Curs 14_Diagnostic de Laborator in Afectiunile Mediate Imun_2013

  • Published on
    09-Dec-2015

  • View
    18

  • Download
    9

Embed Size (px)

Transcript

<ul><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>Diagnostic de laborator n afeciunile mediate imun</p><p>Curs 14</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problemsImmunology 2013. Science can solve problems</p><p>Obiective</p><p> nelegerea diferenelor dintre tehnicile imunologice utilizate</p><p>pentru diagnosticul afeciunilor imune i cele folosite pentru</p><p>evaluarea afeciunilor fr implicare imun</p><p> nelegerea principiilor care stau la baza procedurilor imunologice</p><p>folosite n diagnosticul imunologic de laborator</p><p> Descrierea tehnicilor imunologice relevante care evalueaz diveri</p><p>parametri ai sistemului imun nnscut i dobndit, organizate n</p><p>teste de screening, teste funcionale i teste specializate</p><p> Identificarea utilitii diagnostice a procedurilor imunologice n</p><p>condiii clinice specifice, care includ imunodeficienele, bolile</p><p>alergice i bolile autoimune</p><p> Dobndirea unei estimri a viitoarelor testri diagnostice imune i</p><p>a importanei acestora n diagnosticul precoce i terapia adecvat</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>Cuprins</p><p>1. Tehnici imunologice pentru diagnosticul afeciunilor cu funcie </p><p>imun modificat</p><p>2. Evaluarea imunitii nnscute</p><p>3. Evaluarea imunitii dobndite</p><p>4. Diagnosticul de laborator al afecinilor alergice</p><p>5. Diagnosticul de laborator al bolilor autoimune</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>- Teste ale funciei sistemului imun nnscut (evaluareafagocitelor, celulelor cu rol mediator, NK i complementul)</p><p>- Teste ale funciei sistemului imun dobndit (activitatealimfocitelor T i B)</p><p>Clasificarea testelor imunologice ncearc s ofere un algoritmpractic pentru diagnostic n funcie de complexitatea acestora:</p><p>1. Teste primare (screening)</p><p>2. Teste secundare (funcionale)</p><p>3. Teste teriare (specializate)</p><p> Sunt folosite mpreun cu alte proceduri clinice sau de laboratorpentru testarea funciei imune n diferite stadii diagnostice deboal</p><p> Bolile autoimune, alergiile, astmul, transplantul de organe i de</p><p>mduv osoas hematogen, procesele maligne limfoide, cuplasmocite sau tumorile solide, imunodeficienele primare i</p><p>secundare</p><p>1. Tehnici imunologice pentru diagnosticul afeciunilor cu funcie </p><p>imun modificat</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>Categorie Component Primar (screening)</p><p>Secundar </p><p>(funcional)</p><p>Teriar </p><p>(specializat)</p><p>Sistem imun nnscut</p><p>Fagocite Mo/Macrofage</p><p>Neutrofile</p><p>Eozinofile</p><p>Celule dendritice</p><p>Hemoleucograma AderenChemotaxie</p><p>FagocitozActivitate</p><p>bactericid</p><p>Molecule de </p><p>adeziune</p><p>Chemokine</p><p>Preluarea </p><p>particulelor</p><p>Oxidaza NADPH</p><p>Specii reactive </p><p>ale oxigenului</p><p>(ROS)</p><p>Celule cu rol </p><p>mediator</p><p>Mastocite</p><p>Bazofile</p><p>Hemoleucogram tisular</p><p>Triptaza Histamina, </p><p>prostaglandine, </p><p>leukotriene</p><p>Celule NK Perforine / </p><p>granzime</p><p>ADCC</p><p>CD3- / </p><p>CD16+CD56+</p><p>Activitate citolitic Perforine </p><p>Funcia </p><p>complementul</p><p>ui</p><p>C1-C9 CH50, C3, C4 Opsonic (C3b)</p><p>Anafilatoxina (C3a, </p><p>C5a)</p><p>Chemotactic (C5a)</p><p>Citolitic (C5-9)</p><p>1. Tehnici imunologice pentru diagnosticul afeciunilor cu funcie </p><p>imun modificat</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>Categorie Component Primar (screening)</p><p>Secundar </p><p>(funcional)</p><p>Teriar </p><p>(specializat)</p><p>Sistem imun dobndit</p><p>Funcia </p><p>limfocitelor B</p><p>Limfocite Hemoleucograma</p><p>IgM, IgG, IgA, IgE</p><p>IgG1, IgG2, IgG3, </p><p>IgG4</p><p>Imunofenotipare</p><p>CD19, CD20</p><p>Rspuns specific la anticorpi pre-</p><p>/post</p><p>Funcia </p><p>limfocitelor T</p><p>Limfocite HemoleucogramImunofenotipare </p><p>diferenialCD3+/CD4+</p><p>CD3+/CD8+</p><p>Testarea </p><p>hipersensibilitii de tip ntrziat in vitro</p><p>Teste de </p><p>limfoproliferare in </p><p>vivo la antigen i </p><p>mitogen </p><p>Analiza</p><p>citokinicActivitatea </p><p>citolitic</p><p>1. Tehnici imunologice pentru diagnosticul afeciunilor cu funcie </p><p>imun modificat</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>1. Tehnici imunologice pentru diagnosticul afeciunilor cu funcie </p><p>imun modificat</p><p>Descoperirile majore ale secolului XX cu cel mai mare impact asupra</p><p>diagnosticului imunologic:</p><p>- Tehnologia hibridoamelor</p><p> Kohler i Milstein (1975) producerea in vitro a unor cantiti crescute de anticorpi</p><p>omogeni cu o singur specificitate antigenic anticorpimonoclonali</p><p>-Flowcitometria (FCM) fluorescent activated cell sorting (FACS) tehnologie pentru identificarea molecular utilizarea anticorpilor monoclonali detectarea i caracterizarea diferitelor celule i molecule ale</p><p>sistemului imun</p><p> epidemia SIDA n 1981 recunoaterea i msurarealimfocitelor T CD4+ (diagnostic, tratament, follow-up al</p><p>pacienilor infectai cu HIV)</p><p> evaluarea afeciunilor limfoproliferative, imunodeficienelori alte boli mediate imun</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>Consideraii generale asupra pacienilor suspectai cu</p><p>imunodeficiene primare sau secundare</p><p>Suspiciune de imunodeficien primar (PID)</p><p>Antecedente heredocolaterale</p><p>Infecii</p><p>Tipul agentului infecios</p><p>Localizarea i frecvena infeciilor</p><p>Eecul antibioterapiei n eradicarea infeciei</p><p>Severitatea infeciei</p><p>Anomalii congenitale</p><p>Valori ale parametrilor de laborator</p><p>Autoimunitate</p><p>Incidena crescut a proceselor maligne</p><p>Condiii clinice asociate </p><p>imunodeficienelor primare (PID)</p><p>Infecii</p><p>Neobinuit de severe</p><p>Recurente</p><p>Ageni patogeni neobinuii</p><p>Infecii ale sinusurilor</p><p>Malabsorpie</p><p>Autoimunitate</p><p>Boal reumatoidSindroame lupus-like</p><p>Abcese, leziuni tegumentare</p><p>Diaree cronic</p><p>Vindecare incomplet a rnilor</p><p>Reacii adverse la vaccinurile vii</p><p>Absena ganglionilor limfatici/amigdale</p><p>Absena timusului pe Rx</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>Consideraii generale asupra pacienilor suspectai cu</p><p>imunodeficiene primare sau secundare</p><p>Ageni infecioi asociai PID</p><p>Deficitul de anticorpi</p><p>Hemophilus influenzae</p><p>Streptococcus pneumonie</p><p>Giardia lamblia</p><p>Specii de Cryptosporidium</p><p>Enterovirusuri </p><p>Deficit al imunitii celulare sau combinat</p><p>Candida albicans</p><p>Pneumocystis carinii (jiroveci)</p><p>Specii de Mycobacterium</p><p>Cytomegalovirus</p><p>Virus Epstein-Barr</p><p>Virus Varicella</p><p>Enterovirusuri</p><p>Ageni infecioi asociai PID</p><p>Deficit al fagocitelor/fagocitozei</p><p>Specii Pseudomonas</p><p>Specii Klebsiella</p><p>Staphylococcus aureus</p><p>Serratia marcescens</p><p>Specii Nocardia</p><p>Specii Aspergillus </p><p>Deficit complement sau ale </p><p>componentelor complementului</p><p>Neisseria meningitides</p><p>Neisseria gonorrhoeae</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>2. Evaluarea imunitii nnscuteIstoric medical</p><p>Tipuri de ageni patogeni</p><p>Recurena infeciilor</p><p>Rezultate hemoleucogram i diagnostic diferenial</p><p>Evaluarea flowcitometric a </p><p>subpopulaiilor limfocitare</p><p>Limfocite B Limfocite T</p><p>Cantitaie imunoglobuline</p><p>Izohemaglutinine </p><p>(anti-A, anti-B)</p><p>Electroforeza proteinelor </p><p>serice</p><p>Rspuns la imunizare specific</p><p>Rspuns la anticorpi</p><p>Examinare </p><p>esut limfoid</p><p>Test limfoproliferare </p><p>in vitro</p><p>Rspuns DHT la antigene</p><p>Producerea de citokine </p><p>specific-antigenice </p><p>(FCM, ELISA)</p><p>Examinare </p><p>esut limfoid</p><p>PMN</p><p>Testarea fenotipic (FCM) CD18/CD11</p><p>Teste funcionale</p><p>Fagocitoz, chemotaxie, </p><p>bactericidie</p><p>Efecte respiratorii </p><p>NBT, DHR</p><p>Complement</p><p>CH50C3, C4</p><p>AH50</p><p>Cantitaie componente C</p><p>Nefelometrie</p><p>Testarea </p><p>funcional componente C</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>2. Evaluarea imunitii nnscute</p><p>2.1. Evaluarea funciei fagocitelor</p><p>- Ce? Monocite circulante, macrofage tisulare, celule mieloide circulante</p><p>(neutrofile) fagocitoz, activitate intracelular bactericid, inflamaie;celule prezentatoare de antigen (APC)</p><p>- Cnd? Infecii bacteriene recurente- Cum? Cantitativ i calitativ</p><p>Cnd suspectm o disfuncie fagocitar?- Infecii cutanate S. aureus- Gingivit- Afeciuni periodontale</p><p>- Ulceraii orale</p><p>Anomalii neutrofilice relevante din punct de vedere clinic:</p><p>- Neutropenie</p><p>- Anomalii de aderen i locomoie neutrofilic- Anomalii ale formrii granulelor intracitoplasmatice- Anomalii ale funciei fagocitare</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>2. Evaluarea imunitii nnscute</p><p>Defecte cantitative ale fagocitelor</p><p>Tipul de celul Defect alsistemului imun </p><p>nnscut</p><p>Exemple Manifestriclinice</p><p>Defect al</p><p>numrului de neutrofile</p><p>Neutropenie Congenital, </p><p>infecios, malign, </p><p>boli autoimune</p><p>Creterea</p><p>susceptibilitii la infecii bacteriene</p><p>Defect al </p><p>numrului de macrofage</p><p>Splenectomie</p><p>Splenectomie</p><p>funcional</p><p>ndeprtareachirurgical a splinei ca urmare a </p><p>unui traumatism</p><p>Anemia sickle-cell </p><p>(siclemia)</p><p>Creterea </p><p>susceptibilitii la infecii bacteriene</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>2. Evaluarea imunitii nnscute</p><p>Defecte calitative ale fagocitelor</p><p>Component Defect al sistemului imun nnscut</p><p>Exemple Manifestri clinice</p><p>Granule primare i </p><p>secundare</p><p>Defecte de formare i de </p><p>coninut ale granulelor</p><p>Sindrom </p><p>Chediak-Higashi</p><p>Albinism parial, lizozomi </p><p>uriai, NK i CTL, </p><p>scderea traficului lizozomal, infecii </p><p>bacteriene recurente</p><p>Oxidaza NADPH Defecte ale </p><p>metabolismului oxidativ</p><p>Boal granulomatoas cronic</p><p>Formarea granuloamelor, </p><p>creterea susceptibilitii la infecii bacteriene i fungice</p><p>Defecte de adeziune </p><p>leucocitar (LAD)Defecte ale aderenei i</p><p>chemotaxiei datorate </p><p>mutaiilor integrinei, </p><p>care duc la defecte ale </p><p>CD18 i CD15, </p><p>absena/scderea adeziunii leucocitare i </p><p>migrarea celular </p><p>Deficit de </p><p>adeziune </p><p>leucocitar tip 1 (LAD1)</p><p>ntrzierea separrii cordonului ombilica, </p><p>ulceraii tegumentare, </p><p>periodontit, leucocitoz</p><p>Interferon / IL-12 Defecte ale cii interferon / IL-12</p><p>BCG Susceptibilitate la infecii </p><p>cu Salmonella i </p><p>mycobacterium</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>2. Evaluarea imunitii nnscute</p><p>Defectul fagocitar Exemple Analize de laborator</p><p>Afeciuni ale celulelor </p><p>mieloide</p><p>Neutropenie congenital sever</p><p>Neutropenia ciclic</p><p>Neutropenia X-lincat</p><p>Neutropenie persistent i blocareamaturrii detectate prin studii la nivelul BM</p><p>Neutropenie intermitent care necesit determinri seriate (la intervale de 2-3 sptmni)Expresie WASP alterat (FCM) sau studiide mutagenez</p><p>Defecte ale formrii granulelor i </p><p>coninutului</p><p>Sindrom Chediak-Higashi</p><p>Sindrom Griscelli tip 2</p><p>Incluziuni lizozomale gigantice la nivelul </p><p>granulocitelor (albinism parial)</p><p>Neutropenie fr incluziuni citoplasmatice (albinism parial)</p><p>Defecte ale adeziunii </p><p>leucocitare</p><p>LAD1</p><p>LAD2</p><p>LAD3</p><p>/- CD18 i CD11 (FCM); leucocitoz persistentFenotip Bombay, absena expresiei CD15</p><p>Analize mutaionale</p><p>Defecte ale cilor de semnalizare citokinice</p><p>Sindromul hiper-IgE</p><p>Interferon -/IL-12</p><p>IgE &gt; 2000 IU/ml, Th17, deficit de STAT</p><p>Defecte moleculare ale cii Interferon -/IL-12, detectate prin FCM</p><p>Defecte ale </p><p>metabolismului </p><p>oxidativ</p><p>Granulomatoz cronic Defecte evideniate prin DHR sau NBT</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>2. Evaluarea imunitii nnscute</p><p>2.2. Evaluarea funciei celulelor cu rol mediator</p><p>- celulele cu rol mediator sunt: bazofile, mastocite i eozinofile (au i</p><p>activitate fagocitar)- au fost identificate 2 tipuri de mastocite:</p><p>mucoasa intestinal i esutul peretelui alveolar conin doar triptaz[MC(T)]</p><p> tegumentul normal i submucoasa intestinal conin triptaz ichimaz [MC(TC)]</p><p> triptaza este crescut n reaciile anafilactice i mastocitoz (valoarediagnostic ca marker al acestor afeciuni)</p><p>- Histamina</p><p> mediator vasoactiv potent stocat ca molecul pre-format n granulelecitoplasmatice ale bazofilelor i mastocitelor</p><p> eliberat mpreun cu ali mediatori ai inflamaiei (leukotriene) nreacii de hipersensibilitate tip I (imediat)</p><p> eliberarea bazofilic de histamin (BHR) - test cantitativ de potenalergenic (ingestia unui alergen alimentar) i model in vitro de studiual factorilor declanatori ai eliberrii mediatorului din bazofile</p><p>- Peptidul cationic eozinofilic (ECP) nivel crescut n sput, ser i secreiinazale ale pacienilor cu infecii parazitare, rinit alergic, astm</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>2. Evaluarea imunitii nnscute</p><p>2.3. Evaluarea funciei celulelor NK </p><p>- Rol important n aprarea anti-tumoral i anti-viral apoptoz (direct- perforine i granzime; indirect - precipitarea IgG i inducerea ADCC =</p><p>antigen-dependent cellular cytoxicity)</p><p>- Cnd suspectm o disfuncie a NK? NK n sngele periferic la pacienii cu AIDS, infecii recurente cu</p><p>virusul herpetic</p><p> NK + CTL sunt asociate cu un rspuns inflamator incontrolabilindus de infecie injurie multipl de organe = limfohistiocitozhemofagocitic (HLH); un tip de HLH este sindromul limfoproliferativX-lincat (XLP) = rspuns imun anormal la infecia cu EBV deces ncazul n care nu se efectueaz transplant de mduv osoas</p><p>- Investigaii de laborator?</p><p> imunofenotipare (FCM)</p><p> teste de citotoxicitate eliberarea de 51Cr la 4 ore evaluarea flowcitometric intracelular pentru molecule defective n</p><p>XPL1 i XPL2: SLAM-associated protein (SAP), X-linked inhibitor of</p><p>apoptosis (XIAP)</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>2. Evaluarea imunitii nnscute</p><p>2.4. Evaluarea funciei complementului </p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>2. Evaluarea imunitii nnscute</p><p>2.4. Evaluarea funciei complementului </p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>2. Evaluarea imunitii nnscute</p><p>2.4. Evaluarea funciei complementului </p><p>Cnd suspecm o disfuncie a complementului?Disfunciile complemetului sunt rare (0,03% din populaie)!!</p><p>- Pacieni cu afeciuni autoimune</p><p>- Pacieni cu infecii recurente</p><p>- Pacieni cu angioedem cronic recurent</p><p>Calea clasic (C1q, C1r, C4 i C2) simptome lupus eritematos autoimun-like, cu infecii recurente sino-pulmonare</p><p>Defecte ale C3 infecii bacteriene recurente cu Streptococcus penumoniaeDefecte ale cii lectinei infecii acute recurente ale tractului respirator,mai ales la copii (S. Pneumoniae i N. meningitidis), precum i creterea</p><p>incidenei bolii reumatismale</p><p>Defecte ale cii alternative infecii recurente cu N. Meningitidis</p><p>Cum evalum funcia complementului?-Complementul hemolitic total CH50 (calea clasic)-Funcia cii alternative AH50-Nefelometria prezena i cantitatea componentelor complemetului, dar nudetermin funcia acestora</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>3. Evaluarea imunitii dobndite</p><p>Standard imunofenotipare flowcitometric (FCM)- Limfocite T citotoxice (CD3+CD8+)</p><p>- Limfocite T helper (CD3+CD4+)</p><p>- NK (CD16+CD56+)</p><p>- Limfocite B (CD19+) (4-10% limfocite)</p><p>3.1. Evaluarea funcie limfocitelor B</p><p>Cnd suspectm o disfuncie a limfocitelor B?</p><p>- Agamaglobulinemia X-lincat (Bruton, 1952)- Infecii repetate cauzate de microorganisme comune ncapsulate: S.</p><p>Pneumoniae, S. Aureus, H. Influenzae tip b, N. meningitidis</p><p>- Diaree (25% din pacienii) asociat cu infecii cu Giardia lamblia- Pacieni care nu rspund la imunizarea specific tetanos/difteria,</p><p>vaccinul anti-H. Influenza tip b (vaccin cu virus atenuat), vaccinul anti-</p><p>polio (vaccin cu virus viu administrat oral)</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>3. Evaluarea imunitii dobndite</p><p>3.1. Evaluarea funciei limfocitelor B</p><p>Evaluarea de laborator a funciei limfocitelor B</p><p>Testarea limfocitelor B se face prin teste in vivo - vaccinare</p><p>Vaccinurile proteice (tetanos) evalueaz rspunsul imun dependent de limfocitele T</p><p>Vaccinurile polizaharidice (Pneumovax) evalueaz rspunsul imun independent de limfocitele T</p><p>Antigenele recall anticorpii produi au fcut switching-ul de clas (IgG)</p><p>Neoantigene antigenul este nou pentru sistemul imun; anticorpii produi sunt de tip IgM la prima vaccinare i de tip IgG la a doua vaccinare</p></li><li><p>Immunology 2013. Science can solve problems</p><p>3. Evaluarea imunitii dobndite</p><p>3.1. Evaluarea funciei limfocitelor B</p><p>Teste de screening</p><p>- CBC (complete blood count = hemoleucograma)</p><p>- Nivelul de imunoglobuline nefelometrie (IgM, IgG, IgA) i IgE(ELISA); niveluri &lt; 300 mg/dl la adolescen/aduli i &lt; 95%valo...</p></li></ul>