma.


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La Hematoxilina, es un compuesto que se obtiene de la planta leguminosaHaematoxylum campechianum L., conocida también con el nombre depalo de Campeche. Es un producto natural que al ser oxidado constituyeuna substancia de color morado oscuro denominada hemateína.Tal como se obtiene de la planta e incluso luego de sufrir el proceso deoxidación, su capacidad de tinción es muy limitada. Por lo tanto, debecombinarse con iones metálicos, especialmente las sales de hierro (III) oaluminio (II), que actúan como mordientes.Si bien la hematoxilina es una sal neutra, suele ser denominada como uncolorante básico, ya que el componente cromógeno reside en el complejocatiónico (básico) de la misma. Es de notar que la tinción histológica por

hematoxilina no indica tanto la constitución química de los componentescelulares, sino la densidad de cargas eléctricas negativas de los mismos.


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http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Haematoxylin.png


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La eosina Y (C20H8Br4O5, tetrabromofluoresceína, CI 45380, CI 45386),comúnmente conocida como eosina amarilla.

La eosina B (C20H8Br2N2O9, dibromodinitrofluoresceína, CI 45400),también conocida como eritrosina B azulada.

http://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Eosin_B.pnghttp://es.wikipedia.org/wiki/Archivo:Eosin_Y.svg


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Estructura molecular del xilol

http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/b/b3/IUPAC-cyclic.svg


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CARACTERÍSTICAS DE LA HEMATOXILINA

De acuerdo al procedimiento de tinción puede ser progresiva (intensifica la coloración) y regresiva (eliminación del exceso)

Se obtiene de forma natural (plantas)

Para ser un colorante maduro pasa por un proceso de oxidación

Utilización para coloración de muestras

Utilización para la industria textil

Presenta propiedades semejantes a las anilinas básicas

Es un colorante directo

Los agentes oxidantes naturales: el aire (varios meses de exposición)

Los agentes artificiales puede ser: oxido de mercurio, permanganato de potasio, bicromato de potasio, etc.

En las tinciones histológicas tiñe los componentes ácidos dando un color violeta


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CARACTERISTICAS DE LA EOSINA

El nombre “Eosina” proviene de aurora (naranja).

Presenta auto fluorescencia espontáneaSe la emplea tanto en soluciones acuosas como alcohólicas.

Las eosinas son xantenos ácidos ó colorantes de ftaleína.

Las más comunes son:

Eosina amarilla, es la más usada. Eosina B (azul). Floxina. Eritrocina (está halogenada con iodo en lugar de bromo). Zafranina.

Rosa de Bengala.

Es un colorante artificial (se trata de derivados hidroxixanténicoshalogenados con tres grupos arilo).


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CARACTERISTICAS DE LA EOSINA

Su punto de solubilidad es del 44 % en agua y del 7 % en alcohol.

Se puede usar un acentuador del color (por ejem. ácido acético al0.2 % ó ácido tánico).

Da una buena coloración citoplasmática ó de fondo.

Para colorear se emplea generalmente una batería de coloración.


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CARACTERISTICAS DEL XILOL o XILENO

Químicamente denominado dimetilbenceno, es un

anillo de benceno con dos grupos metilo unidos a él,presentando tres isoformas, en las que la posición de losdos grupos metilo varia en el anillo de benceno.

El Xilol solo es soluble en alcohol al 100%

Se utiliza también como solvente y diluyente.

El alcohol y el xileno disuelven los lípidos de la célula ypor lo cual al extraerse también se extraen las grasas ylos lípidos de la célula.

El líquido diafanizador de uso más frecuente es el xilol


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CARACTERISTICAS DEL XILOL o XILENO

La diafanización de los tejidos deshidratados se debe a que

estas sustancias poseen un alto índice de refracción y alinteractuar con los tejidos los vuelven transparentes.

Es un excelente agente aclarante pero tiende a hacer que lostejidos sean excesivamente duros y quebradizos y esto nuncadeben dejarse en este líquido más de 3 horas.

Se llama aclaración, ya que el tejido se torna transparente oclaro en el xileno, esto se debe a que cambia su índice derefracción.

El xileno es inadecuado para el encéfalo y los ganglioslinfáticos, pues los hace demasiado quebradizos, para estos

órganos es mejor utilizar cloroformo.

Para el procesamiento de muestras, se sumergieron los tejidosen soluciones de xilol I y II durante 15 minutos cada una.


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CARACTERISTICAS DEL METANOL

El metanol (estructura química CH3OH), es un líquido incoloro,volátil, inflamable, con olor leve a alcohol en estado puro.

Se le emplea con frecuencia para fijar frotis desecados:

SANGRE.MEDULA OSEA.GANGLIO.BAZO.LIQUIDOS DE PUNCION.

Altera morfológicamente a los lípidos.

Como fijador de emergencia vale, pero tiene grandesinconvenientes: no fija la cromatina, produce retracción, no tieneefecto mordiente y produce fenómenos de desplazamientos.(sustitución de hidratos de carbono).


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CARACTERISTICA DE ETANOL

Líquido claro, transparente o incoloro, volátil, inflamable y de oloragradable.

Como fijador único utilizaremos alcohol a unas concentracionesentre el 70 y 90% y se obtiene cogiendo de 70−90 ml de alcohol puro

y se lleva hasta 100 con agua destilada.

La fijación mas potente va a corresponder a las soluciones más

concentradas pero a altas concentraciones la capa externa del tejidose endurece en exceso, lo que impide la penetración del fijador a laparte interna de la pieza.

El tiempo de fijación correspondiente a una pieza de 5mm deespesor es dos a cuatro horas renovando unas 3 veces el líquido.

Es un fijador que preserva el glucógeno y la actividad de ciertasenzimas titulares, fija los pigmentos y se emplea en las extensionescitológicas


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CARACTERISTICAS DEL ETANOL

Como altera escasamente la estructura antigénica de los tejidos es un

buen agente fijador para inmunohistoquímica. Entre las ventajas delalcohol están: Fijan y deshidratan al mismo tiempoPosee una gran velocidad de penetraciónPrecipita muy rápidamente las proteínas y el glucógeno lo que unido ala anterior propiedad aporta extraordinariamente el tiempo de fijaciónes un notable agente bactericida y por tanto un buen conservante

No fija adecuadamente la cromatina porque disuelve los ácidosnucleícos y además disuelve parcialmente los lípidos.

Endurece y contrae excesivamente los tejidos.

Prepara mas la tinción porque carece de efecto mordiente

A medida que realiza la fijación se va diluyendo al incorporar el aguaque extrae de los tejidos por lo cual pierde actividad progresivamente


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