Difficultés au cours de l’immunofixation sérique 2009

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Immuno-analyse et biologie spcialise (2009) 24, 100103

TECHNIQUES AU QUOTIDIEN

Difcults au cours de limmunoxation sriqueProblems in immunoxation electrophoresis N. Ghrairi , H. Bouakkez , A. Dahmouni , I. Nahdi , L. Mechmeche , L. Boughnim , S. YalaouiLaboratoire de biologie mdicale, hpital Abderrahmane Mami, 2080 Ariana, Tunisie Recu le 21 novembre 2008 ; accept le 31 janvier 2009 Disponible sur Internet le 21 mars 2009

KEYWORDSImmunoxation electrophoresis; Monoclonal immunoglobulin; 2-mercaptoethanol

Summary Immunoxation electrophoresis (IFE) allows identication of monoclonal immunoglobulins detected as peaks in serum protein electrophoresis. The interpretation of IFE is generally easy; however difculties can be encountered in daily practice. Two examples of difculties with interpretation are presented: a rst case of IFE revealing two monoclonal bands in IgA and kappa tracks which made us suspect of a biclonal gammopathy and which was resolved by the use of 2-mercaptoethanol. Second IFE case was characterized by a non specic precipitation in all tracks which rendered necessary the use of antisera from a different manufacturer. These examples show that it is important to know the possible sources of error in routine practice of IFE in order to make the specic corrective actions. 2009 Published by Elsevier Masson SAS. Rsum Limmunoxation permet lidentication des immunoglobulines monoclonales dtectes sous formes de pics llectrophorse des protines sriques. Linterprtation de limmunoxation est gnralement facile, cependant des difcults peuvent tre rencontres en pratique quotidienne. Deux exemples dinterprtation dlicate sont prsents : un cas dimmunoxation rvlant deux bandes monoclonales IgA kappa faisant suspecter une gammapathie biclonale, rsolu par lutilisation de mercaptothanol et un second cas caractris par une prcipitation non spcique sur lensemble des pistes, ce qui a ncessit lemploi dantisrums dun fabricant diffrent. Ces exemples montrent quil est important de connatre les sources possibles derreur dans la pratique de limmunoxation an de mettre en uvre les actions correctives ncessaires. 2009 Publi par Elsevier Masson SAS. e

MOTS CLSImmunoxation ; Immunoglobuline monoclonale ; Mercaptothanol

Auteur correspondant. Adresse e-mail : ghrairi [email protected] (N. Ghrairi).

La gnralisation de la pratique de llectrophorse des protines dans les laboratoires conduit souvent la dcouverte de pics dimmunoglobulines monoclonales, situs essentiellement dans les zones des bta et gamma globulines. Anciennement, limmunolectrophorse des protines

0923-2532/$ see front matter 2009 Publi par Elsevier Masson SAS. e doi:10.1016/j.immbio.2009.01.003

Difcults au cours de limmunoxation srique sriques et urinaires et actuellement limmunoxation permettent le typage des immunoglobulines monoclonales dtectes llectrophorse. Linterprtation des rsultats est en gnral aise. Cependant, des difcults peuvent tre rencontres en pratique quotidienne. cet effet, nous prsentons deux exemples dinterprtation dlicate dimmunoxation de protines sriques.

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MthodesLe systme dimmunoxation srique Sebia (coffret Hydragel IF K 20) a t utilis dans ce travail. La technique se droule en deux tapes : la premire tape repose sur la sparation des protines sriques par lectrophorse sur gel dagarose aprs dilution des srums (1/5e pour la piste IgG, les autres pistes au moiti) par un tampon diluant de pH 7,5 contenant du bleu de bromophnol fourni dans le coffret ; la seconde tape est limmunoprcipitation des immunoglobulines par des antisrums spciques (Sebia) prts lemploi suivie de la rvlation par un colorant violet acide. Le volume utilis pour chacun des cinq antisrums (G, A, M, kappa, lambda) est de 25 L. Une sixime piste (ELP) est utilise pour la rvlation du prol protique grce une solution de xation.

Figure 2 kappa.

Double bande monoclonale dans les pistes IgA et

Les observationsObservation 1Le srum de M. A.B., patient g de 40 ans, est tudi en immunoxation suite la dcouverte dun pic bta2 sur llectrophorse des protines sriques (Hydragel K20 Sebia ) (Fig. 1). Limmunoxation rvle la prsence de deux bandes au niveau de la piste de lantisrum anti-IgA (une bande discrte du ct anodique accole a une bande plus intense du cot cathodique) ainsi que deux bandes de mme localisation sur la piste de lantisrum antichane lgre kappa (Fig. 2). Les concentrations sriques des IgG, IgA, Ig M mesures par nphlmtrie (Minineph Binding Site ) sont respective-

Figure 3 Immunoxation srique : traitement rducteur au BME : IgA monoclonale kappa.

ment de 7,4 g/l (valeurs normales : 6,58 g/l18,37 g/l), 19 g/l (valeurs normales : 0,71 g/l3,60 g/l), 0,4 g/l (valeurs normales : 0,4 g/l2,36 g/l). Limmunoxation aprs traitement du srum du patient par le bta mercapto-thanol (Sigma ) 1 % pendant une heure 37 C montre nalement un prol diffrent ne rvlant quune seule bande au niveau des deux pistes des antisrums anti-IgA et antichane lgre kappa (Fig. 3). La recherche de chanes lgres dans les urines par immunolectrophorse est ngative. Le diagnostic de mylome Ig A est conrm par mylogramme.

Observation 2Le srum de M. O.N, patient g de 70 ans est tudi en immunoxation. Llectrophorse des protines sriques ayant montr un pic au niveau des bta2 globulines (Hydra-

Figure 1

lectrophorse de protines sriques : pic en bta2.

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N. Ghrairi et al. dimmunoglobulines polymrises. En effet, lexistence dans la premire immunoxation srique de deux bandes monoclonales IgA avec deux bandes correspondantes dans la piste des chanes lgres kappa fait plus penser une IgA monoclonale sous diffrentes formes de polymrisation qu la prsence dune gammapathie biclonale. Le BME a permis de couper les ponts disulfures de lIgA polymrise et dobtenir une molcule monomrique et nalement dhomogniser sa mobilit lectrophortique. Les difcults dinterprtation de limmunoxation en raison de la polymrisation des protines se rencontrent plus souvent avec lIgM, molcule pentamrique de haut poids molculaire mais peuvent mme se voir avec les chanes lgres des immunoglobulines [1,3]. Ainsi, le fabricant Sebia recommande lutilisation dun ractif, le uidil, non fourni avec le coffret dimmunoxation, pour traiter les chantillons particulirement visqueux et ventuellement de procder un traitement rducteur par le BME pour les protines polymrises. Le BME peut se rvler utile, notamment dans les rares situations o une IgM monoclonale resterait adhrente la membrane poreuse de lapplicateur et ne diffuserait pas dans le gel [2]. La seconde observation soulve un autre type de difcult qui est celui de la prcipitation au point de dpt, ce qui rend pratiquement impossible une interprtation correcte de limmunoxation. Ce type de problme peut sexpliquer par la prsence dadditif dans le gel : le polythylne glycol. Ce composant visant optimiser la raction antigneanticorps peut tre la cause dinterfrence en prcipitant certaines protines prsentes dans le srum et en empchant les immunoglobulines de migrer librement dans cet agrgat. Lutilisation de coffrets ne contenant pas ce type dadditifs peut pallier ce genre de problme [4]. Par ailleurs, l aussi, lutilisation de uidil et de BME peut savrer utile. Dans notre observation, nous avons rsolu le problme en utilisant des antisrums dune autre rme commerciale (Diasorin ) dont lutilisation dans notre laboratoire tait jusque-l rserve la technique dimmunolectrophorse classique. Cela peut souligner un autre aspect important dans la pratique quotidienne de limmunoxation, savoir la qualit des antisrums utiliss sachant que les antisrums sont susceptibles de variations inter lots. Il est ainsi utile de disposer dantisrums de deux rmes diffrentes quon pourrait choisir en fonction des besoins [4].

Figure 4 depot.

Immunoxation srique : prcipitation au point de

Figure 5 Immunoxation avec antisrums Diasorin : bande monoclonale en pistes IgA et kappa.

gel K20 Sebia ). Les concentrations sriques des IgG, IgA et IgM mesures par nphlmtrie (Minineph Binding Site ) sont respectivement de 11,24 g/l, 6,65 g/l et 1,12 g/l. Limmunoxation srique (Fig. 4) montre une prcipitation au point de dpt dans les six pistes de la plaque rendant ardue linterprtation. En utilisant des antisrums dune autre rme commerciale (Diasorin ), une seconde immunoxation du mme chantillon de srum non trait rvle la prsence dune bande Ig A monoclonale de type kappa de faible concentration (Fig. 5).

ConclusionSimple et rapide raliser sur le plan pratique, limmunoxation nest cependant pas dnue de piges et donc de problmes pour son interprtation. Ces deux exemples illustrent certaines difcults rencontres et les actions correctives qui peuvent tre mises en place, comme lutilisation par exemple du BME mais aussi dantisrums dorigine commerciale diffrente.

Discussion Conits dintrtsLa premire observation illustre lintrt de lutilisation du bta mercaptothanol (BME) lors de la suspicion de prsence Aucun.

Difcults au cours de limmunoxation srique

103by semiautomated gel electrophoresis. Clin Chem 2005;51: 270. [3] Meunier JC. La dtection des composs monoclonaux difciles : Technique sur gel ou lectrophorse capillaire. Ann Biol Clin 1999;57:60510. [4] Onraed B, Nguyen M, Lerche B, Hennache B. Difcults dinterprtation de limmunoxation. Ann Biol Clin 2004;62:1039.

Rfrences[1] Abraham RS, Charlesworth MC, Owen BL, Benson LM, Katzmann JA, Reeder CB, et al. Trimolecular complexes of lambda light chain dimers in serum of a patient with multiple myeloma. Clin Chem 2002;48:180511. [2] Bossuyt X, Marien G. False negative serum protein electrophoresis in a sample with an IgM monoclonal protein