ColorPACŽ Giardia/Cryptosporidium Rapid Assay · 2017. 5. 31. · Cryptosporidium specific antigens in aqueous extracts of fecal specimens. It is intended for in vitrodiagnostic

CLIA Complexity: ModerateCDC Analyte ID Code: 2222 Giardia lamblia; 1109 Cryptosporidium

CDC Test System ID Code: 08172

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INTENDED USE

The BD ColorPAC� Giardia/Cryptosporidium test is a rapid immunoassay for the qualitative detection of Giardia andCryptosporidium specific antigens in aqueous extracts of fecal specimens. It is intended for in vitro diagnostic use asan aid in the detection of suspected Giardia or Cryptosporidium infections by professional laboratories.

SUMMARY AND EXPLANATION

Giardia and Cryptosporidium are recognized as two of the most frequent causes of parasitic intestinal disease. Bothorganisms are found throughout the world. Transmission is usually through the ingestion of contaminated food or water.

Giardiasis in humans is caused by the protozoan parasite Giardia lamblia (also known as Giardia intestinalis). Theacute disease is characterized by watery diarrhea, nausea, abdominal cramps, bloating, weight loss andmaladsorption lasting for several weeks. Chronic or asymptomatic infection can also occur.1, 2

Cryptosporidiosis in humans is caused by the coccidian parasite Cryptosporidium parvum. Acute symptoms includewatery diarrhea, abdominal cramps, loss of appetite, low grade fever, nausea and vomiting lasting for several days toover a month. Severe, persistent infections can occur in immunocompromised patients.1 Infection may also beasymptomatic. The parasite has been implicated in several major waterborne outbreaks in the United States.3

Diagnosis of Giardia and Cryptosporidium infection has traditionally been done by microscopic examination of stools.More recently, the detection of Giardia and Cryptosporidium antigens in stool specimens using enzyme immunoassayshas become an accepted approach to diagnosis.4-6 The ColorPAC Giardia/Cryptosporidium assay detects similarantigens using a non-enzymatic rapid immunoassay format.

PRINCIPLES OF THE PROCEDURE

The ColorPAC Giardia/Cryptosporidium test is a qualitative immunochromatographic assay that simultaneously detectsand distinguishes between Giardia and Cryptosporidium antigens in aqueous extracts of patient stool specimens. Thespecimen, collected in a sample transport or preservative medium, is added to a tube containing a treatment buffer.A biotinylated anti-Giardia capture antibody reagent is then added, followed by a pooled suspension of colloidal dyelabelled monoclonal antibodies to Giardia and Cryptosporidium. The sample is then mixed and poured into the testdevice that contains a capture reagent (an avidin derivative) for Giardia, a capture antibody for Cryptosporidium, anda control antibody that binds to excess colloidal dye conjugate. If Giardia antigen is present in the sample, a blackband will develop at the GIAR. position in the device window. If Cryptosporidium antigen is present, a black bandwill appear at the CRYP. position. The appearance of a black band at the CONT. position is required for the test resultto be valid. It indicates that the colloidal dye conjugate is intact and that proper capillary flow has occurred.

REAGENTS

Foil pouched ColorPAC Giardia/Cryptosporidium test devices consisting of: a) a membrane coated with an avidinderivative, mouse anti-Cryptosporidium and goat anti-mouse IgG, b) pad materials, desiccant and a plastic housing.(30 per test kit)

Sample Treatment Buffer (STB) (2.8 mL) Buffer solution with detergent, contains azide 0.1%.

Conjugate Reagent A (A) (1.8 mL) Biotinylated rabbit anti-Giardia in diluent buffer with carrier protein and detergent, contains azide 0.1%.

Conjugate Reagent B (B) (1.8 mL) Colloidal dye labelled monoclonal antibodies to Giardia andCryptosporidium in diluent buffer with carrier protein and detergent,contains azide 0.1%.

30 Specimen transfer pipets, 30 Specimen dilution tubes, Procedure Chart

Reagent Stand Stand for holding Reagent A (A), Reagent B (B) and the Sample TreatmentBuffer (STB). Additional 6 spaces for test samples identified as 123456.

ColorPAC� Giardia/CryptosporidiumRapid AssayFor the Qualitative Detection of Giardiaand Cryptosporidium Specific Antigens

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English: pages 1 � 6 Italiano: pagine 17 � 22Français : pages 6 � 12 Español: páginas 23 � 28Deutsch: Seiten 12 � 17

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Precautions: For in vitro Diagnostic Use.

After review by the Centers for Disease Control and Prevention (CDC), under CLIA �88, this product has beenidentified as Moderate complexity. The CDC Analyte Identifier Code for Giardia lamblia is 2222 and forCryptosporidium is 1109; the CDC Test System Identifier Code is 08172.

Do not use kit beyond the printed expiration date. Do not interchange or mix components from different kit lots.

Warning: Pathogenic microorganisms, including hepatitis viruses and Human Immunodeficiency Virus, may bepresent in clinical specimens. �Standard Precautions�7-10 and institutional guidelines should be followed in handlingall items contaminated with blood and other body fluids.

Warning: Reagents contain sodium azide. Very toxic by inhalation, in contact with skin, and if swallowed. Contactwith acids liberates very toxic gas. After contact with skin, wash immediately with plenty of water. Wear eye/faceprotection. Sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive metal azides. Ondisposal, flush with a large volume of water to prevent azide build-up.

Storage: Refrigerate at 2 � 8ºC. DO NOT FREEZE.

Note: It is very important that this kit is stored at 2 � 8ºC. Return kit to 2 � 8ºC storage immediately after each use.

SPECIMEN COLLECTION AND HANDLING

Stool specimens collected for ova and parasite examination can be used in the ColorPAC Giardia/Cryptosporidiumassay. The samples should be collected in clean, leak-proof plastic containers.

Samples collected in SAF, 10% formalin, MIF, Cary-Blair or Stuart's transport media* are the preferred specimens for thetest. Samples in PVA are not suitable.

Fresh* (unpreserved) samples are acceptable but must be diluted 1:4 in an acceptable transport media before runningthe test. If transport media is not available, distilled or deionized water may be used.

To make a 1:4 dilution:

� Mix specimen thoroughly using a wooden applicator stick or equivalent.

� Remove the equivalent of 1 mL mixed specimen and place into 3 mLs of acceptable transport media.

� Mix thoroughly and proceed with test.

*Fresh samples and specimens in Stuart's media should be tested as soon as possible after collection, as storage forthese conditions has not been validated.

QUALITY CONTROL

Several features are incorporated into the ColorPAC Giardia/Cryptosporidium test as routine quality checks:

1. The appearance of a control band at the CONT. position verifies that a functionally intact colloidal dye conjugatehas been added to the device, that the control line antibody is functionally active and that adequate capillary flowhas occurred.

2. The sequence of reagent additions to the sample tube allows the user to visually monitor the procedure: SampleTreatment Buffer is added to an empty tube; the stool specimen is visually observable; Conjugate Reagent A hasa red dye incorporated in it; and Conjugate Reagent B is black in color.

3. Characterized formalin preserved patient specimens may be used as routine external positive and negative controls.Characterized patient samples should be run as test specimens according to the procedures described below.

4. It is recommended that characterized specimens be run as controls with each new kit lot or with each new operator.

Quality control requirements must be performed in accordance with applicable local, state and/or federal regulationsor accreditation requirements and your laboratory�s standard Quality Control procedures. It is recommended that theuser refer to pertinent NCCLS guidance and CLIA regulations for appropriate Quality Control practices.

PROCEDURE

Materials Provided: All materials as listed under �Reagents.�

Materials Required But Not Provided: Specimen collection and transport devices. SAF, 10% formalin, MIF, Cary-Blairand Stuart�s transport media are acceptable, clock or timer.

Notes:

1. Allow kit components and specimens to equilibrate to room temperature before use. Mix liquid reagents byinverting several times before use. Return kit to the refrigerator promptly after each use. Always storereagents in an upright position.

2. Do not unpouch the test devices until ready for use.

3. Several tests may be run at the same time. Use separate dilution tubes and pipets for each specimen.

4. To prevent possible contamination, avoid touching the dispensing tip of the Sample Treatment Buffer, ConjugateReagent A and Conjugate Reagent B dropper bottles to the dilution tubes, pipets, test devices or anything thathas come into direct contact with patient specimens.

2

Formalin and SAF preserved specimens can be stored frozen (-20ºC or -70ºC), refrigerated (2 � 8ºC) or at room temperature(20 � 30ºC) and should be testedwithin 2 months after collection.

Cary Blair diluted samples can bestored refrigerated (2 � 8ºC) andtested within 2 weeks after collection or frozen (-20ºC) andtested within 2 months.

MIF preserved specimens can bestored frozen (-20ºC), refrigerated (2 � 8ºC) or at roomtemperature (20 � 30ºC) andshould be tested within 2 monthsafter collection.

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5. After removing caps from the reagent bottles wipe the exterior portion of the dispense tips with a clean, lint-free laboratory wipe (DO NOT use treated wipes such as alcohol pads).

6. It is important to dispense full drops of reagents for optimal assay performance. For best results, hold the bottleinverted in a near vertical position, squeeze and dispense slowly, allowing air to enter the bottle betweensamples. Shaking the bottle slightly in an inverted position may help to dislodge air trapped in the dispensingtip. If there is evidence of residual liquid or liquid build up on the outside of the dispense tip while dispensingreagent, wipe tip dry with a clean, lint-free laboratory wipe then resume dispensing.

7. Do not concentrate patient specimens. Specimens may be mixed to ensure uniform sampling, although it isacceptable to allow large particulates to settle so that the sample can be more easily pipetted.

8. All fresh or unpreserved specimens, including liquid samples, must be diluted approximately 1:4 in one of theacceptable transport media prior to use with this assay (see SPECIMEN COLLECTION AND HANDLING section).

Test Procedure

1. Remove the test device from the pouch and place on a flat surface; place a Specimen Dilution Tube into the kitworkstation holder or into a suitable test tube rack.

2. Add two drops of Sample Treatment Buffer (STB) to the Specimen Dilution Tube.

3. Use the Specimen Transfer Pipet to aspirate the aqueous patient stool specimen: squeeze the upper bulb of thepipet, insert the open end into the sample and release the pressure on the bulb while holding the pipet in thesample. Be sure to fill the barrel of the pipet completely. An overflow chamber prevents over-filling of the pipet.Transfer the contents of the pipet barrel (approximately 60 µL) into the Specimen Dilution Tube (sample mayremain in the overflow chamber).

Note: All fresh or unpreserved specimens, including liquid samples, must be diluted approximately1:4 in one of the acceptable transport media prior to use with this assay (see SPECIMEN COLLECTIONAND HANDLING section).

4. Add two drops of Conjugate Reagent A (A) to the tube.

5. Add two drops of Conjugate Reagent B (B) to the tube.

6. Mix the sample by manual swirling or by vortexing. Pour the entire contents of the tube into the sample well ofthe test device.

7. Visually read the test results after 10 min. Results are invalid after 15 min.

INTERPRETATION OF RESULTS

Positive for Giardia

The presence of visible grey-black bands at the GIAR. and the CONT. positionsindicates that Giardia antigen has been detected. The intensity of the band can varyfrom faint to strong. Visible test lines of any intensity should be read as positive.

Positive for Cryptosporidium

The presence of visible grey-black bands at the CRYP. and the CONT. positionsindicates that Cryptosporidium antigen has been detected. The intensity of theband can vary from faint to strong. Visible test lines of any intensity should be readas positive.

Negative for Giardia

No band visible at the GIAR. position and a band present at the CONT. positionindicates that Giardia antigen is absent or is below detectable levels. The CRYP.position can have either a band or no band.

Negative for Cryptosporidium

No band visible at the CRYP. position and a band present at the CONT. positionindicates that Cryptosporidium antigen is absent or is below detectable levels. TheGIAR. position can have either a band or no band.

Invalid Results

No band appears at the CONT. position. Incomplete or beaded band appears at theCRYP. or GIAR. position. The test should be repeated using another device. Insituations where adequate flow does not occur due to excessive particulate matter inthe specimen, the sample can be diluted two-fold in water or in the same transportmedium as it was originally collected and re-run.

LIMITATIONS OF THE PROCEDURE

1. As with all diagnostic procedures, the results obtained with the ColorPAC Giardia/Cryptosporidium test should beused in conjunction with other clinical information available to the physician.

2. Negative results can occur in samples containing levels of antigen below the lower limits of detection of theassay. Multiple specimens collected over several days can be tested for patients suspected of being positive forGiardia or Cryptosporidium.

3

Strong Weak

Strong Weak

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EXPECTED VALUES

The prevalence of Giardia and Cryptosporidium is variable among different populations and geographic areas. Giardiaincidence in developed countries is approximately 2 � 5%; Cryptosporidium incidence in Europe and North America isabout 1 � 3%.3 Higher prevalence rates may be present in children and in the immunosuppressed.1-3

PERFORMANCE CHARACTERISTICS

Sensitivity and Specificity

A multi-site clinical evaluation of the ColorPAC Giardia/Cryptosporidium test was performed both prospectively andretrospectively. Results from the ColorPAC Giardia/Cryptosporidium assay were compared with microscopic ova andparasite examination.

In the retrospective study, a panel of previously-characterized formalin preserved patient specimens was used. TheColorPAC assay was compared with microscopic examination results. Microscopic examination included standard ovaand parasite staining for Giardia and other parasites, modified acid-fast staining for Cryptosporidium and ifdiscrepancies were encountered, specific immunofluorescent staining for Giardia and Cryptosporidium.

Giardia results:

Sensitivity: 33/33 = 100% (95% confidence interval 89.4 � 100%)Specificity: 109/109 = 100% (95% confidence interval 96.7 � 100%)

The four discrepant specimens were positive for Giardia by microscopy.

Relative* agreement between the ColorPAC assay and rapid Giardia EIA: 138/142 = 97.2%.

*Note: Please be advised the "relative" refers to the comparison of this assay�s results to that of a similar assay.There was not an attempt to correlate the assay�s results with disease presence or absence. No judgment can bemade on the comparison assay�s accuracy to predict disease.

Cryptosporidium results:

Sensitivity: 36/37 = 97.3% (95% confidence interval 85.8-100%)Specificity: 105/105 = 100% (95% confidence interval 96.6-100%)

The one discrepant was verified as Cryptosporidium positive by immunofluorescence and probably contained a levelof antigen below the limit of detection of the ColorPAC assay.

Relative* agreement between the ColorPAC assay and rapid Cryptosporidium EIA: 142/142 = 100%

*Note: Please be advised the "relative" refers to the comparison of this assay�s results to that of a similar assay.There was not an attempt to correlate the assay�s results with disease presence or absence. No judgment can bemade on the comparison assay�s accuracy to predict disease.

4

Rapid EIA + 29 0for Giardia

� 4 109

ColorPAC� Giardia result

+ �

Microscopic exam + 36 1for Cryptosporidium � 0 105

ColorPAC�Cryptosporidium result

+ �

Rapid EIA + 36 0for Cryptosporidium � 0 106


+ �

Microscopic exam + 33 0

for Giardia � 0 109


+ �

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The prospective study was conducted on specimens characterized at three different geographically separated sites inthe United States. A total of 502 specimens were tested using the ColorPAC Giardia/Cryptosporidium rapid test.Results were compared with microscopic examinations for ova and parasites combined with modified acid faststaining for Cryptosporidium.

Giardia results:

Sensitivity: 50/50 = 100% (95% confidence interval 92.9 � 100%)Specificity: 448/452 = 99.1% (95% confidence interval 97.8 � 99.8%)

Four putative false positives were encountered with the ColorPAC test. Discrepant testing showed all four samples tobe from patients who were Giardia positive by microscopy on a different specimen.

Cryptosporidium results:

Sensitivity: 73/73 = 100% (95% confidence interval 95.1 � 100%)Specificity: 427/429 = 99.5% (95% confidence interval 98.3 � 99.9%)

There were two putative Cryptosporidium false positives from the above data. These samples came from twopatients for which Cryptosporidium could not be documented by a repeat of the microscopic examinations.

Assay Reproducibility

A panel of fifteen samples consisting of five replicates of a Giardia low level positive sample, five replicates of aCryptosporidium low level positive sample and five replicates of a negative sample were run on five separateoccasions by personnel at two diagnostic parasitology laboratories. Intra-assay reproducibility was demonstrated by100% agreement (0% CV) among all of the replicate samples within each run. Inter-assay reproducibility wasdemonstrated by 100% agreement in the results among all of the ten separate occasions that the test panel was run.

Cross-reactivity

The ColorPAC� Giardia/Cryptosporidium assay was run on stool specimens documented to be positive for otherparasites by microscopy.

The Giardia-specific part of the assay showed no cross-reactivity to the following organisms:

The numbers in parentheses represent the number of samples tested for each organism.

The Cryptosporidium-specific part of the assay showed no cross-reactivity to the following organisms:

The numbers in parentheses represent the number of samples tested for each organism.

5

Ascaris lumbricoides (1)

Blastocystis hominis (92)

Chilomastix mesnili (6)

Cyclospora cayetanensis (1)

Dientamoeba fragilis (16)

Endolimax nana (48)

Entamoeba coli (21)

Entamoeba hartmanni (20)

Entamoeba histolytica/dispar (19)

Enteromonas hominis (2)

Giardia lamblia (132)

Hookworm (1)

Hymenolepsis nana (4)

Iodamoeba bütschlii (12)

Microsporidia (1)

Strongyloides sterocoralis (2)

Taenia sp. (2)

Trichomonas hominis (1)




Cryptosporidium parvum (121)



Endolimax nana (28)

Entamoeba coli (14)



Enterobius vermicularis (1)


Hookworm (1)



Microsporidia (1)


Taenia sp. (1)


Microscopic exam + 50 0

for Giardia� 4 448


+ �

Microscopic exam + 73 0for Cryptosporidium � 2 427


+ �

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REFERENCES

1. Garcia, L.S. and D.A. Bruckner, Diagnostic Medical Parasitology, 3rd edition, Washington, D.C.: ASM Press. 1997.

2. Wolfe, M.S., "Giardiasis," Clin. Microbiol. Rev. 5: 93-100. 1992.

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4. Rosoff, J.D., C.A. Sanders, S.S. Sonnad, P.R. De Lay, W.K. Hadley, F.F. Vincenzi, D.M. Yajko and P.D. O'Hanley, "Stooldiagnosis of giardiasis using a commercially available enzyme immunoassay to detect Giardia-specific antigen 65(GSA 65),� J. Clin. Microbiol. 27: 1997-2002. 1989.

5. Kehl, K.C., H. Cicirello and P.L. Havens, "Comparison of four different methods for the detection of Cryptosporidiumspecies," J. Clin. Microbiol. 33: 416-418. 1995.

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7. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2001. Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratoryworkers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, Pa.

8. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and HumanServices, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. ControlHospital Epidemiol. 17:53-80.

9. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHSPublication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C.

10. Directive 2000/54/EC of the European Parliment and of the Council of 18 September 2000 on the protection ofworkers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaningof Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045.

AVAILABILITY

Cat. No. Description

240909 ColorPAC� Giardia/Cryptosporidium Rapid Assay test, 30 test.

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Test de dépistage rapide deGiardia/Cryptosporidium ColorPACPour la détection qualitative d�antigènes spécifiques deGiardia et Cryptosporidium

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! Français

Complexité CLIA : ModéréeCode d�identification CDC de l�analyte 2222 pour Giardia lamblia ; 1109 pour Cryptosporidium

Code d�identification CDC du dispositif de test : 08172

APPLICATION

Le test de dépistage de Giardia/Cryptosporidium ColorPAC BD est un dosage immunologique rapide conçu pour ladétection qualitative d�antigènes spécifiques de Giardia et Cryptosporidium dans des extraits aqueux d�échantillonsfécaux. Ce test, réservé au diagnostic in vitro, s�utilise pour aider à la détection en laboratoire d�analysesd�infestations suspectées par Giardia ou Cryptosporidium.

RESUME ET EXPLICATION

Giardia et Cryptosporidium sont reconnus comme étant deux des causes les plus fréquentes de parasitose intestinale.La distribution de ces deux microorganismes s�étend au monde entier. La transmission s�opère habituellement paringestion d�eau ou d�aliments contaminés.

Chez l�homme, la lambliase est causée par le parasite protozoaire Giardia lamblia (également appelé Giardiaintestinalis). L�infestation aiguë est caractérisée par une diarrhée aqueuse, des nausées, des crampes abdominales, un�dème, une perte de poids et une malabsorption durant plusieurs semaines. Une infestation chronique ouasymptomatique peut également être observée.1,2

Chez l�homme, la cryptosporidiose est causée par le parasite coccidien Cryptosporidium parvum. Les symptômesaigus sont notamment une diarrhée aqueuse, des crampes abdominales, une perte d�appétit, une fièvre légère, desnausées et des vomissements pendant plusieurs jours à plus d�un mois. Des infestations sévères et persistantespeuvent être observées chez les patients immunocompromis.1 Ces infestations peuvent également être asympto-matiques. Ce parasite a été impliqué dans plusieurs épidémies majeures d�origine hydrique aux Etats-Unis.3

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Le diagnostic de l�infestation par Giardia et Cryptosporidium s�effectue traditionnellement par examenmicroscopique des fèces. Plus récemment, la détection d�antigènes de Giardia et Cryptosporidium dans leséchantillons fécaux à l�aide de dosages immunologiques enzymatiques a démontré son utilité comme approchediagnostique.4-6 Le test de dépistage de Giardia/Cryptosporidium ColorPAC détecte des antigènes similaires enutilisant un dosage immunologique rapide non enzymatique.

PRINCIPES DE LA METHODE

Le test de dépistage de Giardia/Cryptosporidium ColorPAC est un dosage immuno-chromatographique qui permet dedétecter et de distinguer simultanément des antigènes de Giardia et Cryptosporidium dans des extraits aqueuxd�échantillons fécaux. L�échantillon, prélevé dans un milieu de transport ou de conservation des échantillons, estdéposé dans un tube contenant un tampon de traitement. Un anticorps anti-Giardia biotinylé est ajouté, puis unpool de suspensions d�anticorps monoclonaux en phase colloïdale, marqués par un chromophore et dirigés contreGiardia et Cryptosporidium. L�échantillon est mélangé, puis versé dans le dispositif de test, qui contient un réactif(dérivé de l�avidine) dirigé contre Giardia, un anticorps anti-Cryptosporidium et un anticorps de contrôle qui se lie auconjugué marqué, en phase colloïdale, en excès. Si l�antigène de Giardia est présent dans l�échantillon, une bandenoire apparaît à la position GIAR. dans la fenêtre du dispositif de test. Si l�antigène de Cryptosporidium est présent,une bande noire apparaît à la position CRYP. L�apparition d�une bande noire à la position CONT. est nécessaire pourvalider le résultat du test. Cette bande indique que le conjugué marqué en phase colloïdale est intact et qu�un fluxcapillaire adéquat a pu s�établir.

REACTIFS

Les dispositifs de test de dépistage de Giardia/Cryptosporidium ColorPAC emballés sous film comprennent : a) unemembrane revêtue d�un dérivé de l�avidine, un anticorps de souris anti-Cryptosporidium et une IgG de chèvre anti-souris, b) des compresses, un dessiccateur et un boîtier plastique. (30 par trousse diagnostique)

Tampon de traitement (2,8 mL) Solution tampon avec détergent ; contient 0,1 % d�azide de sodium.échantillon (STB)

Réactif Conjugué A (A) (1,8 mL) Anticorps de lapin anti-Giardia biotinylé, dans du tampon diluantavec protéine porteuse et détergent ; contient 0,1 % d�azide desodium.

Réactif Conjugué B (B) (1,8 mL) Anticorps monoclonaux anti-Giardia et anti-Cryptosporidium marquésavec un chromophore, en phase colloïdale, dans du tampon diluantavec protéine porteuse et détergent ; contient 0,1 % d�azide desodium.

30 pipettes de transfert à échantillon, 30 tubes de dilution à échantillon, méthode illustrée

Portoir à réactifs Portoir à Réactif A (A), Réactif B (B) et Tampon de traitementéchantillon (STB). Six emplacements supplémentaires pour leséchantillons à tester, identifiés 123456.

Précautions : Réservé au diagnostic in vitro.

Les centres épidémiologiques des Etats-Unis (CDC) ont qualifié ce produit de modérément complexe, conformémentaux recommandations du Clinical Laboratory Improvement Amendment de 1988 (CLIA 88). Le code d�identificationCDC de l�analyte est 2222 pour Giardia lamblia et 1109 pour Cryptosporidium ; le code d�identification CDC dudispositif de test est 08172.

Ne pas utiliser la trousse diagnostique au-delà de la date de péremption imprimée sur l�étiquette. Ne pas échanger nimélanger de réactifs provenant de trousses diagnostiques portant des numéros de lot différents.

Avertissement : Des microorganismes pathogènes, notamment les virus de l�hépatite et de l�immunodéficiencehumaine, sont susceptibles d�être présents dans les échantillons cliniques. Respecter les « Précautions standard »7-10

et les consignes en vigueur dans l�établissement pour manipuler tout objet contaminé avec du sang ou d�autresliquides organiques.

Avertissement : Les réactifs contiennent de l�azide de sodium, qui est extrêmement toxique par inhalation, contactavec la peau ou ingestion. Au contact d�un acide, un gaz très toxique est dégagé. Eviter tout contact avec la peau ;laver immédiatement à grande eau. Porter un équipement de protection des yeux/du visage. L�azide de sodium peutréagir au contact du plomb ou du cuivre des canalisations et former des azides métalliques très explosifs. Rincer avecun grand volume d�eau lors de l�élimination pour éviter l�accumulation d�azides.

Conservation : Réfrigérer à 2 � 8 °C. NE PAS CONGELER.

Remarque : Il est essentiel de conserver cette trousse diagnostique à 2 � 8 °C. Replacer la trousse diagnostique à 2 � 8 °C immédiatement après utilisation.

PRELEVEMENT ET MANIPULATION DES ECHANTILLONS

Les prélèvements fécaux effectués pour la recherche d��ufs et de parasites par examen microscopique peuvent êtreutilisés pour le test de dépistage de Giardia/Cryptosporidium ColorPAC. Les échantillons doivent être recueillis dansdes récipients en plastique propres et étanches.

Privilégier pour ce test les échantillons recueillis dans de l�acétate de sodium et de formaldéhyde (SAF), du formol à10 %, du méthiolate-iodine-formaldéhyde (MIF), ou du milieu de transport de Cary-Blair ou Stuart. Les échantillonsrecueillis dans de l�alcool polyvinylique (PVA) ne conviennent pas.

7

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Les échantillons frais* (sans agent de conservation) sont acceptables, mais doivent être dilués au 1/4 dans un milieude transport adéquat avant d�être testés. En l�absence de milieu de transport, il est possible d�utiliser de l�eaudistillée ou désionisée.

Pour réaliser une dilution au 1/4 :

� Bien mélanger l�échantillon à l�aide d�un bâtonnet applicateur en bois ou équivalent.

� Prélever l�équivalent de 1 mL d�échantillon mélangé et le déposer dans 3 mL de milieu de transportadéquat.

� Bien mélanger et effectuer le test.

* Les échantillons frais et les échantillons recueillis dans du milieu de Stuart doivent être testés aussitôt que possibleaprès le prélèvement, car ces conditions de conservation n�ont pas été validées.

CONTROLE DE QUALITE

Plusieurs dispositifs de contrôle de qualité de routine sont incorporés au test de dépistage deGiardia/Cryptosporidium ColorPAC :

1. L�apparition d�une bande de contrôle à la position CONT. atteste qu�un conjugué marqué en phase colloïdaleintact et fonctionnel a été ajouté au dispositif de test, que l�anticorps de la ligne de contrôle estfonctionnellement actif et qu�un flux capillaire adéquat a pu s�établir.

2. L�ordre d�ajout des réactifs au tube échantillon permet à l�utilisateur de contrôler visuellement la procédure : Letampon de traitement échantillon est ajouté à un tube vide ; l�échantillon fécal est identifiable visuellement ; leRéactif Conjugué A est associé à un colorant rouge ; et le Réactif Conjugué B est de couleur noire.

3. Des échantillons cliniques caractérisés, conservés dans du formol, peuvent servir de contrôles positifs et négatifsexternes de routine. Les échantillons cliniques caractérisés doivent être analysés comme les échantillons à tester,conformément à la méthode décrite ci-dessous.

4. Il est recommandé de tester des échantillons caractérisés comme témoins pour chaque nouveau lot de troussesdiagnostiques ou à chaque changement d�opérateur.

Effectuer les contrôles de qualité conformément à la réglementation nationale et/ou internationale, aux exigencesdes organismes d�homologation concernés et aux procédures de contrôle de qualité en vigueur dans l�établissement.Il est recommandé à l�utilisateur de consulter les directives NCCLS et les réglementations CLIA concernées pour plusd�informations sur les modalités de contrôle de qualité.

METHODE

Matériel fourni : Le matériel fourni est répertorié au paragraphe « Réactifs ».

Matériel requis mais non fourni : Dispositifs de prélèvement et de transport des échantillons. L�acétate de sodium etde formaldéhyde (SAF), le formol à 10 %, le méthiolate-iodine-formaldéhye (MIF) et les milieux de transport de Cary-Blair ou Stuart sont acceptables ; montre ou minuteur.

Remarques :

1. Laisser les composants de la trousse diagnostique et les échantillons s�équilibrer à température ambiante avantde les utiliser. Mélanger les réactifs liquides en retournant plusieurs fois les flacons avant l�emploi. Replacerrapidement la trousse diagnostique au réfrigérateur après utilisation. Toujours conserver les réactifs enposition verticale.

2. Ne déballer les dispositifs de test qu�au moment de leur utilisation.

3. Il est possible de réaliser plusieurs tests simultanément. Utiliser des pipettes et des tubes de dilution distinctspour chaque échantillon.

4. Pour réduire les risques de contamination, ne pas toucher les tubes de dilution, les pipettes, les dispositifs detest, ou tout autre objet qui soit entré en contact direct avec les échantillons cliniques, avec la tétine des compte-gouttes du tampon de traitement échantillon, du Réactif Conjugué A ou du Réactif Conjugué B.

5. Après avoir débouché les flacons à réactifs, essuyer la partie extérieure des tétines avec un chiffon de laboratoirepropre et non pelucheux (NE PAS utiliser de lingettes humectées, telles que des tampons à l�alcool).

6. Pour des performances de test optimales, il est important de distribuer des gouttes entières de réactif. Pour demeilleurs résultats, tenir le flacon retourné quasiment à la verticale, presser de chaque côté et distribuerlentement, en laissant l�air pénétrer dans le flacon entre chaque échantillon. Secouer légèrement le flaconretourné peut aider à déloger l�air emprisonné dans la tétine. S�il reste du liquide ou si du liquide s�est accumuléà l�extérieur de la tétine pendant la distribution du réactif, essuyer la tétine avec un chiffon de laboratoirepropre et non pelucheux, puis reprendre la distribution.

8

Les échantillons recueillis dans duformol et du SAF peuvent êtreconservés congelés (-20 °C ou -70 °C), réfrigérés (2 � 8 °C) ouà température ambiante (20 � 30 °C) et doivent être testésdans les deux mois suivant leprélèvement.

Les échantillons dilués dans dumilieu de Cary Blair peuvent êtreconservés réfrigérés (2 � 8 °C) ettestés dans les deux semainessuivant le prélèvement, oucongelés (-20 °C) et testés dans lesdeux mois qui suivent.

Les échantillons recueillis dans duMIF peuvent être conservéscongelés (-20 °C), réfrigérés (2 � 8 °C) ou à températureambiante (20 � 30 °C) et doiventêtre testés dans les deux moissuivant le prélèvement.

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7. Ne pas concentrer les échantillons cliniques. Il est possible de mélanger les échantillons pour garantir unéchantillonnage uniforme, mais on peut aussi laisser sédimenter les matières particulaires afin de pouvoirpipeter plus facilement l�échantillon.

8. Tous les échantillons frais ou sans conservateur, y compris les échantillons liquides, doivent être diluésapproximativement au 1/4 dans un milieu de transport approprié avant d�être testés (voir la sectionPRELEVEMENT ET MANIPULATION DES ECHANTILLONS).

Mode opératoire du test

1. Déballer le dispositif de test et le poser sur une surface plane ; placer un tube de dilution à échantillon dans leportoir du poste de travail de la trousse diagnostique ou un autre portoir de tubes à essai approprié.

2. Ajouter deux gouttes de tampon de traitement échantillon (STB) dans le tube de dilution à échantillon.

3. Utiliser la pipette de transfert à échantillon pour aspirer l�extrait aqueux d�échantillon fécal : presser la poiresupérieure de la pipette, introduire l�extrémité ouverte dans l�échantillon, puis relâcher la pression sur la poiretout en maintenant la pipette dans l�échantillon. Veiller à remplir complètement le corps de la pipette. Un trop-plein empêche un surremplissage de la pipette. Transférer le contenu du corps de la pipette (environ 60 µL)dans le tube de dilution à échantillon (il arrive que de l�échantillon demeure dans le trop-plein).

Remarque : Tous les échantillons frais ou sans conservateur, y compris les échantillons liquides,doivent être dilués approximativement au 1/4 dans un milieu de transport approprié avant d�êtretestés (voir la section PRELEVEMENT ET MANIPULATION DES ECHANTILLONS).

4. Ajouter deux gouttes de Réactif Conjugué A (A) dans le tube.

5. Ajouter deux gouttes de Réactif Conjugué B (B) dans le tube.

6. Mélanger l�échantillon en faisant tournoyer manuellement le tube ou agiter au vortex. Verser le contenu entierdu tube dans le puits à échantillon du dispositif de test.

7. Lire visuellement les résultats au bout de 10 min. Les résultats ne sont plus valides après 15 min.

INTERPRETATION DES RESULTATS

Positif pour Giardia

Des bandes grise et noire visibles aux positions GIAR. et CONT. indiquent que l�antigènede Giardia a été détecté. L�intensité des bandes peut varier de faible à forte. Toute lignede test visible, quelle que soit son intensité, indique un résultat positif.

Positif pour Cryptosporidium

Des bandes grise et noire visibles aux positions CRYP. et CONT. indiquent que l�antigènede Cryptosporidium a été détecté. L�intensité des bandes peut varier de faible à forte.Toute ligne de test visible, quelle que soit son intensité, indique un résultat positif.

Négatif pour Giardia

L�absence de bande à la position GIAR. et la présence d�une bande à la position CONT.indiquent que l�antigène de Giardia était absent ou présent à une concentration inférieureà la limite de détection du test. Absence ou présence d�une bande à la position CRYP.

Négatif pour Cryptosporidium

L�absence de bande à la position CRYP. et la présence d�une bande à la position CONT.indiquent que l�antigène de Cryptosporidium était absent ou présent à uneconcentration inférieure à la limite de détection du test. Absence ou présence d�unebande à la position GIAR.

Résultats non valides

Absence de bande à la position CONT. Bande perlée ou incomplète à la positionCRYP. ou GIAR. Répéter le test avec un autre dispositif de test. Lorsqu�un fluxcapillaire adéquat n�a pas pu s�établir en raison d�un excès de matièresparticulaires dans l�échantillon, diluer l�échantillon au demi dans l�eau ou le milieude transport utilisé à l�origine pour recueillir le prélèvement et renouveler le test.

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Fort Faible

Fort Faible

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LIMITES DE LA PROCEDURE

1. Comme pour toute méthode diagnostique, les résultats obtenus avec le test de dépistage deGiardia/Cryptosporidium ColorPAC doivent être interprétés conjointement avec les autres informations cliniquesdisponibles pour le médecin.

2. Un résultat négatif peut être obtenu pour un échantillon contenant une concentration d�antigène inférieure à lalimite de détection du test. En cas d�infestation suspectée par Giardia ou Cryptosporidium, il est possible detester des échantillons prélevés sur plusieurs jours.

VALEURS ATTENDUES

La prévalence de l�infestation par Giardia et Cryptosporidium diffère selon les populations et les régionsgéographiques. L�incidence de l�infestation par Giardia dans les pays développés est d�environ 2 à 5 % ; l�incidencede l�infestation par Cryptosporidium en Europe et en Amérique du Nord est d�environ 1 à 3 %.3 Des taux deprévalence plus élevés peuvent être observées chez l�enfant et les immunodéprimés.1-3

CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES

Sensibilité et Spécificité

Une évaluation clinique prospective et rétrospective du test de dépistage de Giardia/Cryptosporidium ColorPAC a étéeffectuée sur plusieurs sites investigateurs. Le test de dépistage de Giardia/Cryptosporidium ColorPAC a été comparéà la recherche d��ufs et de parasites par examen microscopique.

Lors de l�étude rétrospective, un panel d�échantillons cliniques précédemment caractérisés et conservés dans duformol a été utilisé. Les résultats du test ColorPAC ont été comparés à ceux obtenus par examen microscopique.L�examen microscopique comprenait une coloration standard des �ufs et des parasites pour Giardia et d�autresparasites, une coloration acido-résistante pour Cryptosporidium et, en cas de discordance, une coloration parimmunofluorescence spécifique de Giardia et Cryptosporidium.

Résultats pour Giardia :

Sensibilité : 33/33 = 100 % (intervalle de confiance à 95 % : 89,4 � 100 %)Spécificité : 109/109 = 100 % (intervalle de confiance à 95 % : 96,7 � 100 %)

Les quatre échantillons discordants étaient positifs pour Giardia à l�examen microscopique.

Degré de concordance relatif* entre le test ColorPAC et le dosage immuno-enzymatique rapide pour Giardia :138/142 = 97,2 %.

* Remarque : Le terme « relatif » se rapporte à la comparaison des résultats de ce test à ceux d�un test similaire.Aucune tentative n�a été faite pour établir une corrélation entre les résultats de ce test et la présence ou l�absenced�infestation. Aucune assertion ne peut être faite quant à l�aptitude du test de comparaison à prédire l�infestation.

Résultats pour Cryptosporidium :

Sensibilité : 36/37 = 97,3 % (intervalle de confiance à 95 % : 85,8 � 100 %)Spécificité : 105/105 = 100 % (intervalle de confiance à 95 % : 96,6 � 100 %)

Le résultat discordant a été confirmé positif pour Cryptosporidium par immunofluorescence et contenaitprobablement une concentration d�antigène inférieure à la limite de détection du test ColorPAC.

Degré de concordance relatif* entre le test ColorPAC et le dosage immuno-enzymatique rapide pourCryptosporidium : 142/142 = 100 %

* Remarque : Le terme « relatif » se rapporte à la comparaison des résultats de ce test à ceux d�un test similaire.

10

Dosage immuno-enzymatique + 29 0

rapide pour Giardia � 4 109

Résultat Giardia ColorPAC

+ �

Examen microscopique + 33 0

pour Giardia � 0 109


+ �

Examen microscopique pour + 36 1

Cryptosporidium � 0 105

Résultat CryptosporidiumColorPAC

+ �

Dosage immuno-enzymatique + 36 0

rapide pour Cryptosporidium � 0 106


+ �

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Aucune tentative n�a été faite pour établir une corrélation entre les résultats de ce test et la présence ou l�absenced�infestation. Aucune assertion ne peut être faite quant à l�aptitude du test de comparaison à prédire l�infestation.

L�étude prospective a été menée sur des échantillons caractérisés dans trois centres investigateurs éloignésgéographiquement aux Etats-Unis. Au total, 502 échantillons ont été analysés à l�aide du test de dépistage rapide deGiardia/Cryptosporidium ColorPAC. Les résultats ont été comparés à ceux obtenus par examen microscopique, pour larecherche d��ufs et de parasites, associé à une coloration acido-résistante modifiée pour Cryptosporidium.

Résultats pour Giardia :

Sensibilité : 50/50 = 100 % (intervalle de confiance à 95 % : 92,9 �100 %)Spécificité : 448/452 = 99,1 % (intervalle de confiance à 95 % : 97,8 � 99,8 %)

Quatre faux positifs présomptifs ont été obtenus avec le test ColorPAC. L�analyse des résultats discordants a montréque les quatre échantillons provenaient de patients qui étaient positifs pour Giardia à l�examen microscopique sur unéchantillon différent.

Résultats pour Cryptosporidium :

Sensibilité : 73/73 = 100 % (intervalle de confiance à 95 % : 95,1 � 100 %)Spécificité : 427/429 = 99,5 % (intervalle de confiance à 95 % : 98,3 � 99,9 %)

Deux faux positifs présomptifs pour Cryptosporidium ont été obtenus à partir des données ci-dessus. Ces échantillonsprovenaient de deux patients pour lesquels aucune infestation par Cryptosporidium n�a pu être documentée parexamen microscopique répété.

Reproductibilité du tesT

Un panel de 15 échantillons, composé de 5 exemplaires d�un échantillon faiblement positif pour Giardia,5 exemplaires d�un échantillon faiblement positif pour Cryptosporidium et 5 exemplaires d�un échantillon négatif, aété testé à cinq reprises par les techniciens de deux laboratoires de parasitologie diagnostique différents. Lareproductibilité intra-dosage a été démontrée par une concordance de 100 % (0 % CV) sur l�ensemble des répétitionsde test dans chaque série. La reproductibilité inter-dosage a été démontrée par une concordance de 100 % desrésultats obtenus sur l�ensemble des dix séries de test distinctes du panel d�échantillons.

Réactivité croisée

Le test de dépistage de Giardia/Cryptosporidium ColorPAC a été réalisé sur des échantillons positifs pour d�autresparasites à l�examen microscopique.

La partie du test spécifique de Giardia n�a présenté aucune réactivité croisée avec les microorganismes suivants :

Les nombres entre parenthèses indiquent le nombre d�échantillons testés pour chaque microorganisme.

La partie du test spécifique de Cryptosporidium n�a présenté aucune réactivité croisée avec les microorganismessuivants :

Les nombres entre parenthèses indiquent le nombre d�échantillons testés pour chaque microorganisme.

11


pour Giardia � 4 448


+ �


pour Cryptosporidium � 2 427


+ �







Endolimax nana (28)

Entamoeba coli (14)





Ankylostome (1)



Microsporidies (1)


Taenia sp. (1)







Endolimax nana (48)

Entamoeba coli (21)





Ankylostome (1)



Microsporidies (1)


Taenia sp. (2)


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RÉFÉRENCES : Voir la rubrique « References » du texte anglais.

CONDITIONNEMENT

Réf. Description

240909 Test de dépistage rapide de Giardia/Cryptosporidium ColorPAC, 30 tests.

12

ColorPAC-Giardia/Cryptosporidium-SchnellassayFür den qualitativen Nachweis von Giardia- undCryptosporidium-spezifischen Antigenen

L0013152003/06

! Deutsch

Komplexität nach CLIA: MittelCDC-Analyte-Identifizierungscode: 2222 Giardia lamblia; 1109 Cryptosporidium

CDC-Testsystem-Identifizierungscode: 08172

VERWENDUNGSZWECK

Der BD ColorPAC-Giardia-/Cryptosporidium-Assay ist ein schneller Immunoassay für den qualitativen Nachweis vonGiardia- und Cryptosporidium-spezifischen Antigenen in wäßrigen Extrakten von Stuhlproben. Er ist zurVerwendung als In-vitro-Diagnostikum zur Unterstützung des Nachweises von vermuteten Giardia- oderCryptosporidium-Infektionen durch professionelle Labors vorgesehen.

ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG

Giardia und Cryptosporidium sind als zwei der häufigsten Verursacher parasitärer Darmerkrankungen erkannt. BeideOrganismen sind weltweit verbreitet. Die Übertragung erfolgt gewöhnlich durch Aufnahme von kontaminierterNahrung oder kontaminiertem Wasser.

Die Giardiasis des Menschen wird durch den protozoischen Parasiten Giardia lamblia verursacht (auch als Giardiaintestinalis bekannt). Der akute Krankheitsverlauf ist gekennzeichnet durch wäßrige Diarrhö, Übelkeit, Krämpfe imAbdominalbereich, Aufgeblähtheit, Gewichtsverlust und Maladsorption, die über mehrere Wochen anhalten. DieInfektion kann auch chronisch oder asymptomatisch verlaufen.1,2

Die Cryptosporidiose des Menschen wird durch den Coccidia-Parasiten Cryptosporidium parvum hervorgerufenSymptome einer akuten Erkrankung sind wäßrige Diarrhö, Krämpfe im Abdominalbereich, Appetitverlust, leichtesFieber, Übelkeit und Erbrechen, die von mehreren Tagen bis zu einem Monat anhalten. Bei immungeschwächtenPatienten können schwere und anhaltende Infektionen auftreten.1 Die Infektion kann auch asymptomatischverlaufen. Der Parasit wurde als Ursache mehrerer durch kontaminiertes Trinkwasser verursachten Epidemien in denUSA genannt.3

Giardia- und Cryptosporidium-Infektionen werden herkömmlicherweise durch Untersuchung des Stuhls unter demMikroskop diagnostiziert. Seit einiger Zeit ist der Nachweis von Giardia- und Cryptosporidium-Antigenen im Stuhlmit Hilfe von Enzymimmunoassays ein anerkannter Diagnoseansatz.4-6 Der ColorPAC-Giardia-/Cryptosporidium-Assayweist ähnliche Antigene in Form eines nicht-enzymatischen schnellen Immunoassays nach.

VERFAHRENSPRINZIPIEN

Der ColorPAC-Giardia-/Cryptosporidium-Assay ist ein qualitativer immunochromatographischer Assay, dergleichzeitig von Giardia- und Cryptosporidium-spezifischen Antigenen in wäßrigen Extrakten von Stuhlprobennachweist und differenziert. Die in einem Transport- oder Konservierungsmedium befindliche Probe wird in einRöhrchen eingebracht, das eine Pufferlösung enthält. Anschließend werden ein biotinyliertes Anti-Giardia-Einfang-Antikörperreagenz hinzugefügt sowie eine gepoolte Suspension mit kolloidalem Farbstoff markiertenmonoklonalen Antikörpern gegen Giardia und Cryptosporidium. Die Probe wird dann gemischt und in dasTestzubehör umgefüllt. Der Test enthält ein Einfangreagenz (ein Avidinderivat) für Giardia, Einfang-Antikörper fürCryptosporidium und Kontroll-Antikörper, die überschüssiges kolloidales Farbstoffkonjugat binden. Wenn in derProbe Giardia-Antigen vorhanden ist, entwickelt sich an der Position GIAR. des Ergebnisfensters ein schwarzerBalken. Wenn Cryptosporidium-Antigen vorhanden ist, entwickelt sich an der Position CRYP. des Ergebnisfensters einschwarzer Balken. Damit das Testergebnis als gültig betrachtet werden kann, muß an der Position CONT. desErgebnisfensters ein schwarzer Balken erscheinen. Dieser zeigt an, daß das kolloidale Farbstoffkonjugat intakt istund ein ausreichender Kapillarfluß stattgefunden hat.

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REAGENZIEN

Ein folienverpackter ColorPAC-Giardia-/Cryptosporidium-Test, bestehend aus: a) einer mit einem Avidinderivat, Anti-Cryptosporidium-IgG der Maus Anti-Maus-IgG der Ziege beschichteten Membran, b) Polstermaterialien, Trockenmittelund einem Kunststoffgehäuse. (30 Tests per Testkit)

Probenpufferlösung (2,8 mL) Pufferlösung mit Reinigungsmittel. Enthält 0,1 % Azid.

Konjugatreagenz A (A) (1,8 mL) Biotinylatierte Anti-Giardia-Antigene des Kaninchens in Verdünnungs-Pufferlösung mit Trägerprotein und Reinigungsmittel. Enthält 0,1 % Azid.

Konjugatreagenz B (B) (1,8 mL) Mit kolloidalem Farbstoff markierte monoklonale Antikörper gegen Giardiaund Cryptosporidium in einer Verdünnungs-Pufferlösung mit Trägerproteinund Reinigungsmittel. Enthält 0,1 % Azid.

30 Probenübertragungspipetten, 30 Probenverdünnungsröhrchen, Anleitung zur Testdurchführung

Reagenzienständer Ständer für Reagenz A (A), Reagenz B (B) und die Probenpufferlösung (STB).Zusätzlich 6 Plätze für Proben, bezeichnet mit den Ziffern 1 bis 6.

Sicherheitshinweise: In-vitro-Diagnostikum.

Nach einer Prüfung seitens der U.S. Centers for Disease Control and Prevention (CDC) gemäß CLIA �88 wurde diesesProdukt als ein Produkt mittlerer Komplexität klassifiziert. Der CDC-Analyte-Identifizierungscode für Giardia lamblialautet 2222, der für Cryptosporidium lautet 1109. Der Identifizierungscode für das CDC-Testsystem lautet 08172.

Das Kit nach Ablauf des aufgedruckten Verfallsdatums nicht mehr verwenden. Komponenten aus Kits mitverschiedenen Chargennummern nicht gegeneinander austauschen oder kombinieren.

Warnung: Klinische Proben können pathogene Mikroorganismen, wie z.B. Hepatitis-Viren und HIV, enthalten. BeimUmgang mit allen mit Blut oder anderen Körperflüssigkeiten kontaminierten Artikeln sind die �AllgemeinenVorsichtsmaßnahmen�7-10 sowie die einschlägigen Institutionsrichtlinien zu beachten.

Warnung: Die Reagenzien enthalten Natriumazid. Sehr giftig beim Einatmen, bei Berührung mit der Haut und beimVerschlucken. Bei Kontakt mit Säuren entstehen hochgiftige Gase. Falls es zu Hautkontakt kommt, sofort mitreichlich Wasser abwaschen. Schutzbrille/Gesichtsschutz tragen. Natriumazid kann mit Blei- und Kupferleitungenreagieren und hochexplosive Metallazide bilden. Beim Entsorgen mit sehr viel Wasser nachspülen, umAzidansammlungen zu vermeiden.

Aufbewahrung: Bei 2 � 8 °C gekühlt aufbewahren. NICHT EINFRIEREN.

Hinweis: Dieses Kit muß unbedingt bei 2 � 8 ºC aufbewahrt werden. Kit sofort nach Gebrauch wieder bei 2 � 8 ºClagern.

PROBENENTNAHME UND -HANDHABUNG

Stuhlproben, die für die Untersuchung auf Eier und Parasiten entnommen wurden, können für den ColorPAC-Giardia-/Cryptosporidium-Assay verwendet werden. Die Proben sollen in sauberen und vollständig abgedichtetenKunststoffbehältern gesammelt werden.

Für den Test zu bevorzugen sind Proben in SAF-Fixierlösung, einer 10%igen Formaldehydlösung, einer MIF-Lösungoder einem Cary-Blair- oder Stuart-Transportmedium*. Proben in PVA sind nicht geeignet.

Frische* (nicht konservierte) Proben können verwendet werden; sie müssen jedoch vor dem Test erst in einemgeeigneten Transportmedium im Verhältnis 1:4 verdünnt werden. Ist kein Transportmedium zur Hand, so kann stattdessen destilliertes oder entionisiertes Wasser verwendet werden.

Herstellung einer 1:4-Verdünnung:

� Probe mit einem Holzstäbchen oder ähnlichem gründlich durchmischen.

� Das Äquivalent von 1 mL durchmischter Probe entnehmen und in 3 mL eines geeignetenTransportmediums einbringen.

� Gründlich durchmischen und mit dem Test fortfahren.

*Frische Proben und Proben in Stuart-Transportmedium sollten so bald wie möglich nach der Probennahme getestetwerden, da die Lagerung für diese beiden Möglichkeiten nicht validiert wurde.

QUALITÄTSKONTROLLE

Mehrere Funktionen wurden zur Routine-Qualitätsprüfung in den ColorPAC-Giardia-/Cryptosporidium-Test integriert:

1. Das Erscheinen eines Kontrollbalkens an der Position CONT. verifiziert, daß ein funktionell intaktes kolloidalesFarbstoffkonjugat zum Test hinzugefügt wurde, daß die Antikörper der Kontrollinie funktionieren und daß einausreichender Kapillarfluß stattgefunden hat.

2. Die Reihenfolge, in der die Reagenzien in das Röhrchen gegeben werden, ermöglicht es dem Anwender, dieProzedur visuell zu überwachen: Die Probenpufferlösung wird in ein leeres Röhrchen gegeben. Die Stuhlprobe istdeutlich sichtbar. In Konjugatreagenz A ist ein roter Farbstoff integriert. Konjugatreagenz B ist schwarz.

13

In Formaldehyd oder SAF-Lösungkonservierte Proben könneneingefroren (-20 ºC oder -70 ºC),gekühlt (2 � 8 ºC) oder beiRaumtemperatur (20 � 30 ºC)aufbewahrt werden. Sie sollteninnerhalb von 2 Monaten nach derProbennahme getestet werden.

In Cary-Blair-Transportmediumverdünnte Proben können gekühlt(2 � 8 ºC) aufbewahrt undinnerhalb von 2 Wochen getestetwerden oder gefroren (-20 ºC)aufbewahrt und innerhalb von 2Monaten getestet werden.

In MIF-Lösung konservierte Probenkönnen eingefroren (-20 ºC),gekühlt (2 � 8 ºC) oder beiRaumtemperatur (20 � 30 ºC)aufbewahrt werden. Sie sollteninnerhalb von 2 Monaten nach derProbennahme getestet werden.

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3. Charakterisierte, in Formaldehyd konservierte Patientenproben können als routinemäßige externe positive undnegative Kontrollen verwendet werden. Charakterisierte Patientenproben sollten wie andere Proben nach demim nächsten Abschnitt beschriebenen Verfahren getestet werden.

4. Es wird empfohlen, die charakterisierten Proben als Kontrolle mitzutesten, wenn eine neue Kit-Chargennummerverwendet wird oder ein neuer Mitarbeiter mit dem Assay arbeitet.

Es sind die geltenden gesetzlichen und behördlichen und in den Akkreditierungsbedingungen festgelegtenVorschriften zur Qualitätskontrolle sowie die laborinternen Standardvorgaben zur Qualitätskontrolle zu beachten.Benutzer sollten die relevanten NCCLS-Dokumente und CLIA-Vorschriften über geeignete Testverfahren zurQualitätskontrolle einsehen.

VERFAHREN

Mitgeliefertes Arbeitsmaterial: Alle Materialien, wie unter �Reagenzien� aufgeführt.

Benötigtes, jedoch nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial: Hilfsmittel für Probensammlung und Transport. SAF-Fixierlösung, 10%ige Formaldehydlösung, MIF-Lösung oder ein Cary-Blair- oder Stuart-Transportmedium könnenverwendet werden. Uhr oder Kurzzeitmesser.

Hinweise:

1. Kit-Komponenten und Proben vor Gebrauch Raumtemperatur annehmen lassen. Flüssige Reagenzien vorGebrauch durch mehrfaches Umdrehen durchmischen. Kit nach Gebrauch immer sofort wieder in denKühlschrank zurückstellen. Reagenzien stets aufrecht stehend lagern.

2. Tests erst unmittelbar vor Gebrauch auspacken.

3. Es können mehrere Tests gleichzeitig durchgeführt werden. Für jede Probe getrennte Röhrchen zur Verdünnungund getrennte Pipetten verwenden.

4. Um eine Kontaminierung zu verhindern, mit der Tropfspitze der Tropfflaschen von Probenpufferlösung,Konjugatreagenz A und Konjugatreagenz B nicht die Verdünnungsröhrchen, Pipetten, Tests oder andereGegenstände berühren, die in direkten Kontakt mit Patientenproben gekommen sind.

5. Nach dem Entfernen der Deckel von den Reagenzienflaschen den Außenteil der Tropfspitzen mit einemsauberen, fusselfreien Laborpad abwischen (KEINE in Alkohol getränkte oder anderweitig behandelte Padsverwenden).

6. Für optimale Ergebnisse mit diesem Assay ist es wichtig, nur freifallende Tropfen der Reagenzien zu verwenden.Am besten hält man hierzu das Tropffläschchen umgekehrt in möglichst genau vertikaler Position und drückt es,so daß die Tropfen langsam abgegeben werden. Zwischen den einzelnen Proben ist Luft in die Flasche zu lassen.Luftblasen lassen sich aus der Tropfspitze entfernen, indem man das auf den Kopf gestellte Tropffläschchenleicht schüttelt. Wenn Flüssigkeit auf die Außenseite der Tropfspitze gelangt ist oder diese beschlagen ist, dieSpitze mit einem sauberen, fusselfreien Laborpad abwischen und Tropfenabgabe dann fortsetzen.

7. Patientenproben nicht konzentrieren. Die Proben können durchmischt werden, um gleichförmige Proben zuerhalten. Es ist zulässig, größere Partikel sich absetzen zu lassen, damit die Probe einfacher pipettiert werdenkann.

8. Alle frischen oder nicht konservierten Proben, auch flüssige Proben, müssen vor dem Test etwa im Verhältnis 1:4in einem geeigneten Transportmedium verdünnt werden (siehe Abschnitt �PROBENENTNAHME UND -HANDHABUNG�).

Testverfahren1. Test aus der Verpackung nehmen und auf eine ebene Fläche legen. Ein Probenverdünnungsröhrchen in den

Reagenzienständer oder in einen sonstigen geeigneten Röhrchenständer stellen.

2. Zwei Tropfen Probenpufferlösung (STB) in das Probenverdünnungsröhrchen geben.

3. Mit der Probenübertragungspipette die wäßrige Lösung der Stuhlprobe aspirieren: Obere Kammer der Pipettezusammendrücken, Pipettenspitze in die Probe stecken und Kammer wieder loslassen; dabei die Pipettenspitzeständig in der Probe halten. Die Kammer der Pipette muß vollständig gefüllt sein. Eine Überlaufkammerverhindert ein Überfüllen der Pipette. Inhalt der Pipettenkammer (etwa 60 µL) in dasProbenverdünnungsröhrchen einbringen (in der Überlaufkammer kann Probenlösung verbleiben).

Hinweis: Alle frischen oder nicht konservierten Proben, auch flüssige Proben, müssen vor dem Testetwa im Verhältnis 1:4 in einem geeigneten Transportmedium verdünnt werden (siehe Abschnitt�Probenentnahme und -handhabung�).

4. Zwei Tropfen Konjugatreagenz A (A) in das Röhrchen geben.

5. Zwei Tropfen Konjugatreagenz B (B) in das Röhrchen geben.

6. Probe durch Schwenken oder auf dem Vortex-Mixer durchmischen. Gesamten Inhalt des Röhrchens auf dasProbenfeld des Tests aufbringen.

7. Testergebnisse nach 10 Min ablesen. Nach mehr als 15 Min abgelesene Ergebnisse sind ungültig.

INTERPRETATION DER ERGEBNISSE

Giardia-Positiv

Das Vorhandensein sichtbarer grau-schwarzer Balken an den Positionen GIAR. undCONT. zeigt an, daß Giardia-Antigen nachgewiesen wurde. Die Intensität des Balkenskann zwischen schwach und stark variieren. Sichtbare Testlinien beliebiger Intensitätsind als positiv zu interpretieren.

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Stark Schwach

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Cryptosporidium-Positiv

Das Vorhandensein sichtbarer grau-schwarzer Balken an den Positionen CRYP. undCONT. zeigt an, daß Cryptosporidium-Antigen nachgewiesen wurde. Die Intensitätdes Balkens kann zwischen schwach und stark variieren. Sichtbare Testlinienbeliebiger Intensität sind als positiv zu interpretieren.

GIARDIA-Negativ

Das Fehlen eines sichtbaren Balkens an der Position GIAR. und das Vorhandenseineines Balkens an der Position CONT. zeigt an, daß Giardia-Antigen nicht oder nur inKonzentrationen unterhalb der Nachweisgrenze vorhanden ist. Ein Balken an derPosition CRYP. kann vorhanden sein oder auch nicht.

Cryptosporidium-Negativ

Das Fehlen eines sichtbaren Balkens an der Position CRYP. und das Vorhandenseineines Balkens an der Position CONT. zeigt an, daß Cryptosporidium-Antigen nichtoder nur in Konzentrationen unterhalb der Nachweisgrenze vorhanden ist. EinBalken an der Position GIAR. kann vorhanden sein oder auch nicht.

Ungültige Ergebnisse

An der Position CONT. erscheint kein Balken. Unvollständiger oder durchbrochenerBalken an der Position CRYP. oder GIAR. Der Assay sollte mit einem anderen Testwiederholt werden. Wenn durch zu viele Partikel in der Probe ein ausreichenderKapillarfluß nicht stattfindet, kann die Probe im Verhältnis 1:2 in Wasser oder in demursprünglich verwendeten Transportmedium verdünnt und erneut getestet werden.

VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGEN

1. Wie bei allen Diagnostikverfahren sollten auch beim ColorPAC-Giardia-/Cryptosporidium-Test die Ergebnisse inVerbindung mit anderen, dem Arzt vorliegenden, klinischen Daten ausgewertet werden.

2. In Proben, in denen Antigen in Konzentrationen unterhalb der Nachweisgrenze des Assays vorhanden ist,können negative Ergebnisse vorliegen. Wenn der Verdacht besteht, daß ein Patient Giardia- oderCryptosporidium-positiv ist, können mehrere Proben, die über mehrere Tage hinweg gewonnen wurden, getestetwerden.

ZU ERWARTENDE WERTE

Die Prävalenz von Giardia und Cryptosporidium variiert je nach Population und geographischer Region. DiePrävalenz von Giardia in entwickelten Ländern beträgt etwa 2 � 5 %; die Prävalenz von Cryptosporidium in Europaund Nordamerika beträgt etwa 1 � 3 %.3 Höhere Prävalenzen können bei Kindern und bei immunosupprimiertenPatienten auftreten.1-3

LEISTUNGSMERKMALE

Empfindlichkeit und Spezifität

Es wurde eine prospektive und eine retrospektive multizentrische klinische Studie mit dem ColorPAC-Giardia-/Cryptosporidium-Test durchgeführt. Die Ergebnisse des ColorPAC-Giardia-/Cryptosporidium-Assays wurden mit denErgebnissen einer Mikroskopuntersuchung auf Eier und Parasiten verglichen.

In der retrospektiven Studie wurde eine Reihe von zuvor charakterisierten, in Formaldehyd konserviertenPatientenproben getestet. Die Ergebnisse des ColorPAC-Assays wurde mit den Ergebnissen derMikroskopuntersuchung verglichen. Die Mikroskopuntersuchung umfasste eine Standard-Ova- und Parasitenfärbungfür Giardia und andere Parasiten und eine eine modifizierte säurefeste Färbung für Cryptosporidium. WurdenAbweichungen festgestellt, so wurde eine spezifische Immunofluoreszenz-Markierung für Giardia undCryptosporidium durchgeführt.

Ergebnisse für Giardia:

Empfindlichkeit: 33/33 = 100 % (95-Prozent-Konfidenzintervall 89,4 � 100%)Spezifität: 109/109 = 100 % (95-Prozent-Konfidenzintervall 96,7 � 100%)

Die vier abweichenden Proben erwiesen sich bei der Mikroskopuntersuchung als Giardia-positiv.

15

Stark Schwach

Mikroskopuntersuchung + 33 0

auf Giardia � 0 109

ColorPAC-Giardia-Ergebnis

+ �

Schnell-EIA für + 29 0

Giardia � 4 109


+ �

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Relative* Übereinstimmung zwischen ColorPAC-Assay und Schnell-EIA für Giardia: 138/142 = 97,2 %.

*Hinweis: Beachten Sie bitte, daß �relativ� sich auf den Vergleich der Ergebnisse dieses Assays mit denen einesähnlichen Assays bezieht. Es wurde kein Versuch unternommen, das Ergebnis des Assays mit dem Vorhandenseinoder der Abwesenheit einer Erkrankung zu korrelieren. Es kann kein Urteil darüber gefällt werden, wie gut derKrankheits-Prädikationswert des Vergleichsassays ist.

Ergebnisse für Cryptosporidium:

Empfindlichkeit: 36/37 = 97,3 % (95-Prozent-Konfidenzintervall 85,8 � 100 %)Spezifität: 105/105 = 100 % (95-Prozent-Konfidenzintervall 96,6 � 100 %)

Die eine abweichende Probe erwies sich im Immunofluoreszenztest als Cryptosporidium-positiv und enthieltvermutlich einen Antigenspiegel unterhalb der Nachweisgrenze des ColorPAC-Assays.

Relative* Übereinstimmung zwischen ColorPAC-Assay und Schnell-EIA für Cryptosporidium: 142/142 = 100 %*Hinweis: Beachten Sie bitte, daß �relativ� sich auf den Vergleich der Ergebnisse dieses Assays mit denen einesähnlichen Assays bezieht. Es wurde kein Versuch unternommen, das Ergebnis des Assays mit dem Vorhandenseinoder der Abwesenheit einer Erkrankung zu korrelieren. Es kann kein Urteil darüber gefällt werden, wie gut derKrankheits-Prädikationswert des Vergleichsassays ist.

Die prospektive Untersuchung wurde mit Proben durchgeführt, die an drei unterschiedlichen geographischenStandorten innerhalb der USA charakterisiert wurden. Insgesamt wurden 502 Proben mit dem ColorPAC-Giardia-/Cryptosporidium-Schnelltest getestet. Die Ergebnisse wurden mit denen von Mikroskopuntersuchungen auf Eier undParasiten in Kombination mit einer modifizierten säurefesten Färbung für Cryptosporidium verglichen.

Ergebnisse für Giardia:

Empfindlichkeit: 50/50 = 100 % (95-Prozent-Konfidenzintervall 92,9 � 100 %)Spezifität: 448/452 = 99,1 % (95-Prozent-Konfidenzintervall 97,8 � 99,8 %)

Der ColorPAC-Test erbrachte vier möglicherweise falsch positive Ergebnisse. Die Überprüfung der Abweichungenzeigte, daß alle vier Proben von Patienten stammten, die laut Mikroskopuntersuchung einer anderen Probe Giardia-positiv waren.

Ergebnisse für Cryptosporidium:

Empfindlichkeit: 73/73 = 100 % (95-Prozent-Konfidenzintervall 95,1 �100 %)Spezifität: 427/429 = 99,5 % (95-Prozent-Konfidenzintervall 98,3 - 99,9 %)

Es gab zwei möglicherweise falsche Cryptosporidium-positive Ergebnisse. Die entsprechenden Proben stammten vonzwei Patienten, bei denen Cryptosporidium bei Wiederholung der Mikroskopuntersuchung nicht mehr nachgewiesenwerden konnte.

Reproduzierbarkeit des Assays

Eine Serie von 15 Proben, bestehend aus 5 Replikaten einer gering Giardia-positiven Probe, 5 Replikaten einer geringCryptosporidium-positiven Probe und 5 Replikaten einer Probe wurde bei 5 verschiedenen Gelegenheiten durchMitarbeiter zweier parasitologischer Labors mit dem Test untersucht. Die Intra-Assay-Reproduzierbarkeit wurdedurch eine Übereinstimmung von 100 % (VK: 0 %) aller Replikatproben innerhalb eines Durchgangs gezeigt. DieInter-Assay-Reproduzierbarkeit wurde durch eine Übereinstimmung von 100 % aller Ergebnisse der zehnunterschiedlichen Untersuchungen gezeigt, bei denen der Test eingesetzt wurde.

Kreuzreaktionen

Der ColorPAC-Giardia-/Cryptosporidium-Assay wurde an Stuhlproben durchgeführt, bei denen durchMikroskopuntersuchung die Anwesenheit anderer Parasiten nachgewiesen worden war.

16


auf Cryptosporidium � 0 105

ColorPAC-Cryptosporidium-Ergebnis

+ �

Schnell-EIA für + 36 0



+ �


auf Giardia � 4 448


+ �

Mikroskopuntersuchung auf + 73 0



+ �

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Der Giardia-spezifische Teil des Assays zeigte keine Kreuzreaktionen mit den folgenden Organismen:

Die Zahlen in Klammern geben die Anzahl der Proben an, die auf den jeweiligen Organismus getestet wurden.

Der Cryptosporidium-spezifische Teil des Assays zeigte keine Kreuzreaktionen mit den folgenden Organismen:

Die Zahlen in Klammern geben die Anzahl der Proben an, die auf den jeweiligen Organismus getestet wurden.

LITERATUR: S. �References� im englischen Text

LIEFERBARE PRODUKTE

Best.-Nr. Beschreibung

240909 ColorPAC-Giardia/Cryptosporidium-Schnellassay (30 Tests)

17







Endolimax nana (28)

Entamoeba coli (14)





Hakenwürmer (1)



Mikrosporidien (1)


Taenia-Spezies (1)







Endolimax nana (48)

Entamoeba coli (21)





Hakenwürmer (1)



Mikrosporidien (1)


Taenia-Spezies (2)


ColorPAC Giardia/CryptosporidiumRapid AssayPer la rilevazione qualitativa degli antigeni specifici di Giardia e Cryptosporidium

L0013152003/06

! Italiano

USO PREVISTO

Il test BD ColorPAC Giardia/Cryptosporidium è un immunodosaggio rapido per la rilevazione qualitativa degliantigeni specifici di Giardia e Cryptosporidium in estratti acquosi di campioni fecali. È destinato a uso diagnostico invitro in laboratori professionali come ausilio nella rilevazione di sospette infezioni da Giardia o Cryptosporidium.

SOMMARIO E SPIEGAZIONE

Giardia e Cryptosporidium sono riconosciuti come due delle cause più frequenti di parassitosi intestinale. Entrambi imicrorganismi sono diffusi in tutto il mondo e generalmente si trasmettono mediante ingestione di alimenti o acquacontaminati.

La giardiasi nell�uomo è causata dal protozoo parassita Giardia lamblia (conosciuto anche come Giardia intestinalis).La malattia acuta è caratterizzata da diarrea acquosa, nausea, crampi addominali, meteorismo, calo ponderale emalassorbimento che persistono per varie settimane. Può inoltre verificarsi infezione cronica o asintomatica.1,2

La criptosporidiosi nell�uomo è causata dal coccidio parassita Cryptosporidium parvum. I sintomi acuti comprendonodiarrea acquosa, crampi addominali, perdita di appetito, febbricola, nausea e vomito che persistono da qualchegiorno a oltre un mese. Nei pazienti immunocompromessi possono insorgere infezioni gravi persistenti.1 L�infezionepuò anche essere asintomatica. Il parassita è risultato implicato in numerose gravi epidemie causate dacontaminazione idrica negli Stati Uniti.3

Tradizionalmente, la diagnosi di infezione da Giardia e Cryptosporidium si è basata sull�esame microscopico delle feci. La rilevazione degli antigeni di Giardia e Cryptosporidium nei campioni fecali mediante dosaggiimmunoenzimatici (EIA) è stata recentemente accettata come modalità diagnostica.4-6 Il dosaggio ColorPACGiardia/Cryptosporidium rileva antigeni simili utilizzando un formato di immunodosaggio rapido non enzimatico.

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PRINCIPI DELLA PROCEDURA

Il test ColorPAC Giardia/Cryptosporidium è un dosaggio qualitativo immunocromatografico che simultaneamenterileva e differenzia gli antigeni di Giardia e Cryptosporidium in estratti acquosi di campioni fecali. Il campione,raccolto in un terreno conservante o di trasporto, viene versato in una provetta contenente un tampone ditrattamento. Si aggiunge quindi un antisiero biotinilato a cattura anti-Giardia, seguito da una sospensione di unpool di anticorpi monoclonali marcati con un colorante colloidale anti Giardia e Cryptosporidium. Il campione vienepoi mescolato e versato nel dispositivo di test contenente un reagente a cattura (un derivato dell�avidina) perGiardia, un anticorpo a cattura per Cryptosporidium e un anticorpo di controllo che si lega al coniugato di colorantecolloidale in eccesso. La presenza dell�antigene di Giardia nel campione determina lo sviluppo di una banda neranella posizione GIAR. nella finestra del dispositivo, mentre la presenza dell�antigene di Cryptosporidium sviluppa unabanda nera nella posizione CRYP. Affinché il risultato del test sia considerato valido, è necessario che nella posizioneCONT. si sviluppi una banda nera, indicante che il coniugato di colorante colloidale è integro e il flusso capillare èrisultato appropriato.

REAGENTI

Confezione in foglio di alluminio contenente i dispositivi di test ColorPAC Giardia/Cryptosporidium comprendenti: a) una membrana rivestita di un derivato dell�avidina, IgG murine anti-Cryptosporidium e IgG di capra anti-topo, b) tamponi assorbenti, essiccante e un contenitore in plastica (30 per kit di test).

Tampone di trattamento (2,8 mL) Soluzione tampone con detergente, contenente azide allo 0,1%.campione (STB)

Coniugato Reagente A (A) (1,8 mL) Anticorpo biotinilato di coniglio anti-Giardia in tampone diluente condetergente e proteina carrier, contenente azide allo 0,1%.

Coniugato Reagente B (B) (1.8 mL) Anticorpi monoclonali marcati con colorante colloidale anti Giardia eCryptosporidium in tampone diluente con detergente e proteina carrier,contenente azide allo 0,1%.

30 pipette per trasferimento campione, 30 provette di diluizione campione, schema di procedura

Portareagenti Supporto atto a contenere il reagente A (A), il reagente B (B) e iltampone per trattamento campione (STB). 6 postazioni aggiuntive per icampioni da testare, identificate con 123456.

Precauzioni - Per uso diagnostico in vitro.

In seguito alla valutazione compiuta dai Centers for Disease Control and Prevention (CDC), ai sensi delle norme CLIA�88, la complessità di questo prodotto è stata definita Moderata. I codici CDC di identificazione dell�analita perGiardia lamblia e Cryptosporidium sono rispettivamente 2222 e 1109; il codice CDC di identificazione del sistema ditest è 08172.

Non usare il kit oltre la data di scadenza. Non scambiare o mescolare componenti provenienti da lotti di kit diversi.

Avvertenza - I campioni clinici possono contenere microrganismi patogeni, inclusi i virus dell�epatite e i virusdell�immunodeficienza umana. Manipolare tutti i materiali e gli articoli contaminati con sangue e altri fluidibiologici in conformità alle linee guida dell�istituto e alle �Precauzioni standard�.7-10

Avvertenza - I reagenti contengono sodio azide, sostanza altamente tossica se inalata, ingerita e in caso di contattocon la pelle. A contatto con acidi, la sodio azide libera gas estremamente tossici. In caso di contatto con la pelle,lavarsi immediatamente e abbondantemente con acqua. Proteggersi gli occhi/la faccia. La sodio azide può reagirecon il piombo e il rame delle tubature, formando azidi metalliche altamente esplosive. Eliminare la sodio azidefacendo scorrere abbondante acqua negli scarichi per impedire l�accumulo di azidi.

Conservazione - Conservare a 2 � 8 ºC. NON CONGELARE.

Nota - È importante conservare questo kit a 2 � 8 °C. Riportare il kit a 2 � 8 °C subito dopo ciascun utilizzo.

RACCOLTA E TRATTAMENTO DEI CAMPIONI

Nel dosaggio ColorPAC Giardia/Cryptosporidium è possibile usare i campioni di feci raccolti per l�esame parassitologico.Raccogliere i campioni in recipienti di plastica puliti e rigorosamente ermetici.

I campioni più idonei per il test sono quelli raccolti in SAF (Sodio acetato-Acido acetico-Formalina), formalina al 10%,MIF (Mertiolato-Iodio-Formaldeide), terreni di trasporto* Cary-Blair o Stuart. I campioni in PVA (alcol polivinilico)non sono adatti.

I campioni freschi* (non conservati) possono essere accettati, ma devono essere diluiti 1:4 in un terreno di trasportoadatto prima di eseguire il test. Qualora non fosse disponibile alcun terreno di trasporto, è possibile usare acquadistillata o deionizzata.

18

I campioni in formalina e SAFpossono essere congelati (-20 ºC o-70 ºC), refrigerati (2 � 8 ºC)oppure conservati a temperaturaambiente (20 � 30 ºC) e devonoessere testati entro 2 mesi dallaraccolta.

I campioni diluiti in terreno CaryBlair possono essere refrigerati (2 � 8 ºC) e testati entro 2settimane dalla raccolta oppurecongelati (-20 ºC) e testati entro 2 mesi.

I campioni in MIF possono esserecongelati (-20 ºC), refrigerati (2 � 8 ºC) oppure conservati atemperatura ambiente (20 � 30 ºC)e devono essere testati entro 2 mesi dalla raccolta.

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Per eseguire una diluizione 1:4:

� mescolare accuratamente il campione usando un bastoncino di legno o un utensile equivalente;

� rimuovere l�equivalente di 1 mL di campione miscelato e dispensarlo in 3 mL di terreno di trasportoaccettabile;

� mescolare accuratamente e procedere al test.

*Testare i campioni freschi e quelli in terreno Stuart subito dopo la raccolta in quanto la conservazione in talicondizioni non è stata validata.

CONTROLLO DI QUALITÀ

Il test ColorPAC Giardia/Cryptosporidium è dotato di numerose proprietà utili ai fini dei controlli di qualità diroutine.

1. La comparsa di una banda di controllo nella posizione CONT. garantisce che nel dispositivo sia stato versato unconiugato di colorante colloidale funzionalmente integro, che l�anticorpo della linea di controllo siafunzionalmente attivo e che il flusso capillare sia stato adeguato.

2. La sequenza con cui i reagenti vengono versati nella provetta del campione consente all�utente di monitorarevisivamente la procedura: il tampone di trattamento campione viene versato nella provetta vuota; il campione difeci è visivamente osservabile; il Coniugato Reagente A ha un colorante rosso incorporato e il ConiugatoReagente B è di colore nero.

3. Campioni definiti conservati in formalina possono essere usati come controlli positivi e negativi esterni di routine.I campioni definiti devono essere analizzati come campioni da testare in conformità alle procedure descritte diseguito.

4. Si raccomanda di analizzare campioni definiti ogni volta che si utilizza un nuovo lotto di kit o si cambiaoperatore.

Le procedure prescritte per il controllo di qualità devono essere effettuate in conformità alle norme vigenti o airequisiti di accreditazione e alla prassi di controllo di qualità del laboratorio specifico. Per una guida alla prassi dicontrollo di qualità appropriata, si consiglia di consultare le norme CLIA e la documentazione NCCLS in merito.

PROCEDURA

Materiali forniti - Tutti i materiali elencati alla voce �Reagenti�.

Materiali necessari ma non forniti - Dispositivi per il prelievo e il trasporto dei campioni. SAF, formalina al 10%, MIF,terreni di trasporto Cary-Blair e Stuart sono accettabili, orologio o cronometro.

Note

1. Prima dell�uso, attendere che i componenti del kit e i campioni si portino a temperatura ambiente. Mescolare ireagenti liquidi capovolgendoli varie volte prima dell�uso. Rimettere il kit in frigorifero subito dopo ciascunutilizzo. Conservare sempre i reagenti in posizione verticale.

2. Estrarre i dispositivi di test dalla confezione soltanto al momento di utilizzarli.

3. Numerosi test possono essere eseguiti contemporaneamente. Usare pipette e provette di diluizione diverse perogni campione.

4. Al fine di prevenire eventuali contaminazioni, evitare che il puntale di dispensazione del tampone di trattamentocampione, dei contagocce di Coniugato Reagente A e Coniugato Reagente B sfiori le provette di diluizione, lepipette, i dispositivi di test o qualsiasi componente venuto a diretto contatto con i campioni.

5. Una volta rimossi i tappi dai flaconi di reagente, pulire la parte esterna dei puntali di dispensazione con unpanno pulito da laboratorio che non lasci residui (NON usare panni trattati come per esempio salviette imbevutedi alcol).

6. Affinché le performance del dosaggio siano ottimali, è importante dispensare gocce di reagente intere. Perottenere i risultati migliori, tenere il flacone capovolto in posizione quasi verticale, comprimerlo e dispensarelentamente, lasciandovi entrare aria tra un campione e l�altro. Agitare leggermente il flacone capovolto perfacilitare la fuoriuscita dell�aria eventualmente infiltratasi nel puntale di dispensazione. Qualora durante ladispensazione del reagente si ravvisassero residui liquidi o accumuli di liquido sulla parte esterna del puntale didispensazione, pulire quest�ultimo con un panno pulito da laboratorio che non lasci residui, quindi riprendere ladispensazione.

7. Non concentrare i campioni. I campioni possono essere omogenati allo scopo di garantirne l�uniformità; ètuttavia accettabile il deposito di particolati di grosse dimensioni al fine di pipettare il campione con maggiorefacilità.

8. Tutti i campioni freschi o non conservati - inclusi i campioni liquidi - devono essere diluiti circa 1:4 in un terrenodi trasporto accettabile prima di eseguire il test (vedere la sezione RACCOLTA E TRATTAMENTO DEI CAMPIONI).

Procedura del test

1. Rimuovere il dispositivo di test dalla confezione e porlo su una superficie piatta; posizionare una provetta didiluizione campione nell�apposito supporto nella workstation o in un rack adatto.

2. Dispensare due gocce di tampone di trattamento campione (STB) nella provetta di diluizione campione.

3. Usare la pipetta di trasferimento campione per aspirare il campione acquoso fecale: comprimere il bulbosuperiore della pipetta, inserire l�estremità aperta nel campione e allentare la pressione sul bulbo tenendo lapipetta nel campione. Accertarsi di riempire completamente il fusto della pipetta. Una camera di tracimazionepreviene il riempimento eccessivo della pipetta. Trasferire il contenuto del fusto della pipetta (circa 60 µL) nellaprovetta di diluizione campione (il campione può rimanere nella camera di tracimazione).

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Nota - Tutti i campioni freschi o non conservati - inclusi i campioni liquidi - devono essere diluiticirca 1:4 in un terreno di trasporto accettabile prima di eseguire il test (vedere la sezione RACCOLTAE TRATTAMENTO DEI CAMPIONI).

4. Dispensare due gocce di Coniugato Reagente A (A) nella provetta.

5. Dispensare due gocce di Coniugato Reagente B (B) nella provetta.

6. Mescolare il campione roteando manualmente o vortexando la provetta. Dispensare tutto il contenuto dellaprovetta nell�apposito pozzetto del dispositivo di test.

7. Leggere visivamente i risultati del test dopo 10 min. Trascorsi 15 min, i risultati non sono più validi.

INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI

Positivo per Giardia

La presenza di bande visibili grigio-nere nelle posizioni GIAR. e CONT. indica che èstato rilevato l�antigene di Giardia. La banda può avere un�intensità variabile, dadebole a forte. Linee di test visibili, di qualsiasi intensità, devono essere interpretatecome risultato positivo.

Positivo per Cryptosporidium

La presenza di bande visibili grigio-nere nelle posizioni CRYP. e CONT. indica che èstato rilevato l�antigene di Cryptosporidium. La banda può avere un�intensitàvariabile, da debole a forte. Linee di test visibili, di qualsiasi intensità, devono essereinterpretate come risultato positivo.

Negativo per Giardia

L�assenza di una banda visibile nella posizione GIAR. e la presenza di una bandanella posizione CONT. indicano che l�antigene di Giardia è assente o inferiore alivelli rilevabili. Nella posizione CRYP. la banda può essere presente o assente.

Negativo per Cryptosporidium

L�assenza di una banda visibile nella posizione CRYP. e la presenza di una banda nellaposizione CONT. indicano che l�antigene di Cryptosporidium è assente o inferiore alivelli rilevabili. Nella posizione GIAR. la banda può essere presente o assente.

Risultati non validi

Nella posizione CONT. non compare alcuna banda. Nella posizione CRYP. o GIAR.appare una banda incompleta o disomogenea. Il test deve essere ripetuto usandoun altro dispositivo. In caso di flusso inadeguato a causa di un eccesso di particolatinel campione, diluire quest�ultimo due volte in acqua o nel terreno di trasporto incui è stato originariamente raccolto e rianalizzarlo.

LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA

1. Come per tutte le procedure diagnostiche, i risultati ottenuti con il test ColorPAC Giardia/Cryptosporidiumdevono essere usati unitamente all�insieme di informazioni cliniche a disposizione del medico.

2. I campioni contenenti livelli di antigene inferiori ai limiti di rilevazione del dosaggio possono dare risultatinegativi. In caso di pazienti sospetti positivi per Guardia o Cryptosporidium, è possibile testare più campioniraccolti nel corso di vari giorni.

VALORI ATTESI

La prevalenza di Giardia e Cryptosporidium varia a seconda delle diverse popolazioni e aree geografiche. L�incidenzadi Giardia nei paesi sviluppati è di circa il 2 � 5%, mentre quella di Cryptosporidium in Europa e in Nord America èintorno all� 1 � 3%.3 In bambini e soggetti immunocompromessi è possibile riscontrare prevalenze superiori.1-3

PRESTAZIONI METODOLOGICHE

Sensibilità e specificità

Il test ColorPAC Giardia/Cryptosporidium è stato oggetto di una valutazione clinica multicentrica prospettica eretrospettiva. I risultati del dosaggio ColorPAC Giardia/Cryptosporidium sono stati comparati con quelli dell�esamemicroscopico parassitologico.

Nello studio retrospettivo, è stato usato un pannello di campioni conservati in formalina precedentemente definiti. Ildosaggio ColorPAC è stato comparato con i risultati degli esami microscopici. L�esame microscopico è consistito incolorazione standard parassitologica per Giardia e altri parassiti, colorazione acido-resistente modificata perCryptosporidium e - in caso di discrepanze - colorazione specifica in immunofluorescenza per Giardia eCryptosporidium.

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Forte Debole

Forte Debole

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Risultati Giardia

Sensibilità: 33/33 = 100% (intervallo di confidenza 95% 89,4 � 100%)Specificità: 109/109 = 100% (intervallo di confidenza 95% 96,7 � 100%)

I quattro campioni discrepanti sono risultati positivi per Giardia all�esame microscopico.

Concordanza relativa* tra dosaggio ColorPAC ed EIA rapido per Giardia: 138/142 = 97,2%.

*Nota - Ricordare che �relativa� si riferisce alla comparazione dei risultati di questo dosaggio con quelli di undosaggio simile. Non si è cercato di correlare i risultati del dosaggio con la presenza o assenza di malattia. Non èpossibile giudicare l�accuratezza del dosaggio della comparazione per prevedere il decorso della malattia.

Risultati Cryptosporidium

Sensibilità: 36/37 = 97,3% (intervallo di confidenza 95% 85,8 � 100%)Specificità: 105/105 = 100% (intervallo di confidenza 95% 96,6 � 100%)

Il risultato discrepante è stato verificato e determinato positivo per Cryptosporidium mediante immunofluorescenza;probabilmente, conteneva un livello di antigene inferiore al limite di rilevazione del dosaggio ColorPAC.

Concordanza relativa* tra dosaggio ColorPAC ed EIA rapido per Cryptosporidium: 142/142 = 100%*Nota - Ricordare che �relativa� si riferisce alla comparazione dei risultati di questo dosaggio con quelli di undosaggio simile. Non si è cercato di correlare i risultati del dosaggio con la presenza o assenza di malattia. Non èpossibile giudicare l�accuratezza del dosaggio della comparazione per prevedere il decorso della malattia.

Lo studio prospettico è stato condotto su campioni definiti e si è svolto in tre siti distinti geograficamente diversinegli Stati Uniti. Sono stati testati 502 campioni usando il test rapido ColorPAC Giardia/Cryptosporidium. I risultatisono stati comparati con quelli degli esami microscopici parassitologici, combinati con colorazione acido-resistentemodificata per Cryptosporidium.

Risultati Giardia

Sensibilità: 50/50 = 100% (intervallo di confidenza 95% 92,9 � 100%)Specificità: 448/452 = 99,1% (intervallo di confidenza 95% 97,8 � 99,8%)

Con il test ColorPAC, sono stati riscontrati quattro teorici falsi positivi. Il test discrepante ha evidenziato che tutti equattro i campioni provenivano da pazienti Giardia-positivi all�esame microscopico su un campione differente.

Risultati Cryptosporidium

Sensibilità: 73/73 = 100% (intervallo di confidenza 95% 95,1 � 100%)Specificità: 427/429 = 99,5% (intervallo di confidenza 95% 98,3 � 99,9%)

21

Esame microscopico + 33 0

per Giardia � 0 109

Risultato ColorPAC Giardia

+ �

EIA rapido per + 29 0

Giardia � 0 109


+ �


per Cryptosporidium � 0 105

Risultato ColorPACCryptosporidium

+ �




+ �


per Giardia � 4 448


+ �




+ �

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Dai dati suddetti, sono emersi due teorici falsi positivi per Cryptosporidium. Questi campioni provenivano da duepazienti per i quali non è stato possibile documentare Cryptosporidium mediante ripetizione degli esamimicroscopici.

Riproducibilità del dosaggio

Il personale di due laboratori di diagnostica parassitologica ha analizzato - in cinque occasioni diverse - un pannellodi quindici campioni comprendente cinque replicati di un campione positivo a basso livello di Giardia, cinquereplicati di un campione positivo a basso livello di Cryptosporidium e cinque replicati di un campione negativo. Lariproducibilità intra-dosaggio è stata dimostrata dalla concordanza del 100% (CV 0%) tra tutti i campioni replicatinell�ambito di ciascuna sessione. La riproducibilità inter-dosaggio è stata dimostrata dalla concordanza del 100% neirisultati di tutte e dieci le diverse occasioni in cui è avvenuta l�analisi del pannello di test.

Reattività crociata

Il dosaggio ColorPAC Giardia/Cryptosporidium è stato effettuato su campioni di feci determinati positivi per altriparassiti mediante esame microscopico.

La parte Giardia-specifica del dosaggio non ha evidenziato reattività crociata per i seguenti microrganismi.

I numeri tra parentesi rappresentano la quantità di campioni testati per ciascun microrganismo.

La parte Cryptosporidium-specifica del dosaggio non ha evidenziato reattività crociata per i seguenti microrganismi.

I numeri tra parentesi rappresentano la quantità di campioni testati per ciascun microrganismo.

BIBLIOGRAFIA: Vedere �References� nel testo inglese.

DISPONIBILITÀ

N. di cat. Descrizione

240909 Test ColorPAC Giardia/Cryptosporidium Rapid Assay, 30 test.

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Endolimax nana (28)

Entamoeba coli (14)





Anchilostoma (1)



Microsporidia (1)


Taenia sp. (1)







Endolimax nana (48)

Entamoeba coli (21)





Anchilostoma (1)



Microsporidia (1)


Taenia sp. (2)


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USO PREVISTO

La prueba BD ColorPAC Giardia/Cryptosporidium es un inmunoanálisis rápido para la detección cualitativa de losantígenos específicos de Giardia y Cryptosporidium en extractos acuosos de muestras fecales. Está indicada para eluso diagnóstico in vitro en laboratorios profesionales como auxiliar en la detección de infecciones presuntas porGiardia o Cryptosporidium.

RESUMEN Y EXPLICACIÓN

Giardia y Cryptosporidium se describen como las dos causas más frecuentes de la enteropatía parasitaria. Ambosmicroorganismos se pueden encontrar en todo el mundo. Por lo general, la transmisión se produce por la ingestiónde alimentos o agua contaminados.

La Giardiasis en los seres humanos es causada por el parásito protozoario Giardia lamblia (también conocido comoGiardia intestinalis). La enfermedad en su etapa aguda se caracteriza por diarrea líquida, náuseas, cólicos, distensiónabdominal, pérdida de peso y malabsorción, que se prolonga por varias semanas. También pueden producirseinfecciones crónicas o asintomáticas1, 2.

La Cryptosporidiosis en los seres humanos es causada por el parásito de la coccidiosis Cryptosporidium parvum. Lossíntomas agudos incluyen diarrea líquida, cólicos, pérdida del apetito, febrícula, náuseas y vómitos, que seprolongan desde varios días hasta más de un mes. Pueden producirse infecciones graves y persistentes en pacientesinmunodeprimidos1. Dicha infección también puede ser asintomática. El parásito también se vio implicado ennumerosas epidemias de transmisión por agua importantes en Estados Unidos3.

El diagnóstico de la infección por Giardia y Cryptosporidium se ha llevado a cabo tradicionalmente medianteexamen microscópico de las heces. Más recientemente, la detección de los antígenos de Giardia y Cryptosporidiumen muestras fecales mediante enzimoinmunoanálisis se ha convertido en el método aceptado de diagnóstico4-6. Elanálisis ColorPAC Giardia/Cryptosporidium detecta antígenos similares mediante un formato de inmunoanálisisrápido no enzimático.

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO

La prueba ColorPAC Giardia/Cryptosporidium es un análisis inmunocromatográfico cualitativo que detecta ydistingue simultáneamente los antígenos de Giardia y de Cryptosporidium en extractos acuosos de muestras fecalesde pacientes. La muestra, recogida en un medio de transporte o conservante de muestras, es añadida a un tubo conuna solución tampón de tratamiento. Luego se añade un reactivo de anticuerpo de captura biotinilado anti-Giardia,seguido de una suspensión combinada de anticuerpos monoclonales de Giardia y Cryptosporidium diferenciados pormedio de colorante coloidal. Luego la muestra se mezcla y vierte en el dispositivo de prueba que contiene unreactivo de captura (un derivado de avidina) para Giardia, un anticuerpo de captura para Cryptosporidium, y unanticuerpo de control que se une al exceso de conjugado colorante coloidal. Si el antígeno de Giardia se encuentrapresente en la muestra, aparece una banda negra en la posición GIAR. en la ventana del dispositivo. Si está presenteel antígeno de Cryptosporidium, aparece una banda negra en la posición CRYP. La generación de una banda negraen la posición CONT. es condición necesaria para que la prueba sea válida. Indica que el conjugado colorantecoloidal se encuentra intacto y que ha tenido lugar un flujo capilar adecuado.

REACTIVOS

Dispositivos para pruebas envasados ColorPAC Giardia/Cryptosporidium, constituidos por los siguientes elementos: a) membrana revestida con un derivado de avidina, IgG de ratón anti-Cryptosporidium e IgG de cabra anti-ratón, b) almohadilla, secante y estructura de plástico. (30 por equipo de pruebas)

Solución tampón para (2,8 mL) Solución tampón con detergente, con azida al 0,1%.tratamiento de muestras (STB)

Reactivo A (A) conjugado (1,8 mL) Anti-Giardia de conejo biotinilado en solución tampón de diluyentecon proteína portadora y detergente, contiene azida al 0,1%.

Reactivo B (B) conjugado (1,8 mL) Anticuerpos monoclonales diferenciados por medio de colorantecoloidal para Giardia y Cryptosporidium en solución tampón dediluyente con proteína portadora y detergente, contiene azida al0,1%.

30 pipetas para transferencia de muestras, 30 tubos de dilución de muestras, esquema de procedimiento

Base para reactivos Base para sostener el reactivo A (A), el reactivo B (B) y la solucióntampón para tratamiento de muestras (STB). 6 espacios adicionalespara muestras de pruebas identificadas como 123456.

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Análisis rápido ColorPACGiardia/CryptosporidiumPara la detección cualitativa de antígenos específicos deGiardia y Cryptosporidium

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! Español

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Precauciones: Para uso diagnóstico in vitro.

Tras su revisión por parte de los Centers for Disease control and Prevention (CDC), bajo el epígrafe CLIA �88, esteproducto se ha clasificado como de complejidad moderada. El código identificador de analito de los CDC paraGiardia lamblia es 2222, y para Cryptosporidium es 1109; el código identificador de sistema de prueba de los CDC es08172.

No utilizar los componentes del equipo después de la fecha de caducidad impresa en el envase. No intercambiar nimezclar componentes de diferentes lotes de equipos.

Advertencia: En las muestras clínicas puede haber microorganismos patógenos, como los virus de la hepatitis y elvirus de la inmunodeficiencia humana. Para la manipulación de todos los elementos contaminados con sangre uotros líquidos corporales deben seguirse las �Precauciones estándar�7-10 y las directrices del centro.

Advertencia: Los reactivos contienen azida sódica. Muy tóxico por inhalación, por ingestión y en contacto con la piel.El contacto con ácidos libera un gas muy tóxico. En caso de contacto con la piel, lavarla inmediatamente conabundante agua. Utilizar protección para los ojos/la cara. La azida sódica puede reaccionar con las cañerías de plomoy cobre, formando azidas metálicas muy explosivas. Al desechar el material, utilizar un gran volumen de agua paraevitar el depósito de azidas.

Conservación: Refrigerar a 2 � 8 ºC. NO CONGELAR.

Nota: Es muy importante que este equipo se conserve a una temperatura de 2 � 8 ºC. Devolver el equipo alfrigorífico a 2 � 8 ºC de inmediato después de cada uso.

RECOGIDA Y MANIPULACIÓN DE LAS MUESTRAS

Las muestras fecales recogidas para examen en busca de huevos y parásitos se pueden utilizar en el análisis ColorPACGiardia/Cryptosporidium. Las muestras deben recogerse en recipientes limpios, de plástico y herméticos.

Las muestras recogidas en medio de transporte SAF, formalina al 10%, MIF, Cary-Blair o Stuart* son las muestras depreferencia para la prueba. Las muestras en PVA no son adecuadas.

Las muestras recientes* (sin conservantes) son aceptables, pero deben diluirse en una proporción 1:4 en un medio detransporte aceptable antes de realizar la prueba. Si no está disponible un medio de transporte, se puede utilizaragua desionizada o destilada.

Para realizar una dilución 1:4:

� Mezclar la muestra a conciencia, con un aplicador de madera o equivalente.

� Retirar el equivalente de 1 mL de muestra mezclada y colocar en 3 mL de medio de transporteaceptable.

� Mezclar bien y realizar la prueba.

*Las muestras recientes en medio Stuart deben analizarse tan pronto como sea posible después de la recogida, yaque no se ha validado la conservación en dichas condiciones.

CONTROL DE CALIDAD

Se han incorporado varias prestaciones en la prueba ColorPAC Giardia/Cryptosporidium para comprobaciones decalidad sistemáticas:

1. La generación de una banda de control en la posición CONT. verifica que se ha añadido al dispositivo unconjugado colorante coloidal con funcionalidad intacta, que el anticuerpo de línea de control se encuentraactivo y que ha ocurrido flujo capilar adecuado.

2. La serie de adiciones de reactivo al tubo de muestra permite al usuario controlar visualmente el procedimiento: Seañade solución tampón para tratamiento de muestras a un tubo vacío; se puede observar visualmente la muestrafecal; el reactivo A conjugado tiene un colorante rojo incorporado, y el reactivo B conjugado es de color negro.

3. Las muestras de paciente identificadas y conservadas en formalina pueden utilizarse en calidad de controlesnegativos y positivos externos sistemáticos. Las muestras de pacientes identificadas deben someterse análisissegún los procedimientos descritos a continuación.

4. Se recomienda que las muestras identificadas se sometan a análisis en calidad de controles con cada nuevoequipo o con cada operador nuevo.

El control de calidad debe llevarse a cabo conforme a la normativa local y/o nacional, a los requisitos de losorganismos de acreditación y a los procedimientos estándar de control de calidad del laboratorio. Se recomiendaconsultar las instrucciones de NCCLS y normativas de CLIA correspondientes para obtener información acerca de lasprácticas adecuadas de control de calidad.

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Las muestras conservadas enformalina y SAF pueden alma-cenarse congeladas (-20 ºC o -70 ºC), refrigeradas (2 � 8 ºC) o atemperatura ambiente (20 � 30 ºC),y deben analizarse dentro de los 2 meses posteriores a la recogida.

Las muestras diluidas en medioCary Blair pueden almacenarserefrigeradas (2 � 8 ºC) y analizarsedentro de las 2 semanasposteriores a la recogida, ocongeladas (-20 ºC) y analizarse alos 2 meses.

Las muestras conservadas en MIFpueden almacenarse congeladas (-20 ºC), refrigeradas (2 � 8 ºC) o atemperatura ambiente (20 � 30 ºC)y deben analizarse dentro de losmeses posteriores a su recogida.

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PROCEDIMIENTO

Materiales suministrados: Todos los materiales se relacionan bajo el epígrafe �reactivos�.

Materiales necesarios pero no suministrados: Recogida de muestras y dispositivos de transporte. Los medios detransporte SAF, formalina al 10%, MIF, Cary-Blair y Stuart son aceptables; se requiere asimismo reloj o temporizador.Notas:

1. Permitir que los componentes de equipo y las muestras lleguen a temperatura ambiente antes del uso. Mezclarlos reactivos líquidos invirtiéndolos varias veces antes del uso. Devolver el equipo al frigorífico de inmediato,después de cada uso. Siempre conservar los reactivos en posición vertical.

2. No extraer los dispositivos de prueba hasta el momento del uso.

3. Se pueden realizar varias pruebas simultáneamente. Utilizar tubos de dilución y pipetas diferentes para cadamuestra.

4. Para evitar una posible contaminación, evitar el contacto de la punta de los frascos dosificadores de la solucióntampón para tratamiento de muestras, de reactivo A conjugado y de reactivo B conjugado con los tubos dedilución, pipetas, dispositivos de prueba y cualquier otro elemento que haya tenido contacto con las muestras depacientes.

5. Después de quitar las tapas de los frascos de reactivos, limpiar la parte externa de las puntas dosificadoras con unpaño de laboratorio limpio y sin pelusa (NO utilizar paños tratados tales como gasas con alcohol).

6. Es importante dosificar gotas completas de reactivos para un rendimiento óptimo del análisis. Para mejoresresultados, sostener el frasco invertido en posición casi vertical, exprimir y dejar caer las gotas lentamente,dejando que entre aire al frasco entre una muestra y la siguiente. Si sacude el frasco levemente en posicióninvertida, se puede facilitar la eliminación del aire atrapado en la punta dosificadora. Si hay evidencia de líquidorestante o acumulación de líquido en la parte externa de la punta dosificadora mientras se dispensa el reactivo,secar la punta con un paño de laboratorio limpio y sin pelusa, luego reanudar la dosificación.

7. No concentre las muestras de pacientes. Las muestras pueden mezclarse para asegurar un muestreo uniforme,aunque es aceptable permitir que las partículas de gran tamaño se depositen de manera que la muestra sepueda extraer con pipeta con mayor facilidad.

8. Todas las muestras recientes o sin conservante, incluidas las muestras líquidas, deben diluirse en una proporción1:4 aproximadamente, en un medio de transporte aceptable, antes de su uso con este análisis (véase la secciónRECOGIDA Y MANIPULACIÓN DE LAS MUESTRAS).

Procedimiento de análisis

1. Extraer el dispositivo de prueba del envase y colocarlo sobre una superficie plana; colocar un tubo de dilución demuestra en el soporte de la estación de trabajo del equipo o en la gradilla de tubos de ensayo correspondiente.

2. Añadir dos gotas de solución tampón para tratamiento de muestras (STB) al tubo de dilución de muestra.

3. Utilizar la pipeta de transferencia de muestras para aspirar la muestra fecal acuosa del paciente: exprimir la perasuperior de la pipeta, insertar el extremo abierto en la muestra y liberar la presión de la pera mientras sostiene lapipeta en la muestra. Cerciórese de llenar el tubo de la pipeta por completo. Una cámara de desbordamientoevita el llenado excesivo de la pipeta. Transferir el contenido del tubo de la pipeta (aproximadamente 60 µL) enel tubo de dilución de muestra (la muestra puede permanecer en la cámara de desbordamiento).

Nota: Todas las muestras recientes o sin conservante, incluidas las muestras líquidas, deben diluirseen una proporción 1:4 aproximadamente, en un medio de transporte aceptable, antes de su uso coneste análisis (véase la sección RECOGIDA Y MANIPULACIÓN DE LAS MUESTRAS).

4. Añadir dos gotas de reactivo A (A) conjugado al tubo.

5. Añadir dos gotas de reactivo B (B) conjugado al tubo.

6. Mezclar la muestra, girando y agitando manualmente. Verter la totalidad del contenido del tubo en el pocillo demuestra del dispositivo de prueba.

7. Leer a simple vista los resultados de la prueba después de 10 min. Los resultados no son válidos después de 15 min.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Positivos para GiardiaLa presencia de bandas visibles de color gris-negro en las posiciones GIAR. y CONT.indica que se ha detectado el antígeno de Giardia. La intensidad de la banda puedevariar de leve a fuerte. Las líneas de análisis visibles de cualquier intensidad sedeben interpretar como resultados positivos.

Positivos para CryptosporidiumLa presencia de bandas visibles de color gris-negro en las posiciones CRYP. y CONT.indica que se ha detectado el antígeno de Cryptosporidium. La intensidad de labanda puede variar de leve a fuerte. Las líneas de análisis visibles de cualquierintensidad se deben interpretar como resultados positivos.

Negativos para GiardiaNo se ve banda alguna en la posición GIAR. y una banda en la posición CONT. indicaque el antígeno Giardia se encuentra ausente o por debajo de los nivelesdetectables. La posición CRYP. puede causar o no la aparición de una banda.

Fuerte Débil

Fuerte Débil

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Negativos para CryptosporidiumNo se ve banda alguna en la posición CRYP. y una banda en la posición CONT. indicaque el antígeno Cryptosporidium se encuentra ausente o por debajo de los nivelesdetectables. La posición GIAR. puede causar o no la aparición de una banda.

Resultados no válidosNo aparece banda alguna en la posición CONT. Aparece una banda incompleta ofragmentada en la posición CRYP. o GIAR. Debe repetirse la prueba con otrodispositivo. En situaciones en las que no ocurre un flujo adecuado, debido a lacantidad excesiva de partículas en la muestra, ésta puede diluirse dos veces en aguao en el mismo medio de transporte en el que fue recogida originalmente y volver arealizar la prueba.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

1. Como con cualquier procedimiento diagnóstico, los resultados obtenidos con el análisis ColorPACGiardia/Cryptosporidium deben utilizarse junto con otros datos clínicos de los que disponga el médico.

2. Pueden generarse resultados negativos en muestras con niveles de antígeno por debajo de los límites inferioresde detección del análisis. Pueden analizarse varias muestras recogidas durante varios días de pacientes en los quese sospeche infección por Giardia o Cryptosporidium.

VALORES PREVISTOS

La prevalencia de Giardia y Cryptosporidium es variable entre las diferentes poblaciones y áreas geográficas. Laincidencia de Giardia en países desarrollados es de aproximadamente 2 � 5%; la incidencia de Cryptosporidium enEuropa y Norteamérica es de 1 � 3%3. Es posible encontrar un porcentaje más elevado de prevalencia en los niños ylas personas inmnodeprimidos1-3.

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTOSensibilidad y especificidad

Se realizó una evaluación clínica, tanto prospectiva como retrospectiva, de la prueba ColorPACGiardia/Cryptosporidium en múltiples establecimientos. Los resultados del análisis ColorPAC Giardia/Cryptosporidiumse compararon con un examen microscópico de huevos y parásitos.

En el estudio retrospectivo, se utilizó un panel de muestras de pacientes anteriormente identificadas y conservadasen formalina. El análisis ColorPAC se comparó con los resultados del examen microscópico. El examen microscópicoincluyó tinción estándar de huevos y parásitos para Giardia y otros, tinción acidorresistente modificada paraCryptosporidium y, en el caso de encontrar discrepancias, tinción inmunofluorescente específica para Giardia yCryptosporidium.

Resultados de Giardia:

Sensibilidad: 33/33 = 100% (95% intervalo de confianza 89,4 � 100%)Especificidad: 109/109 = 100% (95% intervalo de confianza 96,7 � 100%)

Las cuatro muestras con resultados no coincidentes dieron resultado positivo en el análisis microscópico de Giardia.

Concordancia relativa* entre el análisis ColorPAC y el enzimoinmunoanálisis rápido para Giardia: 138/142 = 97,2%.

*Nota: Tener en cuenta que el término �relativa� se refiere a la comparación de los resultados de este análisis conaquéllos de un análisis similar. No se intentó establecer una correlación entre los resultados del análisis con lapresencia o ausencia de la enfermedad. No se puede emitir opinión acerca de la exactitud del análisis comparativopara predecir la enfermedad.

Resultados de Cryptosporidium:

Sensibilidad: 36/37 = 97,3% (95% intervalo de confianza 85,8 � 100%)Especificidad: 105/105 = 100% (95% intervalo de confianza 96,6 � 100%)

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Examen microscópico + 33 0

de Giardia � 0 109

Resultado de ColorPAC Giardia

+ �

EIA rápido para + 29 0

Giardia � 4 109


+ �



Resultado de ColorPACCryptosporidium

+ �

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El único resultado no coincidente se comprobó como positivo de Cryptosporidium mediante inmunofluorescencia yprobablemente contenía un nivel de antígeno inferior al límite de detección del análisis ColorPAC.

Concordancia relativa* entre el análisis ColorPAC y el enzimoinmunoanálisis rápido para Cryptosporidium: 142/142 =100%

*Nota: Tener en cuenta que el término �relativa� se refiere a la comparación de los resultados de este análisis conaquéllos de un análisis similar. No se intentó establecer una correlación entre los resultados del análisis con lapresencia o ausencia de la enfermedad. No se puede emitir opinión acerca de la exactitud del análisis comparativopara predecir la enfermedad.

El estudio prospectivo se realizó en muestras caracterizadas en tres establecimientos diferentes separadosgeográficamente en Estados Unidos. Se analizaron un total de 502 muestras mediante la prueba rápida ColorPACGiardia/Cryptosporidium. Los resultados se compararon con exámenes microscópicos en busca de huevos y parásitos,en combinación con tinción acidorresistente modificada para Cryptosporidium.

Resultados de Giardia:

Sensibilidad: 50/50 = 100% (95% intervalo de confianza 92,9 � 100%)Especificidad: 448/452 = 99,1% (95% intervalo de confianza 97,8 � 99,8%)

Se encontraron cuatro resultados supuestamente falsos con la prueba ColorPAC. El análisis de las muestras conresultados no coincidentes demostró que las cuatro muestras eran de pacientes que presentaron resultado positivode Giardia mediante examen microscópico en una muestra diferente.

Resultados de Cryptosporidium:

Sensibilidad: 73/73 = 100% (95% intervalo de confianza 95,1 � 100%)Especificidad: 427/429 = 99,5% (95% intervalo de confianza 98,3 � 99,9%)

Se encontraron dos resultados supuestamente falsos para Cryptosporidium de los datos anteriores. Estas muestrasprovenían de dos pacientes en los que no se pudo documentar la presencia de Cryptosporidium mediante larepetición de los exámenes microscópicos.

Reproducibilidad del análisis

Un panel de quince muestras, formado por cinco réplicas de una muestra positiva de Giardia de bajo nivel, cincoréplicas de una muestra positiva de Cryptosporidium de bajo nivel y cinco réplicas de una muestra negativa fueronllevadas a cabo en cinco ocasiones diferentes por personal en dos laboratorios de parasitología diagnóstica. Lareproducibilidad intranalítica se demostró con un 100% de concordancia (0% CV) entre todas las réplicas de muestrasen cada serie de análisis. La reproducibilidad interanalítica se demostró con un 100% de concordancia en losresultados entre las diez diferentes ocasiones en que se realizó el panel de pruebas.

Reactividad cruzada

El análisis ColorPAC Giardia/Cryptosporidium se realizó en muestras fecales documentadas como positivas para otrosparásitos mediante microscopia.

La parte del análisis específica de Giardia no demostró reactividad cruzada a los siguientes organismos:

Los números entre paréntesis representan la cantidad de muestras analizadas por cada organismo.

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+ �


de Giardia � 4 448


+ �


de Cryptosporidium � 2 427


+ �

AAscaris lumbricoides (1)






Endolimax nana (28)

Entamoeba coli (14)





Anquilostoma (1)



Microsporidia (1)


Taenia sp. (1)


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La parte del análisis específica de Cryptosporidium no demostró reactividad cruzada a los siguientes organismos:

Los números entre paréntesis representan la cantidad de muestras analizadas por cada organismo.

REFERENCIAS: Véase la sección �References� en el texto en inglés.

DISPONIBILIDAD

N.º Cat. Descripción

240909 Análisis rápido ColorPAC Giardia/Cryptosporidium, 30 pruebas.

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Endolimax nana (48)

Entamoeba coli (21)





Anquilostoma (1)



Microsporidia (1)


Taenia sp. (2)


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Manufacturer / Producent / Fabrikant / Valmistaja / Fabricant / Hersteller /ÊáôáóêåõáóôÞò /Ditta produttrice / Fabrikant / Fabricante / Tillverkare

Use by / Anvendes før / Houdbaar tot / Viimeinkayttopaiva / A utiliser avant /Verwendbar bis / Çìåñïìçßá ëÞîçò / Usare entro / Brukes før / Utilizar em / Usar antesde / Anvand fore

Catalog number / Katalognummer / Catalogusnummer / Tuotenumero / Numero catalogue / Bestellnummer / Áñéèìüò êáôáëüãïõ / Numero di catalogo / Katalognummer /Numero do catalogo / Numero de catalogo / Katalognummer

Authorized Representative in the European Community / Autoriseret repræsentant i EU /Erkend vertegenwoordiger in de Europese Unie / Valtuutettu edustaja Euroopanyhteisossa / Representant agree pour la C.E.E. / Autorisierte EG-Vertretung /ÅîïõóéïäïôçìÝíïò áíôéðñüóùðïò óôçí ÅõñùðáúêÞ Êïéíüôçôá / Rappresentante autorizzato nella Comunita europea / Autorisert representant i EU / Representanteautorizado na Uniao Europeia / Representante autorizado en la Comunidad Europea /Auktoriserad representant i EU

In Vitro Diagnostic Medical Device / In vitro diagnostisk medicinsk anordning /Medisch hulpmiddel voor in vitro diagnose / Lääkinnällinen in vitro -diagnostiikkalaite /Dispositif médical de diagnostic in vitro / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitroäéáãíùóôéêÞ éáôñéêÞ óõóêåõÞ / Dispositivo medico diagnostico in vitro. / In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / Dispositivomédico de diagnóstico in vitro / Medicinsk anordning för in vitro-diagnostik

Temperature limitation / Temperaturbegrænsning / Temperatuurlimiet /Lämpötilarajoitus / Température limite / Zulässiger Temperaturenbereich / ¼ñéï èåñìïêñáóßáò / Temperatura limite / Temperaturbegrensning / Limitação da temperatura / Limitación de temperatura / Temperaturbegränsning

Batch Code (Lot) / Batch kode (Lot) / Chargenummer (lot) / Erakoodi (LOT) / Code de lot(Lot) / Chargencode (Chargenbezeichnung) / Êùäéêüò ðáñôßäáò (Ðáñôßäá) / Codice dellotto (partita) / Batch-kode (Serie) / Codigo do lote (Lote) / Codigo de lote (Lote) /Satskod (parti)

Contains sufficient for <n> tests / Indeholder tilstrækkeligt til <n> test / Voldoende voor<n> tests / Sisältöon riittävä <n> testejä varten / Contenu suffisant pour <n> tests /Ausreichend für <n> Tests / ÐåñéÝ÷åé åðáñêÞ ðïóüôçôá <n> åîåôÜóåéò / Contenuto sufficiente per <n> test / Innholder tilstrekkelig for <n> tester / Contémo suficiente para<n> testes / Contenido suficiente para <n> pruebas / Räckertill <n> antal tester

Consult Instructions for Use / Læs brugsanvisningen / Raadpleeg gebruiksaanwijzing /Tarkista kayttoohjeista / Consulter la notice d�emploi / Gebrauchsanweisung beachten /Óõìâïõëåõôåßôå ôéò ïäçãßåò ÷ñÞóçò / Consultare le istruzioni per l'uso / Se i bruksanvisningen / Consulte as instrucoes de utilizacao / Consultar las instrucciones deuso / Se bruksanvisningen

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Giardia/Cryptosporidium Combo Assay Procedure / Méthode de dépistage combinée de Giardia etCryptosporidium / ColorPAC-Giardia/Cryptosporidium-Schnelltest � Anleitung / Procedura di

dosaggio Giardia/Cryptosporidium / Procedimiento de análisis para Giardia/Cryptosporidium Combo

FOLD LINE

1. Add 2 drops of Sample Treatment Buffer to tube. / Ajouter 2gouttes de tampon de traitement échantillon dans le tube. /2 Tropfen Probenpufferlösung in das Röhrchen geben. /Dispensare 2 gocce di tampone di trattamento campione(STB) nella provetta. / Añadir 2 gotas de solución tampónpara tratamiento de muestras al tubo.

2. Add patient specimen to tube using transfer pipet. Mix. / Al�aide d�une pipette de transfert, ajouter l�échantillonclinique dans le tube. Mélanger. / Mit der Übertragungs-pipette Patientenprobe in Röhrchen einbringen.Durchmischen. / Usando la pipetta di trasferimento,dispensare il campione nella provetta. Mix. / Añadir muestra del paciente al tubo mediante la pipeta detransferencia. Mezclar.

3. Add 2 drops of Conjugate A to tube. / Ajouter 2 gouttes deConjugué A dans le tube. / 2 Tropfen Konjugat A in dasRöhrchen geben. / Dispensare 2 gocce di Coniugato A nellaprovetta. / Añadir 2 gotas de conjugado A al tubo.

4. Add 2 drops of Conjugate B to tube. Mix. /Ajouter 2 gouttes de Conjugué B dans letube. Mélanger. / 2 Tropfen Konjugat B indas Röhrchen geben. Durchmischen. /Dispensare 2 gocce di Coniugato B nellaprovetta. Mescolare. / Añadir 2 gotas deconjugado B al tubo. Mezclar.

5. Pour contents of tube intosample well of test device. /Verser le contenu du tubedans le puits à échantillon dudispositif de test. / Inhalt desRöhrchens auf das Probenfelddes Tests aufbringen. /Dispensare il contenuto dellaprovetta nell�appositopozzetto del dispositivo ditest. / Verter el contenido deltubo en el pocillo de muestradel dispositivo para pruebas.

6. Visually read results after 10 min but no longer than 15 min. / Lire visuellement lesrésultats après 10 minutes deréaction, sans dépasser 15 min. / Ergebnis nach 10 min (aber nicht nach mehrals 15 min) ablesen. / Leggerevisivamente i risultati dopo10 min, ma non oltre 15 min. / Leer a simple vistalos resultados después de 10 min, pero no más de 15 min.

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ColorPACŽ Giardia/Cryptosporidium Rapid Assay · 2017. 5. 31. · Cryptosporidium specific antigens in aqueous extracts of fecal specimens. It is intended for in vitrodiagnostic