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UNIVERSIDAD DE MAGALLANES FACULTAD DE INGENIERIA
DEPARTAMENTO DE QUIMICA PUNTA ARENAS
″ ESTUDIO QUIMICO DE Berberis coletioides Lechl ″
MARISEL ARAYA ROJAS -2006-
UNIVERSIDAD DE MAGALLANES FACULTAD DE INGENIERIA
DEPARTAMENTO DE QUIMICA PUNTA ARENAS
″ ESTUDIO QUIMICO DE Berberis coletioides Lechl ″
TRABAJO DE TITULACION PRESENTADO EN CONFORMIDAD A LOS REQUISITOS
PARA OBTENER EL TITULO DE INGENIERO DE EJECUCION EN QUIMICA, MENCION
INDUSTRIA Y MEDIO AMBIENTE.
PROFESOR GUIA: DR. VICTOR FAJARDO MORALES.
MARISEL ARAYA ROJAS -2006-
i
RESUMEN
El estudio de productos naturales, en la actualidad ocupa un importante papel en el
desarrollo de nuevas alternativas en áreas terapéuticas, agrícolas y cosmetológicas, entre
otras. La presente investigación está dirigida a determinar la composición química de los
alcaloides en una especie vegetal del género Berberis, B. coletioides.
En este estudio, se aislaron y caracterizaron dos alcaloides del tipo proaporfínico: N-
óxido de pronuciferina (BC-20), pronuciferina (A-2), y una berbina que corresponde al
alcaloide cuaternario berberina (B-3).
La determinación estructural de estos compuestos se llevó a cabo mediante técnicas
modernas de análisis: RMN-1H, RMN-13C, y espectrometría de masas. También se incluye
una recopilación bibliográfica acerca de los estudios químicos y de actividad biológica
realizados en los últimos diez años en el género Berberis.
ii
INDICE
Objetivos……………………………………………………………………...………………1
CAPITULO PRIMERO
1.0 Introducción…………………..….………………………………………………….…….3
1.1 Descripción Botánica………...…...………………………….............................................4
1.1.1 El Género Berberis…………………………………………………………..……..….....4
1.1.2 Descripción Química...……………………………………………..…………...….……6
1.1.3 Estudio de Actividad Biológica……..................……....................................................11
1.2 Técnicas espectroscópicas modernas utilizadas en este estudio....………………………15
CAPITULO SEGUNDO
2.0 Generalidades…………………………………………..……………………..............….18
2.1 Material Vegetal………………………………………….…………………..………......19
2.2 Separación Cromatográfica…………………………………………...………………….19
2.3 Serie de diagramas del procesamiento de B. coletioides………………..….…………….20
iii
CAPITULO TERCERO
3.0 Resultados……………………..……...……………………………….………………....23
CAPITULO CUARTO
4.0 Conclusiones………………………………………………………..……………...……..36
Espectros………………………………………………………….……….…………………39
Referencias………………………………………………….………………..…………..…..52
iv
INDICE DE FIGURAS
Figura Página
1. Método Ácido-Base…………………………………………..………………………20
2. Proceso de separación cromatográfica del extracto básico………………...…………20
3. Proceso de separación cromatográfica del extracto ácido……...……………………..21
4. Espectro RMN-1H de BC-20…………………..……………………….……………..38
5. Espectro RMN-13C desacoplado de BC-20…………………..………………….……39
6. Espectro RMN-13C-DEPT de BC-20…………………..……………………………..40
7. Espectro de masas de BC-20…………………..………………………...……………41
8. Espectro de secuencia de pulso GHSQC de BC-20…………………..……...……….42
9. Espectro de secuencia de pulso GHMBC de BC-20…………………..……………...43
10. Espectro de secuencia de pulso GHMBC de BC-20…………………..…….………..44
11. Espectro de secuencia de pulso GHMBC de BC-20…………………..……………...45
12. Espectro de secuencia HETCOR de BC-20…………………..…………………...….46
13. Espectro de secuencia NOESY de BC-20…………………..……………………..….47
14. Espectro RMN-1H de A-2………………………………...…………………………..48
15. Espectro RMN-13C desacoplado de A-2………………………………...……………49
16. Espectro de masas de A-2………...……………………………………….………….50
17. Espectro RMN-1H de B-3………...……………………………………….………….51
18. Espectro RMN-13C desacoplado de B-3 ..……………………………………………52
v
INDICE DE TABLAS
Tabla Página
1. Alcaloides aislados del género Berberis………………………………..…………….10
2. Sistemas cromatográficos utilizados en el fraccionamiento químico……..………….18
3-1. Datos del espectro RMN-13C desacoplado para el compuesto BC-20…………..…..27
3-2. Datos del espectro RMN-13C-DEPT para el compuesto BC-20…………..…………28
3-3. Datos de RMN de 1H, 13C, GHSQC, GHMBC, HETCOR y NOESY para BC-20….29
3-4. Datos del espectro RMN-13C desacoplado para el compuesto A-2……….…………32
INDICE DE ESTRUCTURAS
Estructura Página
I. (+)–berbamunina …………………………………………………………………..8
II. (+)–temuconina…………………………………………………………………….8
III. (-)–baluchistanamina……………………………………………………………….9
IV. (-)–punjabina……………………………………………………………………….9
V. glaziovina…………………………………………………………………..……..24
VI. pronuciferina………………………………………………………….…………..24
VII. Estructura propuesta para el compuesto BC-20…………………………………..25
VIII. Estructura dada para el compuesto A-2…………………………………………..33
IX. Estructura para el compuesto B-3……………….……………………..…………34
1
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Estudiar químicamente la especie Berberis coletioides (Familia Berberidaceae).
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
1. Aislar, los compuestos del extracto metanólico de Berberis coletioides mediante la aplicación
de técnicas cromatográficas.
2. Determinar la estructura de algunas de las bases terciarias y cuaternarias presentes en el
extracto metanólico de B. coletioides, utilizando técnicas modernas de análisis
espectroscópico (Resonancia magnética nuclear y espectroscopia de masas de alta
resolución).
2
CAPITULO PRIMERO
INTRODUCCION
3
1.0 INTRODUCCION
La química de los productos naturales es conocida por su acción en las más diversas áreas
del conocimiento, como la medicina, agricultura, botánica, ecología, remontándose su uso a la
planta misma o un extracto de ella. Al efecto China representa un caso excepcional con 330 mil
hectáreas cultivadas con plantas medicinales que se utilizan en un 40 % de casos de atenciones
primarias.1
En esta oportunidad, se estudia la especie Berberis coletioides, perteneciente a la
familia Berberidaceae. De B. coletioides, no existían estudios previos, de ahí el interés de
analizar los alcaloides presentes en esta especie.
El término alcaloide fue propuesto por el farmacéutico W. Meissner en 1819 y se aplica
comúnmente a los compuestos de origen vegetal que tienen propiedades alcalinas. En todos estos
compuestos, su naturaleza básica se origina por la presencia de nitrógeno amínico.2
Los alcaloides tienen dos cualidades adicionales: poseen estructuras moleculares
complejas y actividad farmacológica importante. Estos compuestos pueden estar presentes en las
hojas, semillas, raíces y cortezas.3
Ejemplos de alcaloides conocidos y de aplicación farmacológica son la estricnina, la nicotina, la
quinina y la morfina, cuyas estructuras se muestran a continuación:
N
N
CH3
N
OH3C
N
CH2
OH
Estricnina Nicotina Quinina Morfina
4
1.1 DESCRIPCION BOTÁNICA
La Familia Berberidaceae posee aproximadamente 24 géneros con 500 especies en el
género Berberis. En Chile viven alrededor de 50, de las cuales sólo 12 han sido estudiadas con
relación a sus constituyentes químicos: B. buxifolia, B. empetrifolia, B. darwinii, B.
actinacantha, B. chilensis, B. hakeoides, B. ilicifolia, B. montana, B. valdiviana, B. linearifolia,4
B. serrato-dentada y B. microphylla.5 Las especies pertenecientes a la familia Berberidaceae son
plantas herbáceas o arbustivas, en general espinosas. Hojas persistentes o caedizas, alternas,
simples o compuestas, enteras o espinoso-dentadas, pecioladas. Flores regulares hermafroditas,
unisexuales, cáliz petaloideo, corola con pétalos pequeños, estambres en número de 6, con
carpelo cerrado, pluriovulado, fruto en baya y a veces cápsula y semilla con albumen carnoso.
Una de las características mas notable de esta familia es la presencia de alcaloides por lo
cual es utilizada en medicina tradicional y usos etnobotánicos.6
1.1.1 EL GENERO Berberis
Las especies del género Berberis, son plantas fanerógamas, que contienen productos
ácidos y refrescantes, preparándose con sus frutos conservas, jarabes, limonadas y bebidas
alcohólicas. Sus hojas son apetecidas por el ganado y la corteza es amarga. Estos vegetales
contienen una materia colorante amarilla utilizándose la raíz y corteza para teñir lanas. Este
género presenta numerosas variedades ornamentales, enanas, interesantes por su abundante
floración.6
5
Características generales de especies del género Berberis presentes en Chile:7
B. empetrifolia. Lam.
Subarbusto pequeño, recostado, provisto de espinas simples de 1 cm de largo. Hojas persistentes,
filiformes, duras agrupadas, verde oscura. Flores solitarias o agrupadas en corto número. Baya
pequeña, subglobosa, negro-azulada. Crece en Argentina desde la provincia de Catamarca hasta
Tierra del Fuego. Sus frutos son comestibles.
B. linearifolia. Phil.
Arbusto de 1-2 m de altura, ramificado, con espinas trífidas. Hojas persistentes, linear-oblongas.
Flores anaranjado-rojizo. Fruto aovado negro-azulado. Abundante en Chile y Argentina.
B. buxifolia. Lam.
Arbusto de 1-1,5 m de altura, muy ramificado, con espinas trífidas. Hojas obovadas. Flores
solitarias, largamente pedunculadas. Frutos negro-azulados. Vive en el Sur de Chile y Argentina.
Sus frutos son comestibles. Florece en primavera y fructifica en verano.
B. darwinii. Hook.
Arbusto de 1-2,5 m de altura, con ramitas cubiertas de pubescencia ferrugínea, provista de
pequeñas espinas. Hojas elípticas. Flores rojizas, dispuestas en racimos plurifloros. Fruto algo
alargado, negro-azulado. Se encuentra en el Sur de Chile y Argentina. Florece en primavera y
fructifica en verano.
B. heterophylla. Juss.
Arbusto de follaje semipersistente, de 1-1,5 m de altura provisto de espinas trífidas. Hojas
coriaceas. Flores solitarias, largamente pedunculadas. Frutos esféricos, negro-azulados. Vive en
el Sur de Chile y Argentina.
6
B. montana. Gay.
Arbusto de 0,5-1 m de altura, con espinas trífidas. Hojas enteras, fasciculadas, membranosas.
Flores amarillas pecioladas, dispuestas en inflorescencias paucifloras. Fruto subgloboso. Habita
el Sur de Chile y Argentina.
Berberis horrida. Gay.
Arbusto de 40-100 cm de alto. Hojas muy gruesas, coriáceas, pecioladas. Flores amarillas, en
fascículos de 6-10 flores. Fruto en baya subglobosa, pruno-azulado. Planta Chilena de las
provincias centrales; común en Colchagua. Florece en octubre.
1.1.2 DESCRIPCION QUIMICA.4
La familia está representada en el país, únicamente por especies del género Berberis.
Las especies del género Berberis producen un ordenamiento muy especial de alcaloides
isoquinolínicos, todos los cuales derivan biogenéticamente del amino-ácido tirosina. Los
ordenamientos que se mencionan se pueden clasificar en berbinas, aporfinas, bencilisoquinolinas,
proaporfinas, protopinas, pavinas, (bis)benciltetrahidroisoquinolinas y dímeros
(bis)bencilisoquinolínicos, entre otros.
N
O
O
OMe
OMe
M e O
H O
M e O
H ON
M e
M e
Berbina: Berberina Aporfina: Magnoflorina
7
N
OMe
OMe
MeO OMe
Me
N
OMe
O
O
MeH
H
NMeHO
OMe
O
Bisbencilisoquinolina: Calafatina Proaporfina: Glaziovina
N
O
O
O
OO
Me
OMeOMe
OMeOMe
NMe
Protopina: Protopina Pavina: Argemonina
Tetrahidrobencilisoquinolinas
RN
OMe
HOH
OH
NR
OMe
H
HO
HO
S Coclaurina (R=H)S - N- metilcoclaurina (R=Me)
R Coclaurina (R=H)R - N- metilcoclaurina (R=Me)
8
Alcaloides Diméricos Bisbencilisoquinolínicos
Un hecho característico de las especies del género Berberis, es la presencia en todas ellas
de alcaloides diméricos (bis)bencilisoquinolínicos, formadas por la condensación de 2 unidades
coclaurínicas o N-metilclocaurínicas, las cuales presentan configuraciones absolutas diferentes.
La condensación inicial siempre da lugar a la unión cola-cola y nunca a la forma cabeza-cabeza.
Esto origina dimerizaciones, acompañada de O-metilaciones u O-desmetilaciones enzimáticas
generando (bis)bencilisoquinolinas simples, tales como la (+)-berbamunina (I) y la (+)-
temuconina (II), cuyas estructuras químicas son las siguientes:
N Me
MeO
H O
O
H
MeN
OH
OMe
ORH
(I) R= H
(II) R= Me
Secobisbencilisoquinolinas
Una de las principales rutas catabólicas que ocurren en la naturaleza a los alcaloides
benciltetrahidroisoquinolínicos implica una ruptura oxidativa entre los carbonos C-1, C-∝ de una
de las unidades tetrahidrobencilisoquinolínicas. Esta oxidación se presenta preferentemente en la
9
tetrahidrobencilisoquinolina que no está sustituida en C-8, debido a que el centro adyacente C-1
esta menos impedido estéricamente. Ejemplos: (-)-baluchistanamina (III) y la (-)-punjabina (IV).
MeN
OMe
OMe
O
H
MeO
NMe
O
O
HO
O
CHOO
(III)
MeN
OMe
OMe
OMe
H
MeO
NMe
MeO
O
O
O
CHO
(IV)
10
En la siguiente Tabla se describen los principales alcaloides encontrados a la fecha en
especies del género Berberis.
Tabla Nº 1: Alcaloides, aislados del género Berberis.
Nombre de la Planta Nombre del alcaloide
B. actinacantha Mart. Ex Shult aconcaguina, andesina, chilenina,
magnoflorina, pakistanamina.8
B. aristata DC berberina, palmatina.8
B. buxifolia Lam berberina, berbamina, oxyacanthina,
argemonina, norargemonina, calafatina.4-8
B. chilensis Gillies ex Hook berbamina, 7-O-desmetilisotalicberina.9
B. darwinii Hook berberina, berlambina, oxyacanthina.8
B. empetrifolia Lam chilenina, natalinina, natalamina.9
B. hakeoides Hook patagonina, valdivianina, valdiberina.8
B. heterophylla Juss berberina, berbamina, oxyacanthina.8
B. ilicifolia Forst berberina, berbamina, oxyacanthina,
ilicifolina.10-11
B. linearifolia Phil berberina, jatrorricina, palmatina.8
B. lycium Royle berberina, berbamina, berbericidina,
berbericina, palmatina.8
B. microphylla Forst papaverina, berbamina, norargemonina,
berberina.5
B. morrisonensis Hayadata berbamina, berberina, isotetrandrina,
jatrorricina, magnoflorina, palmatina.8
B. nepalensis Spreng jatrorricina.8
11
B. nervosa Pursh berberina.12
B. montana Gay berberina, jatrorricina, palmatina.8
B. Serrata Koehne berberina, berberrubina, berbamina,
columbamina, jatrorricina, oxyacanthina,
palmatina.8
B. trifoliata Moric berberina.8
B. valdiviana Phil berberina, berbamunina, chitralina,
natalamina, natalinina, patagonina.8
B. virscens Hook berbamina, berberina, berberrubina,
oxyacanthina, palmatina.8
B. zebiliana Schneider berbamina, berlambina (oxiberberina).8
1.1.3 ESTUDIO DE ACTIVIDAD BIOLOGICA.
La familia Berberidaceae ha sido de gran interés para la ciencia tanto por su composición química
como por sus notables propiedades farmacológicas. La presencia de nuevos compuestos
alcaloidales y su aplicación biológica, son una muestra de la importancia de este género, los
cuales se reseñan a continuación.
12
En general las especies del género Berberis, muestran potenciales usos en variados
ensayos biológicos.
De Berberis vulgaris, planta nativa de la península Ibérica (S. de Europa), encontraron que un
extracto de Berberis vulgaris disolvería los cristales de oxalato de calcio depositados en la vía
urinaria. Según su análisis químico, Berberis vulgaris mostró la presencia de hidratos de carbono
especialmente de disacáridos el cual forma un complejo con el Ca++, de este modo reduce la
concentración Ca++ libre, disminuyendo el tamaño y la morfología del cálculo, incluso
eliminándolo.13
Berberis paraspecta, planta nativa de la Isla Hainan, República de China, mostraron que el
extracto acuoso tenía una significativa actividad anti-angiogénica (inhibiendo la proliferación de
células tumorales) in vitro. Por esta característica es usado tradicionalmente como agente anti-
tumoral o anti-inflamatorio.14
De Berberis heteropylla, planta nativa de Comodoro Rivadavia, Argentina, por su contenido en
berberina, la utilizaron en el tratamiento de desórdenes gastrointestinales, también como
insecticida y como un agente que inhibe el crecimiento de cierto tipo de hongos.15
Del mismo modo, Berberis aquifolium, Berberis vulgaris y Berberis aristata, plantas nativas del
Monte Etna, Sicilia, Italia se utilizan para las dolores reumáticos y otros tipos de inflamaciones
crónicas. Otros estudios han demostrado que estos extractos tienen una actividad significativa
contra las bacterias, los virus, los hongos, los protozoos, y el clamidios. La caracterización y la
composición química de estas plantas demuestran que su actividad principal se debería a sus
componentes alcaloidales con un núcleo isoquinolínico tal como berberina, oxyacanthina,
berbamina y palmatina. Asimismo, se ha demostrado que la berberina tiene un efecto febrífugo
(reduce la fiebre), hipotensor, inmuno-estimulante, anti-inflamatorio y además posee
13
características antimicrobianas. Se estudió además, un posible efecto anti-tumoral. De esta
manera, las aplicaciones clínicas más prominentes de este alcaloide incluyen la diarrea
relacionada con bacterias, infecciones intestinales parásitas y las infecciones oculares
(conjuntivitis, tracoma).16
La especie Berberis crataegina nativa Cankiri, Ilgaz, Turbia, presenta actividad analgésica, anti-
pirética y anti-inflamatoria. La berberina es su componente principal.17
La especie Berberis aristata, nativa del subcontinente Indo-Pak, es una planta comestible
empleada en la medicina tradicional del sur de Asia, particularmente por sus frutas son utilizadas
como remedio tónico para el hígado y el corazón. En esta investigación, la berberina, un
compuesto conocido de esta planta, fue estudiado por su posible acción antihepatotóxica.18
La especie Berberis vulgaris conocida en Irán, pero nativa de Europa y Asia, es una planta
medicinal, también utilizada como alimento. El extracto acuoso de las frutas de esta planta
presenta actividad antihistamínica y anticolinérgica.19 Los alcaloides oxyacanthina y berberina
también aislados de esta planta, presentan actividad anti-inflamatoria en inflamaciones crónicas
como la artritis. La atención principal se ha centrado en berberina por ser más eficaz y además
porque su alto contenido en las raíces permite que la planta sea utilizada en la industria
farmacéutica.26
Berberis julianae o Berberis poiretti, que se llama “shan-Ke-Zhen” en lenguaje tradicional de
China. Se utiliza para el insomnio, la intranquilidad, el delirio debido a la alta fiebre, la
inflamación, así como para parar diarrea de enteritis y de disenterías agudas. El uso medicinal de
esta planta tiene una historia larga en medicina tradicional china. Berbamina, es uno de los
alcaloides importantes presente en esta planta.20
14
La berbamina, es utilizada contra la enfermedad de la leucemia, este alcaloide es comparado con
la droga gleveec, la cual mata las células cancerígenas, pero su uso prolongado hace a algunas
células resistentes. La berbamina mata a las células sensitivas y resistentes, por lo cual disminuye
la proliferación de células cancerígenas y además posee una actividad antileucémica.21
Berberina alcaloide isoquinolínico, encontrado en la raíz y la corteza de Berberis vulgaris, posee
actividad antihistamínica y anticolinérgica. El fruto de esta especie presenta efecto antirrítmico y
sedante.22
Berberina, es utilizada contra la leishmaniasis, los estudios indican que este alcaloide es menos
tóxico que la droga pentamidina hasta ahora suministrada, además inhibe las síntesis de los
ácidos nucleicos, por lo cual la infección no prolifera.23
7-O-demethylisothalicberina (7-O-DI), obtenido de Berberis chilensis, alcaloide
bisbencilisoquinolino. Esta droga tiene efecto sobre la actividad bioelectrica de las células
transitorias de los marcapasos del seno venoso de la rana, actúa como un hipotensor, disminuye la
presión arterial, bajando la tensión.24
Berberis integerrima, estimula la menstruación y alivia calambres uterinos. El estudio en esta
hierba sugiere no suministrar en estado de embarazo, debido a que induce contracciones
uterinas, por lo tanto puede causar un aborto.25
El extracto de las raíces de Berberis lycium, actuaría sobre el insecto aphis craccivora Koch,
resultando ser altamente tóxico para esta plaga.27
15
1.2 TECNICAS ESPECTROSCOPICAS UTILIZADAS.
1.2.1 Resonancia Magnética Nuclear
La espectroscopia de RMN permite examinar la estructura molecular en el entorno de
núcleos individuales, particularmente hidrógenos y carbonos, y proporciona información muy
detallada respecto a la constitución de una molécula.
En el espectro de RMN muchas señales aparecen como singuletes, dobletes, etc., debido a
la interacción entre núcleos vecinos o acoplamiento spin-spin. Este acoplamiento puede tener
lugar entre núcleos del mismo tipo, homonuclear (1H-1H, 13C-13C) y entre núcleos diferentes,
heteronuclear (1H-13C). La magnitud del desdoblamiento de estas señales se describe mediante la
constante de acoplamiento J.
Los experimentos de RMN de 1H y 13C unidimensionales proporcionan información sobre
la naturaleza de los hidrógenos (geminales a heteroátomos, alifáticos, aromáticos, etc.) y de los
carbonos (aromáticos, unidos a heteroátomos, etc). Por integración de las señales y acoplamientos
spin-spin. (Multiplicidad de la señal y magnitud de la constante de acoplamiento) del espectro de
protón, se deduce el número de hidrogeno y el modo en que estas se distribuyen en la molécula.
El número de señales presentes en el espectro de carbono (registrada por la técnica de
desacoplamiento de protones) indica el número de átomos de carbono presentes en la molécula.
Los experimentos de RMN bidimensionales utilizados son:
1. Experimentos de correlación homonuclear (1H-1H).
Correlación espacial:
NOESY (1H-1H): correlaciones entre protones próximos en el espacio.
2. Experimentos de correlación heteronuclear (1H-13C).
GHSQC: correlación entre átomos que se encuentran a un enlace.
HETCOR: correlación entre átomos que se encuentran a un enlace.
GHMBC: correlación entre átomos que se encuentran a dos o tres enlaces.
16
Estos experimentos son muy útiles en química orgánica para la elucidación estructural de
los productos naturales.28
1.2.2 Espectroscopia de Masas
La espectroscopia de masas (EM) es una técnica instrumental que permite, a partir de
cantidades muy pequeñas de muestra determinar la masa relativa de una sustancia,
permitiendo calcular su fórmula molecular. Para ello hace uso de las propiedades de
partículas cargadas, iones, que son más rápidas y fáciles de medir que las de las partículas
neutras. Además, las fragmentaciones o rupturas de los enlaces que sufre una molécula
expuesta a un bombardeo electrónico, permite conocer valiosos aspectos de sus
estructuras.28
17
CAPITULO SEGUNDO
Parte Experimental
18
PARTE EXPERIMENTAL
2.0 Generalidades
Los espectros de resonancia magnética de los alcaloides obtenidos fueron registrados en un
equipo Bruker de 80 MHz, usando tetrametilsilano (TMS) como referencia interna. Para
disolver las muestras se utilizó cloroformo deuterado (CDCl3).
Los espectros de masas se registraron en un espectrómetro Vg-Micromass modelo Zab 2F.
(70ev).
La concentración de las fracciones se efectuó en dos evaporadores rotatorio a presión
reducida, BUCHI, modelo CH-9230 y HEIDOLPH, Laborota 4000.
Para la cromatografía de capa fina (CCF), se emplearon cromatofolios de aluminio de sílice
(Merck, F254). En cromatografía en capa preparativa (CCFP) se empleó cromatoplacas de
vidrio de sílice (Merck, 60 HF254), de 0,5 y 0,25 mm.
Para la cromatografía de columna (CC) la sílice utilizada fue (Merck, HF 254).
Los sistemas cromatográficos utilizados fueron los siguientes (Tabla Nº2):
I. CHCl3 100 (v)
II. CHCl3 : CH3OH 98:2 (v/v)
III. CHCl3 : CH3OH 97:3 (v/v)
IV. CHCl3 : CH3OH 95:5 (v/v)
V. CHCl3 : CH3OH 93:7 (v/v)
VI. CHCl3 : CH3OH 90:10 (v/v)
VII. CHCl3 : CH3OH 80:20 (v/v)
VIII. CHCl3 : CH3OH 85:15 (v/v)
IX. CHCl3 : CH3OH 70:30 (v/v)
X. CHCl3 : CH3OH 60:40 (v/v)
XI. CHCl3 : CH3OH 50:50 (v/v)
Tabla Nº 2: Sistemas cromatográficos utilizados en el fraccionamiento químico.
19
Las placas CCF y CCFP se revelaron con luz ultravioleta (UV), bajo una lámpara de 360
nm modelo (UVGL-58). También se utilizó reactivo de Dragendorff.
2.1 MATERIAL VEGETAL
2.1.1 COLECTA
La planta se colectó en la IX Región de la Araucanía (2004). En las cercanías de
Curacautín.
2.1.2 EXTRACCION
El material vegetal utilizado en este estudio corresponde a las raíces y ramas (sin hojas, ni
flores y frutos) de la planta, la cual fue secada a temperatura ambiente, molida y posteriormente
extraída por percolación en frío con MeOH durante 48 horas.
El extracto se concentró a presión reducida en un evaporador rotario a temperatura de 40ºC,
obteniéndose una serie de fracciones las cuales se mantuvieron en congelador hasta su análisis. El
procedimiento se describe en Figura Nº 1.
2.2 SEPARACION CROMATOGRAFICA
El trabajo en B. coletioides se inició con fracciones obtenidas en separaciones realizadas
con anterioridad. En este trabajo inicial se obtuvo 80 fracciones alcaloidales; dejando el extracto
ácido para un posterior estudio.
Las muestras que se obtuvieron del extracto básico fueron 80 fracciones, aquellas con
características semejantes se reunieron, obteniéndose seis grupos de fracciones denominadas: A
(fr 33-39), B (fr 28-32), C (fr 58-62), D (fr 51-57), E (fr 22-26) y F (fr 40-42). El procedimiento
se describe en figura Nº 2.
Del extracto ácido se obtuvieron 96 fracciones, reuniéndose por su similitud las
siguientes fracciones: A (fr 41-56), B (fr 81-85), C (fr 20-24), D (fr 36-40), E (fr 60-66), F (fr 72-
75) y G (fr 89-90). Según el diagrama que se presenta en la figura Nº 3.
20
2.3 Serie de diagramas del procesamiento realizado con Berberis coletioides.
2.3.1 Figura Nº 1. Método Ácido–Base.
1.- Molienda 2.- Extracción con matanol 3.- Eliminación del solvente en evap. rotatorio a menos de 40ºC 1.- Disolución en HCl 5%, pH = 2 2.- Extracción con CHCl3 (10 × 0,2L) 1.- Evap. del solvente 1.- Basificación con NH4OH,
pH (9-10) 2.- Ext. CHCl3 (8 × 0,25L)
1. Evap. solvente
2.3.2 Figura Nº 2. Diagrama del proceso de separación cromatográfica realizado en el extracto básico de B. coletioides.
1.- CC 2.- Sistema (I, III, V, VI, VII, IX, XI) 1.- CCF 2.- Sistema (I, II, III, V) 1. CC 1. CC 1. CC 1. CC 1. CC 2. Sist. 2. Sist. 2. Sist. 2. Sist. 2. Sist. (I, IV, VI, (I, II, IV, VI, (I, II, IV, VI, (I, II,III) (VI, IX) VII, IX, XI) VIII, IX, XI) VIII, IX, XI)
1. CC 1. CC 2. Sist. 2. Sist. (IV, VI, VII, (VIII, IX, XI) IX, X)
Extracto total (400gr)
Fase orgánica Fase acuosa
Fase acuosa
Extracto ácido (6,9gr)
Fase orgánica
Extracto básico (9,0gr)
Extracto Básico (9,0gr)
80 Fracciones
29 Fr
Grupo de Fracción A-F
51 Fr 47 Fr 32 Fr 72 Fr
Fr 15 Fr11-14
18 Fr
Planta Seca
F E D C B A
25 Fr 29 Fr
21
1. CC 1. CC 2. Sist. 2. Sist. (IV, VI, VII, (VIII, IX, XI) IX, X)
2.3.3 Figura Nº 3. Diagrama del proceso de separación cromatográfica realizado en el extracto
ácido de B. coletioides.
1.- CC 2.- Sistema (II, IV, VI, VII, IX, X, XI) 1.- CCF 2.- Sistema (II, IV, V, VI)
1. CC 1. CC 2. Sist. 2. Sist. (IV, VI, VII, (IV, VI, VII VIII, IX, X, XI) VIII, IX, X, XI)
96 Fracciones
Grupo de Fracción A-G
Extracto Ácido (6,9gr)
G F E D C A
20 Fr 36 Fr
B
A″ A′
18 Fr 25 Fr
Fr 8-9
22
CAPITULO TERCERO
Resultados
23
3.0 RESULTADOS
La identidad de los compuestos de B. coletioides se estableció de acuerdo a las
características espectroscópicas de RMN-1H, RMN-13C y espectrometría de masas. Estos
alcaloides previamente se reconocieron como tales por su reacción con el reactivo de
Dragendorff, mostrando la típica coloración anaranjada.
3.1 Compuesto I
Las fracciones 41-56 denominadas A, reunidas por su similitud en CCF (Fig. Nº 3), se
llevaron a una CC, recogiéndose 20 nuevas fracciones, después de eluir con el sistema IV (tabla
Nº2). La última de estas permitió separar un único compuesto alcaloidal, denominado Compuesto
BC-20 (4,9 mg).
Una vez evaporado el solvente se obtuvo un sólido amorfo de color café, que en CCF da
una mancha anaranjada con reactivo de Dragendorff. El alcaloide presenta en el espectro RMN-
1H (fig Nº4), una señal a δ 3,32 ppm integrada para tres protones de un N-metilo enlazado a un
oxigeno; dos singuletes a δ 3,63 y 3,82 ppm, atribuidos a dos grupos metoxilos. También
presenta cuatro doble dobletes a: δ 7.01 ( J = 10,01 Hz; 2,74 Hz), δ 6.85 ( J = 10,01 Hz; 2,74 Hz),
δ 6.43 ( J = 10,01Hz; 1,92 Hz); y δ 6.31 ( J = 10,15Hz; 1,92), característicos de protones de un
sistema dienónico.29 Del mismo modo se observa un singulete a δ 6,73 ppm integrada para un
proton asociado al anillo A, de estos alcaloides, en C-3.29
El espectro RMN-13C desacoplado (fig. Nº5), muestra diecinueve señales. Una de ellas es
característica para un grupo carbonilo (δ 185,70); y otra para un N-metilo enlazado a un oxigeno
(δ 57,82).
24
El espectro RMN-13C-DEPT (fig Nº6) da cuenta de doce señales correspondientes a seis
grupos CH, tres CH2 ; y tres CH3. De ambos espectros se puede concluir la presencia siete
átomos de carbono cuaternario.
De esta forma, considerando el número de átomos de carbono y el grupo de señales en el
sistema dienónico a campo bajo con los acoplamientos respectivos se puede postular que la
molécula corresponde a un alcaloide proaporfínico. Este patrón espectroscópico analizado es
similar al mostrado en los conocidos alcaloides glaziovina (V) y pronuciferina (VI).29 Asímismo,
la señal a δ 185,70 (grupo carbonilo) en RMN-13C es representativa en este tipo de compuesto.
N
O
6
45
13 7
10
8
12
6a
32
9
1
6,41 dd6,98 dd
H
6,31 dd
6,89 dd 2,51 S
N
O
6
45
13 7
10
8
6a
32
9
1
6,41 dd6,98 dd
H
6,31 ddJo 9,9 Hz
Jm 2,7Hz
Jo 9,9Hz
Jm 1,8Hz
H3CO
HO
11
CH3
H3CON
O
CH3H
6,89 dd
6,40 dd
6,29 dd
2,39 S7,05 dd
Jm 1,8Hz
Jo 10,0Hz
Jo 9,9Hz
Jm 2,7Hz
H3CO
2
1
3 45
66a
713
810
12
11
9
(V) (VI)
La diferencia fundamental entre glaziovina, pronuciferina y BC-20 está en la señal a δ
3,32 ppm. Este desplazamiento químico estaría indicando la presencia de un N-metilo enlazado a
un oxigeno versus δ 2,51 (V) en glaziovina y δ 2,39 (VI) en pronuciferina.
25
El espectro de masas de alta resolución (fig. Nº7) presenta el ión molecular a m/z 327,15
de fórmula C19H21NO4. El cuarto oxígeno, observado en la fórmula molecular involucraría la
formación del N-óxido, un expediente considerado justificado debido a la naturaleza cuaternaria
del nitrógeno (δ 3,32 , [N-Me]+ ) y apoyado por un ión a m/z 311,15 constituyendo el pico base
en el espectro de masas.30 La presencia de los dos grupos metoxilos detectados en el espectro
RMN-1H ( δ 3,63 y δ 3,82) se enlazarían a C-1 y C-2. En principio se establecería la estructura
(VII), como la más probable.
N+
H3CO
H3CO
O
CH3
O6
45
13 7
11
10
8
12
6a
32
9
1
-
(VII)
Considerando lo anteriormente analizado, se puede sugerir que el alcaloide BC-20
corresponde a N-óxido de pronuciferina (VII), con los desplazamientos químicos a δ 7,01 y δ
6,31 (Δ = 0,70) para los hidrógenos en C-12 y C-11, respectivamente. Como la diferencia entre
ambos protones es elevada y que la estereoquímica del hidrógeno en C-6a es β, típica de los
alcaloides proaporfínicos en Berberis, la relación entre estos tres protones implicaría que todos
ellos están en posición syn.29 Los hidrógenos a δ 6,85 y δ 6,43 (Δ = 0,42) debido a su menor
diferencia estarían en posición anti, respecto al protón en C-6a. Se incluyen en la estructura
(VIIA) los valores de δ para los grupos metoxilos y el protón en C-3.
26
N+
H3CO
CH3
O6
45
13 7
11
10
12
6a
32
9
1
-
H3COH
H
H
H
H
H
O
8
3,32 S7,01 dd
3,82 S
6,31 dd
3,63 S
6,85 dd
6,73 S
6,43 dd
4,70
3b
3a
3c
(VIIA)
De acuerdo a los valores observados en GHSQC, GHMBC, HETCOR y NOESY (Tabla
3-3) se puede efectuar la siguiente asignación : H “beta” en C-6a (δ 4,70) presenta una alta
interacción con el protón β en C-7 (δ 3,25). Este último carbono presenta un δ a 39,57 ppm. El
grupo N+-metilo (δ 3,32) presenta un NOESY(Ver fig. VIIB) con el protón a δ 3,60 ubicado
en C-5, estando ambos en posición ∝.
27
En la tabla Nº 3-1 se encuentran las señales del espectro RMN-13C desacoplado para el
compuesto BC-20.
TABLA Nº 3-1. Muestra las señales de figura Nº5.
Nº de átomo Nº de señal δ (ppm)
4 1 24,25
7 2 39,57
13 3 50,50
CH3O-2 4 56,35
[N-CH3]+ 5 57,82
CH3O-1 6 60,83
5 7 66,25
6a 8 74,10
3 9 112,12
3a 10 125,68
3c 11 127,96
11 12 128,03
9 13 128,69
3b 14 133,60
1 15 145,12
8 16 148,98
12 17 152,31
2 18 154,33
10 19 185,79
28
En la tabla Nº 3-2 se encuentran tabulados los datos del espectro de RMN-13C-DEPT para el
compuesto BC-20.
TABLA Nº 3-2. Datos del espectro RMN-13C-DEPT (figura Nº6).
Nº átomo δ (ppm) CH Nº átomo δ (ppm) CH2 Nº átomo δ (ppm) CH3
6a 74,10 4 24,25 CH3O-2 56,35
3 112,12 7 39,57 [N-CH3]+ 57,82
11 128,03 5 66,25 CH3O-1 60,83
9 128,69
8 148,98
12 152,31
29
Tabla 3-3. Datos de RMN de 1H, 13C, GHSQC, GHMBC, HETCOR y NOESY para el
compuesto BC-20. (Figura Nº 4, 5, 8, 9, 10, 11,12 y 13 respectivamente).
Atomo -C (ppm) -H (ppm) GHSQC GHMBC HETCOR NOESY
1 145,12
2 154,33
3 112,12 6,73 S 112,12 127,96; 145,12
154,33
112,12
3a 125,68
3b 133,60
3c 127,96
4 24,25 2,93; 3,54 24,25
5 66,25 3,60; 3,84 66,25
6a 74,10 4,70 74,10 2,29; 3,25
7 39,57 2,29; 3,25 39,57 127,90; 133,60
148,90; 152,30
13 50,50
8 148,98 6,85 185,79 148,98
9 128,69 6,43 128,69 50,50
10 185,79
11 128,03 6,31 127,96 50,50 128.03
12 152,31 7,01 185,79 152,31
CH3O-1 3,63 60,83 145,12
CH3O-2 3,82 56,35 154,33
[N-CH3]+ 57,80 3,32 57,82 57,82
30
El análisis anterior nos permite concluir que la estructura corresponde al alcaloide N-óxido de
pronuciferina (VIIB).
N+
H3CO
O
CH3
O6
45
13 7
11
10
8
12
6a
32
1
-
H3COH
H
H
H
HH
H
HH
HH
H
4,70
NOESY 3,84
3,60
9
3,32 S
3,25
2,29
6,43 dd
6,31 dd
7,01 dd
3,63 S
3,82 S
6,73 S2,93
3,54
NOESY
NOESY
NOESYNOESY
6,85 dd
NOESY
NOESY
NOESY
NOESY
(VIIB)
31
3.2 Compuesto II
Del extracto básico se reunieron las fracciones 33-39(A). Ver (fig. Nº2), se llevaron a CC
con sistema I como eluente (tabla Nº2). De esta columna se colectaron 29 fracciones, las que se
analizaron por CCF, luz UV y reactivo de Dragendorff. De acuerdo a este estudio, por similitud
se juntan las fracciones 8-9 (111,9 mg), que en CCF mostró un único compuesto alcaloidal (fig
Nº2), llamado compuesto A-2.
Este alcaloide es un sólido amorfo de color violeta, que en CCF revela una mancha
anaranjada con reactivo de Dragendorff.
El espectro de RMN-1H (fig. Nº14) presenta, un singulete δ 2,38 ppm atribuido a un
grupo N-metilo y dos singuletes a δ 3,80 y 3,60 ppm, correspondiente a dos grupos metoxilos.
Además presenta cuatro doble dobletes a: δ 7.02; δ 6.88 ; δ 6.39; y δ 6.27, típicos de protones de
un sistema dienónico mostrado anteriormente en N-óxido de pronuciferina. También se observa
un singulete a δ 6,64, asociado al anillo A en C-3.29
El espectro de RMN-13C desacoplado (fig. Nº15) da cuenta de diecienueve señales.
El espectro de masas de alta resolución (fig. Nº16) presenta el ión molecular a m/z 311,12
(pico base) que responde a la fórmula C19H21NO3.
32
En la tabla Nº 3-4 se encuentran tabulados los valores de los desplazamientos del espectro
RMN-13C desacoplado para el compuesto A-2.
TABLA Nº 3-4. Muestra las señales de figura Nº15.
Nº átomo Nº Señal δ (ppm)
4 1 24,99
7 2 40,66
N-CH3 3 43,57
13 4 50,37
5 5 53,94
CH3O-2 6 55,99
CH3O-1 7 60,59
6a 8 64,50
3 9 111,63
3a 10 125,57
3b 11 127,53
3c 12 128,30
11 13 128,48
9 14 132,41
1 15 144,65
8 16 148,44
12 17 152,02
2 18 154,21
10 19 185,42
33
De acuerdo a los datos obtenidos mediante los espectros de RMN: 1H, 13C y espectro de
masas se puede señalar que la estructura A-2, responde al compuesto pronuciferina (VIII).
Los principales desplazamientos químicos de protones se anotan alrededor de la molécula
(VIII).
N
H3CO
O
CH3
6
45
13 7
11
10
8
12
6a
32
1H3CO
H
H
H
H
H
H
9
2,38 S
6,88 dd
6,39 dd
6,27 dd
3,80 S
3,60 S
7,02 dd
6,64 S
3c
3a
3b
(VIII)
Por otra parte, los desplazamientos químicos de RMN-13C desacoplado, se describen en la
estructura (VIIIA).
N
H3CO
O
H3COH
H
H
H
H
H
43,57
60,59
55,99
144,65
H3CO
O
H3COH
H
H
H
H
H
128,3
185,42132,41
148,44
152,02
128,48
50,3740,66
53,94
24,99111,63
154,21 125,57
127,5364,50 CH3
(VIIIA)
34
3.3 Compuesto III
Las fracciones 81-85 se denominaron B, estas fueron reunidas por su similitud en CCF(fig Nº
3), se llevaron a una CC, colectándose 36 nuevas fracciones, después de eluir con el sistema IV
(tabla Nº2). La última de estas permitió separar un único compuesto alcaloidal, denominado
Compuesto B-3, (25 mg).
Evaporado el solvente se obtuvo un sólido amorfo de color amarillo, que en CCF da una
mancha anaranjada con reactivo de Dragendorff.
Por datos espectroscópicos, RMN (fig. Nº 17 y 18), datos físicos, Pf = 204ºC (204-
205ºC)10 y el color de B-3, se llegó a la conclusión que el compuesto corresponde a la berberina
(IX), alcaloide principal cuaternario presente en todas las especies del género Berberis estudiadas
hasta la fecha desde el punto de vista químico.11
N
O
O
OCH3
OCH3
(IX)
35
CAPITULO CUARTO
Conclusiones
36
4.0 CONCLUSIONES
El estudio de Berberis coletiodes, en base a las características espectroscópicas de los
compuestos previamente aislados, nos da como resultado tres compuestos.
• El compuesto BC-20, de fórmula C19H21NO4 y peso molecular 327, corresponde a una
proaporfina, denominado N-óxido de pronuciferina. Informado por primera vez en
especies del género Berberis.
• El alcaloide A-2, de fórmula C19H21NO3 y peso molecular 311, del mismo grupo
estructural al anterior, llamada pronuciferina.
• El compuesto B-3, cuya fórmula es C20H18NO4 y peso molecular 336, responde a una
berbina, su nombre berberina.
Dos de los tres alcaloides encontrados son farmacológicamente activos, a continuación
señalamos sus principales características:
Pronuciferina presenta un efecto tranquilizante.
Berberina, utilizado como anti-febril, hipotensor, anti-inflamatorio entre otras.
En nuestra investigación se da cuenta de tres compuestos, según el análisis químico de
Berberis coletioides se indicaría la presencia de otro alcaloide que correspondería a un compuesto
homoproaporfínico, también encontrado por primera vez en Berberis, su estereoquímica será
determinada en posteriores estudios.
37
ESPECTROS
38
Espectro RMN-1H del compuesto BC-20
Figura Nº 4: Espectro de RMN-1H, BC-20. Muestra las señales de los protones en la molécula.
39
Espectro RMN-13C desacoplado del compuesto BC-20
Pdu
Figura Nº 5: Espectro RMN-13C desacoplado de,BC-20. Muestra las señales que indican el Nº de
carbonos en la molécula.
40
Espectro RMN- 13C-DEPT del compuesto BC-20
Figura Nº 6: Espectro RMN - 13C-DEPT, BC-20, Muestra las señales de los carbonos primarios,
secundarios y terciarios de la molécula
41
Espectro de Masas del compuesto BC-20
Figura Nº 7: Espectro de Masas, BC-20. Muestra las señales que indican la masa relativa del compuesto.
m/z
Para ver esta película, debedisponer de QuickTime™ y deun descompresor TIFF (LZW).
42
Secuencia de pulso GHSQC del compuesto BC-20
Pdu
Figura Nº 8: Espectro de Secuencia de pulso GHSQC del compuesto BC-20. Muestra la correlación entre
átomos que se encuentran a un enlace.
43
Secuencia de pulso GHMBC del compuesto BC-20
PduPdu
Pdu
Pdu Figura Nº 9: Espectro de Secuencia de pulso GHMBC del compuesto BC-20. Muestra la correlación
entre átomos que se encuentran a dos o tres enlaces.
44
Secuencia de pulso GHMBC del compuesto BC-20
Pdu
Figura Nº 10: Espectro de Secuencia de pulso GHMBC del compuesto BC-20. Muestra la correlación
entre átomos que se encuentran a dos o tres enlaces.
45
Secuencia de pulso GHMBC de BC-20
Figura Nº 11: Espectro de Secuencia de pulso GHMBC del compuesto BC-20. Muestra la correlación
entre átomos que se encuentran a dos o tres enlaces.
46
Secuencia HETCOR de BC-20
Figura Nº 12: Espectro de Secuencia de pulso HETCOR del compuesto BC-20. Muestra la correlación
entre átomos que se encuentran a un enlace.
Para ver esta película, debedisponer de QuickTime™ y deun descompresor TIFF (LZW).
47
Secuencia NOESY de BC-20
Figura Nº 11: Espectro NOESY del compuesto BC-20. Muestra la correlación entre protones próximos
en el espacio.
48
Espectro RMN-1H del compuesto A-2
Figura Nº 14: Espectro de RMN-1H, A-2. Muestra las señales de los protones en la molécula.
49
Espectro RMN- 13C desacoplado del compuesto A-2
Figura Nº 15: Espectro RMN- 13C desacoplado, A-2. Muestra las señales que indican el Nº de carbonos
en la molécula.
50
Espectro de Masas del compuesto A-2
Figura Nº 16: Espectro de Masas, A-2. Muestra las señales que indican la masa relativa del compuesto.
51
Espectro RMN-1H del compuesto B-3
Figura Nº 17: Espectro RMN-1H, B-3. Muestra las señales de los protones en la molécula.
52
Espectro RMN-13C del compuesto B-3
Figura Nº 18: Espectro RMN-13C desacoplado, B-3. Muestra las señales que indican el Nº de carbonos en
la molécula.
53
REFERENCIAS
54
REFERENCIAS
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Aplicaciones. División Química de Productos Naturales y sus Aplicaciones.
Editores Garbarino, J.; y Fiedler, P. (1992).
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cell mediated immunity and the prevention of rejection on skin transplants in mice. J. Of
Ethnopharmacology, 59, 211-215 (1998).
21.- Rongzhen, X., Qinghua, D., Yingzi, Y., Xiaoying, Z., Xiaoxian, G., Dong, W., Qinghua,
L., Xiaohua, X.; y Xiao-Fang, Y. Berbamine: A novel inhibitor of bcr/abl fusion gene
with potent anti-leukemia activity. Leukemia Research, 30, 17-23 (2006).
22.- Fatehi, M., Saleh, T., Fatehi-Hassanabad, Z., Farrokhfal, K., Jafarzadeh, M.; y Davodi,
S. A pharmacological study on Berberis vulgaris fruit extract. J. Of Ethnopharmacology,
102, 46-52 (2005).
23.- Ghosh, A., Bhattacharyya, F.; y Ghosh, D. Leishmania donovani: Amastigote inhibition
and mode of actior of berberine. Experimental Parasitology, 60, 404-413 (1985).
24.- Morales, M., Gallardo, R., Martinez, J., Puebla, R.; y Hernandez, D. Effects of 7-O-
demethylisothalicberine, a bisbenzylisoquinoline alkaloid of Berberis chilensis, on
electrical activity of frog cardiac pacemaker cells. Gen. Pharmacology, 20, 621-625
(1989).
25.- Sadraei, H., Ghannadi, A.; y Takei-Bavani, M. Effects of Zataria multiflora and Carum
carvi essential oils and hidroalcoholic extracts of Pasiflora incarnata, Berberis
integerrima and Crocus sativus on rat isolated uterus contractions. The Internacional J. Of
Aromatherapy, 13, 121-127, (2003).
26.- Ivanovska, N.; y Philipov, S. Study on the anti-inflamatory action of Berberis vulgaris
root extract, alkaloid fractions and pure alkaloids. Internacional J. Immunopharmacology,
18, 553-561 (1996).
27.- Tewary, D., Bhardwaj, A.; y Shanker, A. Pesticidal activities in five medicinal plants
collected from mid hills of western Himalayas. Ind. Crops. Prod. 22, 241-247 (2005).
28.- Domínguez, D. Compuestos Bioactivos de Endemismos Canarios y Chilenos. Memoria
para el Diploma de Estudios Avanzados. (2005).
57
29.- Fajardo, V., Guinaudeau, H., Elango, V. ; y Shamma, M. J. Chem. Soc., Chem. Commun,
1350-1352 (1982).
30.- Hussaini, F.; y Shoeb, A. Isoquinoline Derived Alkaloids from Berberis chitria.
Phytochemistry. 24, 633 (1985).
58
ANEXO
59
FORMULAS ESTRUCTURALES DE LOS COMPUESTOS AISLADOS
N+
H3CO
H3CO
O
CH3
O6
45
13 7
11
10
8
12
6a
32
9
1
-
N- óxido de pronuciferina.
N
H 3CO
H 3CO
O
CH3
Pronuciferina
N
O
O
OCH3
OCH3
Berberina
