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DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM spp Y GIARDIA spp COMO INDICADORES DE CONTAMINACIÓN PARASITARIA EN SISTEMAS DE LAGUNAJE BETTY MANZANO TORRADO LUZ ADRIANA MORENO BERNAL FACULTAD DE CIENCIAS CARRERA DE BACTERIOLOGÍA PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA Bogotá, D. C. 2001

DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

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DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM spp Y

GIARDIA spp COMO INDICADORES DE CONTAMINACIÓN

PARASITARIA EN SISTEMAS DE LAGUNAJE

BETTY MANZANO TORRADO

LUZ ADRIANA MORENO BERNAL

FACULTAD DE CIENCIAS

CARRERA DE BACTERIOLOGÍA

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

Bogotá, D. C. 2001

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DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM spp Y

GIARDIA spp COMO INDICADORES DE CONTAMINACIÓN

PARASITARIA EN SISTEMAS DE LAGUNAJE

BETTY MANZANO TORRADO

LUZ ADRIANA MORENO BERNAL

TRABAJO DE GRADO

Presentado como requisito parcial

Para optar al título de

BACTERIÓLOGA

FACULTAD DE CIENCIAS

CARRERA DE BACTERIOLOGÍA

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

Bogotá, D. C. 2001

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DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM spp Y

GIARDIA spp COMO INDICADORES DE CONTAMINACIÓN

PARASITARIA EN SISTEMAS DE LAGUNAJE

BETTY MANZANO TORRADO

LUZ ADRIANA MORENO BERNAL

Dra CARMEN INES MORA Dra CLAUDIA CAMPOS

Directora Codirectora

FACULTAD DE CIENCIAS

CARRERA DE BACTERIOLOGÍA

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

Bogotá, D. C. 2001

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DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM spp Y

GIARDIA spp COMO INDICADORES DE CONTAMINACIÓN

PARASITARIA EN SISTEMAS DE LAGUNAJE

BETTY MANZANO TORRADO

LUZ ADRIANA MORENO BERNAL

Dr HUGO DIEZ Dra MARTHA NEIRA

JURADO JURADO

FACULTAD DE CIENCIAS

CARRERA DE BACTERIOLOGÍA

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

Bogotá, D. C. 2001

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DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM spp Y

GIARDIA spp COMO INDICADORES DE CONTAMINACIÓN

PARASITARIA EN SISTEMAS DE LAGUNAJE

BETTY MANZANO TORRADO

LUZ ADRIANA MORENO BERNAL

FACULTAD DE CIENCIAS

CARRERA DE BACTERIOLOGÍA

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

Bogotá, D. C. 2001

Page 6: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

NOTA DE ADVERTENCIA

Artículo 23 de la resolución número 13 de julio de 1946:

“ La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos pos sus

alumnos en sus tesis de grado “

Page 7: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

AGRADECIMIENTOS

Agradecemos a la Unidad de Saneamiento y Biotecnología Ambiental de la

Pontificia Universidad Javeriana quién nos proporciono un espacio dentro de

sus instalaciones para el análisis de nuestro estudio. De manera muy

especial agradecemos a la CAR ( Corporación Autónoma Regional ) quienes

nos ofrecieron todo el apoyo y colaboración de manera muy especial, sin

dejar de lado el cuerpo de docentes de la Pontificia Universidad Javeriana en

cabeza del doctor Carlos Corredor y aquellos que por una u otra razón fueron

artífices de esta gran meta.

Page 8: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

DEDICATORIA

A mi mamá, por sus desvelos, su enorme generosidad y sus calladas

enseñanzas.

A mi papá por su apoyo y entusiamos para seguir con mi carrera adelante

A mi hermano por su comprensión y ternura.

A la memoria de mi abuelita Olivia quien falleció mientras terminaba este

trabajo y cuyo espíritu esta conmigo, iluminándome para dar fin a este y

poderme graduar; estoy segura que desde el cielo ella disfrutará mi gran

logro.

A mi amigos Betty, Diego y Paola por estar allí cuando los necesité.

"A Dios" por la vida y a todas aquellas personas entre ellas mis Tíos, Primos,

Ramón y profesores quienes contribuyeron de alguna manera en mi

formación profesional.

A todos ustedes mil gracias

Luz Adriana

Page 9: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

DEDICATORIA

Papá y Mamá

Quiero reiterar mi amor y agradecimiento para con ustedes, les dedico con

toda mi alma este trabajo, es poco frente a lo que quisiera dar y expresar a

los dos.

Si muchos más jóvenes en este país, que me enseñaron a amar, tuvieran

padres como ustedes, estoy segura que viviríamos con progreso y paz, sé

que soy de una minoría afortunada por tenerlos y por lograr culminar una

carrera profesional.

Reconozco sus esfuerzos, desvelos y sacrificios para darme todo el apoyo

que siempre he tenido, me comprometo con una vida de ejercicio profesional

que les haga sentir orgullo y la realización total como los mejores padres del

mundo.

Los amo

Betty.

Page 10: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

TABLA DE CONTENIDO

Página

RESUMEN

INTRODUCCIÓN 23

1. MARCO TEÓRICO 31

1.1 EL CAMBIO NEGATIVO DEL REGIMEN HÍDRICO 31

1.1.1 Deterioro de la calidad. 32

1.2 LA CALIDAD DEL AGUA DEL RÍO BOGOTÁ. 33

1.2.1 Contaminación acuática. 33

1.3 COMPOSICIÓN DE LAS AGUAS RESIDUALES Y SISTEMAS

DE TRATAMIENTO 35

1.3.1 Uso de aguas residuales 37

1.3.2 Sistema de lagunaje para el tratamiento de las aguas

residuales 37

1.3.2.1 Clasificación de las lagunas de tratamiento 40

1.3 ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA 48

1.4.1 Agentes patógenos 48

1.4.1.1 Bacterias 49

1.4.1.2 Virus 49

Page 11: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

1.4.1.3 Parásitos 50

1.5 INDICADORES DE CONTAMINACIÓN EN AGUAS 52

1.5.1 Virus 53

1.5.2 Bacterias 53

1.5.3 Parásitos 53

1.6 GIARDIA 54

1.6.1 Giardiasis 54

1.6.2 Agente etiológico 54

1.6.3 Ciclo de vida 56

1.6.4. Formas de infección 57

1.6.5 Epidemiología y prevención 58

1.7 CRYPTOSPORIDIUM 59

1.7.1 Cryptosporidiosis 59

1.7.2 Agente etiológico 59

1.7.3 Ciclo de vida 60

1.7.4 Formas de infección 61

1.7.5 Epidemiología 62

1.8 IMPACTOS SOBRE LA SALUD 66

1.8.1 Importancia sanitario-epidemiológica de los estudios sobre

contaminación parasitaria de aguas residuales 67

1.8.1.1 Reutilización de aguas residuales 67

1.8.1.2 Interés sanitario: Parásitos presentes en aguas

residuales 69

Page 12: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

1.8.1.3 Características epidemiológicas de los parásitos 70

1.8.1.4 Parasitismo y estado nutricional en niños preescolares de

Instituciones del Distrito Capital 72

1.8.1.5 Presencia de parásitos intestinales en hortalizas que

se consumen crudas 73

1.9 MÉTODOS PARA LA DETECCIÓN DE PARÁSITOS Giardia spp

Y Cryptsoporidium spp 76

1.9.1 Método de sedimentación. 77

1.9.2 Método de flotación por centrifugación 78

1.9.3 Método de floculación inorgánica con cloruro de calcio 78

1.9.4 Inmunofluorescencia 78

1.9.5 Separación inmunomagnética 79

1.10 FACTORES QUE EJERCEN INFLUENCIA SOBRE

LA VIABILIDAD DE LOS INDICADORES PARASITARIOS. 80

1.10.1 Inactivación por los rayos solares 82

1.10.2 Sólidos disueltos totales 84

1.10.3 Conductividad 84

1.10.4 Acción de los vientos 85

1.10.5 Temperatura 86

1.10.6 Precipitaciones pluviales 87

1.10.7 Demanda bioquímica de oxígeno - DBO 87

1.10.8 Demanda química de oxígeno - DQO 88

1.10.9 Competencia con otros microorganismos en el ambiente

Page 13: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

acuático 88

1.11 ELIMINACIÓN DE MICROORGANISMOS POR MEDIO DEL

TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES 89

2. JUSTIFICACIÓN 93

3. OBJETIVOS 102

4. MATERIALES Y METODOS 104

4.1 UBICACIÓN 104

4.2 ZONA DE MUESTREO 104

4.2.1 Sistema de lagunaje Chocontá (cuenca alta) 104

4.2.2 Sistema de lagunaje Anapoima (cuenca baja) 106

4.3 PUNTOS DE MUESTREO 107

4.3.1 Sistema de tratamiento de aguas residules de Chocontá 108

4.3.2 Sistema de tratamiento de aguas residules de Anapoima 111

4.4 TOMA DE MUESTRAS 113

4.4.1 Conservación y transporte de la muestra 116

4.4.2 Análisis parasitológico de las muestras 116

4.5 PROTOCOLO DE FLOCULACIÓN ORGÁNICA POR CLORURO

DE CALCIO 116

4.5.1 Volumen del agua a flocular 117

4.6 ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE VARIABLES 118

5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 122

5.1 Análisis de las concentraciones de Giardia Spp y

Cryptosporidium spp en la planta de tratamiento de Chocontá 122

Page 14: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

5.2 Análisis estadístico de Giardia Spp y Cryptosporidium spp a la

entrada y salida de la planta de tratamiento de Chocontá 132

5.3 Análisis de las concentraciones de Giardia spp y

Crypstosporidium spp en la planta de tratamiento de Anapoima 133

5.4 Análisis estadístico de Giardia spp y Cryptoporidium spp a la

entrada y salida de la planta de tratamiento de Anapoima. 140

5.5 Análisis de los parámetros fisico-químicos para la

planta de tratamiento de Chocontá. 145

5.6 Análisis de los parámetros fisico-químicos para la

planta de tratamiento de Anapoima 146

5.7 Análisis estadístico de los factores fisico-químicos 148

5.7.1 Chocontá 148

5.7.2 Anapoima 149

5.8 INFLUENCIA DE LOS PARAMETROS FÍSICO-QUÍMICOS

SOBRE LA CONCENTRACIÓN DE LOS INDICADORES DE

CONTAMINACION PARASITARIA EN SISTEMAS DE LAGUNAJE

EN LAS PLANTA DE TRATAMIENTO DE CHOCONTÁ Y

ANAPOIMA 150

5.8.1 Influencia de la temperatura 150

5.8.2 Influencia de la DBO y DQO 153

5.8.3 Influencia de la conductividad 154

5.8.4 Influencia de los sólidos disueltos totales 155

Page 15: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

5.8.4 Influencia de las precipitaciones 156

6 CONCLUSIONES 158

7. RECOMENDACIONES 162

9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 164

Page 16: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

LISTA DE TABLAS

Página

TABLA 1. Principales componentes de las aguas residuales. 38

TABLA 2. Reuso de aguas residuales a nivel mundial. 41

TABLA 3. Principales microorganismos patógenos presentes en las

aguas residuales. 51

TABLA 4. Características epidemiológicas de los patógenos entéricos

y su capacidad para causar infección. 52

TABLA 5. Brotes más relevantes causados por utilización de

aguas residuales en el mundo. 75

TABLA 6. Precipitaciones ocurridas durante los días de muestreo. 114

TABLA 7. Días de muestreo en Chocónta. 115

Page 17: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

TABLA 8. Días de muestreo en Anapoima. 115

TABLA 9. Instrumentos y medidas utilizadas para el análisis de

los parámetros físico-químicos 118

TABLA 10. Concentración de Giardia spp y Crypstosporidium spp en la

planta de tratamiento de Chocontá. 123

TABLA 11 Resultados promedio, máximo, mínimo y porcentaje de

reducción de los indicadores de Contaminación parasitaria en la

Planta de Tratamiento de Chocontá 123

TABLA 12. Resultados de análisis estadístico de Giardia spp y

Cryptosporidium spp en la planta de tratamiento de

Chocontá 132

TABLA 13. Concentración de Giardia spp y Crypstosporidium spp en la

planta de tratamiento de Anapoima. 133

TABLA 14. Resultados promedio, máximo, mínimo y porcentaje de

reducción de los indicadores de contaminación parasitaria en la

Planta de Tratamiento de Anapoima. 134

Page 18: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

TABLA 15. Resultados del análisis estadísticos de Giardia spp

y Cryptosporidium spp en la Planta de Tratamiento de

Anapoima 140

TABLA 16. Resultados promedio, máximo, mínimo y porcentaje de

reducción de los indiadores de los parámetros fisico-químicos

de la Planta de tratamiento de Chocontá. 145

TABLA 17. Resultados promedio, máximo, mínimo y porcentaje de

reducción de los indicadores de los parámetros físico-

químicos de la Planta de tratamiento de Anapoima 147

TABLA 18. Resultados de los análisis estadísticos de los Parametros

físico químicos en Chocontá. 148

TABLA 19. Resultados de los análisis estadísticos de los Parametros

físico químicos en Anapoima. 149

Page 19: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

LISTA DE FIGURAS

Página

FIGURA 1. Fotografía de la Giardia spp. 55

FIGURA 2. Fotografía de Cryptosporidium spp. 60

FIGURA 3. Fotografía ganado cerca al río Bogotá 67

FIGURA 4. Fotografía de Giardia spp por inmunofluorescencia 79

FIGURA 5. Fotografía de Cryptosporidium spp por inmunofluorescencia 79

FIGURA 6. Laguna de tratamiento de aguas residuales del municipio

de Choconta -Cuenca alta. 108

FIGURA 7. Entrada de la planta de tratamiento después de las rejas

de desbaste (Chocontá). 109

FIGURA 8. Salida del sistema de lagunaje Chocontá. 109

Page 20: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

FIGURA 9. Laguna de tratamiento de aguas residuales del municipio

de Anapoima - Cuenca baja. 111

FIGURA 10. Entrada de la planta de tratamiento de Anapoima después

de las rejas de desbaste. 111

FIGURA 11. Salida del sistema de lagunaje (Cuenca baja). 112

Page 21: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

LISTA DE GRAFICAS

Página

GRAFICA 1. Concentración de quistes de Giardia spp (UL/1000ml)

a la entrada y salida de la planta de tratamiento de

Chocontá. 125

GRAFICA 2 Concentración de oooquistes Cryptosporidium

spp (UL/1000ml) a la entrada y salida de la planta

de tratamiento de Chocontá. 130

GRAFICA 3. Concentración de quistes de Giardia spp (UL/1000ml)

A la entrada y salida de la planta de tratamiento de

Anapoima, 135

GRAFICA 4. Concentración de oooquistes Cryptosporidium

spp (UL/1000ml) a la entrada y salida de la planta

de tratamiento de Anapoima. 137

Page 22: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

LISTA DE ANEXOS

Página

ANEXO I. Materiales para el método de floculación inorgánica por

Cloruro de Calcio para 2 y 10 litros de agua. 172

ANEXO II . Protocolo de floculación inorgánica por cloruro de calcio

para 2 litros de agua. 176

ANEXO III. Protocolo de floculación inorgánica por cloruro de calcio

para 10 litros de agua. 177

ANEXO IV. Inmunofluorescencia Directa. 178

ANEXO V. Método de Inmunofluorescencia Directa. 180

ANEXO VI. Observación, identificación y recuento de parásitos 181

por Inmunofluorescencia Directa.

Page 23: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

ANEXO VII. Análisis de parámetros físico-químicos de la planta

de tratamiento de aguas residuales en Chocontá 183

ANEXO VIII. Análisis de parámetros físico-químicos de la planta

de tratamiento de aguas residuales en Anapoima. 184

Page 24: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

RESUMEN

El agua es uno de los más importantes factores para el desarrollo social y

económico del hombre. Su escasez y su contaminación amenazan aspectos

fundamentales de la seguridad humana, como son: el equilibrio en el medio

acuático, la producción de alimentos, la salud pública, la estabilidad social y

política. En la actualidad, la reutilización de las aguas residuales es una

práctica mundialmente extendida. Esta tendencia puede deberse a dos

grandes motivos: a una actitud conservacionista - sanitarista y a una

necesidad causada por la escasez o la falta de agua para la supervivencia y

el desarrollo.

La calidad de las aguas del río Bogotá, ha sido afectada por las descargas

de aguas negras de los asentamientos urbanos en su cuenca, especialmente

de Bogotá. Las poblaciones que viven cerca del río Bogotá están expuestas

a contaminantes de origen hídrico a través de una gran variedad de

mecanismos.

Page 25: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

El consumo de agua tratada o parcialmente tratada es la ruta de exposición

que puede resultar en la mayor absorción de tales contaminantes. El

consumo de alimentos producidos con agua de riego contaminada o

provenientes de ganaderías que toman dicha agua es la segunda ruta más

importante de exposición. Finalmente, el contacto físico directo en

actividades de recreación, baño o trabajo puede también producir efectos

adversos sobre la salud.

El agua es un recurso susceptible de contaminación microbiana por parásitos

que llegan a través de las aguas residuales. Algunos de estos parásitos

como el Cryptosporidium spp y la Giardia spp tienen gran efecto en la

salud pública, haciendo que la prevalencia del parasitismo intestinal en

Colombia, principalmente en las áreas rural y urbana marginal, siga siendo

tradicionalmente alta debido a que las condiciones socioeconómicas y

sanitarias son deficientes.

Los protozoos pueden colonizar e infectar la orofaringe, el duodeno, el

intestino delgado, el colon y el tracto urogenital del hombre. La mayoría de

estos parásitos son flagelados. Sin embargo, pueden encontrarse también

infecciones por coccidios. Estos organismos se trasmiten por vía feco-oral.

La transmisión de protozoos intestinales plantean un problema particular en

jardines, guarderías y escuelas, donde se han documentado varias

Page 26: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

epidemias de diarrea por Giardia spp y Criptosporidium spp. Todo esto sin

contar la presencia de estos microorganismos en aguas de playas, como es

el caso de la Giardia, de la que se ha encontrado una gran incidencia.

En otras partes del mundo, la diseminación de los protozoos se puede

controlar en parte mediante mejora de las condiciones sanitarias, junto con

cloración y filtración de agua potable. Sin embargo, esas medidas quizá

resulten difíciles de aplicar en los países en vía en desarrollo.

Según recientes estudios se ha observado un alto índice de parasitismo en

niños preescolares de Bogotá, originado por muchos parásitos dentro de los

cuales se incluyen (Giardia spp y Cryptosporidium spp), sin contar con los

brotes esporádicos en el mundo entero. Desde 1993 se han reportado

decenas de brotes de enfermedades entéricas asociadas con agua. Uno solo

de estos brotes afectó a mas de 450,000 personas en USA (brote

Milwaukee). Hay una lista larga de enteropatógenos involucrados en la

aparición de estos brotes. Según información proveniente de países

industrializados, una tercera parte de enfermedades entéricas están

asociadas con la presencia particularmente de los protozoarios Giardia

lamblia , Balantidium coli, Entamoeba histolytica y Cryptosporidium parvum

están adquiriendo importancia creciente por su resistencia a los

Page 27: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

desinfectantes comunes y a los sistemas convencionales de tratamiento del

agua.

Este hecho de resistencia ha llevado a muchos investigadores a la necesidad

de crear nuevas formas de tratamiento y desinfección, tal es el caso de la

utilización de luz ultravioleta. Se ha observado que los ooquistes de

Cryptosporidium principalmente son resistentes a tratamientos

convencionales y a la desinfección química especialmente al cloro, debido a

su tamaño haciendo que se busquen alternativas para la inactivación de los

ooquistes.

Como se mencionó anteriormente existen sistemas de tratamiento y entre

ellos se encuentra el de lagunaje. Las Lagunas de Tratamiento de Aguas

Residuales, también llamadas de estabilización, tienen como propósito

explícito conseguir que las aguas acumuladas en ellas lleguen a cumplir un

conjunto de parámetros cuantitativos, fijados por ley, que permitan su

descarga al ambiente receptor sin ocasionar problemas ambientales

ulteriores.

En general, las aguas naturales contaminadas presentan microorganismos

patógenos de forma intermitente y en bajas cantidades. Su aislamiento e

identificación, exigen el análisis de volúmenes grandes de agua, su costo es

elevado y los resultados se obtienen después de varios días.

Page 28: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Para superar estos inconvenientes se han buscado alternativas como los

parásitos. Los indicadores de este tipo que deberían ser comúnmente

utilizados son: (Giardia spp y Cryptosporidium spp), ya que se han

descrito muchos brotes epidémicos guarderías, donde es común la

transmisión feco-oral por este tipo de microorganismos.

Es difícil encontrar en un único organismo todas las características que

debería tener un indicador ideal de contaminación parasitaria. No obstante

(Giardia spp) y en menor medida (Cryptosporidium spp) reúnen

características útiles. Por este motivo (Giardia spp) suele ser el indicador

parasitario recomendado o preferido. (Cryptosporidium spp) satisface

algunos criterios y suele utilizarse como indicador suplementario de

contaminación parasitaria por heces humanas.

Por tal razón, es importante evaluar la eficacia de los indicadores de

contaminación parasitaria en diferentes tipos de aguas, con el fin de elegir el

indicador más apropiado, conocer su comportamiento frente a diferentes

fenómenos naturales no controlables como precipitación y temperatura, y

parámetros físico-químicos como: DBO, DQO, SDT, conductividad, para

compararlo con resultados obtenidos en otros estudios, utilizando otro tipo

de indicadores.

Page 29: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

El propósito del presente estudio es evaluar el comportamiento de la Giardia

spp y Cryptosporidium spp como indicadores de contaminación, en las

cuencas alta y baja del río Bogotá frente a las características físico-químicas

de este cuerpo de agua, con la finalidad de conocer la eficacia de los mismos

como indicadores de contaminación parasitaria en aguas y determinar cual

podría ser el mejor indicador de contaminación de acuerdo a las condiciones

particulares de este estudio.

Para el desarrollo del experimento se seleccionaron 2 puntos de muestreo,

uno en la cuenca alta (Chocontá) de donde se obtuvieron 13 muestras y 15

de la cuenca baja (Anapoima) que correspondían a la entrada y salida del

sistema de lagunaje respectivamente, para un total de 28 muestras. En cada

muestreo se analizaron los indicadores parasitarios ( Giardia spp y

Cryptosporidium spp) por medio de inmunofluorescencia directa y

parámetros físico-químicos, acompañados de los fenómenos naturales no

controlables

Los resultados obtenidos de las concentraciones de los indicadores

parasitarios demuestran que los dos indicadores cumplen con la mayoría de

los requisitos de un buen indicador como: mantenerse a concentraciones

constantes, estar presentes en todos los lugares con contaminación de

origen fecal, y su determinación se puede realizar a través de métodos

rápidos y económicos. Sin embargo el indicador de contaminación parasitaria

Page 30: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

que podría ser el más apropiado para la cuenca alta y baja del río Bogotá es

la Giardia spp . Aunque mantuvo una concentración constante en la cuenca

alta y baja del río Bogotá.

La concentración promedio en la cuenca alta y baja en unidades logarítmicas

(UL) de Giardia spp fue de 2.42 a 5.56 UL, mientras que el

Cryptosporidium spp fue de 1.15 a 1.73 UL por debajo de los anteriores,

indicando una contaminación permanente de tipo doméstico, que puede

llegar aguas abajo del vertido y depositarse en los sedimentos.

Los factores fisico – químicos evaluados en las condiciones particulares de la

cuenca alta y baja del río Bogotá, son determinantes en el comportamiento

de estos indicadores parasitarios.

Page 31: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

INTRODUCCION

El agua es un recurso indispensable para la supervivencia del hombre. A

través de los años, con el aumento de la población y el manejo inadecuado,

el recurso hídrico disponible se ha agotado y contaminado; perdiendo las

características que lo hacen apto para el consumo u otras actividades.

La demanda de agua en la sociedad actual ha experimentado un notable

incremento debido, por una parte, a la introducción de nuevos usos para la

misma, como el empleo en actividades recreativas, su uso en actividades

industriales y por otra parte, al aumento del gasto de agua en actividades

tradicionalmente asociadas a ella como las domésticas y el riego de zonas

agrícolas entre otras. Como consecuencia, resulta evidente la necesidad de

reutilizar el agua residual, aplicándola a aquellos usos más adecuados con la

finalidad de racionalizar las reservas de agua, destinando el agua de primer

uso a aquellas actividades que requieran un agua de alta calidad, como

puede ser el suministro de agua potable.

Page 32: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

La reutilización del agua residual comporta un riesgo sanitario que se

encuentra asociado a la presencia de agentes patógenos que conllevan a

que exista una probabilidad de infección en la población por dichos agentes.

Es evidente que las aguas residuales presentan agentes patógenos como

virus, bacterias y parásitos, pero su sola presencia no implica directamente

la infección de la población al ser reutilizada el agua. La cuantificación de

este riesgo sanitario, permite el uso de sistemas de reutilización en

condiciones controladas estrictamente.

Existen regiones endémicas que coinciden con sitios en los que la salud de la

población se ve afectada negativamente por factores de pobreza, falta de

higiene y servicios comunitarios deficientes. Además, se sabe que no sólo la

contaminación del agua como elemento principal produce casos de

epidemias, sino que la propagación de la enfermedad ocurre de persona a

persona en el medio familiar o en guarderías y escuelas.

Por esta razón el manejo de aguas residuales se ha convertido en una de las

problemáticas de mayor complejidad y alto costo que tienen que resolver las

comunidades para alcanzar una mejor calidad de vida. Las diferentes

alternativas que se presentan en ocasiones, no suelen tener el impacto

deseado, muchas veces por no corresponder realmente a las características

Page 33: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

especificas de cada región o por diferencias en la operación y mantenimiento

de los sistemas.

De otro lado, el reuso de las aguas residuales se ha convertido en una

estrategia a seguir para lograr, de cierto modo, una reducción de los costos y

una verdadera cultura ambiental. Para tal hecho se utilizan tecnologías de

lagunaje o de lodos activos, en muy diversas variantes como métodos de

diseño, en términos prácticos, que permitan contrastar unas y otras

soluciones.

Como se mencionó anteriormente existen unas formas de tratamiento, como

son los sistemas de lagunaje. El término laguna o estanque de estabilización

hace referencia a una masa de agua relativamente poco profunda contenida

en un tanque excavado en el terreno.

Se encuentran lagunas para regadío, para alimentación de centrales

hidroeléctricas, de tratamiento de aguas residuales y muchas otras.

Las Lagunas de Tratamiento de Aguas Residuales, también llamadas de

estabilización, tienen como propósito explícito conseguir que las aguas

acumuladas en ellas lleguen a cumplir un conjunto de parámetros

cuantitativos, fijados por ley, que permitan su descarga al ambiente receptor

sin ocasionar problemas ambientales ulteriores. Los parámetros suelen estar

relacionados con el potencial de riesgo a la salud pública, la cantidad de

orgánicos disueltos, los sólidos suspendidos, las materias grasas, el

Page 34: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

contenido de nitrógeno orgánico, el contenido de fosfatos, la ausencia de olor

y la ausencia de color.

El sistema de tratamiento por lagunas ha tenido diversas adaptaciones

tecnológicas, según el grado de tratamiento deseado y el momento histórico

de su implementación. Desde los primeros registros históricos, hace unos

3000 años, existen hoy en día un par de decenas de miles de lagunas; las

mayormente conocidas y caracterizadas son más de 7000 lagunas (año

2000) en operación en los Estados Unidos, si bien se han implementado

muchas en Israel y en América Latina de las cuales no se conocen datos

precisos. La implementación de lagunas en Colombia, alcanza varias

decenas (tal vez un centenar) pero la gran mayoría corresponde a lagunas

que enfrentan graves deficiencias de diseño, generan malos olores,

tratamientos muy por debajo de las especificaciones originales y una grave

ausencia de protocolos de mantenimiento.

La razón básica para llevar a cabo un análisis parasitológico de las aguas

residuales, es la de proteger la salud de la comunidad, evaluando una

posible polución fecal, y por consiguiente el riesgo de transmisión de

enfermedades de origen hídrico.

Page 35: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Debido a que los microorganismos patógenos que se encuentran en las

heces de animales y humanos enfermos, aparecen intermitentemente en

bajas concentraciones, son muy difíciles de identificar y enumerar

directamente en el agua y en la mayoría de los casos requieren técnicas

sofisticadas, demoradas y costosas. Lo ideal es detectar otros

microorganismos que coexistan con los patógenos en el ambiente fecal y que

su presencia en un cuerpo de agua sirva como indicador de contaminación

parasitaria.

Para el análisis de contaminación fecal en aguas se pueden utilizar

indicadores bacterianos, virológicos y parasitarios. Aunque los indicadores

bacterianos de contaminación fecal han sido el único medio rápido,

económico y ampliamente utilizado, actualmente se trabaja en la

normalización de otros indicadores como los parásitos. Todo esto sin dejar

de lado los huevos de helminto como grupo de organismos que incluyen

nemátodos, tremátodos y céstodos. Estos parásitos poseen características

epidemiológicas que los convierten en patógenos entéricos al tener contacto

con agua contaminada.

En los últimos años, se ha insistido, especialmente por parte de los países

desarrollados, en la necesidad de normalizar técnicas para la determinación

y el recuento de Giardia spp y Cryptosporidium spp debido a la alta

Page 36: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

incidencia de dichos parásitos en epidemías de gran relevancia a nivel

mundial.

La prevalencia del parasitismo intestinal en Colombia, principalmente en las

áreas rural y urbana marginal, ha sido tradicionalmente alta debido a que las

condiciones socioeconómicas y sanitarias son deficientes. Desde 1993 se

han reportado decenas de brotes de enfermedades entéricas asociadas con

agua. Uno solo de estos brotes afectó a mas de 450,000 personas en

Estados Unidos. Hay una lista larga de entero patógenos involucrados en la

aparición de estos brotes. Particularmente los protozoarios Giardia lamblia,

y Cryptosporidium parvum están adquiriendo importancia creciente por su

resistencia a los desinfectantes comunes y a los sistemas convencionales de

tratamiento del agua. Aunque no se han encontrado registros significativos (

2 y 3 casos por Giardia lamblia respectivamente) de brotes de

enfermedades hídricas en los dos municipios (Chocontá y Anapoima) que

abarcan la cuenca alta y baja del río Bogotá, y que utilizan aguas de origen

residual en sus actividades domésticas y de riego, la revisión bibliográfica

constata la presencia de estos microorganismos en aguas residuales y su

impacto ambiental.

Es difícil encontrar en un único organismo todas las características que

debería tener un indicador ideal de contaminación parasitaria. No obstante

Giardia spp y en menor medida Cryptosporidium spp reúnen

Page 37: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

características útiles. Por este motivo Giardia spp suele ser el indicador

parasitario recomendado o preferido. Cryptosporidium spp satisface

algunos criterios y suele utilizarse como indicador suplementario de

contaminación parasitaria por heces humanas.

En el presente estudio se evaluó el comportamiento de los indicadores

parasitarios nombrados anteriormente en los sistemas de lagunaje

localizados en la cuenca alta y baja del río Bogotá, con respecto a su

concentración y relación con parámetros físico-químicos del sistema de

lagunaje como DBO, DQO, SDT, conductividad y fenómenos naturales no

controlables; como temperatura y precipitación.

Según la bibliografía nos indica que la mayor parte de las epidemias

reportadas han ocurrido en invierno y en zonas donde la temperatura del

agua es baja, hecho que hace pensar que los datos proporcionados por la

Unidad de Saneamiento Ambiental de la Pontificia Universidad Javeriana y la

CAR, respecto a la temperatura de los sitios de muestreo muy seguramente

influyeron sobre la contaminación de los parásitos especialmente sobre la

supervivencia de los quistes de Giardia spp en el municipio de Chocontá.

Las altas concentraciones de los indicadores parasitarios especialmente de

Giardia spp en los sistemas de lagunaje, son índice de una contaminación

Page 38: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

fecal permanente; lo cual constituye un riesgo para la salud de las personas

que tiene contacto directo o indirecto con este tipo de agua.

De acuerdo a los resultados obtenidos se podría pensar que el indicador

parasitario más apropiado para los sistemas de lagunaje de la cuenca alta y

baja del río Bogotá podría ser la Giardia spp, dado que representa un 5% a

35% de la carga parasitaria de las heces sin dejar de lado los coliformes

fecales. Dicho parásito mantuvo una concentración de quistes de 2.82 UL /

1000 ml a 6.54 UL / 1000 ml y de 0 UL/1000ml a 7.1 UL/1000ml a la entrada

de los sistemas de lagunaje de Choconta y Anapoima respectivamente. En

comparación con el Cryptosporidium spp, se encuentra en

concentraciones de ooquistes de 0 UL/1000ml a 5.3 UL/1000ml y de 0

UL/1000ml a 5.3 UL/1000ml a la entrada de los sistemas de lagunaje de

Choconta y Anapoima .

Los parámetros físico-químicos de las aguas del sistema de lagunaje de

Chocontá y Anapoima (DBO, DQO, SDT, conductividad) temperatura y

precipitación, según el estudio estadístico son determinantes en las

concentraciones de los indicadores parasitarios presentes en los sistemas de

lagunaje que se encuentran ubicados en la cuenca alta y baja del río Bogotá.

Page 39: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

1. MARCO TEORICO

El agua constituye un elemento vital y articulador de la naturaleza y por tanto

su manejo es tema central para la gestión ambiental, ya que sobre él gira e

interrelacionan los recursos naturales, el medio ambiente y la actividad

humana.

1.1 EL CAMBIO NEGATIVO DEL RÉGIMEN HÍDRICO

La población ubicada mayoritariamente en zonas de alta y media montaña

genera cambios negativos en el comportamiento del régimen hídrico natural,

debido a los sistemas productivos no sostenibles.

Estos cambios negativos también tienen que ver con la insuficiente

administración técnica del agua, que no equilibra las actividades socio-

económicas con obras de infraestructura y comportamientos frente al recurso

que impacten favorablemente la regulación hídrica.

Page 40: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Ello origina un desequilibrio, cuyo resultado es la presencia de caudales

máximos mayores y caudales mínimos cada vez menores, según el grado de

deterioro de dicha relación en el ámbito regional o local. Esta situación

genera condiciones descontroladas del medio ambiente, con la consecuente

baja o nula oferta hídrica en épocas secas y presencia de inundaciones y

avalanchas en épocas invernales.

1.1.1 Deterioro de la calidad

Además de las condiciones naturales, la población, los sistemas de

producción-consumo y la tecnología en uso son factores que, en su conjunto,

propician las condiciones de alteración de la calidad del recurso hídrico.

La calidad del recurso hídrico en nuestro país se afecta, en particular, por la

modificación de la cobertura vegetal y la explotación minera, al generar

mayores volúmenes de sedimentos que se integran al flujo del agua, como

transporte de fondo o en suspensión.

También son factores importantes los sistemas de producción agropecuaria e

industrial que incorporan contaminantes a los cuerpos de agua como es el

caso del río Bogotá y las aguas servidas de la población (MINAMBIENTE,

2001).

Page 41: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

1.2 LA CALIDAD DEL AGUA DEL RÍO BOGOTÁ

La calidad de las aguas del río Bogotá ha sido afectada por las descargas de

aguas negras de los asentamientos urbanos en su cuenca, especialmente de

Bogotá (polución biológica), por los vertimientos de aguas residuales

industriales (polución química, mineral y orgánica) y por los aportes de

materiales sólidos insolubles en el agua (polución física) a las redes de

drenaje natural y/o artificial (CAR, 2001).

1.2.1 Contaminación acuática

Un cuerpo de agua se considera contaminado, cuando la composición o el

estado de sus aguas son directa o indirectamente modificadas por la

actividad del hombre ( descarga de vertimientos de aguas residuales) en

medida tal, que disminuya su posible utilización para consumo directo,

agricultura, recreación y actividades industriales (HERNÁNDEZ, 1992).

Entre los vertidos que pueden llegar a un cuerpo de agua se encuentran los

industriales, domésticos y agrícolas. Cualquiera que sea su procedencia, las

aguas residuales significan una amenaza para el medio ambiente, dado que,

modifican las características iniciales del medio natural donde se produce su

descarga (MOPT, 1996).

Page 42: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Las aguas residuales domésticas son las provenientes de las actividades de

la vida diaria como lavado de ropa, baño, preparación de alimentos, limpieza

etc. Estos desechos presentan un alto contenido de materia orgánica,

microorganismos, detergentes y grasas. Su composición varía según los

hábitos de la población que las genera.

La composición de las aguas residuales industriales, varia según su origen;

pueden tener compuestos alcalinos o ácidos, tóxicos coloreados, grasas,

detergentes y sales (MASON, 1984; METCALF 1995).

Las aguas residuales provenientes de la agricultura, son el resultado de la

escorrentía superficial de las zonas agrícolas. Se caracterizan por la

presencia de pesticidas, sales y un alto contenido de sólidos en suspensión

(MOPT, 1996; WINKLER, 1986).

La polución biológica del agua genera una fuerte concentración de bacterias,

virus y parásitos y una reducción del oxigeno disuelto, por lo cual constituye

una amenaza para la salud publica; disminuye o elimina la vida acuática

(especialmente de peces y crustáceos), constriñe o elimina otros usos

posibles del agua (navegación, riego de cultivos, pastos, recreación) y

deteriora seriamente los paisajes.

Page 43: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Debido a la gran cantidad de contaminantes que recibe el río Bogotá, este

posee características ambientales sépticas (sin oxígeno disuelto), pestilencia

continua y riesgo permanente para la salud de las personas que habitan en

sus márgenes (CAR, 1999).

1.3 COMPOSICIÓN DE LAS AGUAS RESIDUALES

Las aguas residuales pueden definirse como las aguas que provienen del

sistema de abastecimiento de agua de una población, después de haber sido

modificadas por diversos usos en actividades domésticas, industriales y

comunitarias, siendo recogidas por la red de alcantarillado que las conducirá

hacia un destino apropiado (MARA, 1976).

Según su origen, las aguas residuales resultan de la combinación de líquidos

y residuos sólidos trasportados por el agua, que provienen de residencias,

oficinas, edificios comerciales e instituciones, junto con los residuos de las

industrias y de actividades agrícolas, así como de las aguas subterráneas,

superficiales o de precipitación que también pueden agregarse

eventualmente al agua residual (MENDOZA, 1987).

Así, de acuerdo con su origen, las aguas residuales pueden ser clasificadas

como:

Ø Domésticas: son aquellas aguas utilizadas con fines higiénicos

(sanitarios, cocinas, lavanderías, etc.) Consisten básicamente en

residuos humanos que llegan a las redes de alcantarillado por medio

Page 44: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

de las descargas de las instalaciones hidráulicas de la edificación y

también en residuos originados en establecimientos comerciales,

públicos y similares.

Ø Industriales: son residuos líquidos generados en los procesos

industriales. Poseen características especificas. dependiendo del tipo

de industria.

Ø Infiltración y caudales adicionales: las aguas de infiltración penetran

en el sistema de alcantarillado a través de los empalmes de las

tuberías, paredes de las tuberías defectuosas, tuberías de inspección

y limpieza, cajas de paso, estructura de los pozos de registro,

estaciones de bombeo, etc. Hay también aguas pluviales, que son

descargadas por medio de varias fuentes, como canales, drenajes y

colectores de aguas lluvias.

Ø Pluviales: Es agua lluvia, que descargan grandes cantidades de agua

sobre el suelo. Parte de estas aguas es drenada y otra escurre por la

superficie, arrastrando arena, tierra, hojas y otros residuos que pueden

estar sobre el suelo.

En la tabla 1 se observan los principales componentes del agua

residual.Así mismo, solamente una franja ubicada entre el 5% y el 10% de

las cabeceras municipales de Colombia hace algún tipo de tratamiento de

aguas residuales. Esta situación se constituye en una de las principales

fuentes de alteración de la calidad de la oferta hídrica superficial. La

inadecuada disposición de residuos sólidos en botaderos a cielo abierto

Page 45: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

en la mayoría de los municipios colombianos, genera lixiviados que

afectan los acuíferos (MINAMBIENTE, 2001).

1.3.1 Uso De Aguas Residuales

A nivel, mundial, después de la República Popular de China, México es el

segundo país que más agua residual emplea en actividades agrícolas. (ver

tabla 1)

1.3.2 Sistemas de lagunaje para el Tratamiento de Aguas Residuales

Como se mencionó anteriormente existen sistemas de tratamiento para las

aguas residuales, y entre ellos se encuentra el sistema de lagunaje. El

término laguna o estanque de estabilización es una masa de agua

relativamente poco profunda contenida en un tanque excavado en un terreno.

Las lagunas de estabilización son el método más simple de tratamiento de

aguas residuales que existe. Están constituidas por excavaciones de forma

rectangular o cuadrada.

El tratamiento a través de lagunas tiene tres objetivos:

* Remover de las aguas residuales la materia orgánica que ocasiona la

contaminación.

Page 46: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

TABLA 1. Principales componentes de las aguas residuales

COMPONENTES CARACTERÍSTICAS

Sólidos en suspensión Conduce al desarrollo de depósitos de

fango y de condiciones anaerobias.

Materia orgánica biodegradable Compuesta principalmente por proteínas,

carbohidratos y grasa animal. Grandes

descargas a un cuerpo de agua, llevan al

agotamiento del oxígeno y desarrollo de

condiciones sépticas.

Patógenos Transmiten enfermedades contagiosas. Su

vector es la materia fecal

Nutrientes Nitrógeno, fósforo y carbono esenciales

para el crecimiento; causan eutroficación.

Materia orgánica refractaria Agentes tensoactivos, fenoles y pesticidas

agrícolas que afectan el microambiente.

Metales pesados Provenientes de actividades industriales por

ejemplo: cromo, azufre, mercurio, que

causan muerte a los microorganismos

acuáticos.

Sólidos inorgánicos disueltos Calcio, sodio, sulfatos, que causan

desequilibrio en la contaminación acuática..

Fuente: Adaptado por las autoras de METCALF, 1995

Page 47: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

* Eliminar los microorganismos patógenos que representan un grave peligro

para la salud.

* Utilizar su efluente para reutilización, con otras finalidades como agricultura

por ejemplo.

Por tanto, los factores que influyen sobre la calidad deseada para el afluente

de las lagunas de estabilización dependen de la visión de los diferentes

sectores:

- Salud: Número de microorganismos patógenos o indicadores.

- Medio Ambiente: Principales indicadores de la contaminación, es decir la

demanda bioquímica de O2, sólidos suspendidos y DBO.

- Reutilización: Dependiendo del uso que se le dará al efluente, se definirán

los criterios para la reducción de DBO, SS y bacteriológica (MENDOZA,

2000).

Se encuentran lagunas para regadío, para alimentación de centrales

hidroeléctricas, de tratamiento de aguas residuales y muchas otras.

Las Lagunas de Tratamiento de Aguas Residuales, también llamadas de

estabilización, tienen como propósito explícito conseguir que las aguas

acumuladas en ellas lleguen a cumplir un conjunto de parámetros

cuantitativos, fijados por ley, que permitan su descarga al ambiente receptor

sin ocasionar problemas ambientales ulteriores. Los parámetros suelen estar

relacionados con el potencial de riesgo a la salud pública, la cantidad de

Page 48: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

orgánicos disueltos, los sólidos suspendidos, las materias grasas, el

contenido de nitrógeno orgánico, el contenido de fosfatos, la ausencia de olor

y la ausencia de color. Cada nación del mundo regula, soberanamente, los

parámetros aplicables, usualmente asegurándose que puedan bajarse para

reducir aún más los riesgos de contagio de enfermedades de transmisión por

ingesta de vegetales de consumo crudo.

En América Latina, México es la nación que más hectáreas irrigan con aguas

servidas no tratadas (Tabla 2).

1.3.2. Clasificación de las lagunas de tratamiento

Las posibles variaciones en lagunas de tratamiento de aguas residuales se

pueden clasificar de distintas maneras, pero una de las más habituales las

clasifica según la participación del oxígeno disuelto en el sistema. Una

laguna en que se espera (por diseño) que exista oxígeno disuelto en todo el

sistema se clasifica como laguna aerobia; si el oxígeno está ausente en toda

la laguna se clasifica como laguna anaerobia; mientras que si el oxígeno

disuelto participa sólo en algunas partes de la laguna (por ejemplo en el

sector superior) pero existen regiones sin oxígeno (por ejemplo en el fondo)

se le clasifica como facultativa. Los términos aerobia, anaerobia y facultativa

se han tomado de la clasificación microbiológica de los microorganismos

participantes.

Page 49: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

TABLA 2. Reuso de aguas residuales a nivel mundial

PAIS LUGAR Superficie Irrigada (HECTÁREAS)

Arabia Saudita RIAD 2,850

Argentina Mendoza 3,700

Australia Melbourne 10,000

Chile Santiago 16,000

China

(diversas ciudades) 1,330,000

Estados Unidos (diversas ciudades) 11,875

India (diversas ciudades) 85,500

Israel (diversas ciudades) 8,800

Perú Lima 6,800

Sudáfrica Johannesburgo 18,000

Sudan Khartum 2,800 Túnez Túnez 4,450

México (diversas ciudades) 350,000

México Valle del mezquital 130,000 México Valle de juárez 26,000

Colombia Medellín 1.200

Fuente: Revista FASPIN; 2000

Page 50: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Las lagunas pueden también clasificarse según el mecanismo que aporta

oxígeno, si es que el oxígeno es necesario. Se encuentran así las lagunas

aireadas (se aporta aire mediante equipos mecánicos o neumáticos para la

transferencia de oxígeno); las de agitación superficial (la agitación promueve

el contacto del agua con la atmósfera y transfiere así el oxígeno del aire) y

las no aireadas o estáticas que usualmente se basan en el aporte diurno de

oxígeno desde fotosintetizadores, como algas por ejemplo.

De igual forma, se pueden clasificar según el grado de mezcla forzada en el

sistema; en tal caso se encuentran lagunas de mezcla completa (cualquier

volumen de líquido, en cualquier parte de la laguna, tiene la misma

composición que cualquier otro) o de mezcla parcial (además de las lagunas

estáticas en que no se promueve el mezclado.

Cada tipo de laguna ha sido clasificada y estudiada en busca de

metodologías de diseño que permitan su adecuada selección técnica,

económica y de explotación. Es tal vez evidente que se recurre a sistemas de

tratamiento en lagunas porque ofrecen un tratamiento de más bajo costo de

explotación que los sistemas de reacción más rápidos (basados,

generalmente, en tecnologías de muy alta densidad celular o lodos activos).

En cuanto al costo de inversión, por otra parte, se debe comparar el valor del

Page 51: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

terreno y de las obras de lagunaje (movimiento de tierras e

impermeabilización) con el de obras civiles y equipos (el terreno ocupado por

tecnologías rápidas es prácticamente despreciable por comparación). Que la

oferta de menor costo sea realidad frente a la consecución de los mismos

valores de parámetros es, precisamente, el punto crítico de un buen diseño.

Las lagunas aerobias estáticas se basan en el aporte de oxígeno a partir del

crecimiento de fotosintetizadores y permiten obtener efluentes de baja DBO

soluble pero de alto contenido de algas, las que debieran ser cosechadas a

fin de controlar los cuerpos receptores. La profundidad debe ser tal que no se

alcancen a producir regiones sin oxígeno, sobre todo teniendo presente que

la turbiedad impide el paso de la luz solar; se suelen encontrar profundidades

de 30 a 45 centímetros y tiempos de retención hidráulicos teóricos (es decir,

volumen de la laguna dividido por caudal medio tratado) de 10 a 40 días de

modo que el terreno requerido para esta tecnología puede ser

intolerablemente grande. La tasa de carga de este tipo de lagunas cae en el

rango de 85 a 170 Kg. de DBO5 por hectárea y por día.

Las lagunas anaerobias se utilizan para tratar caudales con alta carga de

orgánicos, usualmente de origen industrial. Esta tecnología no se aplica a

tratamiento de aguas servidas de alcantarillado porque los olores producidos

Page 52: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

resultarían ambientalmente más inaceptables que la propia descarga cruda.

Sin embargo, las lagunas de tratamiento mal diseñadas para ser facultativas

(bajo tiempo de residencia; descuido en el patrón de flujo; etc.) se convierten

en anaerobias por la sedimentación de la carga entrante. En todo caso, las

lagunas anaerobias suelen recibir cargas de 160 a 800 Kg de DBO5 por cada

1.000 m3 por día, y operan a un tiempo de residencia hidráulico teórico de 20

a 50 días. La profundidad puede estar entre 2,5 y 7 metros.

A pesar de las malas experiencias, las lagunas facultativas han sido la

alternativa más común para tratar aguas residuales de alcantarillado urbano

y operan adecuadamente para la reducción de orgánicos, con una DBO5 de

salida de 30 a 40 mg/L. La carga aceptable para estas lagunas cae entre 20

y 60 Kg DBO5 por hectárea y por día; El tiempo de residencia hidráulico

teórico cae en el rango de 25 a 180 días y la profundidad de operación debe

estar entre 1,2 a 2,5 metros; de otro modo se transforma en laguna

anaerobia. Por otra parte, se debe garantizar que el fluido utiliza todo el

volumen de la laguna, evitando corto circuitos y regiones muertas

(HERRERA, 1998).

El tratamiento de las aguas residuales tiene como objetivo la transformación

de la materia orgánica en material inorgánico y la reducción o eliminación de

Page 53: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

los organismos patógenos de transmisión hídrica. Este proceso se denomina

de estabilización o mineralización, y su consecuencia inmediata es la

disminución de la DBO y de los microorganismos patógenos.

Los procesos biológicos de tratamiento de las aguas se fundamentan en la

interrelación de los microorganismos entre sí (mutualismo, comensalismo,

competición, depredación, etc) y con el ambiente (condiciones de pH,

conductividad eléctrica, temperatura, humedad, etc). Para evaluar la eficacia

de la eliminación de los microorganismos por medio de los métodos de

tratamiento, es necesario cuantificarlos utilizando técnicas simples y

económicas.

Es necesario también utilizar microorganismos indicadores de contaminación

fecal que señalen con su presencia la contaminación por heces o por aguas

residuales y, en consecuencia, riesgos potenciales para la salud pública

(MENDOZA,2000).

Teniendo en cuenta lo anterior, se busco una técnica de cuantificación que

cumpliera con los criterios establecidos y se tomo como opción la

Inmunofluorescencia Directa, ya que es un método simple y económico,

comparado con otro tipo de técnicas utilizadas para el mismo fin.

Page 54: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

En el presente estudio se utilizo el Kitt de Inmunofluorescencia Directa para

Giardia spp y Cryptosporidium spp perteneciente a la casa comercial

Merifluor (Meridian Diagnostics, inc). La asociación entre Giardia spp y

Cryptosporidium spp no esta bien demostrada. Sin embargo, numerosos

incidentes de coinfección con estos microorganismos están documentados.

La detección por inmunofluorescencia directa es un procedimiento rápido y

detecta ooquistes de Cryptosporidium spp y quistes de Giardia spp en

muestras clínicas, incluso en aguas residuales es de gran utilidad. Este

método contiene un anticuerpo monoclonal específico contra las regiones

antigénicas presentes en los parásitos.

Por otra parte en forma generalizada puede decirse que las relaciones

ecológicas en los diferentes sistemas de tratamiento de aguas residuales son

complejas y en algunos casos no están muy bien establecidas. En el caso de

las lagunas de estabilización son mucho más complejas ya que trabajan con

microorganismos heterotróficos y autotróficos al mismo tiempo.

En términos generales es por todos aceptado, que la estabilización de la

materia orgánica en una laguna de estabilización es el resultado de la

relación simbiótica entre algas y organismos heterótrofos ( bacterias, hongos

y protozoarios). Estos últimos oxidan la materia orgánica aeróbicamente

mediante la utilización del oxígeno generado por la población de algas en el

Page 55: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

proceso fotosintético. A la vez, los productos de esta oxidación ( dióxido de

carbono, amonio y otros compuestos inorgánicos) son utilizados por las algas

para su crecimiento y reproducción (ROMERO,1998).

Los estudios han logrado establecer fehacientemente que un sólo sistema

(una sola laguna) produce niveles de tratamiento por unidad de volumen

menor que varias lagunas, sin contar el tiempo de retención. Este tiempo de

retención es el parámetro más importante en la determinación de remoción

de microorganismos en una laguna y por lo tanto en la eliminación de

patógenos de agua residual.

El sistema de tratamiento por lagunas ha tenido diversas adaptaciones

tecnológicas, según el grado de tratamiento deseado y el momento histórico

de su implementación. Desde los primeros registros históricos, hace unos

3000 años, existen hoy en día un par de decenas de miles de lagunas; las

mayormente conocidas y caracterizadas son más de 7000 lagunas en

operación en los Estados Unidos, si bien se han implementado muchas en

Israel y en América Latina de las cuales no se conocen datos precisos

(REVISTA FASPIN, 2000).

La implementación de lagunas en Colombia, alcanza varias decenas (tal vez

un centenar) pero la gran mayoría corresponde a lagunas que enfrentan

graves deficiencias de diseño, generan malos olores, tratamientos muy por

Page 56: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

debajo de las especificaciones originales y una grave ausencia de protocolos

de mantenimiento (MENDOZA, 1999).

1.4 ANÁLISIS PARASITOLÓGICO DEL AGUA

La razón básica para llevar a cabo el análisis microbiológico del agua

residual, es la de proteger la salud de la comunidad de enfermedades

infecciosas o de origen hídrico mediante la detección de una posible polución

fecal.

En los últimos años se han aumentado las enfermedades parasitarias por el

riego de cultivos con aguas residuales. En 1993 una infección por

Cryptosporidium en Milwaukee (USA), fue la responsable de 400.000

enfermos, de los cuales 4400 fueron casos clínicos, sin tener encuentra los

casos aislados que se presentaron en el resto del mundo (ROSE,1997).

1.4.1 Agentes patógenos

Los organismos patógenos son aquellos que pueden causar una

enfermedad. Dentro de estos los más importantes son los entéricos

(microorganismos que habitan el tracto intestinal del hombre y de animales

de sangre caliente), debido a que están relacionados con infecciones

Page 57: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

transmitidas por heces humanas, como cryptosporidiosis, giardiasis, fiebre

tifoidea, hepatitis y gastroenteritis (CAMPOS, 1999).

Las aguas residuales domésticas son las principales portadoras de agentes

patógenos como parásitos, bacterias y virus entéricos. Los agentes

patógenos son capaces de sobrevivir durante mas o menos un tiempo según

la clase de agua y las condiciones imperantes en el medio. Como estos

microorganismos conservan en parte su virulencia, los lagos, ríos y mares

contaminados con aguas residuales implican a menudo un riesgo grave de

infección (MASON 1984). ( Ver tabla 3).

1.4.1.1 Bacterias

Las bacterias que se encuentran con mayor frecuencia en el agua son las

entéricas, que colonizan el tracto intestinal del hombre y son eliminadas a

través de las heces. Las bacterias patógenas no logran adaptarse muy bien

al ambiente acuático, pues se ven afectadas por factores como el pH,

temperatura y competencia con la flora autóctona del agua.

1.4.1.2 Virus

Muchos tipos de virus pueden ser transmitidos por aguas residuales

domésticas. Entre lo virus eliminados por medio de las heces de personas

infectadas, se encuentran: Hepatitis, Rotavirus, Enterovirus. Los virus

entéricos no generan una protección inmunitaria a largo plazo, por lo que la

Page 58: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

infección y la enfermedad causadas pueden repetirse varias veces durante la

vida.

Los virus entéricos son el grupo de organismos patógenos críticos debido, a

que la dosis mínima infecciosa es muy baja y son muy resistentes a los

sistemas de desinfección (CAMPOS, 1999).

1.4.1.3 Parásitos

La mayor parte de enfermedades parasitarias se contraen a través de la

ingestión de alimentos o agua contaminada. Es peligroso beber agua no

potable o consumir hortalizas o frutas regadas con aguas negras, debido a

que la mayoría de los parásitos intestinales soportan el congelamiento y los

desinfectantes, aunque son sensibles a temperaturas mayores de 55°C. El

síntoma más común de la enfermedad parasitaria es la diarrea (KONEMAN,

1997).

Los parásitos patógenos para el hombre se clasifican en dos grupos:

protozoos y helmintos. Los protozoos son organismos unicelulares cuyo ciclo

de vida incluye una forma vegetativa (trofozoito) y una forma resistente

(quiste).

Los huevos de helminto son un grupo de organismos que incluyen

nemátodos, tremátodos y cestodos. Las características epidemiológicas que

hacen de los helmintos patógenos entéricos por contacto con agua

Page 59: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

TABLA 3. Principales microorganismos patógenos presentes en aguas

residuales

PATOGENO ENFERMEDAD OBSERVACIONES

HELMINTOS Ascaris sp Ascariasis Constituye un peligro para el hombre Enterobius sp Enterobiasis proceden de afluentes de aguas residua- Taenia sp Taeniasis les y de fangos secados y utilizados Trichuris trichura Trichuriasis como fertilizantes. Se encuentra en el fango y en el agua residual

PROTOZOOS Enntamoeba histolitica Disentería Se propaga por aguas contaminadas Cryptosporidium parvum Cryptosporidiosis utilizadas para riego y por fangos Giardia lambia Giardiasis usados como fertilizantes.

BACTERIAS Brucelosis, fiebre de malta Normalmente transmitida por leche infe- Brucella sp En el hombre, en el ganado ctada o por contacto, el agua residual es aborto contagioso. sospechosa. Leptospira Leptospirosis Las ratas de alcantarilla son las portado- Iceteroahemorrhagiae ras. Mycobacterium tuberculosis Tuberculosis Aislada en aguas residuales y rios contaminados Salmonella paratyphi Fiebre paratifoidea Comun en el agua residual en tiempo de epidemias. Salmonella typhi Fiebre tifoidea Comun en el agua residual en tiempo de epidemias. Salmonella sp Diarrea, vómito Cómun en el agua residual y efluentes de aguas residuales. Shigella sp Desinteria bacilar Se encuentra en aguas contaminadas Vibrio cholerae Cólera Transmitida por agua residual y contami- nada. Bacillus anthracis Ántrax Se encuentra en el agua residual. Las esporas son resistentes a desinfectantes y condiciones adversas.

VIRUS

Adenovirus Enfermedad respiratoria Se encuentra en efluentes de plantas de tratamiento

Hepatitis Hepatitis biológico de aguas residuales y en verti- Norwalk dos domésticos. Rotavirus Diarrea Enterovirus Gastrointeritis Fuente: METCALF, 1994.

Page 60: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

contaminada son: su alta persistencia en el medio ambiente, mínima dosis

infecciosa, baja respuesta inmune y la capacidad de permanecer en el suelo

por largos periodos de tiempo (CAMPOS, 1999).

En la tabla 4 se resumen las características epidemiológicas de los

patógenos entéricos

TABLA 4. Características epidemiológicas de los patógenos entéricos y

su capacidad para causar infección.

Patógeno Resistencia En el medio

Dosis infectiva mínima

Inmunidad Vías comunes de contaminación

Desarrollo de estado de latencia

Virus Media Baja Larga Aguas y alimentos

No

Bacterias Corta/Media Media/Alta Corta/Media Aguas y alimentos

No

Protozoos Corta Baja/Media Corta Aguas y alimento

No

Helmintos Larga Baja Corta Aguas y alimentos

Si

Fuente: SHUVAL, 1986.

1.5 INDICADORES DE CONTAMINACIÓN EN AGUAS

La dificultad para determinar la presencia de todos los microorganismos

patógenos implicados en el proceso de contaminación ambiental, ha llevado

a la necesidad de encontrar microorganismos o grupos de ellos, que puedan

Page 61: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

ser utilizados para el seguimiento y la evaluación de patógenos. Estos

microorganismos son los denominados indicadores

1.5.1 Virus

En contraste con las bacterias, los virus no se encuentran normalmente en

las heces del hombre. Están presentes solamente en el tracto

gastrointestinal de individuos que han sido infectados.

El análisis de los virus entéricos para utilizarlo como indicadores, es muy

costoso; se necesita de laboratorios especializados y tardan varios días.

Estas dificultades han llevado a la búsqueda de indicadores alternativos, que

sean de rápida, fácil detección y permitan prever el comportamiento en el

medio ambiente, como es el uso de los fagos F+ y somáticos.

1.5.2 Bacterias

Los indicadores bacterianos son los más comúnmente utilizados, debido a su

mayor resistencia a condiciones adversas, específicos de origen fecal y a

que todos comparten características como el habitad.

1.5.3 Parásitos

Además de los huevos de helminto anteriormente citados, la Giardia spp y el

Cryptosporidium spp han cobrado gran importancia en los últimos años

como patógenos emergentes. En la actualidad son los parásitos que se

buscan con mayor frecuencia en aguas potables y residuales.

Page 62: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

1.6 GIARDIA

1.6.1 Giardiasis

Esta parasitosis producida por Giardia intestinalis (G. duodenalis o G.

lamblia) es predominante en niños y presenta en la actualidad una

prevalencia creciente tanto en países tropicales como Brasil, Chile, México,

India entre otros. El parásito fue descubierto por Leeuwenhoek, inventor del

microscopio, quien lo observó en 1681, en sus propias materias fecales

(BOTERO,1998).

1.6.2 Agente etiológico

El trofozoíto de G intestinalis tiene forma piriforme y en la parte anterior

posee dos núcleos que se unen entre sí en el centro, dando la apariencia de

anteojos. Mide aproximadamente 15 micras de longitud por 7 de ancho.

Gardia lamblia, protozoario flagelado, se caracteriza morfológicamente por

simetría bilateral, con cuatro u ocho pares de flagelos. Posee una cavidad o

ventosa que ocupa la mitad anterior de su cuerpo, la cuál utiliza para fijarse a

la mucosa intestinal. Posee en su diámetro longitudinal y en la parte central,

una barra doble o axostilo en su extremo anterior, dos laterales y otro

posterior. El axostilo es atravesado en el centro por dos estructuras en forma

de coma llamadas cuerpos parabasales. Los dos núcleos poseen nucléolos

centrales y están unidos entre sí por los rizoplastos que terminan en el

extremo anterior del axostilo, en dos órganos puntiformes llamados

Page 63: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

blefaroplasto. El trofozoíto tiene capacidad de traslación con movimiento

lento, vibratorio y a la vez rotatorio, lo cual permite observar la cavidad

correspondiente a la ventosa o disco suctorio. El quiste tiene forma ovalada

en doble membrana, de 2 a 4 núcleos y algunas de las estructuras descritas

para el trofozoíto, de las cuales es notorio el axostilo. El tamaño promedio es

de 10 micras de longitud (Ver figura 1) (BOTERO, 1998; ROSE 1991).

Ocasiona brotes de enfermedades transmitidas por el agua en la que se

encuentra en forma de quistes resistentes a los métodos habituales de

cloración. Se disemina a otras personas del ambiente familiar o institucional

del paciente afectado. El inicio de la enfermedad es intempestivo, se

presenta flatulencia fétida, diarrea acuosa, cólicos abdominales y

esteatorrea. Los niños con infección crónica por Giardia lamblia tienen peso

y tallas bajas (BOTERO,1998).

FIGURA 1. Fotografía de Giardia.

FUENTE: MARCELA GÓMEZ; 2000

Page 64: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Giardia lamblia se relaciona con cuadros diarreicos en niños y con menor

frecuencia, en adultos donde el parásito se aloja en intestino delgado. Su

multiplicación es asexuada por fisión binaria. En las heces, cuando son blan-

das o líquidas, se pueden encontrar con mayor frecuencia trofozoitos, pero

en períodos asintomáticos, la eliminación de estas formas parasitarias es

escasa (BOTERO,1998).

1.6.3 Ciclo de vida

Los trofozoítos se localizan en el intestino delgado, fijados a la mucosa,

principalmente en el duodeno. Allí se multiplican por división binaria y los que

caen a la luz intestinal dan origen a quistes. Estos últimos son eliminados con

las materias fecales y pueden permanecer viables en el suelo húmedo o en

el agua por varios meses. Infectan por vía oral y después de ingeridos

resisten la acción del jugo gástrico y se rompen en el intestino delgado para

dar origen a 4 trofozoítos por cada quiste. Los trofozoítos no son infectantes

cuando entran por vía oral. Cuando son eliminados en las heces diarreicas

mueren en el exterior. La infección es principalmente persona a persona,

pero se ha comprobado que algunos animales como perro, gatos, castores y

rumiantes, pueden ser reservorios de G. intestinalis y por consiguiente dan

origen a infección en humanos, en cuyo caso esta parasitosis se puede

considerar como una zoonosis.

Page 65: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

1.6.4 Formas de infección

Los quistes infectantes y resistentes se transmiten por las heces. La

giardiasis se adquiere por ingestión de estos quistes infectantes que se

encuentran en dedos, alimentos y moscas; así mismo, se disemina a otros

miembros de la familia o en el ámbito institucional. Los brotes epidémicos de

giardiasis son causados por contaminación de agua con quistes, Las

personas se infectan durante el contacto físico con el agua: baño,

recreación, por la ingestión de las misma, con el hielo usado para enfriar una

bebida o al consumir alimentos lavados con aguas contaminadas. La

transmisión por esta vía depende de la concentración del patógeno en el

agua y de su tiempo de supervivencia en este ambiente, de la dosis infectiva

y del contacto con el nuevo huésped. Otra forma es por manos sucias

después de acariciar animales que son huéspedes de Giardia lamblia.

La dosis mínima infectante es de 10 a 25 quistes. En estómago, el ácido

estimula la enquistación y liberación de trofozoitos en duodeno y yeyuno,

donde el microorganismo se multiplica por fisión binaria y permanece fijo a la

mucosa intestinal por su ventosa ventral. A la observación microscópica de

biopsias, el intestino infectado se presenta con edema de vellosidades e

inflamación de la mucosa con hiperplasia de nódulos linfáticos y necrosis

tisular (BOTERO,1998).

Page 66: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

1.6.5 Epidemiología y prevención

La giardiasis se transmite mediante la ingestión de los quistes, que son

infectantes tan pronto salen en las materias fecales. Su diseminación se hace

a través de manos sucias, aguas y alimentos contaminados y por cualquier

otro mecanismo que permita la contaminación fecal, como sucede en la

amibiasis y otras infecciones entéricas bacterianas y virales. La giardiasis

puede presentarse en forma epidémica por contaminación de acueductos,

aun en ellos con tratamiento de cloración (ROSE 1997).

En algunos países tropicales es una parasitosis frecuente, especialmente en

niños. Este aumento se ha observado en los últimos años. En Colombia la

prevalencia de la enfermedad es de 12% en la población general y 28% entre

1 y 4 años, mientras que en mayores de 45 años es sólo del 5%.

Esta parasitosis intestinal ha aumentado su frecuencia en los últimos años en

los países desarrollados, debido al aumento de viajeros a zonas endémicas

y a la contaminación de agua de bebida. Se ha demostrado positividad para

el parásito en el 7% de los coprológicos en los laboratorios de salud pública

en Estados Unidos. En estos países se han encontrado frecuentes casos en

personas que tienen actividades transitorias en el campo, como cazadores,

grupos que van de paseo, etc., en los que la infección puede ser adquirida de

reservorios animales. Esta parasitosis tiene importancia en homosexuales

por transmisión oro-fecal. La prevención comprende todas las medidas que

Page 67: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

eviten la contaminación fecal y controlen todos los factores epidemiológicos

(ROSE, 1997).

Es el parásito con mas frecuencia diagnosticado en centros de salud. Los

factores de riesgo son la falta de higiene, viajes a regiones conocidas como

endémicas, ingestión de agua no hervida o filtrada, así como la asistencia a

guarderías y la practica sexual oral-anal.

1.7 CRYPTOSPORIDIUM

1.7.1. Criptosporidiosis

La criptosporidiosis humana fue informada por primera vez en 1976 por Nime

y col., quienes encontraron el parásito en la biopsia rectal de una niña. Hasta

esa época el parásito se consideraba un protozoo que causaba diarrea en

varias especies animales. En el hombre es también causa de diarrea, con

mayor importancia en pacientes inmunosuprimidos, especialmente en SIDA

(ROSE,1997).

1.7.2 Agente etiológico

El protozoo causante de la criptosporidiosis es un esporozoario de la

subclase Coccidia, género Cryptosporidium Se ha identificado la especia C.

parvum, como la responsable de las infecciones humanas y de algunos

animales, pero existen otras especies propias de animales.

Page 68: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

En materias fecales son eliminados los ooquistes esféricos o elipsoides, que

miden de 4 a 5 micras. Estas formas parasitarias son infectantes para las

personas o animales (Ver Figura 2) (BOTERO,1998).

FIGURA 2. Fotografía Cryptosporidium

FUENTE: MARCELA GÓMEZ; 2000

1.7.3 Ciclo de Vida

El género Cryptosporidium como todas las Coccidias, posee un ciclo de

vida asexuado y otro sexuado, los cuales suceden en el interior de los

enterocitos en las infecciones intestinales.

Este ciclo se inicia con la reproducción asexuada, cuando el ooquiste

infectante se desenquista y los esporozoítos liberados invaden la célula para

convertirse en trofozoítos y esquizontes (merogonia), de primera y segunda

generación. Los merozoítos (merontes) procedentes de esta segunda

generación, inician el ciclo sexuado con microgametocitos y

macrogametocitos que dan origen a células masculinas (microgametos) y

femeninas (macrogametos). Estos se unen, forman zigotes y luego

Page 69: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

ooquistes, unos de pared delgada que autoinfecta y otros de pared gruesa

que salen al exterior para contaminar otros huéspedes. La reproducción se

hace dentro de una vacuola parasitófora en las células de las

microvellosidades, que se observan como prominencias al microscopio

(BOTERO,1998).

1.7.4 Formas de infección

La criptosporidiasis consiste en una enfermedad de nuevo registro en

humanos que es producida por un protozoario llamado Cryptosporidium

parvum. El parásito se desarrolla en el tracto digestivo del huésped, donde

cumple todo su ciclo vital. Finalmente, los oocistos son arrojados al exterior

junto con las heces. La ingestión de los oocistos por algún huésped potencial

puede resultar en una infección. La ruta de transmisión a los humanos,

llamada fecal-oral, puede ser de persona-persona o animal-persona, por la

ingestión de agua o comida contaminada (BOTERO,1998).

Aunque desde 1907 se aisló e identificó en ratones, su asociación con

enfermedades humanas no se estableció sino hasta 1976. La debilidad

inmunológica que algunas personas presentaban, y posteriormente la

emergencia del síndrome de inmunodeficiencia adquirida, SIDA, hicieron más

evidente el problema que representaba este parásito; además, mediante el

afinamiento de las técnicas diagnósticas se pudo observar que el

Page 70: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Cryptosporidium también afectaba a las personas de cualquier edad aún y

cuando tuviera su sistema inmunológico normal. Las personas más

susceptibles son los niños, los ancianos y, principalmente, los que tienen

inmunodeficiencia; y las personas en mayor riesgo son las aquellas que

cuidan niños pequeños, personal biomédico que maneja muestras para

análisis o que atiende enfermos que requieren ciertos cuidados

(LINDO,1998).

Uno de los peligros que entraña este parásito es que la dosis infectiva para

humanos es muy pequeña. Estudios hechos en voluntarios indican que un

promedio de 132 oocistos son suficientes para provocar la infección en un

adulto joven; caso contrario es el de los macacos, monos que al infectarse

experimentalmente necesitan una dosis promedio de 200,000 oocistos para

que inicien el proceso infectivo (ROSE, 1997).

Los síntomas que presenta la criptosporidiasis incluye diarrea acuosa,

calambres intestinales, vómitos, nauseas y un poco de temperatura.

1.7.5 Epidemiología

La infección se adquiere por vía oral y es de origen fecal. Puede proceder de

personas infectadas que se contaminan a través de manos, contaminación

Page 71: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

oro-anal, aguas, hortalizas, etc. La infección también puede transmitirse por

materia fecal de animales que sufran la parasitosis.

Los animales reservorios son muchos, por lo cuál se considera una zoonosis

frecuente. Los ooquistes son muy resistentes a las condiciones del medio

ambiente y pueden sobrevivir en el suelo por varios meses. Pueden resistir

algunos desinfectantes comunes, pero pierden su viabilidad con la

congelación y la ebullición.

Se considera la quinta causa de diarrea en niños inmunocompetentes y la

prevalencia en la población infantil ha variado de 2% a 30% de acuerdo a los

países y a las condiciones higiénicas de las poblaciones estudiadas.

En Colombia se ha encontrado 4% de positividad en niños con diarrea en

estudios basados en el examen directo con coloración ácido-resistente,

mientras que en México, donde utilizaron inmunofluorescencia con

anticuerpos monoclonales, encontraron frecuencia de 9 a 30%. En la

población general se presentan ocasionalmente brotes o epidemias, debidas

a contaminación alimentaría y la incidencia tiene variaciones estacionales o

de acuerdo al clima, como se comprobó en Costa Rica, donde la frecuencia

en niños con diarrea aumenta de 4% al 15% entre mayo y agosto, la época

caliente y lluviosa. Se considera una de las causas de la diarrea de los

viajeros (BOTERO,1998).

Page 72: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Con estudios seroepidemiológicos en la población, se detectan anticuerpos y

se han encontrado frecuencias de 25% a 35% en Estados Unidos y de más

de 50% en América Latina y en China.

La relación epidemiológica más importante se ha encontrado en portadores

de VIH y en pacientes con SIDA. En ambos casos el parásito se comporta

como un agente invasor oportunista. Se calcula que en países desarrollados

los pacientes VIH positivos son portadores del parásito entre 10% y 15% y en

países en desarrollo entre el 30% y el 50%. En pacientes con SIDA en

Colombia, el 45.3% de los que tenían diarrea fueron positivos para

Cryptosporidium en materia fecal y en Venezuela el 41.3%. En contraste,

solo de 4% a 5% fueron positivos en casos similares de Estados Unidos

(ROSE,1997).

En 1996 se calculaba que más de 8 millones de personas estaban enfermas

de SIDA y que para el año 2000 el número de personas infectadas por VIH

en el mundo será de 38 millones. Estas cifras alarmantes, que aumentan

permanentemente, hacen necesario que se establezcan medidas de control

para los agentes oportunistas que ya son más de 100. En el caso de

Cryptosporidium, todas aquellas medidas que disminuyan la contaminación

fecal y mejoren el saneamiento ambiental.

Page 73: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

La primera epidemia que se registró de gastroenteritis causada por

Cryptosporidium parvum fue en 1984 en el estado de Texas, a causa de la

contaminación del agua de pozo, con 2006 enfermos.

En 1987 fue la primera epidemia asociada al agua de río, en Carrollton,

Georgia. 12,960 enfermos.

En 1992 se presentaron múltiples epidemias asociadas al tratamiento

deficiente de las plantas abastecedoras de agua potable

En 1993 ocurrió una epidemia de criptosporidiosis en Milwaukee, Wisconsin

que afectó a 403,000 personas y provocó la muerte de más de 100 de ellas.

Este hecho sin precedente en la historia de la salud pública y la ingeniería

sanitaria de los Estados Unidos, producido por la contaminación de las

fuentes de abastecimiento de agua potable de la ciudad, puso en alerta al

Departamento de Salud y a la Agencia de Protección al Ambiente.

Ese mismo año, en Maine, se originó una epidemia por la contaminación de

sidra fresca de manzana.

En 1994 tuvo lugar, en Las Vegas, Nevada, la primer epidemia en una

población que posee las instalaciones más modernas para la potabilización

del agua de bebida (BARER, 1990).

Page 74: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

1.8 IMPACTOS SOBRE LA SALUD

Identificación de los impactos

Las poblaciones que viven cerca del río Bogotá como es el caso de Chocontá

y Anapoima, están expuestas a contaminantes de origen hídrico a través de

una gran variedad de mecanismos. El consumo de agua tratada o

parcialmente tratada es la ruta de exposición que puede resultar en la mayor

absorción de tales contaminantes. El consumo de alimentos producidos con

agua de riego contaminada o provenientes de ganaderías que toman dicha

agua es la segunda ruta más importante de exposición, como se puede

apreciar en la Fig 3. Finalmente, el contacto físico directo en actividades de

recreación, baño o trabajo puede también producir efectos adversos sobre la

salud (CAR, 1999).

Se ha podido observar por datos proporcionados por el estudio en los

municipios que utilizan este tipo de aguas, que existía una correlación con los

hechos ocurridos en Sydney (Australia), en donde se observa la presencia de

parásitos tipo Giardia spp y Cryptosporidium spp en sistemas de lagunaje,

mientras la incidencia de la enfermedad no se ve aumentada.

Page 75: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

FIGURA 3 Fotografía ganado cerca al río Bogotá

Fuente: Autoras, 2001.

1.8.1 Importancia sanitario-epidemiológica de los estudios sobre

contaminacion parasitaria de aguas residuales

1.8.1.1 Reutilización de aguas residuales

Los planes de aprovechamiento de los recursos hídricos van encaminados

hacia la reutilización de aguas residuales, tanto para la conservación, como

forma de prevenir la contaminación de aguas subterráneas y superficial,

como para la reutilización de nutrientes. El aprovechamiento de los efluentes

tratados para el riego de cultivos y zonas verdes del sector rural.

Page 76: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Las aguas residuales son un recurso valioso en las regiones semiáridas del

país. Debido al crecimiento de la población, a la demanda agrícola y a la

escasez del agua este recurso es muy interesante económicamente.

La reutilización de aguas residuales en agricultura permite que existan

reservas de agua potable para otras aplicaciones prioritarias, y contribuye de

este modo, a la conservación de dichas aguas; asimismo, la utilización de

esta agua para el riego ayuda indirectamente a mejorar el estado nutricional

de la población.

No obstante, todas estas prácticas suponen unos importantes efectos

negativos. El agua residual de procedencia industrial puede contener

concentraciones altas de productos químicos tóxicos, metales pesados y

contaminantes orgánicos, lo que comporta efectos fitotóxicos que pueden

afectar a los consumidores, así como efectos adversos para el suelo como

es el caso de la salinización.

Por la posible presencia de parásitos intestinales, el agua puede servir como

vector para la transmisión de enfermedades parasitarias al personal de las

propias depuradoras, al agricultor, al ganado que pasta en prados regados

con esta agua, y como consecuencia de ello a los habitantes o visitantes de

las proximidades (GIBSON,1998).

Page 77: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Las ultimas tendencias apuntan hacia la necesidad de controlar los parásitos

intestinales ( Giardia y Cryptosporidium ) entre otros presentes en esta

agua si se quiere utilizarlos en agricultura, los cuales hasta hace bien poco

habían recibido escasa atención.

1.8.1.2 Interés sanitario: parasitos presentes en aguas residuales

La evaluación del riesgo sanitario procedente del uso de excrementos y por

lo tanto de aguas residuales de tratamiento, hasta ahora se ha basado en

criterios microbiológicos. El “riesgo potencial” ocurría cuando se detectaban

microorganismos patógenos en aguas residuales, o en vegetales, incluso si

no se encontraban casos de enfermedades causadas por estos patógenos.

En este concepto el riesgo se define como la exposición a la posibilidad de

infección, aunque actualmente no se manifiesten tales enfermedades.

Ultimamente se ha introducido un nuevo concepto epidemiológico para la

evaluación de riesgo sanitario. Dicho concepto es la probabilidad para un

individuo de desarrollar una enfermedad en un período determinado.

Existe la posibilidad de que un “ riesgo potencial” no se convierta en un “

riesgo actual” por diferentes motivos: persistencia del patógeno en el medio,

dosis infecciosa mínima, comportamiento humano, y la inmunidad del

hospedador. Además una infección puede tener más de una vía de

transmisión.

Page 78: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

La lista de patógenos asociados a la vía hídrica y en concreto a las aguas

residuales es muy larga. Taxonómicamente se distinguen 4 grupos: virus,

bacterias, protozoos y helmintos. Estos microorganismos son liberados por

personas o animales infectados a través de excrementos, pudiendo pasar a

individuos sanos de forma oral o cutánea; es así como el nivel de

contaminación patogénica de las aguas residuales y las especies presentes,

reflejan la patología de la población animal y humana (MENDOZA,2000).

1.8.1.3 Caracteristicas epidemiologicas de los parasitos

Son tres las características epidemiológicas a tener en cuenta para valorar el

riesgo epidemiológico asociado a su presencia en aguas reutilizadas: la

persistencia en el medio, la dósis infecciosa mínima y, por último, las

diferentes vías de transmisión e inmunidad.

La primera se define como aquella capacidad que tiene el parásito para

sobrevivir fuera del hospedador, en condiciones adversas. Es una

característica muy importante para la transmisión por el uso agrícola de las

aguas residuales.

Se constata que la persistencia de parásitos en el medio es muy larga, y en

algunos casos puede llegar hasta años. En todo caso, los tiempos de

Page 79: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

persistencia son suficientes para presentar un riesgo sanitario potencial, si se

usan aguas residuales.

Una infección humana no proviene de la presencia de patógenos en

vegetales o en el suelo en sí. El hombre tiene que ingerir una cantidad

suficiente de microorganismos patógenos para que se desarrolle la infección

y la enfermedad. La cantidad mínima de patógenos causantes de la infección

se llama dosis infecciosa mínima (D.I.M). Esta dosis es diferente para cada

agente patógeno.

Otro factor a tener en cuenta es el nivel de inmunidad humana para

enfermedades endémicas. Algunos patógenos debido a su elevada presencia

en el medio, en particular en países en desarrollo, provocan que la mayoría

de los niños adquieran inmunidad permanente, o por lo menos a largo plazo,

en los primeros años de vida, de modo que una exposición ambiental externa

no representa un exceso significativo de enfermedades. Evidentemente, esto

no es aplicable a los parásitos intestinales ( protozoos y helmintos ), al no

desarrollarse contra éstos una inmunidad (MENDOZA,2000).

Por otro lado la contaminación zoonótica por este tipo de microorganismos

principalmente por Cryptosporidium spp, demuestran que muchos animales

pueden servir como fuente de contaminación de aguas residuales con la

potencial infección humana (ROSE, 1989; IONAS, 1998).

Page 80: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

1.8.1.4 Parasitismo y Estado Nutricional en Preescolares de

Instituciones del Distrito Capital

Para evaluar la situación de preescolares en las instituciones del Distrito de

Bogotá que prestan servicios a este tipo de población, se estudiaron 237

niños con edades entre 24 y 76 meses, con respecto a la prevalencia de

parasitismo intestinal. Ascaris y tricocéfalos se encontraron con una

frecuencia del 0,5 % mientras que la Entamoeba histolytica se encontró en el

3,5 % y Giardia lamblia en el 14,9 %. Se encontraron desnutriciones crónica

y global de 45,5 % y 38,8 % respectivamente.

La prevalencia del parasitismo intestinal en Colombia, principalmente en las

áreas rural y urbana marginal, ha sido tradicionalmente alta debido a que las

condiciones socioeconómicas y sanitarias son deficientes. El Estudio

Nacional de Parasitismo intestinal de 1980 mostró prevalencias de 38,6 % en

el caso de Ascaris lumbricoides, 35,3 % de Trichuris trichiura y 21,2 % de

Uncinarias. El estudio de parasitismo de 1996 estableció que las

prevalencias de los dos primeros helmintos eran menores del 10 % en el

ámbito nacional, revelando una reducción importante de esta problemática,

reducción que no ha sido suficientemente explicada. En este mismo estudio

se encontraron en Bogotá prevalencias de helmintos (T. Trichiura) del 0,3 %

y de protozoos (Giardia lamblia y E. histolytica) del 18,6 % y 0,7 %

Page 81: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

respectivamente. Estas parasitosis pueden tener consecuencias negativas

sobre la disponibilidad de micronutrientes, el estado nutricional y las

funciones cognitivas.

La prevalencia de parásitos intestinales encontrada en los niños fue inferior

a la detectada en la población general. Sin embargo, la prevalencia de

giardiasis fue significativa y en la medida en que los parasitismos intestinales

resultan de la exposición continua a factores de riesgo en el hogar y la

comunidad, acentuados por el incremento de la velocidad de transmisión en

las casas vecinales y jardines (contacto físico prolongado, manoseo y

similares), donde se concentran los niños por muchas horas, se requiere

adoptar medidas que rompan estos ciclos de transmisión y un sistema de

monitoreo efectivo.

La importancia del agua cada día en nuestra vida es demasiado obvia. La

calidad del agua que bebemos y el uso para la reconstrucción es

fundamental a nuestra salud y bienestar. La ocurrencia continua de los brotes

flotantes tifoideos y del cólera en países en vías de desarrollo es todavía

demasiado familiar y su relación con agua contaminada sigue siendo muy

alta. (ver tabla 5)

1.8.1.5 Presencia de parásitos intestinales en hortalizas que se

consumen crudas

Page 82: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Por su apreciable contenido de ácido ascórbico, carotenos y fibra dietética,

los vegetales son ampliamente recomendados como parte de la dieta diaria

(ANÓNIMO 1989, ZIEGLER 1993). No obstante, una serie de prácticas en

torno a su producción, cosecha y comercialización hacen que este grupo de

alimentos se convierta en vehículo potencial de microorganismos patógenos.

(Ver tabla 5).

El apio, lechuga, repollo, coles y otros vegetales que generalmente se

consumen crudos han sido asociados con brotes de diarrea e incluso de

listeriosis. Además, en este tipo de vegetales se han encontrado

contaminación con huevecillos de parásitos como Ascaris lumbricoides,

Tricocéfalos trichuris, quistes de Entamoeba histolytica, Giardia intestinalis

(HELMER, 1991).

La contaminación microbiológica de estos alimentos toma mayor importancia

al considerar que el tiempo de supervivencia de estos microorganismos

patógenos puede ser prolongado, semanas o meses (FEACHMEN, 1983;

STRAUS 1986), particularmente cuando los microorganismos están en las

áreas más húmedas del vegetal y protegidos de la desecación y de los rayos

directos del sol, como ocurre en la lechuga, repollo, zanahoria y rábano

(FEACHMEN, 1983; SHUVAL, 1986).

Page 83: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

TABLA 5. Brotes más relevantes causados por utilización de aguas

residuales en el mundo

Año LUGAR Est.

CASOS CAUSA SOSPECHADA

1984 Estación De Braun, Tx 2.006 Aguas residuales

contaminadas

1988 Ayrshire, Reino Unido 27

Deficiencias en el tratamiento del agua de río

1990 Loch Lomond, Escocia 442 Deficiencias en el

tratamiento del agua

1991 Pensilvana 551 Deficiencias en el tratamiento del agua

1993 Milwaukee, Wi 403.000 Deficiencias en el tratamiento del agua del lago

Fuente: Revista FASPIN.

Diversos estudios de campo y laboratorio, han mostrado que los patógenos

inoculados en la tierra de cultivo o en las aguas de irrigación con vegetales

pueden sobrevivir hasta por dos meses, período suficiente para que alcancen

en forma viable al consumidor (FEACHMEN 1983; STRAUS 1986).

Según los resultados de SHUVAL 1991 se observó que en el 50% de la

lechuga, en hojas y raíz de cilantro, la concentración de Giardia lamblia se

encontró en el 2.5% y 5.2% de las muestras de hojas y raíz de cilantro,

respectivamente. Cryptosporidium sp. Se halló en el 5.2% y 8.7% de las

muestras de hojas y raíz de cilantro y en menos del 3% de las otras

hortalizas estudiadas.

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Todos estos hechos indican que el uso de aguas residuales para el riego de

hortalizas, es la práctica que más influye en la reducción de la calidad

sanitaria de estos alimentos.

Las concentraciones de Giardia spp y Cryptosporidium spp se han hecho

evidentes en los últimos años gracias a los ensayos realizados a través de

Inmunofluorescencia directa. Estos ensayos ha puesto al descubierto los

quistes y ooquistes de los parásitos en las muestras de agua residual.

1.9 METODOS PARA LA DETECCIÓN DE PARASITOS (Giardia spp y

Cryptosporidium spp)

Para obtener una adecuado perfil de la presencia de parásitos en aguas

residuales, las muestras deben ser obtenidas y examinadas a partir de todo

el proceso de tratamiento. Los métodos aquí descritos son: sedimentación,

filtración, ultrafiltración, inmunofluorescencia, y la citometría de flujo entre

muchos más aunque aún no se habla de ellos, muy probablemente

generarán controversia y contribuirán de alguna manera en la obtención de

un método eficaz.

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Actualmente se trabaja en la normalización de una prueba que determine la

presencia de los protozoarios Giardia spp y Cryptosporidium spp en

aguas. Cada una de las fases del procedimiento se guía según lo

convencionalidad o tradicional (concentración inicial, recuperación,

identificación y enumeración). Los filtros recientemente desarrollados

(Envirocheck y filtra-Max) han mostrado ser eficaces para la recuperación

inicial de ooquistes de Cryptosporidium del agua a través de un filtro en

forma de cartucho. Además se confía mucho en el método de floculación con

sulfato férrico que ha mostrado recuperación similar al Envirocheck y filtra

Max.

También se han evaluado sistemas de purificación modernos como la

separación inmunomagnética. La valoración preliminar de la citometría de

flujo de fase sólida ha indicado que esta técnica podía ofrecer economía en

tiempo al ser comparada con el microscopio convencional (STANFIELD,

2000).

1.9.1 Método de sedimentación

Es el método donde se busca que los microorganismos que han estado

suspendidos en un sistema de lagunaje, se posen en el fondo por su mayor

gravedad, hecho dependiente de la densidad.

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1.9.2 Método de flotación por centrifugación

Se utiliza para separar, concentrar y recobrar ooquistes principalmente, en

algunos casos también sirve para establecer la viabilidad de algunos huevos.

1.9.3 Método de floculación inorgánica con cloruro de calcio

Método con propiedad de utilizar sustancias coloidales para la separación de

una solución espontánea por la acción de varios agentes químicos, formando

pequeños flóculos de donde deriva su nombre (ver anexo I y II).

1.9.4 Inmunofluorescencia

Por otra parte, una de las técnicas más comúnmente utilizadas para la

detección de ooquistes de Cryptosporidium y quistes de Giardia partir de

muestras ambientales, ha sido la inmunofluorescencia (ver anexo III).

Este tipo de procedimiento utiliza un anticuerpo de tipo monoclonal dirigido

contra un componente localizado en la pared de estos parásitos. Como bien

se sabe el Cryptosporidium y la Giardia son dos especies de protozoos

causantes de enfermedades hídricas. La detección de este tipo de

microorganismos en aguas residuales es en forma de ooquistes y quistes

respectivamente (ROSE, 1989).

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FIGURA 4. Fotografía de Giardia spp por

inmunofluorescencia.

Fuente: Autoras; 2001

FIGURA 5. Fotografía de Cryptosporidium spp

por inmunofluorescencia

Fuente: Autoras; 2001

1.9.5 Separación inmunomagnética

La separación inmunomagnética se propone como un método para la

obtención de Cryptosporidium en muestras de aguas residuales. Este

método consiste en la separación de ooquistes a través de interacciones

entre imanes y entre cargas eléctricas presentes en la pared del parásito en

movimiento.

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Otro de los métodos utilizados consiste en la obtención de ooquistes de

Cryptosporidium en aguas residuales por medio de la cápsula de

Envirocheck. Se realiza una elusión del filtro por contacto y posteriormente se

agita en un vortex, al seguir el procedimiento se observó una obtención del

68% de ooquistes y si se realizaba como paso seguido la centrifugación la

obtención de ooquistes era del 94% mucho mayor que la anterior, sin

ocasionar daño morfológico a los ooquistes.

Si se aumenta la proporción del magnetismo se observa una eficacia del 69%

llegando a la conclusión que la metodología descrita permite la detección

hasta de 0.1 ooquiste/L cuando se procesan 100L de agua.

1.10 FACTORES QUE EJERCEN INFLUENCIA SOBRE LA VIABILIDAD

DE LOS INDICADORES PARASITARIOS

En el ambiente acuático se encuentran ciertos factores, físicos, químicos y

biológicos que afectan los indicadores de contaminación parasitaria y pueden

producir su muerte.

Los factores más relevantes en el ambiente acuático, que ejercen alguna

acción sobre los indicadores de contaminación fecal son:

* Ausencia de nutrientes

* Interacciones biológicas

Page 89: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

* Paso del ambiente de origen ( tracto digestivo ) a uno nuevo ( agua ),

situación que genera estados de resistencia en los parásitos.

* Diluciones en el cuerpo de agua por lluvias, pueden disminuir la

concentración de microorganismos.

* Fenómenos de sedimentación.

* Presión osmótica.

* Altas concentraciones de sal.

* Acción germicida de los rayos UV de la luz solar.

* Foto-oxidación.

* Otros factores que afectan los indicadores son los físico-químicos: pH,

temperatura, sólidos disueltos totales, turbiedad, conductividad, DBO, DQO,

precipitaciones ( BITTON, 1994).

Existen varios factores que afectan las condiciones hidráulicas y biológicas

de las lagunas de estabilización. Algunos de estos factores pueden tenerse

en cuenta al elaborar un proyecto. Asimismo, existen otros factores que no

son controlables por el hombre; fénomenos metereológicos, como vientos,

temperatura, precipitaciones, radiación solar y evaporación. Además de

éstos, pueden considerarse las variaciones locales, como infiltración y

características de las aguas residuales que recibirán el tratamiento

(MENDOZA, 2000).

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Una laguna de estabilización contiene principalmente algas, bacterias y

parásitos en suspensión. El oxígeno liberado por las algas, a través del

metabolismo fotosintético, es usado por las bacterias en la descomposición

aeróbica de la materia orgánica. A la vez, los nutrientes y el dióxido de

carbono producidos por la actividad bacterial son usados por las algas

(ROMERO, 1998).

Fenómenos naturales no controlables

1.10.1 Inactivación por los rayos solares

Los rayos solares inactivan a los microorganismos según los siguientes

mecanismos:

Mecanismo 1: Este proceso es independiente del oxígeno, se trata de la

absorción directa de los rayos UV-B de 300 a 320 nm, los cuales causan un

daño al DNA, promueve la formación de los dímeros de pirimidina. Este tipo

de afección puede ser corregida por las bacterias mediante mecanismos de

corrección durante la síntesis del DNA.

Mecanismo 2: Se trata de un daño foto-oxidativo por la reacción de especies

de oxígeno catalizadas por fotosintetizadores endógenos al absorber rayos

UV-B en onda corta, viéndose afectado el DNA de cadena sencilla.

Page 91: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Mecanismo 3: Este al igual que el segundo, se trata de una reacción de foto-

oxidación, pero catalizada por fotosintetizadores externos, como sustancias

que absorben un amplio rango de los rayos solares, y que incrementan el

espectro de los UV-visibles. Las especies oxígeno reactivas, dañan las

estructuras externas de los microorganismos como la pared celular.

La inactivación solar del Cryptosporidium spp aumenta cuando existe una

turbidez en el agua < 1 unt, la concentración de oxígeno es alta. En el caso

de la Giardia spp la inactivación se puede aumentar cuando la

concentración de oxígeno es alta y el pH es alcalino.

La inactivación solar se ve afectada por las partículas suspendidas, la DBO,

compuestos fenólicos, desechos industriales y turbiedad que interfieren en la

transmisión de la radiación UV.

En climas ecuatoriales, se ha comprobado que a turbiedades mayoes de 200

UNT ( unidades nefelométricas de turbiedad ), menos del 1% de los rayos

incidentes de UV, pueden penetrar una profundidad mayor de 2 cm de la

superficie del agua. Por lo tanto en estas condiciones no se puede esperar

un efecto germicida (JOYCE,1996).

Page 92: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Los parásitos indicadores de contaminación fecal están particularmente

protegidos de los rayos UV cuando se ven envueltos dentro de la materia

orgánica. Los sólidos suspendidos los protegen parcialmente del efecto letal

de los UV, debido a que las partículas suspendidas absorben parcialmente

los rayos UV ( desechos sólidos absorben un 75% de la luz)

1.10.2 Sólidos disueltos totales

Los sólidos disueltos totales están compuestos de moléculas orgánicas e

inorgánicas e iones en disolución en el agua ( ICONTEC, 1989 ). Los

constituyentes orgánicos tales como el calcio, sodio y los sulfatos llegan a las

aguas con los vertidos de tipo industrial. Los sólidos disueltos aumentan la

dureza, modifican el pH del agua, lo que dificulta el crecimiento de los

microorganismos. Este análisis es muy importante para el control de

procesos de tratamiento biológico de las aguas, ya que las aguas con un alto

valor de sólidos disueltos pueden producir una condición fisiológica

desfavorable para el consumidor (APHA, 1995).

1.10.3 Conductividad

La conductividad es la cantidad de iones disueltos en el agua, es decir la

capacidad de un cuerpo de agua para conducir la corriente eléctrica,

entonces al haber una alta conductividad en el agua hay una elevada

Page 93: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

concentración de sólidos disueltos, siendo así la conductividad una

alternativa para medir indirectamente la concentración de sólidos disueltos.

La conductividad del agua depende de la presencia de iones y de su

concentración total, movilidad, valencia y concentraciones relativas, así como

de la temperatura de la medición (APHA, 1995).

Con este análisis se pueden tener datos acerca de la salinidad del agua y de

la capacidad de conductividad eléctrica. Por tal razón este análisis

proporciona parámetros que orientan el uso al agua, bien sea para la

producción de energía, riego, consumo humano o animal.

Un cuerpo con alta conductividad no es bueno para el sistema de riego pues

la salinidad afecta el crecimiento de las plantas. Al tener una alta

conductividad es conveniente hacer un análisis de toxicología, dado que

entre los iones presentes algunos pueden ser tóxicos afectando al

ecosistema y en este caso el desarrollo de los indicadores de contaminación

parasitaria (USEPA, 2000).

1.10.4 Acción de los vientos

La acción de los vientos es útil cuando es posible la homogeneización de la

masa líquida llevando oxígeno de la superficie a las capas más profundas,

Page 94: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

haciendo que el afluente y los microorganismos se dispersen en toda la

extensión de esa masa (ROMERO, 1998).

La energía del viento disipada en mezcla es función de la extensión

superficial de la laguna. La mezcla es importante porque proporciona una

distribución más uniforme de la temperatura, del oxígeno y de las algas en

todo el estanque.

El viento puede así establecer condiciones aerobias hasta el fondo de la

laguna. En las lagunas se ha observado, por las mañanas, durante tiempo

cálido y con buenos vientos, color verde debido a la presencia superficial de

las algas verdes y una coloración gris a medida que las algas verdes se

alejan de la zona fótica y de las capas superficiales más calientes.

1.10.5 Temperatura

Las reacciones físicas, químicas y bioquímicas que ocurren en las lagunas

de estabilización son muy influenciadas por la temperatura. Es un parámetro

que se relaciona con la radiación solar y afecta tanto la velocidad de la

fotosíntesis como la del metabolismo de las bacterias responsables de la

depuración de las aguas residuales. Esos fenómenos son retardados por las

bajas temperaturas.

Una caída de 10°C en la temperatura reducirá la actividad microbiológica en

aproximadamente un 50%. La actividad de la fermentación del lodo no ocurre

significativamente en bajas temperaturas.

Page 95: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

1.10.6 Precipitaciones pluviales

Las precipitaciones pluviales pueden tener alguna influencia en la actuación y

confiabilidad de la laguna. El tiempo de detención podrá reducirse durante

períodos de lluvia. Las lluvias intensas pueden diluir el contenido de las

lagunas poco profundas, afectando el alimento disponible de la biomasa. El

aumento repentino del caudal podrá acarrear hacia el afluente grandes

cantidades de sólidos, arrastre significativo de población de algas y de

material inorgánico, principalmente arcilla. Sin embargo, la precipitación de la

lluvia directamente en el espejo de agua de la laguna no ha provocado

efectos duraderos o perjuicios mensurables en las lagunas de estabilización.

1.10.7 Demanda bioquímica de oxígeno-DBO

La demanda bioquímica de oxígeno es la cantidad de oxígeno usada en la

oxidación bioquímica de la materia orgánica, bajo condiciones determinadas

de tiempo y temperatura. Es la principal prueba usada para la evaluación de

la naturaleza del agua residual.

Determina el oxígeno consumido por las bacterias durante la oxidación de la

materia orgánica presente en el agua residual (MENDOZA,2000).

Cuando la producción de DBO es alta, es el resultado de crecimiento de la

biomasa suspendida en la laguna (ROMERO, 1998).

Page 96: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

1.10.8 Demanda química de oxígeno-DQO

La demanda química de oxígeno se obtiene por medio de la oxidación del

agua residual. Este proceso oxida casi todos los compuestos orgánicos en

gas carbónico y agua (MENDOZA, 2000).

La demanda química de oxígeno se usa para medir el oxígeno equivalente a

la materia orgánica oxidable químicamente mediante un agente químico

oxidante fuerte. Es útil como parámetro de concentración orgánica

(ROMERO, 1998).

1.10.9 Competencia con otros microorganismos en el ambiente acuático

La depredación por parte de los protozoos. Las bacterias en el ambiente

acuático son parte de una cadena trófica, en el cual son tomadas como

alimento por los protozoos. De esta manera, estos organismos además de

ser reservorios de patógenos potenciales, también son predadores que

ayudan a controlar el crecimiento de la biomasa bacteriana.

La eliminación de los parásitos esta relacionado de igual forma con el tiempo

de retención hidráulica o el tiempo de permanencia del agua en el sistema de

lagunaje. Cuanto más tiempo permanezca el agua en el sistema mayor

posibilidad de reducir los parásitos.

Page 97: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Es importante tener en cuenta factores que afectan la viabilidad de los

microorganismos indicadores de contaminación, pues en muchos casos los

métodos de análisis no tienen la capacidad de recuperar estos

microorganismos injuriados, haciendo estimaciones por debajo de lo real,

permitiendo utilizar aguas muy contaminadas para las actividades humanas,

lo que implica un riesgo para la salud.

1.11 ELIMINACIÓN DE MICROORGANISMOS POR MEDIO DEL

TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES

Los sistemas de tratamiento de aguas residuales tiene como base procesos

físicos, químicos y biológicos que reproducen en corto tiempo, y en un

espacio reducido, las etapas que ocurren en los procesos naturales de

autodepuración de los ecosistemas acuáticos. El conjunto de esos procesos

se verifica en el interior de los reactores, generalmente en serie, que

constituyen los procesos unitarios del tratamiento de las aguas residuales.

De forma resumida, puede lograrse la destrucción o remoción de los

organismos patógenos mediante tres procesos fundamentales:

Page 98: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

• Por la creación de condiciones adversas extremas, como sucede en la

digestión termofílica, que promueve una muerte rápida.

• Por la permanencia prolongada de los organismos dentro del reactor

(tiempos largos de retención hidráulica), que favorecen la muerte

natural, como se verifica en las lagunas de estabilización.

• Por la aceleración de las tasas metabólicas y estimulación de las

cadenas alimenticias como ocurre en los lodos activados, donde la

oxigenación apropiada y la relación alimento-microorganismo

estimulan el consumo bastante rápido de la materia orgánica.

Tipos diferentes de tratamiento producen efluentes líquidos y lodos de

diferentes calidades y cantidades, con gran variación de tipos y

concentraciones de organismos patógenos.

Los efluentes de lagunas de estabilización, por ejemplo, tienen bacterias y

virus, pero pueden no tener huevos de helmintos, pues éstos se sedimentan

por su propio peso en el fondo de las lagunas, debido al prolongado tiempo

de permanencia en el agua residual.

Por el contrario, en la digestión termofílica, en el material residual de las

fosas sépticas y en los lechos de secado de lodos, los virus y las bacterias

son destruidos con más facilidad que los huevos de helminto.

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La Organización Mundial de la Salud, OMS(1989), recomienda el control de

los parásitos, en especial en efluentes que serán reutilizados para el riego sin

restricciones, es decir, para regar vegetales que serán consumidos crudos,

sin eliminación de la cáscara o de la película superficial (MENDOZA, 2000).

A nivel del tratamiento de aguas residuales, existen cuatro clases de

microorganismos de gran interés: bacterias, hongos, algas y protozoarios.

Aunque existe un quinto grupo, sus miembros no alcanzan un nivel celular

por lo que algunos autores los clasifican en un grupo aparte conocido como

virus. Como es de nuestro interés el comportamiento de los parásitos,

profundizaremos al respecto.

Los protozoarios quienes están constituidos únicamente por formas

unicelulares. Al igual que los demás microorganismos existe una amplia

variedad nutricional, aunque un amplio porcentaje es heterotrófico. Algunos

son depredadores y sus presas más comunes son: bacterias, algas, hongos

y protozoos más pequeños. Este grupo cumple un papel importante a nivel

de los ecosistemas acuáticos tanto en el control, como en la regulación

poblacional( ROMERO, 1998).

Según el estudio de CARRARO, 2000 que hace referencia al impacto en las

plantas de tratamiento, la incidencia de Giardia spp y Cryptosporidium spp

Page 100: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

tanto en el efluente como en el afluente se ve influenciada o está relacionada

con la contribución de aguas residuales contaminadas con excremento

humano.

Los resultados de este estudio sugieren que el impacto del tratamiento de

aguas residuales en un municipio no tiene impacto relacionado con la

Giardia spp y Cryptosporidium spp y subraya la necesidad por la

investigación en la efectividad para eliminar estos protozoarios a través de

tecnología avanzada en municipios y así mostrar una probable baja de

protozoarios

Teniendo en cuenta lo anterior, se considera que el conocimiento y la

evaluación cuantitativa de los diferentes tipos de organismos presentes en

una laguna de estabilización es muy importante. Además, es necesario tener

en cuenta los diferentes factores físico-químicos y biológicos que pueden

limitar su número (ROMERO, 1998).

Page 101: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

2. JUSTIFICACIÓN

El agua es uno de los más importantes factores para el desarrollo social y

económico del hombre. Su escasez y su contaminación amenazan aspectos

fundamentales de la seguridad humana, como son:

• el equilibrio en el medio acuático,

• la producción de alimentos,

• la salud pública,

• la estabilidad social y política

En las regiones áridas y semi-áridas del mundo, el recurso hidráulico es cada

vez más escaso por lo que cualquier fuente de agua adquiere relevancia para

el desarrollo socioeconómico.

En tal sentido, las aguas residuales generadas por aquellos centros de

población que tienen sistemas de lagunaje para evacuar sus residuos

Page 102: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

líquidos, se convierten en una importante alternativa para la producción

agrícola.

En la actualidad, la reutilización de las aguas residuales es una práctica

mundialmente extendida. Esta tendencia puede deberse a dos grandes

motivos:

• A una actitud conservacionista y sanitarista acorde a un pensamiento de

protección al ambiente, donde países como Alemania, Australia, Canadá,

España o Estados Unidos, depuran el agua residual y luego la reciclan en

pequeñas cantidades. Por lo general, el agua recién tratada se devuelve a

cuerpos de agua superficiales; en parte se destina al riego de campos de

golf, campos deportivos, parques o bosques, y, en menor escala, al riego de

cultivos que no representan riesgo al consumo humano, o

• A una necesidad causada por la escasez o la falta de agua para la

supervivencia o el desarrollo, como es el caso de Brasil, Chile, India, Israel,

Marruecos, México, Colombia o Perú, donde se reutiliza el agua residual en

el desarrollo local o regional, empleándola en actividades agrícolas o

acuícolas (REVISTA FASPIN,2000).

En nuestro caso en particular si analizamos la calidad de las aguas de uno

de los ríos más importantes como es el río Bogotá, podemos observar que

Page 103: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

ha sido afectado por las descargas de aguas negras de los asentamientos

urbanos en su cuenca, especialmente de Bogotá (polución biológica), por los

vertimientos de aguas residuales industriales (polución química, mineral y

orgánica) y por los aportes de materiales sólidos insolubles en el agua

(polución física) a las redes de drenaje natural y/o artificial (CAR, 1999).

Las poblaciones que viven cerca del río Bogotá están expuestos a

contaminantes de origen hídrico a través de una gran variedad de

mecanismos. El consumo de agua tratada o parcialmente tratada es la ruta

de exposición que puede resultar en la mayor absorción de tales

contaminantes. El consumo de alimentos producidos con agua de riego

contaminada o provenientes de ganaderías que toman dicha agua es la

segunda ruta más importante de exposición. Finalmente, el contacto físico

directo en actividades de recreación, baño o trabajo puede también producir

efectos adversos sobre la salud (GASPARD, 1997).

Los efectos adversos sobre la salud causados por la exposición a las aguas

contaminadas del río constituyen el más importante y cierto de los

componentes de la evaluación global del daño. Hay una pequeña duda

acerca de cuáles enfermedades son causadas por la exposición a un

contaminante particular conocido y medido en el río Bogotá. Pero, con el fin

de suministrar una base al proceso de toma de decisiones, se consideró útil

Page 104: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

estimar la concentración de estos parásitos causantes de estas

enfermedades causados por la exposición al río (CAR, 1999).

El agua es un recurso susceptible de contaminación microbiana por parásitos

que llegan a través de las aguas residuales. Algunos de estos parásitos

como el Cryptosporidium spp y la Giardia spp tienen gran efecto en la

salud pública, haciendo que la prevalencia del parasitismo intestinal en

Colombia, principalmente en las áreas rural y urbana marginal, siga siendo

tradicionalmente alta debido a que las condiciones socioeconómicas y

sanitarias son deficientes (CAR, 1997).

En verdad, la contaminación de tal agua y como la vive el hombre

contemporáneo, no es un problema completamente nuevo. Estos

microorganismos al realizar su ciclo metabólico agotan las existencias de

oxígeno disuelto en el agua, creando condiciones sépticas. Además, con los

detritos se aumentan los microorganismos causantes de enfermedades

entéricas y, en general los que causan las llamadas enfermedades de origen

hídrico (H0, 1998).

Estas enfermedades son causadas por bacterias (Salmonella, Shigella, E.

coli) virus (Rotavirus, Enterovirus), entre otros y parásitos intestinales, como

Cryptosporidium sp y Giardia sp, se trasmiten conjuntamente con las

Page 105: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

heces de los enfermos, causando infección a los que beben este tipo de

aguas o alimentos regados con las mismas (BITTON, 1994).

Los protozoos pueden colonizar e infectar la orofaringe, el duodeno, el

intestino delgado, el colon y el tracto urogenital del hombre. La mayoría de

estos parásitos son flagelados. Sin embargo, pueden encontrarse también

infecciones por coccidios.

Estos organismos se trasmiten por vía feco-oral (AIRES, 1991) La

transmisión de protozoos intestinales plantean un problema particular en

jardines, guarderías y escuelas, donde se han documentado varias

epidemias de diarrea por Giardia spp y Criptosporidium spp. Todo esto sin

contar la presencia de estos microorganismos en aguas de playa, como es el

caso de la Giardia, quien ha presentado una gran incidencia.

Se han analizado desde el punto de vista bacteriológico y parasitológico

varias muestras de aguas obtenidas en sitios diferentes de algunas costas y

se observó una concentración moderada de parásitos. A pesar de estos

niveles los quistes de Giardia spp presentes en las aguas de playa generan

un riesgo de salud pública, debido a que los nadadores que se pueden

infectar con bajas dosis del parásito. (HO, 1998).

Page 106: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

En otras partes del mundo, la diseminación de los protozoos se puede

controlar en parte mediante mejora de las condiciones sanitarias, junto con

cloración y filtración de agua potable. Sin embargo, esas medidas quizá

resulten difíciles de aplicar en los países en vía en desarrollo (LLOYD, 1999).

La Giardia spp tiene una distribución mundial, y es mantenida por animales

reservorios, como perros. Las Giardiasis se adquiere al beber agua

contaminada y no tratada adecuadamente, por ingestión de verduras o frutas

contaminadas y no cocidas, o persona a persona por vía feco-oral u oro-anal.

La forma quística es resistente a las concentraciones de cloro utilizadas en la

mayoría de las instalaciones de tratamiento de agua (SAUCH 1985,

BOTERO 1999).

Las especies de Cryptosporidium spp están distribuidas en todo el mundo.

Se ha descrito infección en una amplia variedad de animales, incluyendo

mamíferos, reptiles y peces. La diseminación zoonótica desde los reservorios

animales a los humanos, y el contagio persona a persona por vía feco-oral y

oro-anal son los mecanismos más comunes de infección. El personal

veterinario, los manipuladores de animales y los homosexuales experimentan

un riesgo particular de la infección. Se han descrito muchos brotes

epidémicos en guarderías, donde es común la transmisión feco-oral

(MURRAY, 1997; ROSE,1997).

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Según recientes estudios se ha observado un alto índice de parasitismo en

niños preescolares de Bogotá, originado por muchos parásitos dentro de los

cuales se incluyen (Giardia spp y Cryptosporidium spp), sin contar con los

brotes esporádicos en el mundo entero. Desde 1993 se han reportado

decenas de brotes de enfermedades entéricas asociadas con agua. Uno solo

de estos brotes afectó a mas de 450,000 personas en USA (brote

Milwaukee). Hay una lista larga de enteropatógenos involucrados en la

aparición de estos brotes (ROSE, 1997). Particularmente los protozoarios

Giardia lamblia, Balantidium coli, Entamoeba histolytica y Cryptosporidium

parvum están adquiriendo importancia creciente por su resistencia a los

desinfectantes comunes y a los sistemas convencionales de tratamiento del

agua.

Este hecho de resistencia ha llevado a muchos investigadores a la necesidad

de crear nuevas formas de desinfección, tal es el caso de la utilización de luz

ultravioleta. Se ha observado que los ooquistes de Cryptosporidium

principalmente son resistentes a tratamientos convencionales y a la

desinfección química especialmente al cloro, debido a su tamaño; lo que ha

llevado a la búsqueda de alternativas para la inactivación de los ooquistes.

Page 108: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Uno de los usos más prometedores es la utilización de luz ultravioleta ya que

la irradiación, baja o disminuye los niveles de ooquistes. Para la utilización de

este método se necesita que exista una dosis baja de luz ultravioleta,

demostrando que puede ser muy eficaz en la inactivación de los ooquistes

(CLANCY,2000).

Existe una larga lista de enteropatógenos involucrados con la aparición de

estos brotes. Según información proveniente de países industrializados, una

tercera parte de los brotes de enfermedades entéricas están asociados con

la presencia de G. lamblia y C. parvum en agua que cubría los criterios más

estrictos de calidad bacteriológica. En Colombia no es realmente suficiente lo

que sabemos respecto a la epidemiología de estos enteropatógenos y su

asociación con la contaminación del agua (MINISTERIO DE SALUD, 1999)

La importancia que últimamente está adquiriendo la reutilización de aguas

residuales depuradas como recurso hídrico requiere cada vez con más

fuerza una profundización en el análisis parasitológico de cara a controlar el

posible riesgo sanitario que ello conlleva. Por tanto, se hace necesario insistir

en este aspecto, para que las autoridades lleven a cabo una planificación y

frecuencia de muestreo con que deberían efectuarse los exámenes de

control de rutina (BERTOLUCCI, 1998).

Page 109: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

De igual forma, es necesario iniciar el estudio del comportamiento de este

tipo de protozoos en sistemas de tratamiento de aguas residuales. El sistema

de lagunas de estabilización es el más ampliamente encontrado en nuestro

país y de ahí la importancia de la determinación y cuantificación de la

Giardia spp y Cryptosporidium spp en nuestro medio.

Page 110: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

3. OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

Determinar y cuantificar por medio de inmunofluorescencia directa, la

presencia de Criptosporidium spp y Giardia spp en aguas residuales

(afluente y efluente) provenientes de los sistemas de lagunaje de Chocontá y

Anapoima en las cuencas alta y baja del río Bogotá.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Normalizar una técnica de inmunofluorescencia directa para determinar la

concentración de Giardia spp y Cryptosporidium spp en aguas residuales.

Determinar la eficacia de los sistemas de lagunaje en la depuración de las

aguas residuales del río Bogotá con énfasis en la reducción de

Criptosporidium spp y Giardia spp.

Page 111: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Determinar si existe correlación entre los parámetros físico-químicos y la

concentración de Giardia spp y Cryptosporidium spp provenientes de

sistemas de lagunaje de la cuenca alta (Chocontá) y la cuenca baja

(Anapoima), del río Bogotá.

Page 112: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

4. MATERIALES Y METODOS

4.1 Ubicación

El proyecto se llevo a cabo en el laboratorio de Saneamiento y Biotecnología

Ambiental de la Pontificia Universidad Javeriana.

4.2 Zona de muestreo

Para determinar y cuantificar por medio de inmunofluorescencia directa, la

presencia de Giardia spp y Cryptosporidium spp en aguas residuales, se

tomaron como puntos de muestreo dos sistemas de lagunaje ubicados en la

cuenca alta (Chocontá) y cuenca baja(Anapoima) del río Bogotá. Estas zonas

además de diferenciarse en su ubicacion, temperatura y características

fisicoquímicas del agua, pertenecen al plan de recuperación del río Bogotá.

4.2.1 Sistema de lagunaje Chocontá (Cuenca alta)

El río en esta zona recibe los vertidos de la industria de curtidos de cuero,

ladrilleras, molinos, mataderos, porquerizas, vertidos de producción agrícola

y avícola. Además recibe aguas de origen doméstico, las cuales no tiene

Page 113: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

ningún tipo de tratamiento antes de ser vertidas al alcantarillado. El

alcantarillado es de tipo combinado y atiende al 95% de la población urbana.

La población actual es de 18.194 habitantes al 30 de junio, según la

proyección dada por el censo del 1993.

La planta de tratamiento de aguas residuales de Chocontá esta funcionando

desde septiembre de 1996 y se encuentra localizada en la margen izquierda

del río Bogotá a 600 m del casco urbano de la población de Chocontá. Esta

conformada por dos lagunas facultativas cuyo caudal de manejo es de

1555m 3/día. La laguna número 1 almacena 27.000 m3 de agua y tiene una

profundidad de 2,50 m con un tiempo de retención hidráulica de 18 días; el

área total es de 10.457 m2. La laguna número 2 almacena 33.000 m3 de

agua y tiene una profundidad de 2,00 m con un tiempo de retención

hidráulica de 35 días; el área total es de 19.656 m2.

La laguna 1 esta dividida en dos sectores por medio de una cortina

separadora de geomembrana. De allí pasa a dos pozos y posteriormente a la

laguna 2 que esta dividida en 4 sectores. Finalmente va al río Bogotá (CAR,

1997).

Ambas lagunas cuentan con pantallas deflectoras de geomembrana y

protección de taludes con geotextit y geomembrana. EI caudal de entrada es

de 13,2 l/seg a la entrada y de 9,9 l/seg a la salida (CAR, 1998).

Page 114: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

4.2.2 Sistema de lagunaje de Anapoima (Cuenca baja)

La planta de tratamiento de aguas residuales del municipio de Anapoima se

diseño y construyó para tratar las aguas domésticas provenientes del casco

urbano. Se encuentra situada a 3 kilómetros hacia el sur de la cabecera

municipal y su alcantarillado es de tipo combinado.

La tecnología seleccionada para la depuración de las aguas residuales del

municipio de Anapoima, corresponde a un tratamiento anaerobio mediante

reactores UASB seguidos de dos lagunas de estabilización. En el reactor se

desarrolla un proceso biológico con condiciones anaerobias que

descomponen la materia orgánica.

El sistema de tratamiento consiste de tres operaciones principales: unidad

preliminar, modulo de tratamiento primario y sistema de tratamiento

secundario. El sistema preliminar consiste en un conjunto de rejillas que

retienen sólidos. El módulo de tratamiento primario consiste en dos unidades

que funcionan como desarenadoras y sedimentadoras. El sistema secundario

consiste en dos unidades de tratamiento anaerobio que funcionan en paralelo

y dos lagunas de estabilización facultativas en serie.

Page 115: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Los dos reactores UASB (Upflow Anaerobic Sludge Blanket) o flujo

ascendente a través de un manto de lodos anaerobios tienen unas

dimensiones de 4.70 m de profundidad y 8 m de diámetro. EI tiempo de

retención hidráulico es de 4-5 horas.

Las lagunas funcionan en serie y tienen una profundidad de 2 m. La laguna

primaria tiene un área de 3825 m2 y una capacidad de 7650 m3. La laguna

secundaria tiene un área de 4050 m2 y una capacidad de 8100 m3. El tiempo

de retención hidráulico es de 5 días.

La planta fue diseñada para tratar un caudal de 19 L/s. En la actualidad se

trata un caudal de 18 L/s. La población actual es de 10.616 habitantes a junio

30 del 2001 según el censo de 1993.

4.3 Puntos de muestreo

Para el estudio se escogieron 2 puntos de muestreo, uno en el sistema de

lagunaje de la cuenca alta (Chocontá) y otro en el sistema de lagunaje de la

cuenca baja (Anapoima), teniendo en cuenta la salida y la entrada de cada

laguna respectivamente.

Page 116: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

El número total de muestras fue de 28, tomando 13 en la cuenca alta y 15 en

la cuenca baja.

4.3.1 Sistema de tratamiento de aguas residuales de Chocontá

FIGURA 6. Laguna de tratamiento de aguas residuales del

municipio Chocontá-cuenca alta

Fuente: Autoras; 2001

A continuación se encuentran algunas figuras de los puntos de muestreo

Page 117: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

FIGURA 7. Entrada de la planta de tratamiento, después de las

rejas de desbaste (Chocontá)

Fuente: Autoras; 2001

FIGURA 8. Salida del sistema de lagunaje (Chocontá)

Fuente: Autoras; 2001

Ø Punto 1:

Page 118: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Ubicado a la entrada del sistema de lagunaje. El aspecto del agua en la

mayoría de los muestreos se caracteriza por un olor a moho típico de agua

residual fresca o a podrido típico de agua residual séptica, que ocurre debido

a la descomposición de los productos contaminantes.

El agua residual presentaba una tonalidad café-grisácea, indicador de

residuos frescos. Adicionalmente se podía observar la presencia de sólidos

tipo arena o excrementos convirtiéndola en muy turbia.

Este tramo que se encuentra muy cerca al nacimiento, presenta

contaminación debido al vertimiento de las aguas negras de la población,

además de los vertimientos orgánicos de las curtiembres ubicadas en el

sector.

Ø Punto 2:

Se encuentra ubicado a la salida del sistema de lagunaje. El agua se

observaba de color verdoso, debido al crecimiento de algas. Su apariencia

era ligeramente turbia en comparación con el agua de entrada. El olor era

variado pero más tolerable.

Page 119: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

4.3.2 Sistema de tratamiento de aguas residuales de Anapoima

FIGURA 9. Laguna de tratamiento y sistema UASB del

municipio de Anapoima - cuenca baja

Fuente: Autoras; 2001

A continuación se encuentran algunas figuras de los puntos de muestreo

FIGURA 10. Entrada de la planta de tratamiento, después de

las rejas de desbaste. Fuente: Autoras; 2001

Page 120: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

FIGURA 11. Salida del sistema de lagunaje (Cuenca baja)

Fuente: Autoras; 2001

Ø Punto 1:

Ubicado a la entrada del sistema de lagunaje. El aspecto del agua en la

mayoría de los muestreos presentaba un olor característico en algunas

oportunidades a moho típico de agua residual fresca. En otras ocasionesa

huevo podrido “insoportable”; típico de agua residual séptica, que ocurre

debido a la descomposición de productos o variados olores debido a los

diferentes tipos de elementos: sulfurosos, nitrogenados, materia fecal, ácidos

orgánicos, etc.

La apariencia del agua residual tenía una tonalidad de gris a negro. El color

negro caracteriza al residuo de descomposición parcial, adicional se podía

observar la presencia de sólidos tipo arena o excrementos convirtiéndola en

muy turbia.

Page 121: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Este tramo conforma realmente una alcantarilla abierta, de condiciones

permanentemente sépticas y pestilentes, por lo general el oxígeno disuelto

alcanza sus valores más bajos.

Ø Punto 2:

Se encuentra ubicado a la salida del sistema de lagunaje. El agua se observa

de color verdoso, debido al crecimiento de algas. Su apariencia era

ligeramente turbia en comparación con el agua de entrada. El olor era

variado pero más tolerable; esto se debía a la presencia de oxígeno disuelto

y ya no existía producción de sulfuro de hidrógeno establecido por la

descomposición anáerobia de los sólidos.

Para tener claro el estado del clima en el momento del muestreo se tuvieron

en cuenta los resultados de precipitación suministrados por la CAR, con

respecto a las precipitaciones ocurridas. Ver TABLA 6.

4.4 Toma de la muestra

El análisis parasitológico, fue realizado inicialmente durante los días lunes y

miércoles; en Chocontá se escogieron los meses de Septiembre a

Noviembre de 1999 en este período se puso la técnica a punto,

posteriormente se analizaron los meses de Mayo de 2000 y Febrero, Marzo

y Abril de 2001.

Page 122: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

TABLA 6. Precipitaciones ocurridas durante los días del muestreo

PRECIPITACIONES

CHOCONTA ANAPOIMA

FECHA mm FECHA mm

OCT 11 1999 0.5 JUL 12 2000 0.0

OCT 13 1999 0.1 JUL 17 2000 11.0

MAY 12 2000 0.2 JUL 24 2000 0.0

MAY 15 2000 0.0 JUL 26 2000 11.9

MAY 17 2000 0.0 AGO 21 2000 0.0

FEB 14 2001 0.0 AGO 27 2000 0.0

FEB 21 2001 0.0 FEB 26 2001 0.0

MAR 4 2001 0.0 FEB 28 2001 0.0

MAR 24 2001 1.5 MAR 4 2001 0.0

MAR 25 2001 0.0 MAR 5 2001 18.7

ABR 27 2001 0.0 MAR 7 2001 0.9

ABR 28 2001 0.0 MAR 11 2001 0.0

ABR 29 2001 0.0 MAR 23 2001 0.5

--- --- MAR 24 2001 0.9

--- --- MAR 25 2001 0.0

Fuente: CAR, 2001

Para Anapoima los muestreos se analizaron durante los meses de Julio y

agosto de 2000 y los últimos muestreos analizados fueron durante los

meses de Febrero y Marzo de 2001.

Page 123: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

TABLA 7. Días de muestreo en Chocontá

Día Lunes Martes Miercoles Jueves Viernes Sabado Domingo Oct 11 1999 X Oct 13 1999 X May 12 2000 X May 15 2000 X May 17 2000 X Feb 14 2001 X Feb 21 2001 X Mar 4 2001 X Mar 24 2001 X Mar 25 2001 X Abr 27 2001 X Abr 28 2001 X Abr 29 2001 X

TABLA 8. Días de muestreo en Anapoima

Día Lunes Martes Miércoles Jueves Viernes Sabado Domingo Jul 12 2000 X Jul 17 2000 X Jul 24 2000 X Jul 26 2000 X Ago 21 2000 X Ago 27 2000 X Feb 26 2001 X Feb 28 2001 X Mar 4 2001 X Mar 5 2001 X Mar 7 2001 X Mar 11 2001 X Mar 23 2001 X Mar 24 2001 X Mar 25 2001 X

Page 124: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

4.4.1 Conservación y transporte de la muestra

El procesamiento del agua para la obtención de los floculos se realizó dentro

de las 24 horas siguientes de recogida la muestra. El análisis parasitológico

se realizaba a las dos semanas siguientes por medio de inmunofluorescencia

directa, manteniéndose estas muestras en refrigeración sin ningún riesgo de

variación con los resultados (ROSE J, 1989).

El tiempo de transporte no fue superior a 2 horas en la cuenca alta y baja.

Durante este tiempo las muestras se mantuvieron a una temperatura

ambiente.

4.4.2 Análisis parasitológico de las muestras

Los procedimiento de inmunofluorescencia realizado para el análisis de los

indicadores de contaminación parasitaria en sistemas de lagunaje de la

cuenca alta y baja del río Bogotá comprendieron: un protocolo de floculación

orgánica por cloruro de calcio y una visualización y recuento por medio de

inmunofluorescencia directa (Kitt Meryfluor) para Giardia y

Cryptosporidium.

4.5 PROTOCOLO DE FLOCULACIÓN ORGÁNICA POR CLORURO DE

CALCIO

Este protocolo de floculación consiste en la adición de una serie de reactivos

(CaCl2 1M, NaHCO3 1M, NaOH 2M, Acido sulfámico) a una muestra de agua

Page 125: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

residual, para que a través de procesos químicos se obtengan una

concentración tanto de quistes como de ooquistes en la muestra.

El protocolo de floculación orgánica por cloruro de calcio se encuentra en el

anexo II y III.

4.5.1 Volumen de agua a flocular:

El volumen de agua a flocular dependió del sitio de toma de la muestra, de tal

manera que se utilizaron cantidades diferentes de reactivos, teniendo en

cuenta si eran 2 litros o 10 litros la muestra a analizar. Cuando se tomaron 2

litros de agua en la entrada del sistema de lagunaje, se hacia debido a que

el agua en este sitio tiene mayor concentración de parásitos, hecho que

facilitaba la obtención de Giardia spp y Cryptosporidium spp, y en la salida

10 litros de agua pues allí los parásitos se encontraban en menor

concentración una vez eran sometidos al sistema de tratamiento.

4.5.2 Análisis Fisicoquímicos

En la tabla 9 se describen cada uno de los instrumentos utilizados para la

medición de los parámetros fisicoquímicos, con su respectiva unidad de

medición.

Page 126: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

TABLA 9 . Instrumentos y medidas utilizadas para el análisis de los

parámetros físico-químicos.

PARÁMETRO INSTRUMENTO UNIDADES DE MEDICION

DBO / DQO Medido en el laboratorio de acuerdo a Standar methodos

mg/l

Conductividad Medido In situ con el equipo de campo HACH para medir Conductividad/SDT/Temperatura

Milisiemens por centímetro (mS/cm)

Temperatura Medido In situ con el equipo de campo HACH para medir Conductividad/SDT/Temperatura

Grados centígrados °C

SDT Medido In situ con el equipo de campo HACH para medir Conductividad/SDT/Temperatura

Gramos por litro g / l

Fuente: GOMEZ 2000

4.6 ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE VARIABLES

Para el desarrollo del proyecto se tomaron 28 muestras en total. En la

cuenca alta 13 y 15 en la cuenca baja en el período de septiembre de 1999

a abril de 2001. El tamaño inicial del muestreo era de 30, correspondiendo 15

a cada uno de los sistemas de lagunaje en cada una de las cuencas, pero

sólo se realizaron 13 en Chocontá por problemas de seguridad.

En la cuenca alta se obtuvieron 3 muestras que inicialmente fueron

utilizadas para la puesta a punto de la técnica . En cada uno de los

muestreos se analizaron parámetros físico-químicos (DBO (mg/l), DQO

Page 127: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

(mg/l), SDT (g/L),conductividad (mS/cm)) y cada uno de los indicadores

parasitarios anteriormente nombrados. Además de otras variables a medir en

este estudio se tuvieron en cuenta los valores de: precipitación (mm) y

temperatura (oC). De manera simultanea se llevó a cabo, la determinación y

el recuento de quistes de Giardia spp y Ooquistes de Cryptosporidium spp

presentes en un litro de agua residual por medio de inmunufluorescencia

directa.

La técnica estadística utilizada para el análisis de los datos obtenidos durante

la experiencia fue la t de student para muestras relacionadas; buscando

verificar si hay diferencias en el número promedio de quistes de Giardia spp

y ooquistes de Cryptosporidium spp entre la salida y la entrada de los

sitemas de lagunaje de Chocontá y Anapoima.

Por otra parte para el análisis de las variables independientes analizadas en

diferentes condiciones , en este caso los paramétros físico-químicos DBO,

DQO, precipitación, temperatura, SDT, y conductividad; se utilizó la prueba

binomial para dos tipos de muestras. Dicho análisis permite determinar si

existe reducción por parte de la planta de tratamiento y si los valores

determinados para los análisis físico-químicos influyen sobre la eliminación

de los parásitos en el sistema de lagunaje.

Page 128: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Utilizando estas variables se formuló como hipótesis nula (Ho) que los

parámetros físico- químicos medidos en la experiencia afectan las

concentraciónes de los indicadores de contaminación parasitaria como

(Giardia spp y Cryptosporidium spp) en un sistema de lagunaje . Como

hipótesis alterna (Hi) los parámetros físico-químicos medidos en la

experiencia no afectan la concentración de indicadores de contaminación

parasitaria en un sistema de lagunaje.

Para probar la hipótesis se utilizo el estadístico de prueba t student con un

nivel de significancia del 0.05.

Las hipótesis nulas son rechazadas cuando t calculada es mayor que la t

teórica : to > t teórica → rechazada. Por ejemplo:

Ho: La temperatura afecta la concentración de Giardia spp en la planta de

tratamiento de Anapoima.

Hi: La temperatura no afecta la concentración de Giardia spp en la planta de

tratamiento de Anapoima

Ho: t = 0

Hi: t ≠ 0

Después de planteadas las hipótesis se determinó el nivel de error tipo 1 con

un α = 0.05 = 95% y luego se halla la t de prueba o calculada, la cual se

Page 129: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

comparó con el t teórico, entonces si el t calculado resulta menor que el

teórico la hipótesis nula no se puede rechazar como en este caso. Por tanto

en el ejemplo se rechazó la Ho. Esto significa que, la temperatura no afecta

la concentración de indicadores parasitarios. En caso contrario, si la t

calculada fuera mayor que la teórica, la hipótesis nula se rechazaría. Esto

significa que la temperatura si afecta la concentración de indicadores

parasitarios.

Todas las operaciones realizadas para el desarrollo del análisis estadístico,

se llevaron a cabo en el programa Statistical Packaege for Social Science (

SPSS ).

Page 130: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …
Page 131: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

5. RESULTADOS Y DISCUSION

Estos resultados fueron obtenidos por medio del uso de inmunofluorescencia

directa para Giardia spp y Cryptosporidium spp. La técnica de

inmunofluorescencia directa como se menciono anteriormente consiste en la

unión del antígeno o anticuerpo marcado con isotioscianato de fluoresceína a

su anticuerpo o antígeno respectivamente y la detección del producto marcado

mediante el microscopio de fluorescencia. Este tipo de procedimiento utiliza un

anticuerpo de tipo monoclonal dirigido contra un componente localizado en la

pared de estos parásitos.

5.1 Análisis de las concentraciones de Giardia spp y Cryptosporidium

spp en las plantas de tratamiento de Chocontá

En la siguiente tabla (10) se encuentran los datos de las concentraciones

obtenidas de Giardia spp y Cryptosporidium spp a la entrada y salida de las

plantas depuradoras de Chocontá.

CHOCONTA GIARDIA UL/L CRYPTOSPORIDIUM UL/L

ENTRADA SALIDA % REDUCION ENTRADA SALIDA % REDUCION 2.82 3.6 -27.65 4.04 2.6 35.64

Page 132: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

4.26 1.81 57.52 3.19 2.77 13 4.81 0 100 0 0 100 6.26 0 100 0 4.81 0 5.6 4.81 14.11 5.3 0 100

6.02 5.3 11.97 0 4.81 0 5.2 0 100 0 0 100

6.26 0 100 0 0 100 6.14 0 100 0 0 100 6.12 4.81 21.41 0 0 100 6.54 5.6 14.38 5.11 0 100 6.35 0 100 4.81 0 100 5.93 5.51 7.09 0 0 100

Tabla 10. Concentración de Giardia spp y Cryptosporidium spp a la

entrada y salida la planta de tratamiento de Chocontá.

Pasaremos a analizar los resultados obtenidos para Giardia spp y

Cryptosporidium spp en la planta de tratamiento de Chocontá.

CUENCA ALTA ENTRADA SALIDA

INDICADOR PARASITARIO

PROMEDIO (UL) /L

MÁXIMO (UL) /L

MINIMO (UL) /L

PROMEDIO (UL) /L

MÁXIMO (UL) /L

MINIMO (UL) /L

% REDUCCION

GIARDIA SPP 5.56 6.54 2.82 2.42 5.6 0 65.5

CRYPTOSPORIDIUM SPP 1.73 5.3 0 1.73 4.81 0 73.0

Tabla 11. Resultados promedio, máximo, mínimo y porcentaje de

reducción de los indicadores de contaminación parasitaria en la Planta de

Tratamiento de Chocontá

En la tabla 11 se observa que los valores promedio de Giardia spp a la

entrada es de 5.56 UL, con valores máximos de 6.54 UL y mínimos de 2.82 UL.

Si analizamos por otra parte las concentraciones de Giardia spp a la salida se

observa un promedio de 2.42 UL con un valor mínimo de 0 UL y un valor

Page 133: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

máximo de 5.6 UL observándose además un porcentaje de reducción de

aproximadamente del 65.5%.

Estos resultados coinciden con los obtenidos por V, ROUQUET, 2000. Este

autor analizo la incidencia de Giardia spp y Cryptosporidium spp en aguas

que serían vertidas al río Sena de París. Después de realizar una serie de

métodos analíticos que incluían concentración, purificación y ensayos de

inmunofluorescencia a las muestras de agua, pudo observar que la cantidad de

ooquistes de Cryptosporidium spp (103 - 104 / 100 L) era más baja que la

concentración de Giardia spp ( 10 5 - 10 6 / 100 L) debido a que la eliminación

de dicho parásito se ve influida por la velocidad de sedimentación, lo que se

explica por su afinidad con las partículas suspendidas en el agua. Visto de otra

manera estos indicadores parasitarios poseen cargas eléctricas en su

membrana que al estar en contacto con las partículas suspendidas en el agua

generan un campo magnético que facilita la sedimentación.

Page 134: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Gráfica 1. Concentración de quistes de Giardia spp (UL/1000ml) a la

entrada y salida de la planta de Tratamiento de Chocontá

Como se observa en la gráfica 1 la reducción de quistes de Giardia spp está

entre 2.82 y 6.54 UL. De la totalidad de las muestras 13, correspondientes a la

entrada del sistema de lagunaje de Chocontá, los quistes de Giardia spp en la

muestra 1 presentaron una concentración no uniforme muy inferior al resto de

los muestreos. Para las muestras 2 y 3 aún cuando se observó un incremento

significativo en comparación con la muestra 1 continuaba siendo inferior el

comportamiento con respecto al presentado desde la muestra 4 a la muestra

13, los cuales reflejaron una concentración de quistes de Giardia spp que

oscilaba entre 5.2 UL/1000 ml y 6.54 UL/1000 ml. Estos últimos valores si se

analizan con detenimiento muestran que en la mayoría de los casos

pertenecen a días correspondientes a fines de semana, cuando la población

aumenta debido a la participación en eventos religiosos, actividades recreativas

GIARDIA A LA ENTRADA Y SALIDA (CHOCONTA)

0

1

2

3

4

5

6

7

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 NUMEROS DE MUESTREOS

CO

NC

EN

TR

AC

ION

DE

GIA

RD

IA E

N U

L/1

00

0 m

l

ENTRADA SALIDA

Page 135: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

y visitas al comercio, por lo tanto aumenta el caudal de vertido al alcantarillado.

Se considera que este comportamiento no uniforme de la muestra 1 en

comparación con las demás muestras que se comportaron de manera

uniforme, se presenta porque no existieron cambios relevantes a excepción del

aumento de la población que incidieran en el afluente. Por otro lado si se tiene

en cuenta el valor obtenido en el primer muestreo en el cual se obtuvo un valor

muy inferior con relación a los demás, muy probablemente se debió a que las

descargas del alcantarillado no fueron lo suficientemente significativas, además

no se conoce con certeza la intensidad de la lluvia que ocurrió ese día. Los

datos de las lluvias fueron suministrados por la persona encargada de la planta,

ya que estos datos suministrados eran más confiables que los proporcionados

por la CAR, los cuales eran tomados de la estación pluvial más cercana a la

planta. Según lo indicado por ROSE 2000, quien tras un estudio realizado en

Pensilvania pudo comprobar que las precipitaciones tienen un mayor efecto

sobre en la calidad del agua. Como se sabe; más del 60% de los residuos

urbanos son transportados durante las tormentas. Esta afirmación fue

demostrada a través de las concentraciones de Giardia spp y

Cryptosporidium spp en los arroyos urbanos en tiempos de sequía. En este

tiempo se observó que las concentraciones para Giardia spp van de 13 a

6579 quistes/100L y para Cryptosporidium spp de 5 a 105 ooquistes/L. Sin

embargo, durante el tiempo de lluvia se observan concentraciones que van de

9000 a 283000 quistes/L para Giardia spp y de 250 a 40000 ooquistes/L para

Cryptosporidium spp , estas concentraciones se vieron en afluentes que

Page 136: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

afectan el suministro de agua de una localidad. Todo esto era debido a la

escorrentía y a las suspensiones ocasionadas de desagüe de la tormenta.

Los resultados presentados por los quistes de Giardia spp en la salida de la

planta de tratamiento de Chocontá al contrario de las concentraciones de

entrada presentaron un comportamiento heterogéneo, con resultados que

oscilaban entre 0 UL/1000ml y 5.6 UL/1000ml. Sin embargo, se presentaron en

seis de las muestras valores de 0 UL/1000ml y en cinco muestras cuyos

resultados estaban dentro de 4.8 UL/1000ml y 5.6 UL/1000ml, los dos restantes

fueron de 1.8 UL/1000ml.

Si analizamos la concentración de quistes de Giardia spp a la salida del

muestreo 1, podemos observar que se elimina o reduce mayor cantidad de

quistes que lo ingresado, este hecho se podría justificar de la siguiente manera:

Hay que tener en cuenta que el agua que ha sido tomada a la salida de la

planta de tratamiento de Chocontá no garantiza que corresponda al agua que

entro, aún sabiendo que la planta presenta un funcionamiento estable, y que

esta planta es de construcción reciente, no tiene tanta relevancia como el

tiempo de retención hidráulica que corresponde al tiempo medio en que el agua

permanece en el sistema, que en esta caso es de 43 días. Por otra parte el día

que fue tomada la muestra correspondía al lunes. La muestra fue recolectada

en las horas de la mañana (9:00a.m). MENDOZA 2000 observó que existen

variaciones en el caudal que entra a la planta de tratamiento y que esta

variación esta relacionada con la hora del día y el día de la semana, de

Page 137: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

acuerdo con los usos y costumbres de la población, además de la temperatura

y de la precipitación atmosférica de la región.

Por otra parte hay que tener en cuenta los cambios morfológicos que ocurren

en el parásito que de forma indirecta pueden influir en dicho resultado. Los

procesos de desenquistamiento o exquistamiento que son parte del ciclo de

vida de la Giardia spp, ocurren en un período de 20 minutos a 41/2 horas en

condiciones de temperatura favorable (SOTTO, 1985). Si observamos la

temperatura en esos días se encontraba alrededor de 18°C (Ver anexo VII) y

lo ideal para que exista desenquistamiento es una temperatura entre 18°C y

21°C entre cinco y 24 días , este hecho aunque no ocurre con frecuencia es

determinante del aumento de la concentración de quistes.

El comportamiento del Cryptosporidium spp a la entrada y salida de la planta

de tratamiento de Chocontá de acuerdo con lo observado en la tabla 10,

muestra a la entrada, una concentración promedio de Cryptosporidium spp

de 1.73 UL, encontrándose un valor mínimo de 0 y un máximo de 5.3 UL. Si se

analizan además los resultados obtenidos a la salida se puede observar que

existe un porcentaje de reducción del 73%, encontrándose un valor mínimo de

0 y un máximo de 4.81 UL. Las diferencias de concentración entre Giardia

spp y Cryptosporidium spp, coinciden con los resultados de estudios

realizados por CARRARO 2000, quien buscaba evaluar el impacto de una

planta de tratamiento a nivel municipal en la reducción de quistes y ooquistes

de Giardia spp y Cryptosporidium spp respectivamente. Observó que todas

Page 138: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

las muestras del efluente contenían concentraciones bajas de Giardia spp y

Cryptosporidium spp entre 0.139 +/- 0.510 quistes/L y 0.21 +/- 0.06

ooquistes/L respectivamente. Esto se relacionó con las altas concentraciones

de los anteriores parásitos observadas en el alcantarillado que oscilaban entre

53.6 +/- 68 quistes/L y 4.5 +/- 0.3 ooquistes/L. La incidencia de la mayor

concentración de Giardia spp por encima de Cryptosporidium spp tanto en el

afluente como en el efluente probablemente está relacionado con la

contribución de descargas de origen humano. De igual manera confirma que

las plantas de tratamiento tienen impacto en la reducción de Giardia spp y

Cryptosporidium spp en aguas residuales contaminadas.

En la gráfica 2 se observa la concentración de Cryptosporidium spp a la

entrada y salida de la Planta de tratamiento de Chocontá.

CRYPTOSPORIDIUM ENTRADA Y SALIDA DE CHOCONTA

0

1

2

3

4

5

6

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 NUMEROS DE MUESTREO

CO

NC

EN

TR

AC

ION

DE

CR

IPT

OS

PO

RID

IUM

EN

UL

/10

00

ENTRADA SALIDA

Page 139: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Gráfica 2. Concentración de ooquistes de Cryptosporidium spp

(UL/1000ml) a la entrada y salida de la planta de Tratamiento de Chocontá.

En la gráfica 2 se observan las concentraciones de Cryptosporidium spp. Del

total de las muestras el 62% obtuvo una concentración de 0 UL/1000 ml a la

salida y el 38% restante correspondía a una concentración de ooquistes de

Cryptosporidium spp que oscilaba entre 3.2 UL/1000 ml y 5.3 UL/1000ml.

Cuando se observaron valores de 0 UL/1000ml en el análisis de las muestras

por medio de Inmunofluorescencia Directa es por que muy posiblemente

ocurrió alguno de los siguientes hechos:

• La sensibilidad de la técnica es más baja que la cantidad de parásitos

que realmente existen en el punto de muestreo.

• En el momento de la toma de la muestra de entrada no existió un

vertido importante por parte del matadero y del municipio a las aguas

del alcantarillado.

• El día en que fueron tomadas las muestras influye, porque todos los días

no se presentaban las mismas condiciones (población, hora, actividades

cotidianas).

• El agua que fue recogida a la salida no garantiza que corresponda al

agua de entrada porque hay que tener en cuenta las precipitaciones y el

tiempo de retención hidráulica de la laguna. Lo ideal había sido conocer

el tiempo de retención hidráulica y tomar dos muestras: en tiempo 0 y a

los 43 días en Chocontá y a los 15 días en Anapoima. Sin embargo,

Page 140: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

obviamos esto debido a que el funcionamiento de la laguna es estable.

Lo que hace suponer que el agua que sale ha sido sometida al mismo

tipo de tratamiento durante el tiempo que se hizo la evaluación.

Si se analiza por otra parte la concentración de ooquistes de Cryptosporidium

spp a la salida de la planta de tratamiento de Chocontá, en la mayor parte de

las muestras se observaba una reducción del 88.3%. Pero si se analizan las

muestras 4 y 6 la cantidad de ooquistes a la entrada era baja pero cuando se

observaba la salida existía mayor reducción de lo que inicialmente ingresaba.

Este fenómeno ocurría por mecanismos muy similares a los ya expuestos para

la Giardia spp.

5.2 Resultados del análisis estadístico de Giardia spp y Cryptosporidium

spp en la Planta de Tratamiento de Chocontá

CHOCONTA ENTRADA Y SALIDA

INDICADOR PARASITARIO DS to t teörico PROMEDIO P

GIARDIA SPP 2.7174 2.3060 4.171 3.1438 0.001

CRYPTOSPORIDIUM SPP 3.1830 2.3060 0.650 0.5738 0.528

Tabla 12. Resultados del análisis estadístico de Giardia spp y

Cryptosporidium spp en la Planta de Tratamiento de Chocontá

De acuerdo al análisis estadístico realizado se encontró que nuestros

resultados para la Giardia spp presentan una p= 0.001 lo que indica que el

Page 141: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

número de Giardia spp a la entrada es > a la salida. Si se analiza el dato

proporcionado por la p= 0.528 para el Cryptosporidium spp se puede

observar que el promedio de concentración para este parásito es < a la entrada

que a la salida. Los resultados obtenidos para Giardia spp se interpretan

como una reducción importante de este parásito, una vez es sometido al

sistema de lagunaje. Esta reducción esta relacionada con los diferentes

factores ( temperatura, pH, Oxígeno disuelto, tiempo de retención hidráulica),

que influyen en la inactivación o eliminación del parásito en el sistema. En el

caso del Cryptosporidium spp, los resultados son muy irregulares, y es difícil

concluir si los factores citados anteriormente influyen el la reducción de este

parásito.

5.3 Análisis de las concentraciones de Giardia spp y Cryptosporidium

spp en las plantas de tratamiento de Anapoima

En la siguiente tabla se encuentran los datos obtenidos de Giardia spp y

Cryptosporidium spp en la entrada y salida de la planta de tratamiento de

Anapoima

ANAPOIMA

GIARDIA UL/L CRYPTOSPORIDIUM UL/L

ENTRADA SALIDA % REDUC G ENTRADA SALIDA % REDUC C 5.41 0 100 5.11 0 100

6.2 0 100 5.3 0 100

0 0 0 0 0 0

6.66 5.88 11.72 0 4.64 0

7.1 5.66 20.29 5.11 0 100

6.38 4.81 24.61 0 0 0

6.5 0 100 0 0 0 6.55 0 100 4.81 0 100

6.44 0 100 0 0 0

5.3 0 100 4.81 0 100

Page 142: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

6.73 0 100 0 0 0

6.68 4.81 28 4.81 4.81 0

5.3 5.41 -2.07 0 0 100

6.02 0 100 0 0 100

6.07 0 100 5.11 0 100

Tabla 13. Concentración de Giardia spp y Crypstosporidium spp a la

entrada y salida de la planta de tratamiento de Anapoima

Pasaremos a analizar los resultados obtenidos para Giardia spp y

Cryptosporidium spp en la planta de tratamiento de Anapoima.

CUENCA BAJA ENTRADA SALIDA

INDICADOR PARASITARIO PROMEDIO

UL /L MÁXIMO

UL /L MINIMO

UL /L PROMEDIO

UL /L MÁXIMO

UL)/L MINIMO

UL /L % REDUCCION

GIARDIA SPP 5.82 7.1 0 1.77 5.88 0 53.8

CRYPTOSPORIDIUM SPP 2.34 5.3 0 0.63 4.81 0 53.3

Tabla 14. Resultados promedio, máximo, mínimo y porcentaje de

reducción de los indicadores de contaminación parasitaria en la Planta de

Tratamiento de Anapoima

De acuerdo a la tabla 14 podemos observar que para Giardia spp a la entrada

del sistema de lagunaje se observan unos valores que oscilan entre 0 y 7.1 UL

con un promedio de 5.82 UL , pero si observamos la salida es evidente la

reducción del parásito en un 53.8%.

En la gráfica 3 podemos observar las concentraciones de Giardia spp a la

salida y entrada de la planta de tratamiento de Anapoima.

Las concentraciones de Giardia spp a la entrada de la planta de tratamiento

presentan un comportamiento homogéneo que oscila entre 5.3 UL/1000 ml y

Page 143: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

6.6 UL/1000 ml para las quince muestras en total, excepto la concentración

obtenida en la muestra 3 que presentó valor de 0 que se puede explicar por los

factores mencionados anteriormente para el caso del Cryptosporidium spp.

El comportamiento homogéneo confirma que existe una contaminación

permanente de origen fecal. Además si analizamos con detenimiento las

concentraciones son muy similares en todos los puntos de muestreo, hecho

debido a que reciben todos los vertidos provenientes del matadero del pueblo,

aumento de la población; además la temperatura proporcionada es la

adecuada para la proliferación de microorganismos como la Giardia spp, sin

dejar de lado la incidencia de moscas de la región que mantienen viables los

quistes por 24 horas y algunas especies de cucarachas que sirven de

reservorio por varios días según un estudio realizado por el INS en 1985.

Gráfica 3. Concentración de quistes de Giardia spp (UL/1000ml) a la

entrada y salida de la planta de Tratamiento de Anapoima.

GIARDIA A LA ENTRDA Y SALIDA (ANAPOIMA)

0

1

2

3

4

5

6

7

8

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 NUMEROS DE MUESTREO

CO

NC

EN

TR

AC

IN D

E G

IAR

DIA

EN

UL

/10

00

ml

ENTRADA SALIDA

Page 144: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Si analizamos las concentraciones de Giardia spp a la salida de la planta de

tratamiento, para diez de las muestras la reducción fue del 100% y para las

cinco muestras restantes los resultados se encontraron entre 4.81 UL/1000 ml

y 5.8 UL/1000 ml. Estos valores comparados con los encontrados a la entrada

presentan una reducción entre el 11% y el 28%. Esto se debe posiblemente a

que la temperatura se encontraba entre 16°C y 28°C lo que facilitaba el

enquistamiento según lo indicado por SOTTO en 1985.

Pasemos ahora a analizar el comportamiento del Cryptosporidium spp a la

entrada y salida de la planta de tratamiento de Anapoima. De acuerdo con lo

observado en la tabla 14. Podemos observar que a la entrada el

Cryptosporidium spp tienen una concentración promedio de 2.34 UL, con un

valor mínimo de 0 y un máximo de 5.3 UL. En comparación con los resultados

obtenidos a la salida se puede apreciar una reducción del 53.3% y los valores

mínimos de 0 y los máximos de 4.81 UL. En estos datos se puede observar

que hay una coincidencia con lo anteriormente expuesto por CARRARO, 2000.

En la gráfica 4 se observa la concentración de Cryptosporidium spp a la

entrada y salida de la Planta de tratamiento de Anapoima.

Page 145: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Gráfica 4. Concentración de ooquistes de Cryptosporidium spp

(UL/1000ml) a la entrada y salida de la planta de Tratamiento de

Anapoima.

En la gráfica 4 se puede observa las concentraciones de ooquistes de

Cryptosporidium spp . El comportamiento estuvo dividido en un 53% de las

muestras originando valores de 0 UL/1000ml y en el 47% restante tuvo unas

oscilaciones entre 4.8 UL/1000ml y 5.1 UL/ 1000ml. Si analizamos las muestras

podemos observar que se presenta un comportamiento irregular. Cuando se

observaron valores de cero, pudo deberse a los mismo hechos ya

mencionados en la salida de la planta de tratamiento de Chocontá. Además, en

algunos casos para que exista Cryptosporidium spp debe coexistir con otro

patógeno tipo Rotavirus según lo afirma el INS en 1985, pero cuando hablamos

CRYPTOSPORIDIUM ENTRADA Y SALIDA DE ANAPOIMA

0

1

2

3

4

5

6

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 NUME RO DE MUESTREO

CO

NC

EN

TR

AC

ION

DE

CR

YP

TO

SP

OR

IDIU

M E

N U

L/1

00

0 m

l

ENTRADA SALIDA

Page 146: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

del 47% restante se observó una relación con la cantidad de sólidos

suspendidos y sólidos disueltos totales que tenían concentraciones elevadas

(0.949 mg/L) sobre los cuales el parásito se pudo adherir debido a las mismas

circustancias ocurridas en Chocontá para dicho parásito. Este hecho tiene

relación con los resultados obtenidos por MORRIS, 2000 quien observó en

aguas de ríos de Gran Bretaña que la cantidad de ooquistes de

Cryptosporidium spp se encuentran asociados con la turbiedad y la cantidad

de sólidos suspendidos hasta tal punto que puede ser un medio para medir la

incidencia del parásito. Según ROMERO en 1998, si este tipo de sólidos

suspendidos en una laguna de estabilización logra producir biomasa

sedimentable, fácil de retener, el efluente será de muy buena calidad. Sin

embargo, hay que tener en cuenta que la antigüedad de la planta de

tratamiento de Anapoima no permite que este fenómeno ocurra debido al

tiempo de retención hidráulica que no es el suficiente para sedimentar.

Por otro lado la reducción de Cryptosporidium spp a la salida fue de un 100%

en trece de las 15 muestras, lo que indica que existe un buen porcentaje de

reducción por parte de la planta.

Un factor importante en la eliminación de parásitos del tipo Giardia spp y

Cryptosporidium spp es la existencia de los UASB en la planta de tratamiento

de Anapoima. Este reactor de tipo anaerobio permite más rápidamente la

oxidación bioquímica de las aguas residuales, al poseer bacterias de tipo

Page 147: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

anaerobio que rompen los enlaces químicos y principalmente aquellos que

contienen el ión oxígeno facilitando la degradación de la materia orgánica y la

eliminación de los microorganismos aeróbios o heterótrofos facultativos como

es el caso de la Giardia y el Cryptosporidium.

En este proceso, el residuo que se quiere tratar se introduce por la parte

inferior del reactor. El agua residual fluye en sentido ascendente a través de un

manto de fango constituido por gránulos o partículas formadas biológicamente.

El tratamiento se produce en ponerse al entrar en contacto el agua residual y

las partículas. Los gases producidos en condiciones anaerobias

(principalmente metano y dióxido de carbono) provocan una circulación interior,

que colabora en la formación y mantenimiento de los gránulos. Parte del gas

generado dentro del manto de fango se adhiere a las partículas biológicas.

Tanto el gas libre como las partículas a las que se ha adherido el gas, asciende

hacia la parte superior del reactor. Allí, se produce la liberación del gas

adherido a las partículas, al entrar éstas en contacto con unos deflectores

desgasificadores (METCALF, 1995).

Los lodos producidos en las plantas de tratamiento pueden ser digeridos en

reactores anaerobios. En este caso, la eficiencia en la eliminación de los

patógenos depende de la temperatura y del tiempo de retención. Digestores

anaeróbicos que operan como sistemas cerrados, donde toda la masa de lodo

esta a una temperatura constante durante un tiempo fijo preestablecido,

pueden eliminar todos los microorganismos, si la temperatura es de 500C y el

Page 148: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

tiempo de permanecía es de 13 días. Cuando la temperatura disminuye a 32oC

y el tiempo de permanecía aumenta a 28 días, ocurre la eliminación de virus y

protozoarios y permanecen algunas bacterias y huevos de helmintos. En

condiciones de temperatura ambiente, solo son eliminados algunos

protozoarios después de algunos meses. En los lechos de secado, períodos de

2 a 3 meses pueden eliminar virus y bacterias y eventualmente protozoarios, si

las temperaturas son superiores a 20 0C.

5.4 Resultados del análisis estadístico de Giardia spp y Cryptosporidium

spp en la Planta de Tratamiento de Anapoima

ANAPOIMA ENTRADA Y SALIDA

INDICADOR PARASITARIO DS To t teörico PROMEDIO P

GIARDIA SPP 2.7158 2.3060 5.776 4.0513 0.000

CRYPTOSPORIDIUM SPP 3.0530 2.3060 2.166 1.7073 0.048

Tabla 15. Resultados del análisis estadístico de Giardia spp y

Cryptosporidium spp en la Planta de Tratamiento de Anapoima

De acuerdo al análisis estadístico realizado se encontró que nuestros

resultados para la Giardia spp presentan una p= 0.000 lo que indica que en

promedio el número de Giardia spp a la entrada es < a la salida. Si se analiza

el dato proporcionado por la p= 0.048 para el Cryptosporidium spp se puede

observar que el promedio de concentración para este parásito es < a la entrada

y salida, lo que significa que hay una reducción importante de la Giardia spp y

elCryptosporidium spp en el sistema evaluado.

Page 149: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Todo lo anterior indica que la planta de tratamiento de Chocontá logra una

mayor reducción de parásitos, comparada con la planta de tratamiento de

Anapoima ya que como se pudo observar con respecto a las concentraciones

de Giardia spp y Cryptosporidium spp hubo en Chocontá una reducción del

65.5% y de 73% respectivamente, hecho que nos haría pensar que la planta es

eficiente en la reducción de parásitos, mientras que en Anapoima el porcentaje

de reducción para Giardia spp fue 53.8% y para Cryptosporidium spp del

53.3%.

De acuerdo con los resultados obtenidos en este estudio, se observa que en

algunos casos, la eliminación de Giardia spp y Cryptosporidium spp en el

efluente es importante. Estos resultados tienen una implicación importante en

la salud pública, ya que de acuerdo con múltiples investigaciones

epidemiológicas realizadas en el último decenio, las posibles vías de

transmisión de este tipo de parasitismo (giardiasis y cryptosporidiosis), están

relacionados con su presencia en el agua. Como se mencionó anteriormente la

entrada de los parásitos, en su foma quística habitual, se produce a través de

la boca y, por ende, tres vías han sido estudiadas: el agua, los alimentos y el

contacto directo, persona a persona o sexual.

Según estudios realizados por SOTTO en 1987, se observó que pacientes con

giardiasis sobre los cuales incidían también otros microorganismos debido a

que la lesión producida por la Giardia proporciona un excelente hábitat para la

proliferación de bacterias especialmente del género coliformes, bacteroides y

Page 150: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

clostridium potencializando las lesiones de la mucosa. Para el caso del

Cryptosporidium spp en la mayoría de los casos se ha encontrado que los

pacientes que poseen cryptosporidiosis presentan también coexistencia con

Coronavirus, E, coli enterotoxigénica y Rotavirus principalmente. Si el parásito

se encuentra solo el brote diarréico no es tan severo.

Hasta hace poco tiempo se ha iniciado el estudio a cerca de la relación de la

Giardia spp y Cryptosporidium spp en aguas residuales, y se han recopilado

análisis estadísticos de las principales causas de morbilidad por diarrea.

SOTTO, (1987) , observó que la cryptosporidiosis es siete veces más frecuente

en pacientes con giardiasis. Este hecho se señala como una de las primeras

causas de morbilidad en niños. Dentro de las llamadas enfermedades de origen

hídrico se podrían clasificar principalmente a la giardiasis y cryptosporidiosis

como enfermedades causadas por patógenos emergentes. La población infantil

parece ser más afectada que la adulta, posiblemente por la resistencia

adquirida al parásito después de una infección inicial.

A pesar de los numerosos casos de afección digestiva que se presentan, los

datos proporcionados por los centros de salud de los municipios Chocontá y

Anapoima es reducido ( 2 y 3 casos encontrados respectivamente). Este hecho

ocurre debido a que después de una infección por Giardia spp unos logran

eliminar el parásito, otros no lo eliminan, pero continúan excretándolo sin

presentar síntomas. Estos datos permiten postular que los factores capaces de

convertir una giardiasis asintomática en sintomática están en dependencia no

Page 151: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

del parásito, sino de ciertas características del hospedero SOTTO,1985. Muy

seguramente esta podría ser la explicación de la gran cantidad de Giardia spp

observada en los municipios de Chocontá y Anapoima.

Si se realizara un estudio de la materia fecal al azar de los habitantes de los

municipios de Chocontá y Anapoima muy seguramente se encontraría n altas

concentraciones de Giardia spp y Cryptosporidium spp. Estos resultados

coincidirían con los expuestos por HSU, 2000, quien observó en la materia

fecal de individuos que utilizaban aguas residuales en Taiwán, una mayor

concentración de Giardia spp en comparación con Cryptosporidium spp

convirtiendolos en patógenos emergentes en este país. Las concentraciones

observadas fueron comparadas con las obtenidas en el afluente de una planta

de tratamiento proporcionando un valor promedio de 66.6 quistes/100 litros y

8.92 ooquistes/100 litros. Después de pasar por la planta de tratamiento se

observó una reducción de 1.27 quistes/ 100 litros de Giardia spp y de 0.28

ooquistes/ 100 litros de Crypstosporidium spp.

Por otra parte el riesgo a la salud pública de infección por Cryptosporidium

spp se relaciona directamente con el número total de ooquistes que entra en el

sistema de tratamiento (GALE, 2000). Dependiendo de la cantidad y del tipo de

ooquistes adquiridos se ocasiona la enfermedad. Existen dos tipos de

ooquistes: los de pared gruesa que son los que transmiten la enfermedad y los

de pared delgada que origina la autoinfección.

Page 152: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Después de lo que hemos expuesto acerca del agua, resulta lógico pensar que

los alimentos crudos puedan ser también una vía de transmisión de

parasitismo. Sin embargo, no hay estudios bien documentados al respecto. El

número promedio de quistes de Giardia spp es de 2.4 UL/1000ml y de

ooquistes de Cryptosporidium spp es de 0 UL/1000ml detectados en los

efluentes de ambas depuradoras. Estos valores son muy superiores a los que

indica MENDOZA, 2000 referente a la presencia de 1 a 2UL/1000ml de quistes

y de 2UL/1000ml de ooquistes de aguas residuales depuradas que se reutilizan

para riego de cultivos. En este sentido, los efluentes de las dos plantas

estudiadas, principalmente la planta de tratamiento de Chocontá no podría ser

reutilizada en agrícultura con un riesgo para la salud humana, en lo que

respecta a la transmisión de giardiasis y cryptosporidiosis.

5.5 Análisis de los Parámetros Físico-Químicos para la Planta de

Tratamiento de Chocontá

En la siguiente tabla se encuentran los resultados de los parámetros físico-

químicos obtenidos en la Planta de Tratamiento de Chocontá.

CUENCA ALTA

PARAMETROS PROMEDIO MÁXIMO MINIMO

%

REDUCCIO N

ENTRAD

A

SALID

A

ENTRAD

A

SALID

A

ENTRAD

A

SALID

A

DBO (mg/L) 193.1 51 551 103 140 15.5 83.615

Page 153: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

DQO (mg/L) 646.7 212.3 927 334 295 103 67.33

SDT (g/L) 0.42 0.21 0.974 0.253 0.153 0.18 74.04

TEMPERATURA ( 0C) 16.17 16.86 18 18 15 14 ---

CONDUCTIVIDAD

(mS/cm) 0.83 0.53 1.12 0.967 0.408 0.37 83.97

Tabla 16. Resultados promedio, máximo, mínimo y porcentaje de

reducción de los indicadores de los parámetros físico-químicos de la

planta de tratamiento de Choconta

La DBO presentó una reducción del 83.6% en promedio observándose valores

a la entrada de 193 mg/L y de 51 mg/L a la salida, indicando que la planta

ofrece una buena reducción. Si se comparan con las normas de la CAR (quien

hace referencia a que el porcentaje de reducción de DBO en una planta de

tratamiento de aguas residuales que posteriormente serán vertidas a un cuerpo

de agua como es el caso del río Bogotá, debe ser mayor o igual al 80% de

reducción). También tuvo su incidencia la reducción de la DQO en menor

proporción que la anterior en un promedio del 65% con valores que oscilan

entre 927 mg/L a la entrada y 103 mg/La la salida. La temperatura del agua

oscilaba entre 15°C y 18°C

Si se observan los valores de los sólidos disueltos totales y conductividad del

agua podemos observar que presentaron valores relativamente altos. Este

hecho coincide con lo expuesto por MENDOZA 2000 quien afirma que la

concentración del agua residual depende de una gran variedad de sustancias

Page 154: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

principalmente de materia orgánica. Para cuantificar la masa de la materia

orgánica, se utilizan ampliamente las pruebas de DBO y DQO.

5.6 Análisis de los Parámetros Físico-Químicos para la Planta de

Tratamiento de Anapoima

En la siguiente tabla se encuentran los resultados de los parámetros físico-

químicos obtenidos en la Planta de Tratamiento de Anapoima.

CUENCA BAJA

PARAMETROS PROMEDIO MAXIMO MINIMO

%

REDUCCION

ENTRAD

A

SALID

A

ENTRAD

A

SALID

A

ENTRAD

A

SALID

A

DBO (mg/L) 235.25 70.9 330 91 71 53.4 60

DQO (mg/L) 498.5 390 659 498 250 224 27.7

SDT (g/L) 0.45 0.47 0.76 0.949 0.3 0.27 79.20

TEMPERATURA (0C) 22.36 22.05 28.4 28.3 16 16 ----

CONDUCTIVIDAD

(mS/cm) 0.83 0.64 0.98 0.698 0.6 0.55 71

Tabla 17. Resultados promedio, máximo, mínimo y porcentaje de

reducción de los indicadores de los parámetros físico-químicos de la

planta de tratamiento de Anapoima.

En los análisis fisico – químicos de DBO y DQO de la cuenca baja debería

existir un porcentaje de reducción mayor o igual del 80% según el artículo 72

del 24 de junio de 1984 expedido por el Ministerio de Salud quien estableció

Page 155: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

estos valores para aquellas aguas residuales que son conducidas a un cuerpo

receptor como es el río Bogotá, los datos obtenidos indicaron que existe un

promedio de reducción para la DBO de 59.82 % y para la DQO del 27.7 %, lo

que indica que no existe una reducción eficiente. Además si analizamos los

valores de conductividad y de sólidos suspendidos son aumentados debido a

que la planta recibe aguas provenientes de los vertidos de origen doméstico,

las aguas lluvias provenientes de los colectores de alcantarillado, y aquellas

que llegan de forma no reglamentaría como las provenientes de fincas

ganaderas. Las temperaturas fueron variadas

presentaron valores que oscilaron entre 16°C y 28°C, lo que hace que la

degradación de la materia orgánica sea más rápida.

Todo lo anterior indica que la planta de tratamiento de Chocontá esta

funcionando de forma adecuada en comparación con la planta de tratamiento

de Anapoima, por que como se puede observar en la tabla 16 hubo una

reducción del 83.6% y de 67.3% de DBO y DQO respectivamente, hecho que

nos haría pensar que la planta es eficiente en la reducción de la demanda tanto

bioquímica como química de oxígeno, mientras que en Anapoima el porcentaje

de reducción para DBO y DQO fue del 59.9% y 27.7% respectivamente, esto

ocurre debido a los tiempos de retención que son reducidos como resultado del

aumento de los lodos sedimentables en la planta de tratamiento.

5.7 Análisis estadístico de los parámetros Físico-Químicos

5.7.1. Chocontá

CHOCONTA ENTRADA Y SALIDA

PARAMETRO DS To t teórico PROMEDIO P

Page 156: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

DBO (mg/L) 140.3434 2.3060 5.623 249.5400 0.000

DQO (mg/L) 191.0801 2.3060 6.858 414.40 0.000

SDT (g/L) 0.31855 2.3060 1.464 0.20860 0.217

TEMPERATURA (oC) 1.9152 2.3060 -0.947 -0.6857 0.380

CONDUCTIVIDAD(mS/cm) 0.54852 2.3060 1.230 0.30180 0.286

Tabla 18. Resultados de los análisis estadísticos de los parámetros Físico-Químicos en Chocontá De acuerdo con los resultados de los análisis estadísticos se pudo observar

que la DBO presento una p= 0.000, lo que indica que la concentración de DBO

no es igual a la entrada y a la salida, para la DQO con un p= 0.00 al igual que

la DBO, la concentración de DQO a la entrada no es igual a la salida lo que

indica que hay reducción por parte de la planta Para SDT con un p= 0.217 y

conductividad con p=0,286 se podría observar que la cantidad a la entrada es

similar de la salida de la planta de tratamiento.

Los parámetros anteriormente nombrados y que se encuentran en la tabla 18

fueron analizados por la prueba binomial, y se pudo observar que la DBO,

DQO, Conductividad y SDT influían sobre la concentración de los parásitos

Giardia spp y Cryptosporidium spp.

5.7.2 Anapoima

ANAPOIMA ENTRADA Y SALIDA

PARAMETRO DS To t teörico PROMEDIO P

DBO (mg/L) 109.6011 2.3060 4.241 164.350 0.004

DQO (mg/L) 14.3773 2.3060 2.111 108.50 0.073

SDT (g/L) 0.20688 2.3060 -0.318 -0.02325 0.760

Page 157: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

TEMPERATURA (oC) 1.87574 2.3060 0.471 31250 0.352

CONDUCTIVIDAD(mS/cm) 0.9502 2.3060 5.492 0.18450 0.001

Tabla 19. Resultados de los análisis estadísticos de los parámetros Físico-Químicos en Anapoima De acuerdo con los resultados de los análisis estadísticos se pudo observar

que la DBO presento una p= 0.004, lo que indica que la concentración de DBO

no es igual a la entrada y a la salida, para la DQO con un p= 0.073 al igual que

la DBO, la concentración de DQO a la entrada no es igual a la salida lo que

indica que hay reducción por parte de la planta Para SDT con un p= 0.760 y

conductividad con p=0,001 se podría observar que la cantidad a la entrada es

simi lar de la salida de la planta de tratamiento.

Los parámetros anteriormente nombrados y que se encuentran en la tabla 19

fueron analizados por la prueba binomial, y se pudo observar que la DBO,

DQO, Conductividad y SDT influían sobre la concentración de los parásitos

Giardia spp y Cryptosporidium spp.

5.8 INFLUENCIA DE LOS PARÁMETROS FISICO – QUÍMICOS SOBRE LA

CONCENTRACION DE LOS INDICADORES DE CONTAMINACIÓN

PARASITARIA EN SISTEMAS DE LAGUNAJE EN LAS PLANTAS DE

TRATAMIENTO DE CHOCONTA Y ANAPOIMA

5.8.1. Influencia de la temperatura

La temperatura del agua residual suele ser siempre más elevada que la del

agua de suministro, hecho que se debe principalmente a la incorporación de

Page 158: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

aguas calientes procedentes de las casas y de diferentes usos industriales.

Dado que el calor específico del agua es mucho mayor que el del aire, las

temperaturas registradas de las aguas son mucho mayor que las del aire

durante la mayor parte del año, y sólo son menores que ella durante los meses

de verano.

En función de la situación geográfica, la temperatura media anual del agua

residual varía entre 10°C y 21°C, pudiéndose tomar 15,6°C como valor

representativo. Dependiendo de la situación y la época del año, las

temperaturas del efluente pueden situarse por encima o por debajo del

afluente.

La temperatura del agua es un parámetro muy importante dada su influencia,

tanto sobre el desarrollo de la vida acuática como sobre las velocidades de

reacción. Por otro lado, el oxígeno es menos soluble en aguas calientes que en

frías. El aumento de las velocidades de reacciones químicas producen un

aumento en la temperatura, combinado con la reducción de oxígeno presente

es causa frecuente de agotamiento de las concentraciones de oxígeno disuelto.

La dependencia de la temperatura de las constantes de velocidad de las

reacciones biológicas son muy importantes a fin de asegurar la eficacia

conjunta de un proceso de tratamiento biológico. La temperatura no solo influye

en las actividades biológicas de la población microbiana, sino que también

tienen un profundo efecto sobre las caracteríticas de sedimentación de los

Page 159: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

sólidos biológicos (METCALF,1995).

Cuando existe elevación de la temperatura se produce un rápido aumento en la

actividad de las bacterias anaerobias y facultativas, una multiplicación en el

número de esas bacterias y en consecuencia un mayor consumo de oxígeno

disminuyendo las concentraciones del mismo, lo que genera un medio no apto

para la supervivencia de los parásitos. Además el hecho de que exista una

multiplicación de bacterias ocasiona una competencia por los nutrientes

ocasionando una reducción en la población parasitaria (MENDOZA, 2000).

Las temperaturas observadas en los dos sistemas de lagunaje del río Bogotá, a

pesar de no haber sido determinadas algunos días de muestreo lo que indican

que estadísticamente no sean representativas, varían según la ubicación

geográfica (en la cuenca alta de 14oC a 18o C y en la cuenca baja de 16oC a

280C). Sin embargo, son adecuadas para el desarrollo de indicadores de

contaminación parasitaria, ya que estos se desarrollan en temperaturas que

oscilan entre 150C y 400C. La temperatura óptima para el desarrollo de

microorganismos tipo parásitos son aquellas que oscilan entre 18°C y 24°C.

Según lo enuncian SOTO, (1987) y INS, (1987) las bajas temperaturas reducen

en gran medida la viabilidad y el enquistamiento de la Giardia spp durante 15

días, y la infectividad se pierde totalmente en dos semanas entre 150C - 200C y

en 5 días a 370C para el Crypstosporidium spp, hechos que harían pensar

que muy seguramente los quistes y ooquistes determinados no ocasionan

Page 160: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

enfermedad. Lo ideal sería realizar un estudio paralelo de viabilidad.

5.8.2 Influencia de la DBO y DQO

Es muy importante conocer la cantidad de oxígeno necesario para cada

proceso. Además la cantidad de oxígeno producido debe ser suficiente para

efectuar reacciones como la oxidación de la materia orgánica (remoción del

sustrato) para producir la energía necesaria para la síntesis, la respiración

endógena de los microorganismos y si es posible la nitrificación.

Por lo general, se considera las dos primeras reacciones, es decir, la demanda

de oxígeno para la remoción de DBO (solo la materia carbonácea). La

demanda de oxígeno del desecho para remoción de DBO es igual a la

demanda de oxígeno producida por la materia oxidada.

La demanda de oxígeno de las aguas residuales se debe a que la materia

orgánica carbonosa es usada como fuente de alimento por los

microorganismos aerobios (MENDOZA,2000). Cuando la DBO es elevada

indica que existen en las aguas residuales mayor cantidad de microorganismos

que requieren de dicho oxígeno para la descomposición de la materia orgánica.

Este hecho no les favorece a los parásitos porque al ser microorganismos

aerobios las condiciones de oxígeno disminuyen para ellos.

La DQO de un agua residual suele ser mayor que su correspondiente DBO,

siendo esto debido al mayor número de compuestos cuya oxidación tiene lugar

por vía química frente a los que se oxidan por vía biológica. Por otra parte la

Page 161: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

demanda química de oxígeno DQO tiene por objeto medir la oxidación del

agua residual o más precisamente oxidar todos los compuestos orgánicos en

gas carbónico y agua (MELCAFT, 1995).

Cuando las condiciones de DQO son elevadas indican que las aguas

residuales contienen gran cantidad de compuestos de origen muy

probablemente industrial o agrícola como pesticidas o plaguicidas que pueden

afectar las condiciones de viabilidad de los parásitos.

5.8.3 Influencia de la Conductividad

Se entiende por conductividad la medida indirecta de la concentración de

sólidos disueltos totales. La conductividad es la cantidad de iones disueltos en

el agua, es decir la capacidad de un cuerpo de agua para conducir la corriente

eléctrica, entonces al haber una alta conductividad en el agua hay una elevada

concentración de sólidos disueltos, siendo así la conductividad una alternativa

para medir indirectamente la concentración de sólidos disueltos.

La conductividad del agua depende de la presencia de iones y de su

concentración total, movilidad, valencia y concentraciones relativas, así como

de la temperatura de la medición (APHA, 1995).

Cuando las aguas residuales presentan valores de conductividad altos puede

deberse a muchos factores: como presencia de iones o sales si las aguas son

principalmente de origen industrial y que pueden afectar al crecimiento de

microorganismos (METCALF,1995) principalmente Giardia spp y

Page 162: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Cryptosporidium spp, ya que estos iones disueltos en el agua puede

ocasionar efectos osmóticos, toxicidad y en algunos casos disminución de la

viabilidad. Pero si la conductividad se debe a la presencia de sólidos

suspendidos puede favorecer la sedimentación de dichos microorganismos.

5.8.4 Influencia de los sólidos disueltos totales

Los sólidos disueltos totales están compuestos de moléculas orgánicas e

inorgánicas e iones en disolución en el agua (ICONTEC, 1989). Los

constituyentes orgánicos tales como el calcio, sodio y los sulfatos llegan a

las aguas con los vertidos de tipo industrial. Los sólidos disueltos aumentan

la dureza, modifican el pH del agua, lo que dificulta el crecimiento de los

microorganismos. Aunque es coveniente aclarar el tipo de sólidos disueltos

ya que como se mencionó anteriormente favorecen la sedimentación de los

parásitos en los sistemas de lagunaje.

5.8.5 Influencia de las precipitaciones

La variabilidad y el cambio del clima en las regiones no han sido asunto de

mucho estudio en la transmisión de las enfermedades. La lluvia y la

escorrentía han sido asociadas con erupciones individuales de

enfermedades hidrícas causadas por patógenos de procedencia feco – oral

(ROSE,2000).

El clima de la tierra es un sistema dinámico y complejo que involucra la

Page 163: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

radiación solar e interacciones entre la atmósfera, tierra y masas del agua.

Tal es el caso de la precipitación que parece tener un mayor efecto en la

calidad del agua, al punto que es quien origina de forma indirecta las

enfermedades, haciendo que exista una degradación mayor en la calidad

del agua. Bien se sabe que más del 60% de los residuos urbanos se

transportan durante las tormentas (GIBSON III, 1998).

Estudios realizados en Pensilvania demostraron que la Giardia spp y el

Cryptosporidium spp en los arroyos urbanos en tiempos de sequía,

presentan concentraciones que van de 5 a 105 quistes/100L y de 13 a

6,579 ooquistes/100L respectivamente. Sin embargo, durante el tiempo de

lluvia se observan concentraciones que van desde 250 a 40,000

ooquistes/100L y de 9,00 a 283,000 quistes/100L respectivamente. Estas

concentraciones se vieron en afluentes que afectan el suministro de agua

de una localidad. Todo esto era debido a la escorrentía y a las

suspensiones en el fondo del río, ocasionados por sedimentos de desagüe

de la tormenta (ROSE, 2000; GIBSON III, 1998).

El promedio de precipitación fue de 0.18 mm y 2.94 mm en Chocontá y

Anapoima respectivamente. Las precipitaciones pluviales tuvieron influencia

sobre la Giardia spp y el Cryptosporidium spp provocando en estos

parásitos una mayor adherencia o afinidad por los sólidos arrastrados por

las lluvias que se produjeron en algunos días. Es de aclarar que la

concentración de los parásitos se ve afectada por la dilución ocasionada por

Page 164: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

las lluvias sobre la laguna.

6. CONCLUSIONES

• El análisis parasitologico realizado en los sistemas de lagunaje de los

municipios de Chocontá y Anapoima han mostrado la presencia de quistes

de Giarda spp y Cryptosporidium spp por medio de inminufluorescencia

directa.

• Según los datos obtenidos se pudo determinar la eficacia de los sistemas

de lagunaje de la cuenca alta y baja del río Bogotá con enfasis en la

Page 165: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

reducción de Giardia spp y Cryptosporidium spp con valores que van

desde 5.56 UL hasta 6.54 UL para la Giardia spp y 1.73 UL a 1.15 UL para

Cryptosporidium spp en Chocontá, y para Giardia spp de 5.82 UL a 7 UL y

de 2.34 UL a 0.63 UL de Cryptosporidium spp en Anapoima.

• El análisis comparativo de los efluentes de las dos plantas de tratamiento

estudiadas ha evidenciado, desde un aspecto cuantitativo, una mayor carga

parasitaria de quistes en 17 muestras, en términos generales, en la planta

de Chocontá desde el punto de vista cualitativo, ambas plantas depuradoras

han presentado en sus efluentes las mismas especies parasitaria Giardia

spp y Cryptosporidium spp, por lo que podríamos decir que la existencia de

animales ( gallinas, cerdos y vacas principalmente) de granja en las

poblaciones en la zona de Chocontá parece ejercer una aparente influencia

sobre la presencia de Giardia spp y Cryptosporidium spp detectados en

dichas planta.

• El número promedio de quistes de Giardia spp es de 2.42 UL/ 1000ml a la

salida detectados en los efluentes de la depuradora de Chocontá es muy

alto en aguas residuales depuradas que se reutilizan para riego de cultivos;

en este sentido, los efluentes de las dos plantas estudiadas no podrían ser

reutilizados en agrícultura con un riesgo para la salud humana, en lo que

respecta a las parasitosis por Giardia spp y Cryptosporidium spp que se

podrían transmitir según MENDOZA 2000.

• La presencia de Giardia spp y Cryptosporidium spp en sistemas de

lagunaje, demuestran un factor de contaminación continuo de tipo

doméstico.

Page 166: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

• Los indicadores parasitarios demostraron su cumplimiento con gran parte

de las condiciones de un buen indicador, concentraciones constantes,

presentes en todos los lugares de contaminación fecal, son resistentes a

condiciones adversas y los métodos para el análisis son rápidos,

económicos y no implican riegos.

• Al determinar y cuantificar la concentración de estos parásitos en los

sistemas de lagunaje y al investigar en los Hospitales de los dos municipios

estudiados la existencia de casos de diarrea producidos por dichos

microorganismos (Giardia spp y Crypstosporidium spp) se buscaba que

existiera una correlación tipo parásito Vs diarrea y no se pudo establecer

una relación, debido a que la población cuando comienza a presentar

síntomas de diarrea no acude al centro de salud de inmediato, impidiendo

de esta manera que dicho centro hospitalario tenga un estadística referente

al número total de casos ocasionadas por la utilización de aguas residuales.

• Uno de los problemas más serios en Anapoima es la ocurrencia de flotación

de lodo o bulking. Este fenómeno indica que el lodo formado tiene

dificultades de sedimentación y por el hecho de estar flotando, puede ser

descargado con el efluente final, disminuyendo la eficiencia del sistema de

tratamiento.

• En las lagunas facultativas, la remoción y la muerte de los indicadores

parasitarios esta influenciado por los parámetros fisico-químicos (DBO,

DQO, SDT y conductividad.

• El tiempo de retencción hidraúlica de las aguas residuales dentro de la

laguna es sin duda, un factor decisivo, que determina la eficiencia del

Page 167: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

sistema.

• La disminución en la concentración de parásitos a la salida de las plantas

puede deberse, al tiempo de retención hidraúlica, la adherencia de los

microorganismos a los sedimentos, la temperatura y el pH.

• Si analizamos el problema del funcionamiento de las plantas de tratamiento

para aguas residuales en Colombia, todavía la falta mucha aplicabilidad de

los principios básicos de la ciencia y de la ingeniería a los problemas de

control de las aguas contaminadas. El objetivo final de toda planta de

tratamiento es la gestión del agua residual y la protección del medio

ambiente empleado medidas conformes a las posibilidades e inquietudes

económicas, sociales y políticas.

• Las plantas de tratamiento de Choconta y Anapoima no cumplen con lo

establecido por el artículo 71 del 24 de junio de 1984, para el manejo,

administración y control del recurso hídrico.

• Para reducir o eliminar el riesgo sanitario proveniente del uso agrícola de

aguas residuales, se pueden tomar cuatro medidas de protección: el

tratamiento de aguas residuales, las restricción de cultivos en campos

regados con agua residual, el control de la exposición humana a aguas

residuales, y los modos de aplicación.

• Las aguas residuales domésticas casi siempre contienen huevos de

helmintos y quistes de protozoos. Las concentraciones de ambos

encontrados en la literatura varían mucho. Esto debido a situaciones

locales, como el número de portadores en la comunidad, o a la presencia en

el agua residual de aguas procedentes de un matadero.

Page 168: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

7. RECOMENDACIONES

• Sería recomendable revisar las normas que rigen la calidad

microbiológica del agua en el país, para actualizar los métodos y

parámetros por los cuales se rigen, dando importancia a los parásitos

que están tomando auge a nivel sanitario.

• Realizar un estudio comparativo que incluya viabilidad de Giardia spp y

Cryptosporidium spp, para conocer si la concentración de quistes y

ooquistes son infectivos y pueden ocasionar enfermedades de origen

hídrico.

• Para evaluar la calidad parasitológica de las aguas residuales, no

deberá descartarse la posibilidad del uso de indicadores parasitarios

como Giardia spp y Cryptosporidium spp ya que podría ser una

buena opción alterna o paralela para control de aguas residuales.

• En la mayoría de países en desarrollo como Colombia, las fuentes de

Page 169: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

agua rural tienen gran concentración de microorganismos de origen

fecal, bajo esas condiciones los servicios de vigilancia deberían

replanterase los parámetros para medir la calidad del agua incluyendo o

aplicando técnicas para el aislamiento de parásitos.

• La calidad microbiológica del agua en la mayoría de los casos es medida

por medio del uso de indicadores bacterianos de contaminación fecal

dejando de lado otro tipo de microorganismos como parásitos que

podrían proporcionar información valiosa sobre las aguas residuales.

Algunos de los indicadores actualmente empleados han demostrado que

no proveen información acerca de la existencia de otro tipo de

microorganismos como los virus, entre otros.

Page 170: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

BIBLIOGRAFIA

1. AIRES, R., STOTT, R., LEE., D. MARA, D., AND SILVA S.(1991).

Comparison of techineques for the enumeration of human parasitic

helminth eggs in treated wastewater.Environmental Technology. (12):

617-633.

2. ANONIMO. (1989). Microorganisms in foods. Sampling for

microbiological analysis: Principles and specific applications.

International Commission on Microbiological Specifications for Foods (

ICMSF). University of Toronto, Toronto Canadá. 213p

3. APHA. (1995) Estándar Methods for the examination of wasre water 19

th New York American. Poublic health Asociation.

4. BARER, M.R., AND WRIGHT, A.E. (1990). Cryptosporidium and water, 1

Edition. Appl. Microbiology (II): 271-277

5. BERTOLUCCI C., GILLI, G., CARRARO, E., GIACOSA, D., AND

PUPPO, M. (1998). Influence of raw water storage on Giardia,

Cryptosporidium and nematodes. Elsevier Science ltd. ( 37): 261-267

6. BITTON, G. (1994). Wasterwater Microbiology. Departament of

Environmental. Engineering Sciencies University of Florida, editorial

Wiley-Liss, New York: 11-77

7. BOTERO, D., and RESTREPO, M. (1998). Parasitosis Humana. 3°

Edición. Corporación para la investigación biológica. Medellín, Colombía.

Page 171: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

8. CAMPOS, C. (1999) Indicadores de Contaminación Fecal en Aguas.

Memorías II Congreso Internacional de Microbiología Ambiental.

Pontificia Universidad Javeriana, Facultad de Ciencias, Departamento de

Microbiología. Bogotá 19-21 de Mayo.

9. CLANCY, J., BUKHARI, Z., HARGY, T., BOLTON, J., and MARSHALL,

M. (2000). Using UV to inactivate Cryptosporidium. Pathogens: 97-104.

10. CORPORACIÓN AUTÓNOMA REGIONAL (CAR). (1997). Interventoria

para la construcción de la planta de tratamiento de aguas residuales y

obras complementarias del Municipio de Chocontá. A.E. Ingeniería Ltda.

59 p.

11. CORPORACIÓN AUTÓNOMA REGIONAL (CAR). (1998). Operación y

mantenimiento de las plantas de tratamiento de las aguas residuales

construidas por la CAR en los Municipios de Gachancipá, Tocancipá,

Sesquile, Suesca y Chocontá. Desarrollo de Ingeniería y administración

Ltda.. 150 p

12. CORPORACIÓN AUTONOMA REGIONAL (CAR).

2001.www.Car.gov.co

13. CORPORACIÓN AUTÓNOMA REGIONAL DE CUNDINAMARCA

(CAR). (1999). Municipio de Anapoima. Planta de tratamiento de aguas

residuales . Manual de operación y mantenimiento. Pp 24.

14. DEPARTAMENTO NACIONAL DE PLANEACIÓN. (1990) Corporación

Autónoma Regional de las cuencas de los ríos Bogotá, Ubáte y Suárez.

Boletín estadístico de hidrología y metereología.

15. EL HAMOURI, B., HANDOUF, A., MEKRANE, M., AND

Page 172: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

BENCHOKROUN, T.(1995). Wastewater reuse for irrigation in moroco

effect on the yield, the bacteriological and the parasitological cualites of

the crop. International association on water quality. 17-20.

16. GALE, P. And STANFIELD, G. (2000) Cryptosporidium during a

simulated outbreak. Pathogens: 105-115.

17. GASPARD, P., AND SCHWARTZBROD., J. (1992). Determination of the

parasitic contamination of irrigated vegetables. Enviromental Quality and

Ecosystem Stability. (VIA): 289-295.

18. GASPARD, P., AND SCHWARTZBROD., J.(1995). Helminth eggs in

wastewater quantification techinique. All rights reserved. (31): 441-446.

19. GASPARD, P., WIART., J AND SCHWARTZBROD ., J. (1997).

Parasitological. Contamination of urban Sludge used for agricultural

purposes. Waste Management & Research. (15): 429-436.

20. GIBSON, C., STADTERMAN, K., STATES, S ., AND SYKORA., J.

(1998). Combined sewer overflows: a source of Cryptosporidium and

Giardia ?. Elsevier Science ltd. (38); 67-72.

21. Guyot, K; Gireaudot – Liepmomm, M; Cabon, A; and Dci – cass, E.

(2000) Influence o US EPA 1622 method sucesive steps on the of

oocysts. Francia water Sciencie and technology Vol 41 N. 7 p p 189-196

iwa publishing.

22. Hall, T; Head, R; and Holt, D. (2000) UK WIR initiatives for implementing

expert group recomentations to minimise Cryptosporidium risk in water

treatment summary rivieal. Water Sciencie and Technology Vol 41 N.7 p

p 143-147 iwa publishing.

Page 173: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

23. HASS, Ch., and ROSE, J. (1995). Developing an action level for

Cryptosporidium. Cryptosporidium and Giardia: 81-84

24. HASS, Ch., CHRISTOPHER, C., ROSE, J., GERBA, Ch., and FAZIL, A.,

(1996). Assessing the risk posed by oocysts in drinking water. Protecting

public health: 131-135.

25. HERNANDEZ, A. (1992). Depuración de las Aguas Residuales. Escuela

Técnica de Ingeni ería de Caminos, Canales y Puertos. España: 97-107

26. HERRERA, L. (1998). Aplicaciones de Biotecnología ambiental. Texto

perteneciente al postulado de Ciencias y Tecnologías Avanzadas para la

Protección Ambiental de Gestión (IMA-USACh). Curso de Biotecnología

Ambiental.

27. HIRATA, T., and HASHIMOTO, A. (1998). Experimental assessment of

the Efficacy of Microfiltration and Ultrafiltration for Cryptosporidium

Removal. Elsevier Science. Vol 18 (17): 103 -107.

28. HO, B., AND TAM., T. (1998). Ocurrences of Giardia Cysts in beach

water. Elsevier Science Ltd. (38): 73-76.

29. Hsu, B; Huang, C; Hsu. Y; and Hsu, C (2000) Examination of Giardia and

Cryptosporidium in water samples and fecal. Specimens in Taiwan

(Taiwan) water sciencie and technology Vol 41 N. 47 p p 87-92 lwa

Publishing.

30. Instituto nacional de Salud (INS) (1987) Cryptosporidiosis. Ministerio de

Salud. ,Bogotá pag 9 -40

31. IONAS, G., LEARMONTH, E., KEYS, A., AND BROWN. J. (1998).

Distribution of Giardia and Cryptosporidium innatural water systems in

Page 174: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

New Zealand-a nationwide survey. Elsevier Science ltd. (38): 57-60.

32. JOSEPH G JACANGELO., LAINE, JM., CARNS, K. (1991). Low-

Pressure Membrane Filtration for Removing Giardia and Microbial

Indicators. Research and Technology journal awwa: 97-106

33. KONEMAN, E. (1997). Diagnóstico de Microbiología. Texto y Atlas a

color. Editorial Panamericana, México: 200- 204.

34. LINDO, J., LEVY, V., BAUM, M., and PALMER, CAROL. (1998).

Epidemiology of giardiasis and cryptosporidiosis in Jamaica. The

american Society of Tropical Medicine and Hygiene: 717-721.

35. LLOYD, B., AND FREDERICK., G. (1999). Parasite removal by waste

stabilitation systems and the relationship between concetrations in

sewage and prevalence in the community. Waste Stabilitation ponds:

Techinology and the enviroment. 20-23.

36. MASSON, C.F. (1994). Biología de la Contaminación de Aguas Dulce.

Editorial Alhambre, España: 21-43

37. MEDEMA, G., SCHETS, M., AND BOSCHMAN, G. (1998). Improved

detection and vital staining of Cryptosporidium and Giardia with flow

cytometry. Elsevier Science ltd. (38): 61-65

38. MENDOZA, S. (2000). Sistemas de laguna de estabilización. McGraw

Hill: 68-136.

39. METCALF and EDDY. (1995). Ingeniería de Aguas Residuales.

Tratamiento, Vaertido y Reutilización. 3° Edición, Editorial Mac Graw Hill.

Madrid : 53-127

40. MINISTERIO DEL MEDIO AMBIENTE. (2001).www.minambiente.gov.co

Page 175: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

41. MONGE, R., CHINCHILLA, M., y REYES, LILIANA.(1995). Presencia de

parásitos y bacterias intestinales en hortalizas que se consumen crudas

en Costa Rica. Ministerio de Salud San José de Costa Rica:1-20

42. MOPT (Ministerio de Obras Públicas y Transporte de España). (1996).

Depuración por lagunaje de Aguas Residuales. Manual de Operadores:

169

43. Morris, B.I and Foster S. (2000) Cryptosporidium contamination hazard

assement and risk management for British groundwater sources. Water

Science and Technology Vol 41 N. 7 p p 67-77 lwa Publishing.

44. MURRAY. KOBASYASKI. ROSENTHAL (1997). Microbiologia médica .

Segunda edicción. Editorial Harcourt Brace.

45. Canaro E. Fea, S; and Gilli G (2000) Impact of a Wastewater Treatment

Plant On Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts ocurring in a

Surface water. Water science and Technology Vol 41 # 7 p p 31-37. lwa

Publishing.

46. PHILIPPE, G., JACQUES, W., JANINE S. (1997). Parasitological

contamination of urban sludge used for agricultural p urposes. Wasre

Management & Reserch (15): 429-436.

47. ROSE, J. (1997). Environmental Ecology of Cryptosporidium and Public

Health Implications. Public Health (18): 135-161.

48. ROSE, J., DAESCHNER, S., EASTERLING, D., CURRIERO, F., LELE,

S., and PATZ, J. (2000). Climate and waterborne disease outbreaks.

Pathogens: 77-86.

49. ROSE, J., HASS, Ch., and REGLI, S. ( 1991). Risk Assessment and

Page 176: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Control of Waterborne Giardiasis. American Journal of Public Health. Vol

81 (6): 709-713.

50. ROSE, J., LANDEEN, L., RILEY, K., and GERBA, Ch.(1989) Evaluation

of immunofluorescence Techniques for Detection of Cryptosporidium

Oocysts and Giardia Cysts from Environmental Samples. Applied and

Environmental Microbiology. Vol 55 (12): 3189-3196

51. Rouquet, V; Homer, F; Brignon, J; Bonne, P; and Cavand, J. (2000)

Source and ocurriience of Giardia and Cryptosporidium in Paris rivers.

Francia water Sciencie and Technology Vol 41 N. 7 p p 79-86 lwa

Publishing

52. SAUCH, J. (1985). Use of immunofluorescence and Phase-Contrast

Microscopy for Detection and Identification of Giardia Cysts in Water

Samples. Applied and Environmental Microbiology. Vol 50 (6):1434-1438

53. Sotto Escobar Arcadio. Giardiasis (1987). Ed Científico Technical. Cuba

pag 3-82.

54. Standfield, G; Carrigton F; and Whitmore (2000) Au optimised and

standardised test to determine the presence of the protozoa

Cryptosporidium and Giardia in water (Francia, Water Sciencie and

technology Vol 41 N. 7 pag 103-110. iwa publishing.

55. WINKLER, M. (1986). Tratamiento Biológico de Aguas de Desecho.

Editorial Limusa, Mexico: 15-25.

56. www.REVISTA FASPIN (2000)

57. YATES, MARYLYNN. (1992). Biomonitors of enviromental

contamination. Encyclopedia of microbiology. (1): 321-330.

Page 177: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

ANEXO I

MATERIALES PARA EL METODO DE FLOCULACION INORGANICA POR

CLORURO DE CALCIO PARA 2 Y 10 LITROS DE AGUA RESIDUAL

Reactivos

- Aguas residuales

- CaCl2 1M

- NaHCO3 1M

- NaOH 2M para ajustar el pH a 10.

- Tween 80 0,01 %

- Acido Sulfámico 10% P/V

- PBS pH 7.4

- Kit Meryfluor para Giardia sp y Cryptosporidium sp.

Page 178: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Material de vidrio

- 2 Vasos precipitados de 400 ml

- Pipetas de 20 ml

- Laminas

Material de plástico

- 1 Garrafon plásticos de 2 Litros.

- 1 Garrafon plástico de 10 Litros.

Otros

- Manguera de caucho

- Pipeteador

Equipos

- Centrífuga

- Microscopio de fluorescencia

- Medidor de pH

- Papel indicador universal.

Concentración de la muestra por el método de floculación inorgánica por

Carbonato de Calcio

- Recoger 2 litros de agua (entrada) o 10 litros de agua (salida)

respectivamente, en bidones limpios y procesar inmediatamente o

conservar a baja temperatura.

Page 179: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

- Añadir por cada 2 litros de muestra, 20 ml de Cloruro de calcio 1M y 20 ml

de Bicarbonato de sodio 1M.

- En agitación, ajustar el pH a 10 con Hidróxido de sodio 2M. ( Nunca corregir

el pH con ácido)

- Decantar durante 4 horas a temperatura ambiente.

- Pasadas las 4 horas, retirar el sobrenadante, intentando no aspirar el

precipitado blanco (carbonato de calcio).

- Retirar el precipitado del bote en que se ha realizado el proceso de

concentración y dispensarlo en tubos de centrifuga de 10ml.

- Lavar el recipiente en que se ha realizado la concentración con 10 ml de

ácido sulfámico al 10% (P/V) por cada 2 Litros de agua . El volumen de

ácido sulfámico utilizado en el lavado decantarlo en el tubo de centrifuga

que contiene el precipitado. Realizar el proceso de lavado 2 veces.

- Una vez lavado el recipiente con ácido sulfámico, realizar un lavado con 10

ml de PSB al 0.01%, Tween 80 (V/V) para cada 2 litros de agua . Decantar

el volumen dentro del tubo de centrifuga.

- Disolver el precipitado (contenido del tubo de centrifuga) con el volumen de

ácido sulfámico necesario. Centrifugar a 3000 rpm durante 10 minutos.

- Eliminar el sobrenadante ( ácido) dejando un poco de volumen para evitar

perder el pelet presente.

- Transferir el volumen a tubos de 10 ml asegurándose de no perder

precipitado. Realizar un lavado del tubo de centrifuga de 10 ml con PBS a

pH 7.4.

- Añadir PBS pH 7.4 en el tubo de centrifuga de 10 ml, resuspendiendo el

Page 180: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

pelet de manera que se realice un buen lavado y centrifugar 10 minutos a

3000 rpm.

- Repetir el lavado del tubo de centrifuga con PBS a pH 7.4 ( Estos lavados

se realizan para eliminar la acidez de la muestra, neutralizando el pH.

Nunca utilizar hidróxido de sodio para neutralizar el pH ya que se correría

el riesgo de que se formara carbonato de calcio, perdiéndose la muestra)

- Una vez realizados los dos lavados, comprobar que el pH está neutralizado.

En caso contrario realizar un tercer lavado.

- Finalmente obtener un volumen final de 15 Ul que será usado en la técnica

de inmunofluorescencia directa.

Page 181: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

ANEXO II PROTOCOLO DE FLOCULACIÓN INORGANICA POR CLORURO DE

CALCIO PARA 2 LITROS DE AGUA

2 Litros agua residual + 20 ml CaCl2 1M +20 ml NaHCO3 1M En agitación

Ajustar el pH a 10 con NaOH 2M

Decantar durante 4 horas a temperatura ambiente

Eliminar el sobrenadante por aspiración

Separación del floculo

Retirar el precipitado del bote e que se ha realizado el proceso de concentración y dispensarlo en tubos de centrifuga. Lavar 2 veces el recipiente donde se ha realizado la

concentración con 10 ml de ácido sulfámico al 10% (P/V) y decantarlo en tubos de centrifuga

Una vez lavado el recipiente con ácido sulfámico, realizar un lavado con 10 ml de PBS al 0.01% Tween 80 (V/V). Decantarlo en los tubos de centrifuga .

Disolver el precipitado (contenido del tubo de centrifuga) co n el volumen de ácido súlfamico necesario (aproximadamente 40 ml)

Centrifugar a 3000 rpm durante 10 min

Eliminar el sobrenadante, dejando un poco de volumen para evitar perder el pelet

presente

Transferir el volumen a tubos de centrifuga de 10ml asegurandose de no perder

precipitado. Si se cree opotuno se puede realizar un lavado del tubo de centrifuga de 10 ml con 9 ml de PBS a pH7.4

Lavar 2 veces con 6ml de PBS a pH 7.4

Centrifugar a 3000 rpm X 10 minutos

Page 182: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Comprobar que el pH sea 7.0, de lo contrario realizar un nuevo lavado con PBS pH 7.4

Detección de los quistes y ooquistes por Inmunofluorescencia Directa

ANEXO III PROTOCOLO DE FLOCULACIÓN INORGANICA POR CLORURO DE

CALCIO PARA 10 LITROS DE AGUA

10 Litros agua residual + 100 ml CaCl2 1M +100 ml NaHCO3 1M En agitación

Ajustar el pH a 10 con NaOH 2M

Decantar durante 4 horas a temperatura ambiente

Eliminar el sobrenadante por aspiración

Separación del floculo

Retirar el precipitado del bote e que se ha realizado el proceso de concentración y dispensarlo en tubos de centrifuga. Lavar 2 veces el recipiente donde se ha realizado la

concentración con 50 ml de ácido sulfámico al 10% (P/V) y decantarlo en tubos de centrifuga

Una vez lavado el recipiente con ácido sulfámico, realizar un lavado con 50 ml de PBS al 0.01% Tween 80 (V/V). Decantarlo en los tubos de centrifuga .

Disolver el precipitado (contenido del tubo de centrifuga) con el volumen de ácido súlfamico necesario (aproximadamente 200 ml)

Centrifugar a 3000 rpm durante 10 min

Eliminar el sobrenadante, dejando un poco de volumen para evitar perder el pelet

presente

Transferir el volumen a tubos de centrifuga de 10ml asegurandose de no perder

precipitado. Si se cree opotuno se puede realizar un lavado del tubo de centrifuga de 10 ml con 45 ml de PBS a pH7.4

Lavar 2 veces con 6ml de PBS a pH 7.4

Centrifugar a 3000 rpm X 10 minutos

Page 183: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Comprobar que el pH sea 7.0, de lo contrario realizar un nuevo lavado con PBS pH 7.4

Detección de los quistes y ooquistes por Inmunofluorescencia Directa

ANEXO IV

INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA

Fundamento kitt Merifluor para Giardia sp y Cryptosporidium sp.

La técnica de inmunofluorescencia directa consiste en la unión del antígeno o

anticuerpo marcado con isotioscianato de fluoresceína a su anticuerpo o

antígeno, respectivamente y la detección del producto marcado mediante el

microscopio de fluorescencia.

Cuando un microorganismo, tal como un parásito, invade un espacio corporal,

activa una cantidad de respuesta inmune, que originan clones de células

plásmaticas, cada uno de los cuales produce un anticuerpo diferente . Como

sabemos, la superficie de un parasito contiene una variedad de proteínas,

polisacaridos, lipoproteínas y lipopolisacaridos que son inmunógenas para el

huésped.

Merifluor contiene una mezcla de FITC (isotioscianato de fluoresceína) unido a

niveles de anticuerpos monoclonales dirigidos contra los antígenos de

ooquistes de Cryptosporidium sp y quistes de Giardia sp presentes en la

muestra (agua residual).

Los anticuerpos monoclonales producidos por una sola clona de células B,

presentan la misma especificidad y afinidad siempre y permiten una mayor

reproducibilidad en las pruebas.

Page 184: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Procedimiento

- Utilizar una asa para transferir una gota de muestra en un pozo, extenderla

completamente, teniendo cuidado de no rayar la superficie al deslizar o

extender la muestra.

- Realizar el mismo procedimiento con los pozos de control positivo y control

negativo.

- Dejar secar a temperatura ambiente (aproximadamente 30 minutos).

- Colocar una gota del reactivo de detección y una gota de reactivo de

contraste en cada pozo.

- Mezclar los reactivos con un aplicador y extenderlos sobre el pozo

completamente teniedo cuidado de no rayar la superficie de la lamina.

- Incubar en cámara humeda oscura durante 30 minutos a temperatura

ambiente.

- Use una botella de lavado ( 2.5ml de buffer con 47.5ml agua destilada) para

quitar el exceso del reactivo de detección y el reactivo de contraste; no

sumerga en la solución de lavado para evitar que el especimen o controles

se contaminen.

- Remover el exceso de buffer por el borde de la lamina en un papel

absorbente, no deje secar.

- Adicionar una gota de medio de montaje a cada pozo y colocar una

laminilla.

- Visualizar cada pozo completamente usando 100X - 200X de magnificación.

Page 185: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

ANEXO V INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA

Depositar 15 Ul del especimen contenido en la solución de ooquistes sobre el pozo de la lámina

Secar a temperatura ambiente aproximadamente 30 minutos

Agregar reactivo de contraste y reactivo de detección

Colocar en cámara húmeda oscura durante 30 minutos

Lavar con solución Buffer

No dejar secar

Depositar una gota de solución de montaje y colocar una laminilla

Examinar al microscopio de inmunofluorescencia con objetivo de 100-200 X.

Page 186: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE Cryptosporidium spp Y Giardia spp COMO INDICADORES DE CONTAMINACIÓN PARASITARIA EN

SISTEMAS DE LAGUNAJE Betty Manzano Torrado, Luz Adriana Moreno Bernal, Carmen Inés Mora y Claudia Campos

ABSTRACT The increase of the man's population world and constant intervention in the environment is altering the quality of the residual waters, with discharges pollutants and returning more and more scarce the resources natural hÍdricos. The available reservations are impacted more and more, affecting their self-purification capacity. The discharges of municipal residual waters contaminate the aquatic bodies with organisms patogens and they transform them in vehicles of transmission of infectious illnesses. One of the most important aspects in the aquatic microbiology is the study of the contamination of the waters with microorganisms patogens that cause intestinal infections. Thi s study presents the procedures and some basic knowledge for the determination and quantification of indicators of parasitic contamination as Giardia spp and Cryptosporidium spp in systems of lagunaje of the Bogotá river corresponding to the basins discharge (Municipality of Chocontá) and it lowers (Municipality of Anapoima) who make part of a system of treatment of residual waters for Lagoons of Stabilization, natural system of treatment of minimum cost of operation, recognized worldwide as the most adaptive to all the economic capacities of populations of few financial resources. In the determination and quantification of these parasites: Giardia spp and Cryptosporidium spp carried out on treatment of residual waters, for stabilization lagoons, were considered as factors of important influence on the process, among other, the following ones: DBO. DQO, SDT, conductivity, temperature and precipitation providing the following results the concentration average in the high basin and it lowers in logarithmic uni ts (UL) of Giardia spp he/she went from 2.42 to 5.56 UL, while the Cryptosporidium spp went from 1.15 to 1.73 UL below the previous ones, indicating a permanent contamination of domestic type that can arrive waters under the one poured and to be deposited in the silts. RESUMEN El aumento de la población mundial y constante intervención del hombre en el medio ambiente están alterando la calidad de las aguas residuales, con descargas contaminantes y volviendo cada vez más escasos los recursos hídricos naturales. Las reservas disponibles son impactadas cada vez más, afectando su capacidad de autopurificación. Las descargas de aguas residuales municipales contaminan los cuerpos acuáticos con organismos

Page 187: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

patógenos y los transforman en vehículos de transmisión de enfermedades infecciosas. Uno de los aspectos más importantes de la microbiología acuática es el estudio de la contaminación de las aguas con microorganismos patógenos que causan infecciones intestinales. Este estudio presenta los procedimientos y algunos conocimientos básicos para la determinación y cuantificación de indicadores de contaminación parasitaria como Giardia spp y Cryptosporidium spp en sistemas de lagunaje del Río Bogotá correspondientes a las cuencas alta ( Municipio de Chocontá) y baja ( Municipio de Anapoima), quienes hacen parte de un sistema de tratamiento de aguas residuales por Lagunas de Estabilización, sistema natural de tratamiento de costo mínimo de operación, reconocido mundialmente como el más adaptable a todas las capacidades económicas de poblaciones de pocos recursos financieros. En la determinación y cuantificación de estos parásitos: Giardia spp y Cryptosporidium spp realizado sobre tratamiento de aguas residuales, por lagunas de estabilización, se consideraron como factores de influencia la DBO, DQO, SDT, conductividad, temperatura y precipitaciones proporcionando los siguientes resultados: la concentración promedio en la cuenca alta y baja en unidades logarítmicas (UL) de Giardia spp fue de 2.42 a 5.56 UL, mientras que el Cryptosporidium spp fue de 1.15 a 1.73 UL por debajo de los anteriores, indicando una contaminación permanente de tipo doméstico, que puede llegar aguas abajo del vertido y depositarse en los sedimentos. _______________________________________________________________ INTRODUCCIÓN El agua es un recurso indispensable para la supervivencia del hombre. A través de los años con el aumento de la población y el manejo inadecuado el recurso hídrico disponible se ha agotado y contaminado con descargas, perdiendo características que lo hacen apto para el consumo u otras actividades y volviendo cada vez más escasos los recursos hídricos naturales (REVISTA FASPIN, 2000). En el intestino del hombre y de los animales existen bacterias, virus, protozoarios y helmintos patógenos (transmisores de enfermedades) Muchos de ellos después de excretados con las heces, pueden sobrevivir en el medio ambiente (agua, lodo, aguas negras, suelo) e incluso multiplicarse.

Uno de los aspectos más importantes de la microbiología es el estudio de la contaminación de las aguas (superficiales y subterráneas) con microorganismos patógenos que causan enfermedades intestinales. El suministro de agua microbiológicamente segura es uno de los principales propósitos del saneamiento, así como preservar de la contaminación y de la polución de las aguas en general. En las enfermedades que siguen la ruta oral-fecal, el contagio ocurre desde el material fecal contaminado hasta la boca de una persona sana, que será el nuevo huésped. Para esto es necesario establecer barreras múltiples de protección. (MENDOZA, 2000) Debido a esto se requieren

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mecanismos de depuración y control más eficaces para asegurar y determinar su calidad. La utilización del agua residual comporta un riesgo sanitario asociado a la presencia de agentes patógenos que conlleva a que exista una probabilidad de enfermedad en la población por agentes patógenos.

Page 189: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

La calidad de las aguas del río Bogotá ha sido afectada por las descargas de aguas negras de los asentamientos urbanos en su cuenca, especialmente en Bogotá (polución biológica), por los vertimientos de las aguas residuales industriales (polución química, mineral y orgánica) y por los aportes de materiales sólidos insolubles en el agua (polución física) a las redes de drenaje natural y/o artificial. (CAR, 1999) Las poblaciones que viven cerca al Río Bogotá están expuestos a los poluctantes de origen hídrico a través de una gran variedad de mecanismos. El consumo de agua tratada o parcialmente tratada es la ruta de exposición que puede resultar en la mayor absorción de tales contaminantes. El consumo de alimentos producidos con agua de riego contaminada o provenientes de ganaderías que toman dicha agua es la segunda ruta de exposición. Finalmente, el contacto físico directo en actividades de recreación, baño o trabajo pueden también producir efectos adversos sobre la salud. (GASPAR, 1997) El agua es un recurso susceptible de contaminación por parásitos que llagan a través de las aguas residuales. Algunos de estos parásitos como la Giardia spp y Cryptosporidium spp tienen gran efecto sobre la salud pública, haciendo que la prevalencia del parasitismo intestinal en Colombia, principalmente en las áreas rurales y urbana marginal, siga siendo tradicionalmente alta debido a que

los indicadores socioeconómicos y sanitarios son deficientes. (MENDOZA,2000) La giardiasis es una infección parasitaria intestinal más común en el mundo. Se encuentra en contaminación acuática a través de quistes contenido en las excretas animales. Las manifestaciones clínicas de la Giardia spp pueden pasar en estado asintomático, con sólo dolor abdominal apacibles en algunos casos hasta estados de gastroenteritis con producción de diarrea, calambres abdominales, inflamación, flatulencias, anorexia y náuseas. Los estudios epidemiológicos, realizados a raíz de las epidemias de giardiasis ocurridas en algunos países, han enfatizado la importancia del agua de consumo como agente portador de este parasitismo. El contacto directo entre personas ha sido destacado por estudios llevados a cabo en instituciones infantiles, así como la transmisión en adultos a través de relaciones sexuales.(SOTTO, 1999) Por otra parte la cryptosporidiosis hasta el momento una parasitosis poco diagnosticada debido a que es causada por un parásito al que sólo recientemente se le ha dado importancia. Esta patología ocurre por ingestión de comida contaminada, agua contacto con materia fecal. Sus ooquistes han comenzado a tener gran importancia principalmente en pacientes con VIH, quienes generalmente experimentan una infección aguda que dura de 10-15

Page 190: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

días, los síntomas son diferentes como calambres epigástricos apacible, náuseas, anorexia y diarrea profusa, acuosa. (INS, 1987) La transmisión de protozoos intestinales plantea un problema en particular en jardines, guarderías y escuelas donde se han documentado varias epidemias. La Giardia spp y el Cryptosporidium spp constituyen actualmente los parásitos más frecuentes en muchos países desarrollados y en vías de desarrollo. El mejoramiento de las condiciones socioeconómicas en algunos países, ha logrado disminuir la helmintiasis y otras infecciones similares, como la amebiasis y la tricomoniasis, y, sin embargo, la giardiasis y cryptosporidiosis parecen haber aumentado. (SOTTO, 1999) Son estas las razones por las cuales el tratamiento de aguas residuales tienen como objetivo la transformación de la materia orgánica en material inorgánico y la reducción o eliminación de los organismos patógenos de transmisión hídrica. Para evaluar la eficacia de la eliminación de los microorganismos por medio de los métodos de tratamiento, es necesario cuantificarlos usando técnicas simples y económicas. Es necesario también utilizar microorganismos indicadores de contaminación fecal que señalen con su presencia la contaminación por heces o por aguas residuales y, en consecuencia, riesgos potenciales para la salud pública. (MENDOZA,2000)

MATERIALES Y METODOS Los quistes de Giardia spp y los ooquistes de Cryptosporidium spp fueron investigados en muestras de aguas residuales tomados de dos sistemas de lagunaje correspondientes a las cuencas alta (Municipio de Chocontá) y baja (Municipio de Anapoima) del río Bogotá. Para dicho estudio fueron tomados dos puntos de muestreo correspondiente a la entrada y salida de cada sistema de lagunaje. El número de muestras tomadas en total fue 28 distribuido de la siguiente forma: 13 en la cuenca alta y 15 en la cuenca baja. Para el análisis parasitológico los procedimientos realizados en los sistemas de lagunaje comprendieron: Floculación de base de carbonato de calcio e inmunofluorescencia directa. Floculación a base de carbonato de calcio: Este método tiene la propiedad de utilizar sustancias coloidales para la separación de una solución espontánea por la acción de varios agentes químicos, formando pequeños floculo de donde deriva su nombre. En la floculación el carbonato de calcio el CaCL2 1m y el NaHCO3 1m, actúan como sustancias coloidales que proporcionan la obtención de ooquistes o quistes resuspendidos en el floculo formado. Para que todo esto se pueda llevar a cabo con buenos resultados es necesario la utilización de NaOH 2M, quien permite que dicha suspensión se

Page 191: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

realice a un pH de 10, después de este procedimiento se dejan las muestras como mínimo 4 horas, se lava el recipiente donde se realizo la floculación con Acido súlfamico que actúa como detergente y PBS para ajustar el pH a 10 que permitir su visualización por inmunofluorescencia directa. El procedimiento anterior se realiza posterior a la toma de la muestra con un lapso no superior a 2 horas. Inmunofluorescencia Directa: Para el recuento de los quistes de Giardia spp y los ooquistes de Cryptosporidium spp se utilizó el Kitt Meryfluor Cryptosporidium / Giardia de la casa comercial Meridian Este tipo de procedimiento utiliza anticuerpo de tipo monoclonal dirigido contra un componente localizado en la pared de estos parásitos. Para el análisis de los parámetros físico-químicos (DBO, DQO, Temperatura y Oxígeno disuelto) y precipitaciones ocurridas durante los días en los que se llevo a cabo el muestreo, se revisaron los registros proporcionados por la CAR ( Corporación Autónoma Regional) entidad encargada por el gobierno de realizar este tipo de análisis. ANÁLISIS ESTADÍSTICO La técnica estadística utilizada para el análisis de los datos obtenidos durante la experiencia fue la t de student para muestras relacionadas; buscando verificar si hay diferencias en el número promedio de quistes

de Giardia spp y ooquistes de Cryptosporidium spp entre la salida y la entrada de los sitemas de lagunaje de Chocontá y Anapoima. Por otra parte para el análisis de las variables independientes analizadas en diferentes condiciones , en este caso los paramétros físico-químicos DBO, DQO, precipitación, temperatura, SDT, y conductividad; se utilizó la prueba binomial para dos tipos de muestras. Dicho análisis permite determinar si existe reducción por parte de la planta de tratamiento y si los valores determinados para los análisis físico-químicos influyen sobre la permanencia de los parásitos en el sistema de lagunaje. Todas las operaciones realizadas para el desarrollo del análisis estadístico, se llevaron a cabo en el programa Statistical Packaege for Social Science ( SPSS ). RESULTADOS Y DISCUSION Estos resultados fueron obtenidos por medio del uso de inmunofluorescencia directa para Giardia spp y Cryptosporidium spp. La técnica de inmunofluorescencia directa como se menciono anteriormente consiste en la unión del antígeno o anticuerpo marcado con isotioscianato de fluoresceína a su anticuerpo o antígeno respectivamente y la detección del producto marcado mediante el microscopio de fluorescencia. Este tipo de procedimiento utiliza un

Page 192: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

anticuerpo de tipo monoclonal dirigido contra un componente localizado en la pared de estos parásitos.

FIGURA 1. Fotografía de Giardia spp por Inmunofluorescencia Fuente: Autoras, 2001.

FIGURA 2. Fotografía de Cryptosporidium spp por inmunofluorescencia Autoras, 2001. ENTRADA Y SALIDA DE LA PLANTA DE TRATAMIENTO DE CHOCONTA

PROM: Promedio, MAX: máximo, MIN: Mínimo, % Reduc: % reducción. Tabla 1. Resultados promedio de los indicadores de contaminación parasitaria en la Planta de Tratamiento de Chocontá En la tabla 1 se observa que los valores promedio de Giardia spp a la entrada es de 5.56 UL, con valores máximos de 6.54 UL y mínimos de 2.82 UL. Si analizamos por otra parte las concentraciones de Giardia spp a la salida se observa un promedio de 2.42 UL con un valor mínimo de 0 UL y un valor máximo de 5.6 UL observándose además un porcentaje de reducción de aproximadamente del 65.5%. Estos resultados coinciden con los obtenidos por V, ROUQUET, 2000. Este autor analizo la incidencia de Giardia spp y Cryptosporidium spp en aguas que serían vertidas al río Sena de París. Después de realizar una serie de métodos analíticos que incluían concentración, purificación y ensayos de inmunofluorescencia a las muestras de agua, pudo observar que la cantidad de ooquistes de Cryptosporidium spp (103 - 104 / 100 L) era más baja que la concentración de Giardia spp (10 5-106 / 100L) debido a que la eliminación de dicho parásito se ve influida por la velocidad de sedimentación, estando establecida la habilidad de sedimentación por su afinidad por las partículas. Visto de otra manera estos indicadores parasitarios poseen cargas eléctricas en su membrana que al estar en contacto con las partículas

CUENCA ALTA

ENTRADA SALIDA

INDICADOR PARASITARIO

PROM UL

MÁX UL

MIN UL

PROM UL

MÁX UL

MIN UL

% REDUC

GIARDIA SPP 5.56 6.54 2.82 2.42 5.6 0 65.5

CRYPTOSPORIDIUM SPP 1.73 5.3 0 1.73 4.81 0 73.0

Page 193: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

suspendidas en el agua generan un campo magnético que facilita la sedimentación.

Gráfica 1. Concentración de quistes de Giardia spp (UL/1000ml) a la entrada y salida de la planta de Tratamiento de Chocontá Como se observa en la gráfica 1 la reducción de quistes de Giardia spp está entre 2.82 y 6.54 UL. De la totalidad de las muestras 13, correspondientes a la entrada del sistema de lagunaje de Chocontá, los quistes de Giardia spp en la muestra 1 presentó una concentración no uniforme muy inferior al resto de los muestreos. Para las muestras 2 y 3 aún cuando se observó un incremento significativo en comparación con la muestra 1 continuaba siendo inferior el comportamiento con respecto al presentado desde la muestra 4 a la muestra 13, los cuales reflejaron una concentración de quistes de Giardia spp que oscilaba entre 5.2 UL/1000 ml y 6.54 UL/1000 ml. Estos últimos valores si se analizan con detenimiento se observa que en la mayoría de los casos pertenecían a días correspondientes a fines de

semanas, cuando la población aumenta debido a la participación en eventos religiosos, actividades recreativas y visitas al comercio, por lo tanto aumenta el caudal de vertido al alcantarillado. Se considera que este comportamiento no uniforme de la muestra 1 en comparación con las demás muestras que se comportaron de manera uniforme, se presenta porque no existieron cambios relevantes a excepción del aumento de la población que incidieran en el afluente. Por otro lado si se tiene en cuenta el valor obtenido en el primer muestreo en el cual se obtuvo un valor muy inferior con relación a los demás, muy probablemente se debió a las fuertes lluvias que provocaron dilución en la concentración del parásito de la laguna. Los datos de las lluvias fueron suministrados por la persona encargada de la planta, ya que estos datos suministrados eran más confiables que los proporcionados por la CAR, los cuales eran tomados de la estación pluvial más cercana a la planta. Según lo indicado por ROSE 2000, quien tras un estudio realizado en Pensilvania pudo comprobar que las precipitaciones tienen un mayor efecto sobre en la calidad del agua. Como se sabe que más del 60% de los residuos urbanos son transportados durante las tormentas. Esta afirmación fue demostrada a través de las concentraciones de Giardia spp y Cryptosporidium spp en los arroyos urbanos en tiempos de sequía. En este tiempo se observó

GIARDIA A LA ENTRADA Y SALIDA (CHOCONTA)

0

1

2

3

4

5

6

7

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 NUMEROS DE MUESTREOS

CO

NC

EN

TRA

CIO

N D

E G

IAR

DIA

EN

UL/

1000

ml

ENTRADA SALIDA

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que las concentraciones para Giardia spp van de 13 a 6579 quistes/100L y para Cryptosporidium spp de 5 a 105 ooquistes/L. Sin embargo, durante el tiempo de lluvia se observan concentraciones que van de 9000 a 283000 quistes/L para Giardia spp y de 250 a 40000 ooquistes/L para Cryptosporidium spp, estas concentraciones se vieron en afluentes que afectan el suministro de agua de una localidad. Todo esto era debido a la escorrentía y a las suspensiones ocasionadas de desagüe de la tormenta. Los resultados presentados por los quistes de Giardia spp en la salida de la planta de tratamiento de Chocontá al contrario de las concentraciones de entrada presentaron un comportamiento heterogéneo, con resultados que oscilaban entre 0 UL/1000ml y 5.6 UL/1000ml. Sin embargo, se presentaron en seis de las muestras valores de 0 UL/1000ml y en cinco muestras cuyos resultados estaban dentro de 4.8 UL/1000ml y 5.6 UL/1000ml, los dos restantes fueron de 1.8 UL/1000ml. Si analizamos la concentración de quistes de Giardia spp a la salida del muestreo 1, podemos observar que se elimina o reduce la concentración en comparación con lo que había ingresado, este hecho se podría justificar de la siguiente manera: Hay que tener en cuenta que el agua que ha sido tomada a la salida de la planta de tratamiento de Chocontá no garantiza que

corresponda al agua que entro, aún sabiendo que la planta presenta un funcionamiento estable, y que esta planta es de construcción reciente, no tiene tanta relevancia como el tiempo de retención hidráulica que corresponde al tiempo medio en que el agua permanece en el sistema, que en este caso es de 43 días. Por otra parte el día que fue tomada la muestra correspondía al lunes. La muestra fue recolectada en las horas de la mañana (9:00a.m). MENDOZA 2000 observó que existen variaciones en el caudal que entra a la planta de tratamiento y que esta variación esta relacionada con la hora del día y el día de la semana, de acuerdo con los usos y costumbres de la población, además de la temperatura y de la precipitación atmosférica de la región. Por otra parte hay que tener en cuenta los cambios morfológicos que ocurren en el parásito que de forma indirecta pueden influir en dicho resultado. Los procesos de desenquistamiento o exquistamiento son parte del ciclo de vida de la Giardia spp, ocurren en un período de 20 minutos a 41/2 horas en condiciones favorables como temperatura (SOTTO, 1985), si observamos la temperatura en esos días se encontraba alrededor de 18°C y lo ideal para que exista desenquistamiento es una temperatura entre 18°C y 21°C entre cinco y 24 días, este hecho no ocurre con frecuencia. Además, como ya se había mencionado anteriormente la planta tiene un buen funcionamiento lo que

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indica que su tiempo de retención es de aproximadamente de 43 días. Si analizáramos en el tiempo el día que ingreso el agua correspondiente a la muestra 1, que esta siendo analizada a la salida, podríamos observar que corresponde a un fin de semana en donde el caudal varia por los vertidos de la población, a pesar de ser una planta construida para recibir vertidos de origen doméstico hay incidencia de otras actividades de origen agrícola y ganadero que afectan las características del afluente. El comportamiento del Cryptosporidium spp a la entrada y salida de la planta de tratamiento de Chocontá de acuerdo con lo observado en la tabla 1. podemos observar a la entrada una concentración promedio de Cryptosporidium spp de 1.73 UL, encontrándose un valor mínimo de 0 y un máximo de 5.3 UL. Si se analizan además los resultados obtenidos a la salida se puede observar que existe un porcentaje de reducción del 73%, encontrándose un valor mínimo de 0 y un máximo de 4.81 UL. Estos resultados coinciden con los resultados de estudios realizados por CARRARO 2000, quien buscaba evaluar el impacto de una planta de tratamiento a nivel municipal en la reducción de quistes y ooquistes de Giardia spp y Cryptosporidium spp respectivamente en el agua de un receptor. Observó que todas las muestras del efluente contenían concentraciones bajas de Giardia spp y Cryptosporidium spp entre

0.139 +/- 0.510 quistes/L y 0.21 +/- 0.06 ooquistes/L respectivamente. Esto se relacionó con las altas concentraciones de los anteriores parásitos observadas en el alcantarillado que oscilaban entre 53.6 +/- 68 quistes/L y 4.5 +/- 0.3 ooquistes/L, las incidencias de la mayor concentración de Giardia spp por encima de Cryptosporidium spp tanto en el afluente como en el efluente probablemente está relacionado con la contribución de descargas de origen humano. Este estudio indica que las plantas de tratamiento tienen impacto en la reducción de Giardia spp y Cryptosporidium spp en aguas residuales contaminadas.

Gráfica 2. Concentración de ooquistes de Cryptosporidium spp (UL/1000ml) a la entrada y salida de la planta de Tratamiento de Chocontá. En la gráfica 2 se puede observar las concentraciones de Cryptosporidium spp. Del total de las muestras el 62% obtuvo una concentración de 0 UL/1000 ml y el 38% restante correspondía a una concentración de ooquistes de Cryptosporidium spp que oscilaba

CRYPTOSPORIDIUM ENTRADA Y SALIDA DE CHOCONTA

0

1

2

3

4

5

6

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 NUMEROS DE MUESTREO

CO

NC

EN

TRA

CIO

N D

E C

RIP

TOSP

OR

IDIU

M E

N U

L/10

00

ENTRADA SALIDA

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entre 3.2 UL/1000 ml y 5.3 UL/1000ml. Cuando se observaron valores de 0 UL/1000ml en el análisis de las muestras por medio de Inmunofluorescencia Directa es por que muy posiblemente ocurrió alguno de los siguientes hechos:

• La sensibilidad de la técnica es más baja que la cantidad de parásitos que realmente existen en el punto de muestreo, en el momento de la toma de la muestra de entrada no existió un vertido importante por parte del matadero y del municipio a las aguas del alcantarillado.

• el día en que fueron tomadas las muestras influye, porque todos los días no se presentaban las mismas condiciones (población, hora, actividades cotidianas)

• El agua que fue recogida a la salida no garantiza que corresponda al agua de entrada porque hay que tener en cuenta las precipitaciones y el tiempo de retención hidráulica de la laguna. Lo ideal había sido conocer el tiempo de retención hidráulica y tomar dos muestras: en tiempo 0 y a los 43 días en Chocontá y a los 15 días en Anapoima, sin embargo obviamos esto debido a que el funcionamiento de la laguna es estable. Lo que hace suponer que el agua que sale a sido sometida al mismo

tiempo de tratamiento durante el tiempo que se hizo la evaluación.

Si se analiza por otra parte la concentración de ooquistes de Cryptosporidium spp a la salida de la planta de tratamiento de Chocontá, en la mayor parte de las muestras se observaba una reducción del 88.3%. Pero si se analizan las muestras 4 y 6 la cantidad de ooquistes a la entrada era baja pero cuando se observaba la salida existía mayor reducción de lo que inicialmente ingresaba. Este fenómeno ocurría por mecanismos muy similares a los ya expuestos para la Giardia spp. ENTRADA Y SALIDA DE LA PLANTA DE TRATAMIENTO DE ANAPOIMA

PROM: Promedio, MAX: máximo, MIN: Mínimo, % Reduc: % reducción Tabla 2. Resultados promedio de los indicadores de contaminación parasitaria en la Planta de Tratamiento de Anapoima De acuerdo a la tabla 2 podemos observar que para Giardia spp a la entrada del sistema de lagunaje se observan unos valores que oscilan entre 0 y 7.1 UL con un promedio de 5.82 UL , pero si observamos la

CUENCA BAJA

ENTRADA SALIDA INDICADOR PARASITARIO

PROM UL

MÁX UL

MIN UL

PROM UL

MÁX UL

MIN UL

% REDUC

GIARDIA SPP 5.82 7.1 0 1.77 5.88 0 53.8 CRYPTOSPORI- DIUM SPP 2.34 5.3 0 0.63 4.81 0 53.3

Page 197: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

salida es evidente la reducción del parásito en un 53.8%.

Gráfica 3. Concentración de quistes de Giardia spp (UL/1000ml) a la entrada y salida de la planta de Tratamiento de Anapoima. En la gráfica 3 podemos observar las concentraciones de Giardia spp a la salida y entrada de la planta de tratamiento de Anapoima. Las concentraciones de Giardia spp a la entrada de la planta de tratamiento presentan un comportamiento homogéneo que oscila entre 5.3 UL/1000 ml y 6.6 UL/1000 ml para las quince muestras en total, excepto la concentración obtenida en la muestra 3 que presentó valor de 0 y que al igual que para los valores anteriores tiene la misma justificación. El comportamiento homogéneo confirma que existe una contaminación permanente de origen fecal. Además si analizamos con detenimiento las concentraciones son muy similares en todos los puntos de muestreo, hecho debido a que reciben todos los vertidos provenientes de fincas

ganaderas, del matadero del pueblo, aumento de la población, además la temperatura proporcionada es la adecuada para la proliferación de microorganismos como la Giardia spp, sin dejar de lado la incidencia de moscas de la región que mantienen viables los quistes por 24 horas y algunas especies de cucarachas que sirven de reservorio por varios días según un estudio realizado por el INS en 1985. Si analizamos las concentraciones de Giardia spp a la salida de la planta de tratamiento, para diez de las muestras la reducción fue del 100% y para las cinco muestras restantes los resultados se encontraron entre 4.81 UL/1000 ml y 5.8 UL/1000 ml. Estos valores comparados con los encontrados a la entrada presentan una reducción entre el 11% y el 28%. Esto se debió a que la temperatura se encontraba entre 16°C y 28°C lo que facilitaba el enquistamiento según lo indicado por SOTTO en 1985. Pasemos ahora a analizar el comportamiento del Cryptosporidium spp a la entrada y salida de la planta de tratamiento de Anapoima. De acuerdo con lo observado en la tabla 2 podemos observar que a la entrada el Cryptosporidium spp tienen una concentración promedio de 2.34 UL, con un valor mínimo de 0 y un máximo de 5.3 UL. En comparación con los resultados obtenidos a la salida se puede apreciar una reducción del 53.3% y los valores

GIARDIA A LA ENTRDA Y SALIDA (ANAPOIMA)

0

1

2

3

4

5

6

7

8

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 NUMEROS DE MUESTREO

CO

NC

EN

TR

AC

IN D

E G

IAR

DIA

EN

UL

/100

0 m

l

ENTRADA SALIDA

Page 198: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

mínimos de 0 y los máximos de 4.81 UL si se analizan con los de entrada se puede observar que son bien bajos. En estos datos se puede observar que hay una coincidencia con lo anteriormente expuesto por CARRARO, 2000.

Gráfica 4. Concentración de ooquistes de Cryptosporidium spp (UL/1000ml) a la entrada y salida de la planta de Tratamiento de Anapoima. En la gráfica 4 se puede observa las concentraciones de ooquistes de Cryptosporidium spp. El comportamiento estuvo dividido en un 53% de las muestras originando valores de 0 UL/1000ml y en el 47% restante tuvo unas oscilaciones entre 4.8 UL/1000ml y 5.1 UL/ 1000ml. Si analizamos las muestras podemos observar que se presenta un comportamiento irregular. Cuando se observaron valores de cero, pudo deberse a los mismo hechos ya mencionados en la salida de la planta de tratamiento de Chocontá. Además, en algunos casos para que exista Cryptosporidium spp debe coexistir con otro patógeno tipo Rotavirus según lo afirma el INS en

1985, pero cuando hablamos del 47% restante se observó una relación con la cantidad de sólidos suspendidos y sólidos disueltos totales que tenían concentraciones elevadas sobre los cuales el parásito se pudo adherir debido a las mismas circunstancias ocurridas en Chocontá para dicho parásito. Este hecho tiene relación con los resultados obtenidos por MORRIS, 2000 quien observó en aguas de ríos de Gran Bretaña que la cantidad de ooquistes de Cryptosporidium spp se encuentran asociados con la turbiedad y la cantidad de sólidos suspendidos hasta tal punto que puede ser un medio para medir la incidencia del parásito. Pero si se analiza desde el punto de vista de ROMERO en 1998, si este tipo de sólidos suspendidos en una laguna de estabilización logra producir biomasa sedimentable, fácil de retener, el efluente será de muy buena calidad, claro que hay que tener en cuenta que la antigüedad de la planta de tratamiento de Anapoima no permite que este fenómeno ocurra debido al tiempo de retención hidráulica que no es el suficiente para sedimentar. La cantidad de vacacionistas que recurren a este tipo de lugares por su clima como es el municipio de Anapoima ocasionan un aumento en la demanda de desechos de origen doméstico. Por otro lado la cantidad de Cryptosporidium spp a la salida fue de un 100% en ocho de las 15 muestras, lo que indica que existe

CRYPTOSPORIDIUM ENTRADA Y SALIDA DE ANAPOIMA

0

1

2

3

4

5

6

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 NUMERO DE MUESTREO

CO

NC

ENTR

AC

ION

DE

CR

YPTO

SPO

RID

IUM

EN

UL/

1000

ml

ENTRADA SALIDA

Page 199: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

un buen porcentaje de reducción por parte de la planta. Cuando se analizó la muestra 12 se observó la misma cantidad de ooquistes a la entrada y salida. Sin embargo, no podemos decir que no hubo reducción, ya que el agua que salió es un agua que entro hace quince días a la planta de tratamiento, esto fue debido como ya habíamos mencionado anteriormente a muchos factores que influyen en la reducción de microorganismos. Podemos suponer que al igual que las bacterias y los huevos de helmintos factores como la temperatura, el tiempo de retención hidráulica, adherencia de los microorganismos a los sedimentos y el pH influyen en la reducción de ooquistes de Cryptosporidium spp. La planta recibe muchos vertidos de diversos orígenes especialmente doméstico y de otras actividades relacionadas con la agricultura. Un factor importante en la eliminación de parásitos del tipo Giardia spp y Cryptosporidium spp es la existencia de los UASB en la planta de tratamiento de Anapoima. Este reactor de tipo anaerobio permite más rápidamente la oxidación bioquímica de las aguas de origen industrial, al poseer bacterias de tipo anaerobio que rompen los enlaces químicos y principalmente aquellos que contienen el ión oxígeno facilitando la degradación de la materia y la eliminación de los microorganismos aeróbios o heterótrofos facultativos como es el caso de la Giardia y el Cryptosporidium.

En este proceso, el residuo que se quiere tratar se introduce por la parte inferior del reactor. El agua residual fluye en sentido ascendente a través de un manto de fango constituido por gránulos o partículas formadas biológicamente. El tratamiento se produce en ponerse al entrar en contacto el agua residual y las partículas. Los gases producidos en condiciones anaerobias (principalmente metano y dióxido de carbono) provocan una circulación interior, que colabora en la formación de y mantenimiento de los gránulos. Parte del gas generado dentro del manto de fango se adhiere a las partículas biológicas. Tanto el gas libre como las partículas a las que se ha adherido gas, asciende hacia la parte superior del reactor. Allí, se produce la liberación del gas adherido a las partículas, al entrar éstas en contacto con unos deflectores desgasificadores (METCALF, 1995). Los lodos producidos en las plantas de tratamiento pueden ser digeridos en reactores anaerobios. En este caso, la eficiencia en la eliminación de los patógenos depende de la temperatura y del tiempo de retención. Digestores anaeróbicos que operan como sistemas cerrados, donde toda la masa de lodo esta a una temperatura constante durante un tiempo fijo preestablecido, pueden eliminar todos los microorganismos, si la temperatura es de 500C y el tiempo de permanecía es de 13 días. Cuando la temperatura disminuye a

Page 200: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

32oC y el tiempo de permanecía aumenta a 28 días, ocurre la eliminación de virus y protozoarios y permanecen algunas bacterias y huevos de helmintos. En condiciones de temperatura ambiente, solo son eliminados algunos protozoarios después de algunos meses. En los lechos de secado, períodos de 2 a 3 meses pueden eliminar virus y bacterias y eventualmente protozoarios, si las temperaturas son superiores a 200C. Los efluentes de lagunas de estabilización en lagunas en serie, con tiempos de retención hidráulica inferior a diez días presentan parásitos. Cuando este tiempo se aumenta a veinte días, estos desaparecen del efluente MENDOZA, 2000. INFLUENCIA DE LOS PARÁMETROS FISICO-QUÍMICOS SOBRE LA CONCENTRACIÓN DE LOS INDICADORES PARASITARIOS Según Los análisis estadísticos de los parámetros físico-químicos (DBO, DQO, SDT, conductividad), temperatura y precipitaciones estos son determinantes en la concentración de los indicadores parasitarios.

CONCLUSIONES • El análisis parasitológico

realizado en los sistemas de lagunaje de los municipios de Chocontá y Anapoima han

mostrado la presencia de quistes de Giarda spp y Cryptosporidium spp por medio de inmunofluorescencia directa.

• Según los datos obtenidos se pudo determinar la eficacia de los sistemas de lagunaje de la cuenca alta y baja del río Bogotá con énfasis en la reducción de Giardia spp y Cryptosporidium spp con valores que van desde 5.56 UL hasta 6.54 UL para la Giardia spp y 1.73 UL a 1.15 UL para Cryptosporidium spp en Chocontá, y para Giardia spp de 5.82 UL a 7 UL y de 2.34 UL a 0.63 UL en Anapoima.

• El análisis comparativo de los efluentes de las dos plantas de tratamiento estudiadas ha evidenciado, desde un aspecto cuantitativo, una mayor carga parasitaria de quistes en 17 muestras, en términos generales, en la planta de Chocontá desde el punto de vista cualitativo, ambas plantas depuradoras han presentado en sus efluentes las mismas especies parasitaria Giardia spp y Cryptosporidium spp, por lo que podríamos decir que la existencia de animales ( gallinas, cerdos y vacas principalmente) de granja en las poblaciones en la zona de Chocontá parece ejercer una aparente influencia sobre la presencia de Giardia spp y Cryptosporidium spp detectados en dichas planta.

• El número promedio de quistes de Giardia spp es de 2.4 UL/ 1000ml y de ooquistes de

Page 201: DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACION DE CRYPTOSPORIDIUM …

Cryptosporidium spp es de 0 UL/ 1000ml detectados en los efluentes de ambas depuradoras es muy alto en aguas residuales depuradas que se reutilizan para riego de cultivos; en este sentido, los efluentes de las dos plantas estudiadas no podrían ser reutilizados en agricultura con un riesgo para la salud humana, en lo que respecta a las parasitosis por Giardia spp y Cryptosporidium spp que se podrían transmitir según MENDOZA.

• En la utilización de los indicadores parasitarios Giardia spp y Cryptosporidium spp en sistemas de lagunaje fue evidente su presencia además de sus concentraciones constantes en las plantas de tratamiento evaluadas, demostrando un factor de contaminación continuo de tipo doméstico.

• Los indicadores parasitarios demostraron su cumplimiento con gran parte de las condiciones de un buen indicador, concentraciones constantes, presentes en todos los lugares de contaminación fecal, son resistentes a condiciones adversas y los métodos para el análisis son rápidos, económicos y no implican riegos.

• Al determinar y cuantificar la concentración de estos parásitos en los sistemas de lagunaje y al investigar en los Hospitales de los dos municipios estudiados la existencia de casos de diarrea

producidos por dichos microorganismos (Giardia spp y Crypstosporidium spp) se buscaba que existiera una correlación tipo parásito Vs diarrea y no se pudo establecer una relación, debido a que la población cuando comienza a presentar síntomas de diarrea no acude al centro de salud de inmediato, impidiendo de esta manera que dicho centro hospitalario tenga una estadística referente al número total de casos ocasionadas por la utilización de aguas residuales.

• Uno de los problemas más serios en Anapoima es la ocurrencia de flotación de lodo o bulking. Este fenómeno indica que el lodo formado tiene dificultades de sedimentación y por el hecho de estar flotando, puede ser descargado con el efluente final, compromete al propio tratamiento.

• En las lagunas facultativas, la remoción y la muerte de los indicadores parasitarios esta influenciado por los parámetros físico-químicos (DBO, DQO, SDT y conductividad.

• El tiempo de retención hidráulica de las aguas residuales dentro de la laguna es sin duda, un factor decisivo, que determina la eficiencia del sistema.

• Los valores de concentraciones parasitaria equivalentes a cero no indican que no existe Giardia spp y Cryptosporidium spp. Esto puede deberse a la sensibilidad de la técnica, el tiempo de

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retención hidráulica, la adherencia de los microorganismos a los sedimentos, la temperatura y el pH.

• Si analizamos por otra parte el problema del funcionamiento de las plantas de tratamiento para aguas residuales en Colombia, todavía la falta mucha aplicabilidad de los principios básicos de la ciencia y de a ingeniería a los problemas de control de las aguas contaminadas. El objetivo final de toda planta de tratamiento es la gestión del agua residual y la protección del medio ambiente empleado medidas conformes a las posibilidades e inquietudes económicas, sociales y políticas.

• Las plantas de tratamiento de Chocontá y Anapoima no cumplen con lo establecido por el artículo 71 del 24 de junio de 1984, para el manejo, administración y control del recurso hídrico.

• Para reducir o eliminar el riesgo sanitario proveniente del uso agrícola de aguas residuales, se pueden tomar cuatro medidas de protección: el tratamiento de aguas residuales, la restricción de cultivos en campos regados con agua residual, el control de la exposición humana a aguas residuales, y los modos de aplicación.

• Las aguas residuales domésticas casi siempre contienen huevos de helmintos y quistes de protozoos. Las concentraciones de ambos

encontrados en la literatura varían mucho. Esto debido a situaciones locales, como el número de portadores en la comunidad, o a la presencia en el agua residual de aguas procedentes de un matadero.

AGRADECIMIENTOS Agradecemos a la Unidad de Saneamiento y Biotecnología Ambiental de la Pontifica Universidad Javeriana quien nos proporciono un espacio dentro de sus instalaciones para el análisis de nuestro estudio. De manera muy especial agradecemos a la CAR (Corporación Autónoma Regional) quienes nos ofrecieron todo el apoyo y colaboración de manera muy especial, sin dejar de lado al cuerpo de docentes de la Pontificia Universidad Javeriana en cabeza del Doctor Carlos Corredor y aquellos que por una u otra razón fueron artífice de esta gran meta. • REFERENCIAS

BIBLIOGRAFICAS

CORPORACIÓN AUTÓNOMA REGIONAL DE CUNDINAMARCA (CAR). (1999). Municipio de Anapoima. Planta de tratamiento de aguas residuales. Manual de operación y mantenimiento: 24 GASPARD, P., WIART., J AND SCHWARTZBROD ., J. (1997). Parasitological. Contamination of

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urban Sludge used for agricultural purposes. Waste Management & Research. (15): 429-436. INSTITUTO NACIONAL DE SALUD ( INS ). (1987). Cryptosporidiosis. Ministerio de Salud:40

MENDOZA, S. (2000). Sistemas de laguna de estabilización. McGraw Hill: 68-136. REVISTA; FASPIN 2000 SOTTO, A. Giardiasis. (1999) Ministerio de Cultura, ed científico-técnica. Cuba:100

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ANEXO VI

OBSERVACIÓN, IDENTIFICACIÓN Y RECUENTO DE PARÁSITOS POR

INMUNOFLUORESCENCIA

Las muestras se visualizan con el microscopio de inmunofluorescencia y se

observan todos los campos, siendo estos representativos de los 15 uL servidos en

el pozo, diferenciando a la vez la presencia de Cryptosporidium sp y Giardia sp.

Por lo que se refiere a la cuantificación de Cryptosporidium y/o Giardia en un litro,

existe una fórmula de recuento adaptada a la técnica; que se explica a

continuación con un ejemplo:

3 Cryptosporidium sp y/o Giardia sp observados en toda la lamina

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1 Ul ----- 1x10 -3 ml

15 Ul ----- X

X = 0.015 ml

3 Cryptosporidium sp y/o Giardia sp -------- 0.015 ml

X -------- 1000 ml

X = 200.000 Cryptosporidium sp y/o Giardia sp / 1 Litro de agua residual.

Expresión de resultados

Se informa la cantidad de Giardia sp y Cryptosporidium sp contenida en 1 litro de

agua residual.

Sensibilidad y especificidad de la técnica

Giardia spp Crypstoporidium spp

Especificidad 93.90% 85.30%

Sensibilidad 96.60% 92.30%

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ANEXO VII

ANÁLISIS FISICO-QUÍMICOS DE LA PLANTA DE TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES DE CHOCONTA.

PLANTA DE TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES DE CHOCONTA

FECHA PRECI DBO DQO TEMPERATURA SDT CODUCTIVIDAD

ENTRADA SALIDA % REDUC ENTRADA SALIDA % REDUC ENTRADA SALIDA ENTRADA SALIDA % REDUC ENTRADA SALIDA % REDUC OCT 11 1999 0.5 140 29.3 79.1 295 103 65.09 18 18 ND ND ND ND ND ND

OCT 13 1999 0.1 140 29.3 79.1 295 103 65.09 18 18 ND ND ND ND ND ND

MAY 12 2000 0.2 216 37 82.88 670 215 65.09 15.4 15.4 0.153 0.18 15 0.907 0.037 -2351

MAY 15 2000 0 216 37 82.88 670 215 67.92 15.5 18.6 0.192 0.184 -4.3 0.985 0.696 -41.52

MAY 17 2000 0 216 37 82.88 670 215 67.92 16.3 20 0.204 0.183 -11.47 0.408 0.967 57.8

FEB 14 2001 0 212 15.5 92.69 543 135 75.14 15 14 0.56 0.23 -143.47 1.12 0.45 -148.88

FEB 21 2001 0 212 15.5 92.69 543 135 75.14 15 14 0.974 0.253 -284.99 0.747 0.508 -47.04

MAR 4 2001 0 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

MAR 24 2001 1.5 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

MAR 25 2001 0 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

MAR 27 2001 0 551 103 81.31 927 334 63.97 ND ND ND ND ND ND ND ND

MAR 28 2001 0 551 103 81.31 927 334 63.97 ND ND ND ND ND ND ND ND

MAR 29 2001 0 551 103 81.31 927 334 63.97 ND ND ND ND ND ND ND ND

PROMEDIO 0.18 193.1 51 83.615 646.7 212.3 67.33 16.17 16.86 0.42 0.21 -85.846 0.83 0.53 -506.13

MAXIMO 1.5 551 103 92.69 927 334 75.14 18 20 0.974 0.253 15 1.12 0.967 57.8 MINIMO 0 140 15.5 79.1 295 103 63.97 15 14 0.153 0.18 -284.99 0.408 0.037 -2351

ND: No determinado.

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ANEXO VIII

ANÁLISIS FISICO-QUÍMICOS DE LA PLANTA DE TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES DE ANAPOIMA.

PLANTA DE TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES DE ANAPOIMA

FECHA PRECI DBO DQO TEMPERATURA SDT CODUCTIVIDAD

ENTRADA SALIDA % REDUC ENTRADA SALIDA % REDUC ENTRADA SALIDA ENTRADA SALIDA % REDUC ENTRADA SALIDA % REDUC

JUL 12 2000 0 330 69,6 78.9 659 419 36.4 24.6 27.6 0.46 0.34 -35.29 0.918 0.68 -35

JUL 17 2000 11 330 69,6 78.9 659 419 36.4 28.4 25 0.475 0.945 49.73 0.95 0.691 -37.48

JUL 24 2000 0 330 69,6 78.9 659 419 36.4 28.2 28.3 0.478 0.336 -42.26 0.96 0.673 -42.64

JUL 26 2000 11.9 330 69,6 78.9 659 419 36.4 27.7 25.5 0.761 0.949 19.81 0.98 0.698 -40.4

AGO 21 2000 0 210 91,0 56.7 426 498 -16.9 19 19 ND ND ND ND ND ND

AGO 27 2000 0 210 91,0 56.7 426 498 -16.9 19 19 ND ND ND ND ND ND

FEB 26 2001 0 71,0 53,4 24.8 250 224 10.4 16 16 0.39 0.3 -30 0.78 0.61 -27.86

FEB 28 2001 0 71,0 53,4 24.8 250 224 10.4 16 16 0.36 0.32 -12.5 0.71 0.63 -12.69

MAR 4 2001 0 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

MAR 5 2001 18.7 ND ND ND ND ND ND ND ND 0.35 0.3 -16.6 0.71 0.6 -18.33

MAR 7 2001 0.9 ND ND ND ND ND ND ND ND 0.3 0.27 -11.1 0.6 0.55 -9.09

MAR 11 2001 0 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

MAR 23 2001 0.5 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

MAR 24 2001 0.9 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

MAR 25 2001 0 ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND

PROMEDIO 2.94 235.25 70.9 59.83 498.5 390 27.7 22.36 22.05 0.45 0.47 -9.78 0.83 0.64 -27.94

MAXIMO 18.7 330 91 78.9 659 498 36.42 28.4 28.3 0.76 0.949 49.73 0.98 0.698 -9.09

MINIMO 0 71 53.4 24.8 250 224 -16.9 16 16 0.3 0.27 -42.26 0.6 0.55 -42.64

ND: No determinado

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