Fikar (Repaired).docx

8/11/2019 Fikar (Repaired).docx

1/45

1

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Inflamasi merupakan proses yang dimediasi oleh aktivitas mediator inflamasi

atau sel imun untuk menghadapi paparan patogen (Lundberg, 2000). Makrofag

memiliki peran penting dalam beberapa kelainan immunopatologi termasuk

produksi sitokin pro-inflamasi dan mediator inflamasi yang berlebihan, yang

secara umun diaktivasi oleh Inducible Nitrit Oxide synthases (iNOS) dan

siklooksigenase-2 (COX-2). INOS merupakan enzim yang merubah asam amino

L-arginin menjadi Nitrit Oksida (NO). Nitrit oksida merupakan mediator

inflamasi yang muncul akibat respon imun untuk membunuh patogen. Nitrit

oksida dalam jumlah banyak akan mengakibatkan respon inflamasi (Galin and

Synderman, 1999). Produksi mediator inflamasi yang berlebihan oleh makrofag

dapat menyebabkan penyakit salah satunya kanker. Janakiram et al . (2012)

melaporkan iNOS pada inflamasi kronis dapat mengarahkan NO dalam bentuk

reaktif yang dapat mengakibatkan kerusakan DNA, meningkatkan inflamasi dan

berkontribusi dalam karsinogenesis. Maka, penekanan produksi NO yang

berlebihan dapat mengurangi terjadinya inflamasi yang lebih parah.

Penekanan produksi NO dapat dilakukan secara in vitro menggunakan sel

seperti makrofag. Pada penelitian ini digunakan sel RAW 264,7 yang diinduksi

lipopolisakarida (LPS) yang berasal dari dinding sel bakteri gram negatif sebagai

inducer . Sel RAW 264,7 merupakan sel yang menyerupai makrofag yang didapat


2/45

2

dari mencit ( Mus musculus ), mirip dengan makrofag yang dihasilkan dari sumsum

tulang belakang (Berghaus et al ., 2009). Respon terhadap paparan LPS sistemik,

akan mengakibatkan interaksi antara monosit, makrofag dan neutrofil melepas

mediator inflamasi seperti NO. Kurkumin dalam temulawak dan kunyit serta

ekstrak jahe dilaporkan memiliki aktivitas sebagai agen antiinflamasi.

Temulawak, kunyit dan jahe merah (Tekuja) diketahui memiliki potensi

sebagai antikanker dan telah diuji secara in vitro dan in vivo. Kombinasi jahe, dan

cabe jawa telah diuji secara in vitro pada sel kanker Widr dapat memicu apoptosis

melalui ekspresi p53 (Ekowati et al ., 2012). Kombinasi Tekuja menunjukkan hasil

sinergis dengan pemberian agen doksorubisin dan 5-FU (Diliwiyani, 2013). Pada

penelitian in vivo , ekstrak tekuja mempunyai efek perlindungan terhadap hepar

karena efek samping kemoterapi pada tikus putih yang diinduksi doksorubisin

(Ekowati et al., 2013). Ekstrak tekuja dalam penelitian lain juga menunjukkan

efek proteksi terhadap ginjal (Harris, 2012) jantung (Hadi, 2012) dan parameter

darah (Andikacitra, 2012). Salah satu karakteristik kanker adalah terjadinya

inflamasi secara terus-menerus. Salah satu potensi Tekuja sebagai antikanker

yaitu sebagai agen antiinflamasi.

Kurkumin pada temulawak dan kunyit dapat meningkatkan produksi dari

sitokin pro-inflamasi pada PBMC ( peripheral blood mononuclear cells ) (Yue et

al., 2010). Selain itu kurkumin pada konsentrasi 5 M, 10 M, dan 20 M

mampu menurunkan produksi NO pada sel RAW 264,7 yang diinduksi LPS (Ben

et al ., 2011). Kurkumin dalam kunyit dengan konsentrasi 2 M, 4 M, dan 8 M

mampu menekan produksi NO pada sel primer mikroglial yang diinduksi LPS


3/45

3

(Jung et al ., 2006). Agarwal et al . (2005) melaporkan kurkumin dapat menekan

iNOS. Ekstrak jahe pada konsentrasi 0,5 mg/ml mampu menekan ekspresi iNOS

sebesar 5814% pada sel RAW 264,7 (Mueller et al ., 2010). 6-gingerol dan 6-

shogaol pada konsentrasi 1M, 2M, dan 3M mampu menekan produksi NO

pada sel RAW 264,7 yang diinduksi LPS (Dugasani et al ., 2010). Kombinasi dari

temulawak, kunyit dan jahe berpotensi sebagai agen anti-inflamasi. Pada

penelitian ini efek antiinflamasi akan diamati melalui penekanan kadar NO pada

sel RAW 264,7 yang diinduksi LPS.

B. Perumusan Masalah

1. Apakah kombinasi ekstrak temulawak, kunyit dan jahe merah dapat berperan

sebagai anti-inflamasi dengan menghambat produksi NO pada sel RAW

264,7 yang diinduksi LPS ?

2. Apakah peningkatan konsentrasi ekstrak temulawak, kunyit dan jahe merah

dapat meningkatkan aktivitas antiinflamasi dengan menghambat produksi NO

pada sel RAW 264,7 yang diinduksi LPS ?

C. Tujuan

1. Mengetahui efek anti-inflamasi kombinasi ekstrak temulawak, kunyit dan

jahe merah dengan menghambat produksi NO pada sel RAW 264,7 yang

diinduksi LPS.

2. Mengetahui efek peningkatan konsentrasi ekstrak temulawak, kunyit dan jahe

merah terhadap peningkatan aktivitas antiinflamasi berdasarkan

penghambatan produksi NO pada sel RAW 264,7 yang diinduksi LPS.


4/45

4

D. Manfaat Penelitian

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah mengenai

aktivitas dari ekstrak kombinasi temulawak, kunyit dan jahe merah pada sel

RAW 264,7. Kegunaan ekstrak temulawak, kunyit dan jahe merah sebagai bahan

obat-obatan alami dapat berkembang sebagai upaya pendayagunaan kekayaan

alam Indonesia.

E. Keaslian Penelitian

1. Menurut Mueller et al. (2010 ), jahe dapat menekan ekspresi iNOS secara in

vitro pada sel RAW 264,7 yang diinduksi LPS. Pada konsentrasi ekstrak jahe

0,5 mg/ml produksi NO dapat ditekan sebesar 58 14%.

2. Menurut Yue et al. (2010), kurkumin pada kunyit dan temulawak secara in

vitro dapat meningkatkan produksi dari sitokin (TGF- , TNF -, GM -CSF,

IL-1, IL -5, IL-6, IL-8, IL-10 and IL-13) pada PBMC ( peripheral blood

mononuclear cells ).

3. Menurut Dugasani et al . (2010) 6-gingerol dan 6-shogaol pada konsentrasi

1M, 2M, dan 3M mampu menekan produksi NO pada sel RAW 264,7

yang diinduksi LPS.

4. Menurut Yadav et al. (2005), temulawak secara in vitro dapat meningkatkan

sel NK ( natural killer) dan menghambat produksi NO.

Penelitian tentang potensi anti-inflamasi kombinasi ekstrak temulawak,

kunyit dan jahe merah berdasarkan penurunan kadar NO pada sel RAW 264,7

yang dinduksi LPS belum pernah dilakukan.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92775/#ch7_r77http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92775/#ch7_r77http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92775/#ch7_r77http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92775/#ch7_r77http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Yue%20GG%5Bauth%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Yue%20GG%5Bauth%5Dhttp://informahealthcare.com/action/doSearch?action=runSearch&type=advanced&result=true&prevSearch=%2Bauthorsfield%3A%28Yadav%2C+V.+S.%29http://informahealthcare.com/action/doSearch?action=runSearch&type=advanced&result=true&prevSearch=%2Bauthorsfield%3A%28Yadav%2C+V.+S.%29http://informahealthcare.com/action/doSearch?action=runSearch&type=advanced&result=true&prevSearch=%2Bauthorsfield%3A%28Yadav%2C+V.+S.%29http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Yue%20GG%5Bauth%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92775/#ch7_r77


5/45

5

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Tanaman Temulawak (Curcuma xanthorr iza)

Temulawak mempunyai klasifikasi sebagai berikut (Ravindran and

Babu ,2007):

Divisi : Spermatophyta

Sub divisi : Angiospermae

Kelas : Monocotyledonae

Ordo : Zingiberales

Famili : Zingiberaceae

Genus : Curcuma

Spesies : Curcuma xanthorrhiza Roxb.

Gambar 2.1 Temulawak

Temulawak memiliki kandungan kurkuminoid dan komponen

sesquiterpenoid bioaktif bisabolane. Komponen sesquiterpenoid bisabolane ini

terdiri dari -curcumen, ar-turmeron dan terutama xanthorizol yang mempunyai


6/45

6

aktivitas anti-bakteri dan antiinflamasi (Itokawa et al ., 2008). Kurkumin menurut

(Yue et al. , 2010) mempunyai aktivitas imunomodulator. Yadav et al, (2005)

melaporkan bahwa ekstrak temulawak dapat meningkatkan aktivitas NK dan

menurunkan produksi NO. Kurkumin dalam ekstrak temulawak memiliki efek

anti-inflamasi dengan cara meregulasi beberapa faktor transkripsi, sitokin, protein

kinase, molekul adesi dan enzim yang berhubungan dengan inflamasi (Aggarwal

and Harikumar, 2009). Kurkumin pada konsentrasi 5M, 10M, 20M mampu

menekan produksi NO pada sel RAW 264,7 yang diinduksi LPS (Ben et al .,

2011). Kurkumin dengan konsentrasi diatas 2 M mampu menghambat produksi

NO dan eskpresi iNOS pada sel RAW 264,7 yang diinduksi LPS dengan

menonaktivkan NF- B (Kim et al ., 2008).

B. Tanaman Kunyit (Curcuma longa)

Kunyit ( Curcuma longa ) memiliki klasifikasi sebagai berikut (Ravindran

and Babu , 2007):


Sub-divisi : Angiospermae

Kelas : Monocotyledoneae

Ordo : Zingiberales


Genus : Curcuma

Spesies : Curcuma longa L.
http://informahealthcare.com/action/doSearch?action=runSearch&type=advanced&result=true&prevSearch=%2Bauthorsfield%3A%28Yadav%2C+V.+S.%29http://informahealthcare.com/action/doSearch?action=runSearch&type=advanced&result=true&prevSearch=%2Bauthorsfield%3A%28Yadav%2C+V.+S.%29http://informahealthcare.com/action/doSearch?action=runSearch&type=advanced&result=true&prevSearch=%2Bauthorsfield%3A%28Yadav%2C+V.+S.%29


7/45

7

Gambar 2.2 Kunyit

Kunyit ( Curcuma longa L) merupakan tanaman tradisional yang sudah

dikenal luas dan sudah lama digunakan oleh masyarakat. Selain itu kunyit juga

dapat digunakan sebagai agen imunostimulator. Yue et al . (2010) melaporkan

bahwa kurkuminoid dan sesquiterpenoid isolat dari kunyit meningkatkan produksi

sitokin (TGF- , TNF -, GM -CSF, IL- 1, IL -5, IL-6, IL-8, IL-10 and IL-13) pada

PBMC ( peripheral blood mononuclear cells ). Kurkumin juga dilaporkan

menimbulkan sifat anti inflamasi pada mencit yang diinduksi karagen. Pada dosis

tinggi (1000 mg/kg) ekstrak kunyit dapat menekan udem sebesar 78,37% (Rustam

et al ., 2007). Selain itu, ekstrak kunyit juga bermanfat sebagai agen antiinflamasi,

pencegah kanker dan antioksidan (Olivia et al ., 2006). Kurkumin dalam ekstrak

kunyit dilaporkan mampu menghambat respon inflamasi mikrovaskuler hepatik

pada tikus BALB/C (Lukita-Atmadja et al. , 2002). Kurkumin dalam kunyit

dengan konsentrasi 2 M, 4 M, dan 8 M mampu menekan produksi NO dan

menghambat produksi iNOS pada konsentrasi 4 M, dan 8 M pada sel primer

mikroglial yang diinduksi LPS (Jung et al ., 2006).

C. Tanaman Jahe merah ( Zi ngiber offi cinale Var)

Klasifikasi tanaman jahe merah menurut Ravindran and Babu . (2007)

adalah sebagai berikut:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Yue%20GG%5Bauth%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Yue%20GG%5Bauth%5Dhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Yue%20GG%5Bauth%5D


8/45

8


Subdivisi : Angiospermae

Kelas : Monocotyledoneae

Ordo : Zingiberales (Scitamineae)


Genus : Zingiber

Spesies : Zingiber officinale Var.

Gambar 2.3 Jahe merah

Dalam rimpang jahe segar, gingerol dan shogaol teridentifikasi sebagai

komponen aktif utama. Kandungan zat aktif lain yang terdapat dalam jahe

adalah monoterpen dan seskuiterpen, kamfen, betafelandren, kurkumin, sineol,

asetat geranil, terfineol, terpen, borneol, geraniol, limonen, linalool, alfa-

zingiberen (30-70%), beta-sesquifelandren (15-20%), betabisabolen (10-15%),

dan alfa farmesen (Yeh et al ., 2014).

Zingiber officinale Var, dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan dan

antiinflamasi. NO merupakan suatu senyawa yang berperan dalam tranduksi


9/45


10/45

10

Secara garis besar inflamasi dibagi menjadi dua yaitu inflamasi akut dan

inflamasi kronis. Inflamasi akut adalah inflamasi yang terjadi segera setelah

adanya rangsang antigen. Pada tahap ini terjadi pelepasan plasma dan komponen

seluler darah ke dalam ruang-ruang jaringan ekstraseluler. Termasuk didalamnya

granulosit, neutrofil yang melakukan fagositosis untuk membersihkan debris

jaringan dan mikroba (Mitchel and Cortan, 2003). Inflamasi kronis adalah

inflamasi yang berlangsung secara terus-menerus. Inflamasi kronis dapat

disebabkan karena produksi mediator inflamasi seperti NO dan prostaglandin

secara berlebihan. Produksi NO yang berlebihan akan menyebabkan inflamasi

yang berlangsung lama dan mengawali berbagai penyakit termasuk kanker

(Jayaraman et al ., 2012).

E. Makrofag dan sel RAW 264,7

Makrofag adalah perkembangan sel dari monosit. Dalam sistem imun

makrofag berperan sebagai pertahanan pertama dalam menghadapai serangan

patogen dari luar. Makrofag berperan sebagai Antigen Presenting Cell (APC),

kemudian makrofag memaparkan antigen yang telah di fagositosis yang kemudian

merangsang sel T untuk berproliferasi dan berdiferensiasi (Varin and Gordon,

2009).

Makrofag sebagai sel penyaji antigen APC, mengekspresikan peptida

protein MHC klas II pada permukaan sel dan berikatan dengan reseptor sel T

(Tcr), sel T helper. Makrofag mensekresi Interleukin (IL)- 1, IL -6, IL-8, IL-12,

dan TNF- (Asadullah et al., 2004). Makrofag akan menstimulasi limfosit sebagai

respon terhadap patogen. Respon terhadap endotoksin seperti terhadap
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0171298508001484http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0171298508001484http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0171298508001484http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0171298508001484http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0171298508001484


11/45

11

lipopolisakarida (LPS), makrofag melepaskan beberapa sitokin proinflamasi,

seperti interleukin (IL)- 1 , IL -6 dan Tumor nekrosis factor (TNF)- yang akan

mengaktivasi nuclear factor (NF)- B. Makrofag juga akan menginduksi sintesis

nitrit oksida (NO) dan siklooksigenase-2 (COX-2) (Kim et al ., 2012). Salah satu

sel makrofag yang sudah dikultur dari mencit dan bisa dikembangkan adalah sel

RAW 264,7.

Sel RAW 264,7 adalah salah satu sel makrofag yang sudah dikultur dari

mencit dan bisa dikembangkan (Gambar 2.4). Sel RAW 264,7 merupakan suatu

monocyte-macrophage cell line yang didapat dari mencit ( Mus musculus ). Sel ini

tidak memiliki surface immunoglobulin (sIg-), Ia (Ia-) and Thy-1.2 (Thy-1.2-). Sel

RAW 264,7 sangat mirip dengan makrofag yang dihasilkan dari sumsum tulang

belakang, terutama dalam merespon ligan mikroba dan reseptor permukaan sel

yang dimiliki (Berghaus et al ., 2009). Karena itu sel ini banyak digunakan dalam

penelitian terkait dengan sistem imun.

Sel makrofag RAW 264,7 dapat ditumbuhkan dalam media yang

mengandung asam amino non-esensial dan glutamat, serta membutuhkan growth

factor dari foetal calf serum . Suhu inkubator yang digunakan adalah 37o

C dengan

kadar CO 2 5% (ATCC, 2006). Dalam keadaan normal, RAW 264,7 bersifat

adherent , melekat pada plate tempat tumbuh. Sel ini sangat sensitif terhadap

endotoksin lipopolisakarida (LPS) dari bakteri gram negatif. Adanya LPS dapat

berefek besar pada fenotip dan fungsi dari makrofag. Maka dari itu, berbagai


12/45

12

larutan yang digunakan dalam penelitian seperti buffer dan media yang digunakan

harus benar-benar steril (Hsueh and Roach, 2003)

Beberapa penelitian imunologi yang menggunakan sel RAW 264,7

dilakukan untuk mengetahui produksi sitokin dan NO pada sel RAW 264,7 dan

human peripheral blood mononuclear cell (hPBMC) yang diinkubasi dengan

berbagai flavonoid (Lyu and Park, 2005); membandingkan respon sistem imun

alami dari primary murine macrophage-lineage cells dengan sel RAW 264.7

(Berghaus et al ., 2009).

Gambar 2.4 Sel RAW 264,7 (CCRC Farmasi UGM)

F. Nitrit Oksida (NO)

Nitrit oksida (NO) disintesis dari asam amino L-argine oleh NO sintesis

enzim (NOS). NOS pada dasarnya terbagi menjadi dua yaitu eNOS yang berada di

sel endotel atau nNOS yang berada di sel neuron dan iNOS yang berada di

makrofag yang muncul akibat paparan patogen. NO adalah molekul penting

dalam pertahanan melawan paparan patogen yang dihasilkan pada sel makrofag.

Respon yang ditimbulkan akibat pemejanan endotoksin seperti LPS dan IFN- , sel


13/45

13

akan memproduksi NO dalam jumlah banyak yang akan mengakibatakan aksi

pelawanan terhadap patogen dengan respon inflamasi (Galin and Synderman,

1999).

NO merupakan salah satu efektor sistem imun yang diproduksi oleh

makrofag untuk proses destruksi intraseluler. NO memegang peranan penting

dalam sel-sel imun, termasuk sel dendritik, sel NK, sel mast, makrofag dan sel

fagosit lainnya. Ketika tubuh diserang oleh patogen maka makrofag akan

teraktivasi dan mengeluarkan sitokin pro-inflamasi seperti IL- 1, IL -6 TNF- dan

mediator inflamasi seperti NO (Lee et al ., 2010). Produksi mediator inflamasi

yang berlebihan oleh makrofag dapat menyebabkan berbagai penyakit seperti

rheumatoid arthritis (Tilg et al ., 1992), dan fibrosis pada paru-paru (Bertolini et

al ., 2001). Janakiram et al . (2012) melaporkan iNOS pada inflamasi kronis dapat

menyebabkan NO berubah dalam bentuk reaktif yang dapat mengakibatkan

kerusakan DNA, meningkatkan inflamasi dan berkontribusi dalam karsinogenesis.

Menekan timbulnya inflamasi yang menyebabkan kanker diperlukan bahan-bahan

yang mampu menekan produksi NO.

G. Lipopolisakarida

Lipopoliskarida (LPS) adalah endotoksin pada bakteri gram negatif pada

membran luar dari dinding sel yang pada keadaan tertentu bersifat toksik pada

inang tertentu. Paparan LPS dapat menginduksi respon imun dengan

meningkatkan produksi dari IL-1, IL-6, IL-8, and TNF- (Solank i et al. , 2013).

Selain itu LPS juga bisa menginduksi produksi NO (Kang et al. , 2013). Respon

terhadap paparan LPS sistemik, akan mengakibatkan interaksi antara monosit,


14/45

14

makrofag dan neutrofil melepas mediator inflamasi seperti interleukin (IL), interferon

(IFN), platelet activating factor (PAF), tumor necrosis factor (TNF- ), induci ble nitrit

oxida sintase (iNOS) dan siklooksigenase 2 (COX 2)/ prostaglandin E2 (PGE2) (Ma et

al .,2009).

Pattern recognition receptor (PRR) adalah reseptor yang secara khusus

mengenali patogen tertentu yang dimiliki oleh makrofag. PRR ini mampu

mengenali PAMP, salah satunya adalah lipopolisakarida. LPS mengikat LPS-

binding protein yang beredar dalam darah dan kompleks ini, pada gilirannya,

mengikat molekul reseptor (CD14) yang ditemukan pada permukaan sel-sel

pertahanan tubuh yang disebut makrofag. Hal ini akan dikenali oleh TLR-4, TLR-

4 merupakan reseptor yang ditemukan pada permukaan berbagai sel pertahanan

dan sel lain yang berfungsi mengenali lipopolisakarida (LPS) dari dinding sel

gram negatif (Juskewitch et al ., 2012). TLR-4 yang telah berikatan dengan LPS

akan merespon dengan mengeluarkan sitokin proinflamasi (TNF, IL-1,IL-8,IL-6),

sintesis COX-2, asam arakidonat dan sintesis iNOS serta keluarannya anion super

oksida yang akan memacu keluaranya NO (Galin and Synderman, 1999).

H. Reagen Griess

Nitrit atau nitrat dapat ditetapkan secara langsung dan tidak langsung.

Secara langsung mengunakan metode spetrofotometri UV, GC-MS, HPLC, ion-

selectiv electrodes , dan eletroforesis. Akan tetapi metode tersebut mahal,

memerlukan banyak waktu dan keterbatasan sensitivitas metode tersebut. Secara

tidak langsung dapat mengunakan penambahan reagen Griess kemudian diukur


15/45

15

nilai absorbansinya. Metode ini lebih sederhana dibndingkan dengan metode

lainya, selain itu metode ini dapat digunakan untuk sempel biologis, saliva, urin

dan sel kultur (Sun et al ., 2003)

Reagen Griess dibuat dari 0,1% N-(1-naphtil)etilediamin dihidroklorid

(NED) dan 1% sulfonilamida dalam 5% phosporic acid (Lee et al. , 2012). Reagen

Griess akan berekasi dengan NO sehingga akan menghasilkan senyawa Azo Dye

yang akan berwarna ungu (Gambar 2.5). Semakin besar intensitas warna ungu

yang dihasilkan semakin banyak NO yang bereaksi dengan reagen Griess .

Gambar 2.5 Reaksi NO dan Reagen Griess (Coneski et al ., 2012)

I. Landasan Teori

Temulawak, kunyit, dan jahe merupakan beberapa tanaman yang

memiliki banyak manfaat dan telah banyak diteliti. Senyawa yang terkandung

pada tanaman-tanaman tersebut memliki banyak kegunaan seperti sebagai

antikanker, antioksidan, anti-inflamasi dan aktivitas imunostimulan yang baik.

Baik secara in vitro maupun in vivo masing-masing ekstrak temulawak, kunyit

dan jahe telah diuji. Kurkumin pada temulawak dan jahe dapat meningkatkan

sitokin seperti (TGF- , TNF -, GM -CSF, IL- 1, IL -5, IL-6, IL-8, IL-10 and IL-


16/45

16

13) dan menekan mediator inflamasi seperti NO. Ekstrak jahe dilaporkan dapat

menekan produksi iNOS. Temulawak juga dilaporkan dapat menekan produksi

NO.

Nitrit oksida adalah mediator inflamasi yang disintesis dari asam amino L-

arginin di sel endotel. Pada kondisi inflamasi akut NO dan mediator inflamasi

lainnya berguna untuk melebarkan susunan sel endotel pembuluh darah sehingga

sel-sel imun yang berada dalam pembuluh darah dapat berpindah ke jaringan yang

mengalami infeksi. Tetapi bila kondisi inflamasi ini terus berlangsung maka akan

terjadi inflamasi kronis akan menyebabkan berbagai macam penyakit. Diperlukan

agen yang mampu menghambat produksi NO.

Penghambatan produksi NO dapat dilakukan secara in vitro pada sel RAW

264,7 yang diinduksi LPS. Sel RAW 264,7 merupakan sel yang menyerupai

makrofag. LPS berfungsi sebagai agen pemicu produksi sitokin proinflamsi dan

mediator inflamasi seperti NO. LPS merupakan bagian dari dinding bakteri gram

negatif.

J. Hipotesis

Kombinasi ekstrak temulawak, kunyit dan jahe dapat berperan sebagai

agen antiinflamasi dengan menghambat produksi NO pada sel RAW 264,7 yang

diinduksi LPS. Peningkatan konsentrasi ekstrak akan meningkatkan aktivitas anti-

inflamasi dengan menghambat produksi NO pada sel RAW 264,7 yang diinduksi

LPS.


17/45

17

BAB III

METODE PENELITIAN

A. Waktu dan Lokasi Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Kimia Bahan Alam Jurusan

Farmasi Universitas Jenderal Soedirman, Laboratorium Terpadu Universitas

Jenderal Soedirman serta Laboratorium Parasitologi Universitas Gadjah Mada

Yogyakarta selama 6 bulan.

B. Bahan dan Alat Penelitian

1. Bahan Penelitian

Rimpang Temulawak, Kunyit, Jahe merah, etanol 96%, Dimetil sulfosida

(DMSO), medium DMEM, Fetal Bovine Serum (FBS) 10%, penisilin-

streptomisin 3%, fungizon 1%, sel RAW 264,7, etanol 70%, phosphate buffer

saline (PBS), lipopolisakarida (LPS), reagen Griess .

2. Alat Penelitian

Toples maserasi, kertas saring, oven, blender , ayakan B40, neraca analitik ,

corong Buchner, evaporator, water bath, cawan petri, mikrokultur 24 sumuran,

mikropipet, tip, autoklaf, inkubator CO 2, alat-alat gelas yang biasa digunakan di

laboratorium,lemari pendingin, beaker glass 500 mL dan 1 L, screw scapped ,

conical tube , tabung eppendrof, mikroskop cahaya, cover slip , object glass , vortex

dan Elisa reader .


18/45

18

C. Rancangan Penelitian

1. Metode Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian ekperimental laboratorium.

Penelitian ini menganalisis kombinasi ekstrak temulawak, kunyit dan jahe

merah sebagai agen anti-inflamasi berdasarkan penghambatan produksi NO

mengunakan sel RAW 264,7 yang diinduksi LPS dengan reagen Griesse .

2. Variabel Penelitian

a. Variabel bebas adalah konsentrasi kombinasi ekstrak temulawak,

kunyit, dan jahe merah yaitu 250 g/ml dan 500 g/ml.

b. Variabel terikat adalah kadar NO.

c. Variabel terkontrol adalah jumlah kepadatan sel, konsentrasi LPS

1g/mL, waktu inkubasi dan suhu inkubasi.

D. Jalannya Penelitian

Penelitian ini dilaksanakan melalui tahapan sebagai berikut:

1. Determinasi rimpang temulawak, kunyit dan jahe merah

Determinasi dilakukan di Laboratorium Taksonomi Fakultas Biologi

Universitas Jenderal Soedirman Purwokerto untuk menentukan kebenaran

bahan yang akan digunakan dalam penelitian.

2. Pembuatan serbuk simplisia

Rimpang temulawak, kunyit dan jahe merah dicuci dengan air mengalir,

dipotong-potong, kemudian dikeringkan dengan cara diangin-anginkan pada

ruang terbuka tanpa terkena sinar matahari secara langsung. Pengeringan


19/45

19

dilanjutkan di dalam oven dengan suhu maksimal 70C. Setelah kering,

simplisia diblender, diayak dengan ayakan ukuran B40 untuk mendapatkan

ukuran serbuk yang homogen.

3. Pembuatan Ekstrak

Serbuk rimpang temulawak, kunyit dan jahe merah ditimbang masing-masing

sebanyak 500 gr. Masing-masing serbuk simplisia tersebut diekstraksi dengan

cara maserasi menggunakan pelarut etanol 96% selama 3 x 24 jam.

Perbandingan serbuk simplisia dengan etanol 96% adalah 1:6. Ketiga filtrat

disaring lalu diuapkan dengan evaporator hingga didapatkan ekstrak kental.

Masing-masing ekstrak dihilangkan pelarutnya di atas waterbath sehingga

diperoleh ekstrak kental bebas pelarut

4. Uji produksi NO dengan media sel RAW 246,7

a. Pembuatan media DMEM (Gibco) (CCRC, 2000) a

Serbuk media DMEM yang sudah siap dilarutkan dengan akuabides 800

ml dalam beker glass 1 L, ditambah dengan natrium bikarbonat 2 g dan

HEPES 2 g, ditambahkan akuades sampai 1 L, diaduk dengan magnetic

stirer . Larutan dibuat dengan pH antara 7,2-7,4 dengan menambahkan 1 M

NaOH atau 1 M HCl. Larutan dimasukkan ke dalam botol tertutup dan

steril dengan disaring menggunakan filter 0,2 m dalam LAF. Medium

diberi label dan disimpan dalam lemari es suhu 4 oC. Untuk membuat

media MEM serum, sebanyak 100 ml media DMEM ditambah dengan

FBS 10%, antibiotika penisilin-streptomisin 1% dan fungison 1%.


20/45

20

b. Prosedur kultur dan pertumbuhan sel RAW 264,7 (CCRC, 2000) b

Sel diambil dari tangki nitrogen cair, segera dicairkan dalam pemanas air

370C, kemudian ampul disemprot dengan etanol 70%. Ampul dibuka dan

sel dipindahkan ke dalam tabung conical steril yang berisi medium

DMEM. Suspensi sel disentrifus dengan kecepatan 3000 rpm selama 5

menit, supernatan dibuang, diganti media DMEM yang baru, kemudian

disuspensi pelan-pelan. Sel disuspensikan perlahan hingga homogen,

kemudian sel ditumbuhkan dalam beberapa (2-3) buah tissue culture flask

kecil, diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37 0C dengan aliran 5% CO2.

Setelah 24 jam medium diganti dan sel ditumbuhkan hingga konfluen.

c. Pemanenan sel dan Penghitungan sel (CCRC, 2008)

Sel diambil dari inkubator CO 2. Panen sel dilakukan setelah sel 80%

konfluen . Media dibuang dan sel dibilas 2 kali dengan PBS.

Selanjutnyasel dipanen menggunakan screw scrapped sel diresuspensi

sampai sel terlepas satu-satu. Keadaan sel diamati di bawah mikroskop.

Sel yang telah lepas dipindahkan ke dalam conical steril baru. Kemudian

ditambahkan MK 2-3 mL lalu sel diresuspensi. 10 l panenan sel

dipipetkan ke hemacytometer . Kemudian, sel dihitung di bawah mikroskop

dengan cell counter . Sejumlah sel yang diperlukan dipindahkan ke dalam

conical yang lain dan ditambahkan MK sesuai dengan konsentrasi sel yang

dikehendaki. Jumlah sel yang dibutuhkan untuk uji adalah 2x10 5

sel/sumuran.


21/45

21

d. Pembuatan Reagen Griess

Reagen Griess dibuat dari 0,1% N-(1-naphtyl)ethylediamine

dihydrocloride (NED) dan 1% sulfonilamida dalam 5% phosporic acid .

NED ditimbang sebanyak 0,1 g dan dilarutkan kedalam air suling 100mL.

Sulfonilamida ditimbang 1g dan dilarutkan dalam 100mL phosporic acid

5%. Ketika akan digunakan larutan 0.1% NED dan 1% sulfonilamida

dicampurkan dalam volume sama banyak (Lee et al. , 2012).

e. Pembuatan kurva baku NaNO 2

NaNO 2 ditimbang sabanyak 69mg dan dilarutkan dalam 500mL air suling

(stok 2mM). Pengenceran bertingkat dibuat dengan konsentrasi 25M,

50M, 75M, 100M, 125M, 150M, 175M dan 200M dengan

mengencerkan larutan stok dengan medium untuk kultur sel. Kemudian

masing-masing konsentrasi dimasukan ke dalam 1 sumuran mikrokultur 96

sumuran dan dibaca absorbansinya mengunakan Elisa reader , nilai

absorbansi yang didapat dimasukan dalam rumus persamaan garis lurus

hingga didapat kurva baku NO.

f. Uji produksi NO dengan media sel RAW 264,7

Sel diambil dari inkubator CO 2 dan diamati kondisinya. Kultur sel yang

digunakan dalam kondisi 80 % konfluen untuk dipanen. Sel dipanen dan

dimasukan kedalam 24 well plate dengan kepadatan sel 2x10 5

sel/sumuran. Setelah itu sel diinkubasi selama 24 jam supaya sel kembali

normal. Setelah sel normal kembali, ekstrak dibuat dengan konsentrasi

250g/ml dan 500g/ml. Adapun perlakuan yang akan dilakukan adalah :


22/45

22

Skema pengisian mikrokultur dapat dilihat pada Gambar 3.1

A B C D E F

1 KS KSL SLE1 SLE2

2 KS KSL SLE1 SLE2

3 KS KSL SLE1 SLE2

4

Gambar 3.1. Skema pengisian mikrokulturKS = kontrol selKSL = kontrol LPS diberi lipopolisakaridaSLE1 = kelompok perlakuan diberi lipopolisakarida dan ekstrak 250 gg/mLSLE2 = kelompok perlakuan diberi lipopolisakarida dan ekstrak 500 g/mL

Mikrokultur diambil dari incubator, tambahkan ekstrak Tekuja dan

dibiarkan selama 1 jam. LPS ditambahkan pada masing-masing sumuran

sebesar 1g/mL sampel dan diinkubasi selama 15 jam di dalam inkubator

dengan CO 2 5%. Setelah 15 jam sel diambil dari inkubator. Media diambil

dari masing-masing sumuran 100L dan dipindahkan kedalam 96

mikrokultur ditambah 50L reagen Griess, diamkan selama 5 menit.

Kemudian diukur pada panjang gelombang 595 nm dengan Elisa reader

dan data dimasukkan kedalam kurva baku yang sudah dibuat (Lee et al .,

2012).


23/45

23

E. Analisis Data

Absorbansi yang didapat pada sampel kemudian dimasukkan dalam rumus

kurva baku yang sudah didapat, sehingga diperoleh kadar NO.

Keterangany: absorbansi pada elisa readerx: konsentrasi NO

Kadar NO dianalisis secara statistik dengan metode ANOVA satu jalan,

dilanjutkan dengan uji HSD dengan taraf kepercayaan 95%.


24/45

24

Gambar 3.2 Skema penelitian

Dimasukan dalam rumus kurva baku

- Ditambah reagan Griess50L per 100L media lalu diukur serapannya595 nm dengan elisa reader

- Di inkubasi selama 15 jam dan diambil media

- dikumpulkan- dideterminasi- dicuci- dikeringkan- dihaluskan menjadi serbuk- dimaserasi etanol 96% (324

jam)- penyaringan- evaporasi

Rimpang temulawak, kunyit danJahe merah

Ekstrak Temulawak Ekstrak Kunyit Ekstrak Jahe Merah

Kombinasi ekstrak 1 : 1 : 1 Lipopolisakarida

Media

Absorbansi

Kadar NO

Sel RAW 264,7

Analisis

Kesimpulan


25/45

25

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Determinasi Tanaman

Tanaman temulawak, kunyit, dan jahe merah yang digunakan dalam

penelitian ini berasal dari Desa Hargobinangun, Kecamatan Pakem, Sleman,

Yogyakarta. Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Taksonomi Fakultas

Biologi Universitas Jenderal Soedirman. Determinasi tanaman dilakukan untuk

memastikan kebenaran identitas dari tanaman yang akan digunakan dalam

penelitian dan untuk menghindari kesalahan dalam pengambilan bahan tanaman.

Hasil dari determinasi diperoleh kepastian bahwa spesies tanaman yang

digunakan dalam penelitian ini adalah Curcuma xanthorrhiza (Lampiran 1),

Curcuma longa L. (Lampiran 2), dan Zingiberofficinale cv. Rubrum (Lampiran

3) yang semuanya berasal dari familia Zingiberaceae.

B. Pembuatan Ektrak Temulawak, Kunyit dan Jahe Merah

Ekstraksi merupakan upaya untuk memperoleh komponen kimia

(metabolit sekunder) pada tumbuhan yang akan diujikan. Ekstraksi yang tidak

tepat dapat mempengaruhi bioktivitas komponen yang diujikan. Oleh karena itu,

dalam ekstraksi perlu diperhatikan pada penggunaan pelarut dan metode ekstraksi

yang sesuai dengan sifat fisika dan kimia komponen yang terkandung dalam

tanaman (Hayouni et al ., 2007). Pembuatan ekstrak tanaman temulawak, kunyit,

dan jahe merah, dilakukan dengan metode maserasi.


26/45

26

Maserasi dipiih sebagai metode ekstraksi dalam peneitian karena kontak

antara pelarut dengan serbuk simplisia lebih lama sehingga memungkinkan

perpindahan senyawa dari simplisia kedalam pelarut akan lebih optimal, waktu

yang lebih singkat, pengerjaannya mudah dan peralatan yang digunakan relatif

sederhana. Metode maserasi didasarkan pada prinsip perpindahan masa komponen

zat kedalam pelarut, perpindahan mulai terjadi pada lapisan antarmuka kemudian

berdifusi masuk kedalam pelarut sehingga komponen kimia yang terkandung

dalam simplisia dapat ditarik keluar (Depkes, 2000).

Serbuk temulawak, kunyit, dan jahe merah dimaserasi selama 3x24 jam

dengan menggunakan pelarut etanol 96%. Etanol dipilih sebagai pelarut karena

etanol merupakan pelarut yang bersifat universal yang relatif baik untuk

melarutkan senyawa dengan perbedaan kepolaran dan relatif kurang toksik

dibandingkan dengan metanol serta dapat menarik senyawa dengan baik yang

bersifat polar maupun non-polar. Etanol juga tidak beracun, lebih selektif, kapang

dan kuman sulit tumbuh, netral, absorbsinya baik, dapat menghambat kerja enzim,

mengendapkan albumin dan panas yang diperlukan untuk pemekatan lebih sedikit

(Depkes, 1986).

Tabel 4.1. Ekstrak Kental dan Rendemennya

Nama Bahan Bobot SerbukSimplisia (gr)

Ekstrak Etanolik (gram) RendemenEkstrak (%)

Temulawak 500 43,29 8,66

Kunyit 500 57,14 11,43

JaheMerah 500 37,92 7,58


27/45

27

Berdasarkan Tabel 4.1. dapat dilihat bahwa rendemen dari temulawak,

kunyit dan jahe merah berturut-turut sebesar 8,66%, 11,43%, dan 7,58%.

Rendemen untuk temulawak, kunyit dan jahe merah berturut-turut menurut

Farmakope Herbal Indonesia, yaitu tidak kurang dari 18%, tidak kurang dari 11%

dan tidak kurang dari 6,6% (Depkes RI, 2008). Berdasarkan hasil penelitian yang

dilakukan, rendemen temulawak memiliki perbedaan dengan rendemen yang

disebutkan pada Farmakope Herbal Indonesia. Hal ini dikarenakan perbandingan

cairan penyari dengan serbuk temulawak lebih kecil dibandingkan cairan penyari

pada kunyit dan jahe merah.

C. Penetapan kadar NO

Penelitian ini diawali dengan membuat kurva baku NaNO 2. Tingkat

liniearitas dari kurva baku baik karena memilik nilai r = 0,996. Berdasarkan kurva

baku tersebut diperoleh persamaan garis lurus y = -0,0024 + 0,0023x (Gambar

4.1). Pembuatan kurva baku NaNO2 bertujuan untuk mengetahui hubungan antara

larutan baku NaNO2 dengan absorbansi, yang akan digunakan untuk mengukur

kadar NO pada sampel yang dianalisis. NaNO2 dapat digunakan untuk stadar

karena HNO2 pada larutan NaNO2 dapat bereaksi denagn sulfanilamid menjadi

garam diazonium dan membentuk senyawa kopling dengan NED sama seperti

NO.


28/45

28

Gambar 4.1 Kurva baku NaNO 2

Uji penetapan kadar NO kombinasi ekstrak temulawak, kunyit dan jahe

merah pada sel RAW 264,7 yang diinduksi LPS. menggunakan reagen Griess .

Penggunaan reagen Griess merupakan cara yang mudah dan efisien untuk

mengukur kadar NO secara in vitro . Pemberian reagen Griess dilakukan setelah

sel RAW 264,7 diinkubasi selama 15 jam dengan perlakuan ekstrak. NO akan

bereaksi dengan reagen Griess sehin gga akan menghasilkan senyawa Azo Dye

yang akan berwarna ungu.

Mikrokultur dibaca dengan ELISA reader pada panjang gelombang 595

nm. Konsentrasi hasil sel yang memproduksi NO dapat dilihat pada Tabel 4.2.

00.05

0.10.15

0.20.25

0.30.35

0.40.45

0.5

0 50 100 150 200 250

Aborbans i

Konsentrasi(M)

r = 0,9957


29/45

29

Tabel 4.2 Absorbansi dan Konsentrasi NO

Konsentrasiekstrak(g/mL)

Absorbansi AbsorbansiSampel -Media

Konsentrasi NO (M)

Rata Rata SD

0

0,249 0,205 90,17

101,41 8,75

0,255 0,211 92,780,280 0,236 103,650,277 0,233 102,350,284 0,240 105,390,304 0,260 114,09

250

0,243 0,199 87,57

77,13 12,58

0,335 0,191 84,09

0,241 0,197 86,700,211 0,167 73,650,239 0,195 85,830,169 0,125 55,39

500

0,202 0,158 69,74

70,97 10,21

0,180 0,136 60,170,242 0,198 87,130,182 0,138 61,040,203 0,159 70,170,220 0,176 77,57

Tabel 4.3 Rata-rata kadar NO dan SD

Konsentrasi ekstrakkombinasi Tekuja (g/mL) Rata-rata kadar NO (M)

0 101,47 8,75250 77,13 12,58 *500 70,97 10,21 *

*terdapat perbedaan bermakna dengan konsentrasi Tekuja 0g/mL (p


30/45

30

Data yang sudah diuji dengan Shapiro-wilk dilanjutkan dengan uji Anova dengan

tingkat kepercayaan 95%. Nilai signifikansi lebih kecil dari 0,05 artinya terdapat

perbedaan bemakna antara kombinasi ekstrak temulawak, kunyit dan jahe merah

dengan kontrol. Untuk mengetahui perbedaan itu selanjutnya dilakukan uji

lanjutan. Berdasarkan HSD tuckey tidak terdapat perbedaan bermakna antara

konsentrasi 250 g dan 500 g. Tetapi terdapat perbedaan bermakna antara

konsentrasi 0g dan 250 g serta 0g dan 500 g (Tabel 4.3). Pada penelitian ini

produksi NO tidak terukur karena nilai absorbansinya sangat kecil dibawah

rentang kurva baku. Berdasarkan data diatas ekstrak Tekuja dapat menghambat

produksi NO. Produksi NO perlu dihambat karena NO dalam jumlah banyak

dapat menyebabkan inflamasi kronis, inflamasi kronis ini dapat meyebabkan

terjadinya penyakit lainya seperti kanker (Janakiram et al ., 2012).

NO merupakan salah satu mediator inflamasi, NO disintesis dari asam

amino L-argine oleh NO sintesis enzim (NOS). NOS pada dasarnya terbagi

menjadi dua yaitu eNOS yang berada di sel endotel atau nNOS yang berada di sel

neuron dan iNOS yang berada di makrofag yang muncul akibat paparan patogen,

iNOS memproduksi NO paling banyak dibandingkan dengan NOS yang lainnya.

Ekspresi iNOS diregulasi oleh NF- B (Jin et al ., 2010). Diketahui bahwa LPS

mampu menginduksi NF- B sehingga menginduksi peningkatan eskpresi iNOS

sehingga kadar NO meningkat. Ekstrak temulawak, kunyit dan jahe merah

masing-masing dapat menghambat NF- B ( Aggarwal et al ., 2005). Maka

diperlukan penelitian lebih lanjut mengenai mekanisme downregulation ekspresi

iNOS oleh ekstrak tekuja pada sel RAW 264,7 yang diinduksi LPS.


31/45

31

Kurkumin dapat mempengaruhi berbagai jalur pensinyalan pada sel,

termasuk agen inflamasi (NF- B, TNF, IL -6, IL-1, COX-2 dan 5-LOX)

(Aggarwal et al ., 2005). Mekanisme kurkumin dalam menghambat efek NF- B

dengan cara memblok fosforilasi IK (inhibitor kappa B kinase) dan

mendegradasi IB (inhibitor NF -B) yang menyebabkan NF -B berikatan

dengan IB pada sitoplasma sehingga tidak memungkinkan NF- B

memasuki inti sel untuk mengaktivasi transkripsi gen. Penghambatan NF- B

juga berkaitan dengan penurunan regulasi COX-2 dan iNOS yang merupakan

marker dari inflamasi. Kurkumin dalam kunyit dengan konsentrasi 2 M, 4 M,

dan 8 M mampu menekan produksi NO dan menghambat produksi iNOS pada

konsentrasi 4 M, dan 8 M pada sel primer mikroglial yang diinduksi LPS (Jung

et al ., 2006).

Ekstrak jahe mengandung 1-dehidro-[6]-gingerdion, 6-shogaol, 6-

dehidroshogaol dan heksa hidrokurkumin yang berfungsi sebagai antiinflamasi.

Menurut Li et al . (2012) kandungan pada jahe (1-dehidro-[6]-gingerdion, 6-

shogaol, 6-dehidroshogaol and heksa hidrokurkumin) mempunyai aktivitas

antiinflamasi dengan cara menghambat iNOS, PGE 2/COX-2, TNF- , IL -1 dan

machrophage chemoactractant protein-1 (MCP-1) pada sel RAW 264,7.

Aktivitas 6-shogaol dalam menurunkan iNOS dan COX-2 dengan cara

menurunkan aktivas jalur NF- B dengan cara memblok fosforilasi NF- B,

menghambat aktivas jalur p38 MAPK dan JNK pada sel makrofag yang

distimulasi LPS (Ha et al ., 2012). Selain itu kurkumin pada konsentrasi 5 M, 10

M, dan 20 M mampu menurunkan produksi NO pada sel RAW 264,7 yang


32/45

32

diinduksi LPS (Ben et al ., 2011). Kurkumin dalam curcuma longa mampu

menekan produksi NO pada sel mikroglial yang diinduksi LPS (Jung et al ., 2006).

Menurut Mueller et al. (2010) , ekstrak jahe dapat menekan ekspresi iNOS

secara in vitro pada sel RAW 264,7 yang diinduksi LPS, pada konsentrasi ekstrak

jahe 0,5 mg/ml produksi NO dapat ditekan sebesar 58 14%. Senyawa aktif 6-

gingerol dan 6-shogaol mempunyai efek antiinflamasi yang terkandung dalam

jahe merah juga mampu menekan produksi NO pada sel RAW 264,7 yang

diinduksi LPS (Lee et al ., 2009; Dugasani et al., 2010).

Kombinasi ekstrak temulawak, kunyit dan jahe merah mulai konsentrasi

250g/mL mempunyai efek pada sel RAW 264,7 yang diinduksi LPS dengan

menekan ekspresi NO. Kombinasi ekstrak temulawak, kunyit dan jahe merah

memiliki potensi untuk dikembangkan menjadi agen antiinflamasi.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92775/#ch7_r77http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92775/#ch7_r77http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92775/#ch7_r77http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92775/#ch7_r77


33/45

33

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

1. Kombinasi ekstrak temulawak, kunyit dan jahe merah pada konsentrasi 250

g/mL dan 500 g/mL mempunyai efek anti-inflamasi dengan cara

menghambat produksi NO pada sel RAW 264,7 yang diinduksi LPS.

2. Peningkatan konsentrasi kombinasi ekstrak temulawak, kunyit dan jahe

merah sebanding dengan penghambatan produksi NO pada sel RAW 264,7

yang diinduksi LPS.

B. Saran

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai ekspresi iNOS pada sel RAW

264,7 yang diinduksi LPS.


34/45

34

DAFTAR PUSTAKA

Anwar, K., Santoso, B.H., and Cahaya N., 2013, Penghambatan Radang InfusaDaun Dadap Ayam ( Erythrina vaiegata L.) Pada Mencit jantan yangDiinduksi Karagenin, Prosiding Semirata FMIPA Universitas Lampung , 45-52.

Aggarwal, B.B., Kumar, A., Aggarwal, M.S., and Nshishodia, S., 2005, Curcuminderved from turmeric (Curcuma longa): a spice for all season , CRC press,

New York.

Aggarwal, B.B, and Harikumar K.B., 2009, Potential therapeutic effects ofcurcumin, the anti-inflamatory agent, against neurodegenerative,cardiovascular, pulmonary, metabolic, autoimmune and neoplastic diseases,The International journal of Biochemistry and Cell Biology , 41:40-59.

Andikacitra, P., 2012, Efek Proteksi Kombinasi Curcuma xanthorriza, Curcumadomestica , dan Zingiber officinale pada Tikus yang Diinduksi Doksorubisin,Skripsi , Jurusan Farmasi, Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto.Tidak dipublikasikan.

Anonim., 2008, Innate immune Resource Guide , BioLegend, San Diego.

Asadullah, K. , Sabat, R. , Friedrich, M. , Volk, H.D. , and Sterry, W. , 2004,Interleukin-10: an important immunoregulatory cytokine with major impacton psoriasis , Curr Drug Targets Inflamm Allergy , 3(2): 185-92.

Baratawidjaja, K.G., and Rengganis I., 2010, Imunologi Dasar edisi IX, BalaiPenerbit FKUI, Jakarta, hal: 557

Ben P. , Liu J. , Lu C. , Xu Y. , Xin Y. , Fu J. , Huang H. , Zhang Z. , Gao Y. , Luo L. ,and Yin Z. , 2011, Curcumin promotes degradation of inducible nitric oxide

synthase and suppresses its enzyme activity in RAW 264.7 cells, Int Immunopharmacol. 11(2):179-186.

Berghaus, L.J., Moore, J.N., Hurley, D.J., Vandenplas, M.L., Fortes, B.P.,Wolfert, M.A., and Boons, G.J., 2009, Innate Immune Responses ofPrimary Murine Macrophage-lineage Cells and RAW 264.7 Cells toLigands of Toll-like Receptors 2, 3, and 4, Comp Immun Microbiol Infect

Dis , 33(5):443-54.

Bertolini, A., Ottani A., and Sandrin, M., 2001, Dual acting anti-inflamatory

drugs: a reapprasial, Pharmacological research, 44:437-450.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Asadullah%20K%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15180472http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Sabat%20R%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15180472http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Friedrich%20M%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15180472http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Volk%20HD%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15180472http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Sterry%20W%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15180472http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15180472http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15180472http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Ben%20P%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Liu%20J%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Lu%20C%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Xu%20Y%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Xin%20Y%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Fu%20J%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Huang%20H%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Zhang%20Z%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Gao%20Y%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Luo%20L%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Yin%20Z%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Curcumin+promotes+degradation+of+inducible+nitric+oxide+synthase+and+suppresses+its+enzyme+activity+in+RAW+264.7+cellshttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Curcumin+promotes+degradation+of+inducible+nitric+oxide+synthase+and+suppresses+its+enzyme+activity+in+RAW+264.7+cellshttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Curcumin+promotes+degradation+of+inducible+nitric+oxide+synthase+and+suppresses+its+enzyme+activity+in+RAW+264.7+cellshttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Curcumin+promotes+degradation+of+inducible+nitric+oxide+synthase+and+suppresses+its+enzyme+activity+in+RAW+264.7+cellshttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Yin%20Z%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Luo%20L%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Gao%20Y%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Zhang%20Z%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Huang%20H%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Fu%20J%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Xin%20Y%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Xu%20Y%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Lu%20C%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Liu%20J%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Ben%20P%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21094287http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15180472http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Sterry%20W%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15180472http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Volk%20HD%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15180472http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Friedrich%20M%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15180472http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Sabat%20R%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15180472http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Asadullah%20K%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15180472


35/45

35

CCRC, 2000 a, Prosedur Tetap Pembuatan Media , Cancer ChemopreventionResearch Center Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

CCRC, 2000 b, Prosedur Tetap Cell Thawing , 2, Cancer ChemopreventionResearch Center Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

CCRC, 2008, Uji imunositokimia, Protokol in vitro 12. Imunositokimia ,Fakultas farmasi UGM, Yogyakarta.

Coneski, P.N., and Schoen, M.H., 2012, Nitrit oxide release part IIImeasurenment and reporting, Cehem.Soc.Rev, 41:3753-3758.

Depkes RI, 1986, Sediaan Galenik , Departemen Kesehatan Republik Indonesia,Jakarta, hal: 3-5.

Depkes RI, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat ,Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal :5.

Depkes RI, 2008, Farmakope Herbal Indonesia Edisi I , Departemen KesehatanRepublik Indonesia, Jakarta, hal: 24, 73 dan 154.

Diliwiyani, S., 2013, Efek sitotosik kombinasi kombinasi ekstrak temulawak,kunyit, dan jah merah pada sel MCF-7 dan pengaruhnya pada induksiapoptosis, Skripsi , Jurusan Farmasi, Universitas Jenderal Soedirman,Purwokerto. Tidak dipublikasikan.

Dugasani, S., Pichika, M.R., Nadarajah, V.D., Balijepali, M.K., Tandra, S., and Korlakunta, J.N., 2010, Comparative antioxidant and antiinflamatoryeffects of 6-gingerol, 8-gingerol, 10-gingerol and 6-shogaol, Journal of

Ethnopharmacology , 127: 515-520.

Ekowati, H., Achmad, A., Prasasti, E., Wasito, H., Sri, K., Hidayati, Z., andEkasar, T., 2012, Zingiber officinale, Piper retrofractum and CombinationInduced Apoptosis and p53 Expression in Myeloma and WiDr Cell Lines,

Hayati , 19(3): 137-140.

Ekowati, H., Sarmoko., and Widiastuti, R., 2013, Combination of three species of

Zingiberaceae prevents doxorubicin-induced hepatotoxicity, UNIVERSA MEDICINA, 32(1):11-19.

Gallin, J.I, and Snydermn, R., 1999, Inflamation Basic Principil and ClinicalCarletes Third Edition , Lippincott Willams and Wikin, USA.

Hadi, G.P.S., 2012, Efek Kardioprotektif Kombinasi Curcuma xanthorriza,Curcuma domestica , dan Zingiber officinale terhadap Tikus yangDiinduksi Doksorubisin, Skripsi , Jurusan Farmasi, Universitas JenderalSoedirman, Purwokerto. Tidak dipublikasikan.

Harris, R.A., 2012, Potensi mieloprotektif Kombinasi Curcuma xanthorriza,

Curcuma domestica , dan Zingiber officinale terhadap perubahan biokimia


36/45

36

pada tikus yang Diinduksi Doksorubisin dan formulasi sediaannya,Skripsi , Jurusan Farmasi, Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto.

Tidak dipublikasikan.

Hayouni, E., Abedraba, M., Bouix, M., and Hamadi, 2007, The effect solvent andextraction method on content and biological activities in vitro of TunisianQuereus coccifera L. and Juniperus phonicea L. fruit extracts, FoodChem , 105, 1126-1134.

Hsueh, R., and Roach, T., 2003, Passage Procedure for RAW 264.7Cells , http://www.signaling-gateway.org/data/cgi

bin/ProtocolFile.cgi/afcs_PP00000159.pdf?pid=PP00000159

Ha, S.K., Moon, E., Ju, S.M., Kim, D.H., Ryu, J.H., Oh, M.S., and Kim, S.Y.,2012, 6-Shogaol, a ginger product, modulates neuroinflammation: A newapproach to neuroprotection, Neuropharmacology , 63: 211-223.

Itokawa, H., Shi, Qhi, Akiyama, T., Morrisnatschke, S.L., and Lee, K.H., 2008,Recent advances in the investigation of curcuminoids, Biomed central, 3(11): 1-13.

Janakiram, N.B., and Rao, C.V., 2012, Chemoprevention of Colon Cancer byiNOS-Selective Inhibitors, For Immunopathol Dis Therap, 3(2): 155 167.

Jayaraman, P., Parikh, F., Rivera, E.L., Hailemichael, Y., Clark, A., Ma, G.,Cannan, D., Ramacher, M., Kato, M., Overwijk, W.W., Chen, S.H.,Umansky., and Sikora, G., 2012, Tumor-expressed iNOS control inductionof functional myeloid derived suppressor cell (MDSC) through moduluationof VEGF release, J Immunol , 188(11):5365-5376.

Jin, M., Suh, S.J., Yang, J.H., Lu, Y., Kim, S.J., Kwon, S.Y., Jo, T.J., Kim, J.W., park, Y.I., Ahn, G.W., Lee, C.K., Kim, C.H., Son, J.K., Son, J.H., and Chang, H.W., 2010, anti-inflamatory activity of bark of Dioscorea batatasDECNE through the inhibition iNOS and COX-2 expression in RAW 264,7cells viaNF- B and ERK1/2 inactivation, food and chemical toxicology , 48:3073-3079.

Jung K.K. , Lee H.S. , Cho J.Y. , Shin W.C. , Rhee M.H. , Kim T.G. , Kang J.H. , KimS.H. , Hong S. , and Kang S.Y. , 2006, Inhibitory effect of curcumin on nitricoxide production from lipopolysaccharide-activated primary microglia, LifeSci, 79(21):2022-31.

Juskewitch, J.E. , Platt, J.L. , Knudsen, B.E. , Knutson, K.L. , Brunn, G.J. , andGrande, J.P. , 2012, Disparate roles of marrow- and parenchymal cell-
http://www.signaling-gateway.org/data/cgi%20bin/ProtocolFile.cgi/afcs_PP00000159.pdf?pid=PP00000159http://www.signaling-gateway.org/data/cgi%20bin/ProtocolFile.cgi/afcs_PP00000159.pdf?pid=PP00000159http://www.signaling-gateway.org/data/cgi%20bin/ProtocolFile.cgi/afcs_PP00000159.pdf?pid=PP00000159http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Jung%20KK%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Lee%20HS%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Cho%20JY%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Shin%20WC%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Rhee%20MH%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kim%20TG%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kang%20JH%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kim%20SH%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kim%20SH%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Hong%20S%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kang%20SY%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Juskewitch%20JE%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Platt%20JL%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Knudsen%20BE%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Knutson%20KL%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Brunn%20GJ%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Grande%20JP%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Grande%20JP%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Brunn%20GJ%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Knutson%20KL%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Knudsen%20BE%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Platt%20JL%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Juskewitch%20JE%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kang%20SY%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Hong%20S%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kim%20SH%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kim%20SH%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kang%20JH%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kim%20TG%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Rhee%20MH%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Shin%20WC%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Cho%20JY%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Lee%20HS%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Jung%20KK%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=16934299http://www.signaling-gateway.org/data/cgi%20bin/ProtocolFile.cgi/afcs_PP00000159.pdf?pid=PP00000159http://www.signaling-gateway.org/data/cgi%20bin/ProtocolFile.cgi/afcs_PP00000159.pdf?pid=PP00000159


37/45

37

derived TLR4 signaling in murine LPS-induced systemic inflammation, Sci Rep , 2:918.

Kang, C.H. , Kim, M.J. , Seo, M.J. , Choi, Y.H. , Jo, W.S. , Lee, K.T. , Jeong, Y.K. ,and Kim, G.Y. , 2013, 5-Hydroxy-3,6,7,8,3'4'-hexamethoxyflavone inhibitsnitric oxide production in lipopolysaccharide-stimulated BV2 microglia via

NF- B, Food Chem Toxicol, 57:119-25.

Kim, S., Shin, S., Hyun, B., Kong, H., Han, S., Lee, A., Lee, S., and Kim, K.,2012, Immunomodulatory Effects of Dioscoreae Rhizome AgainstInflammation through Suppressed Production of Cytokines Via Inhibition ofthe NF- B Pathway, Immune Network , 12(5): 181-188.

Kim K.M. , Pae H.O. , Zhung M. , Ha H.Y. , Ha Y.A. , Chai K.Y. , Cheong Y.K. ,

Kim J.M. , and Chung H.T. , 2008, Involvement of anti-inflammatory hemeoxygenase-1 in the inhibitory effect of curcumin on the expression of pro-inflammatory inducible nitric oxide synthase in RAW264.7 macrophages,

Biomed Pharmacother , 62(9):630-636.

Lee, H.S., Ryu, D.S., Lee, G.S., and Lee, D.S., 2012, Anti- inammatory effectsof dichloromethane fraction from Orostachys japonicus in RAW264.7 cells: Suppression of NF- B activation and MAPK signaling,

Journal of Ethnopharmacology , 140: 271 276.

Lee, P.Y. , Kumagai, Y. , Xu Y. , Li Y. , Barker T. , Liu C. , Sobel E.S. , Takeuchi,O., Akira, S. , Satoh, M. , and Reeves W.H. , 2010, IL- 1 modulatesneutrophil recruitmentin chronic inflammation induced by hydrocarbon oil,

J Immunol . 186(3):1747-54.

Lee, T.Y., Lee, K.C., Chen, S.Y., and Chang, H., 2009, 6-Gingerol inhibits ROSand iNOS through the suppression of PKC- and NF -B pathways inlipopolysaccharide-stimulated mouse macrophags, BBRC , 382:134-139

Li, X., and Xu, W., 2010. TLR4-mediated activation of macrophages by the polysaccharidefraction from Polyporus umbellatus (pers.), Fries. Journalof Ethnopharmacology , 135: 1 6.

Lukita-Atmadja, W., Ito, Y., Baker, G.L., and McCuskey, R.S., 2002. Effect of

curcuminoids as anti-inflammatory agents on the hepatic microvascularresponse to endotoxin. SHOCK . 17 (5): 399 403.

Lundberg, I.E., 2000, The role of cytokines, chemokines, and adhesion moleculesin the pathogenesis of idiopathic inflammatory myopathies, Current

Rheumatology Report, 2:216-224.

Ma, W., Dumont, Y., Vercauteren, F., and Quirion, R., 2009, Lipopolysaccharideinduces calcitonin gene-related peptide in theRAW 264, 7 macrophage cellline, The journal of cell, moleculs, system and technologies , 130, 399 409

Mitchell, R.N, and Cotran, R.S, 2003, Acute and Cronic Inflammation , DalamS.L. Robbins.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kang%20CH%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kim%20MJ%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Seo%20MJ%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Choi%20YH%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Jo%20WS%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Lee%20KT%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Jeong%20YK%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kim%20GY%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kim%20KM%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Pae%20HO%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Zhung%20M%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Ha%20HY%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Ha%20YA%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Chai%20KY%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Cheong%20YK%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kim%20JM%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Chung%20HT%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Lee%20PY%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kumagai%20Y%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Xu%20Y%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Li%20Y%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Barker%20T%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Liu%20C%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Sobel%20ES%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Takeuchi%20O%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Takeuchi%20O%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Akira%20S%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Satoh%20M%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Reeves%20WH%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Reeves%20WH%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Satoh%20M%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Akira%20S%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Takeuchi%20O%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Takeuchi%20O%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Sobel%20ES%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Liu%20C%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Barker%20T%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Li%20Y%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Xu%20Y%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kumagai%20Y%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Lee%20PY%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=21191074http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Chung%20HT%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kim%20JM%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Cheong%20YK%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Chai%20KY%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Ha%20YA%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Ha%20HY%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Zhung%20M%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Pae%20HO%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kim%20KM%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=18325727http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kim%20GY%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Jeong%20YK%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Lee%20KT%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Jo%20WS%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Choi%20YH%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Seo%20MJ%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kim%20MJ%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Kang%20CH%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23542513http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23213355http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23213355


38/45

38

Mueller, M., Hobiger, S., and Jungbauer, A., 2010, Anti- inammatory activity ofextracts from fruits, herbs and spices, Food Chemistry 122: 987 996.

Olivia F., Alam S., And Hadibroto I., 2006, Seluk Beluk Food Supplement ,Jakarta:Penerbit PT Gramedia Pustaka Utama, p: 166.

Ravindran, P.N, and Babu, K.N., 2005, Ginger The Genus Zingiber , CRC Press, New York.

Rustam, E., Atmasari, I., and Yanwirasti, 2007, Efek Antiinflamasi Ekstrak EtanolKunyit ( Curcuma domestica Val.) Pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar,

Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi , 12(2), 112-115.

Shim, S., Kim, S., Choy D.S., Ckown Y.B., and Ckown J., 2011. Antiinflamatory

effects of 6-sogaol: Potential roles of HDAC inhibitions and HSP 70induction. Food and chemical toxicology . 49:2734-2740.

Solanki, P. , Aminoshariae, A. , Jin, G. , Montagnese, T.A. ,and Mickel, A. , 2013,The effect of docosahexaenoic acid (DHA) on expression of IL-1, IL-6, IL-8, and TNF- in normal and lipopolysaccharide (LPS) -stimulatedmacrophages, Quintessence Int , 44(6): 393.

Srivastava, R.M., Singh, S., Dubey, S.K., Misra S.K., and Khar, A., 2011,Immunomodulatory and therapeutic activity of curcumin, International

Immunopharmacology , 11: 331-341.

Sun, J., Zhang, X., Broderick, M., and Fein, H., 2003, Review measurement ofnitic oxide production in biological system by using griess reaction assay,Sensor , 3, 276-284.

Tilgh, H., Wilmer, A., Vogel,W., Herold, M., Nolchen, B., Judmaier, G., and Huber, C., 1992, Serum level of cytokines in cronic liver diseases.Gastroenterology , 103:264-274.

Varin, A. , and Gordon, S. ,2009, Alternative activation of macrophages: immunefunction and cellular biology , Immunobiology. 214(7):630-41.

Yadav, V. ,Mallappa, C. ,Gangappa, S.N. , Bhatia, S. , and Chattopadhyay, S. , 2005,A Basic Helix-Loop-Helix Transcription Factor in Arabidopsis, MYC2,Acts as a Repressor of Blue Light Mediated Photomorphogenic Growth, The

Plant Cell Preview, 17(7):1953-66.

Yue, G.G.L., Chan, B.C.C., Hon, P.M., Lee, M., Fung, K.P., Leung, P.C., and Lau,C., 2010, Evaluation of in vitro anti-proliferative and immunomodulatoryactivities of compounds isolated from Curcuma longa, Food ChemToxicology, 48(8-9): 2011 2020.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Solanki%20P%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23534044http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Aminoshariae%20A%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23534044http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Jin%20G%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23534044http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Montagnese%20TA%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23534044http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Mickel%20A%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23534044http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23534044http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23534044http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Varin%20A%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=19264378http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Gordon%20S%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=19264378http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19264378http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19264378http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19264378http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Yadav%20V%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15923349http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Mallappa%20C%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15923349http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Gangappa%20SN%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15923349http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Bhatia%20S%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15923349http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Chattopadhyay%20S%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15923349http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Chattopadhyay%20S%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15923349http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Bhatia%20S%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15923349http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Gangappa%20SN%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15923349http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Mallappa%20C%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15923349http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Yadav%20V%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=15923349http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19264378http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Gordon%20S%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=19264378http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Varin%20A%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=19264378http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23534044http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Mickel%20A%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23534044http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Montagnese%20TA%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23534044http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Jin%20G%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23534044http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Aminoshariae%20A%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23534044http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=Solanki%20P%5BAuthor%5D&cauthor=true&cauthor_uid=23534044


39/45

39

LAMPIRAN


40/45

40

Lampiran 1. Hasil Determinasi Temulawak


41/45

41

Lampiran 2. Hasil Determinasi Kunyit


42/45

42

Lampiran 3. Hasil Determinasi Jahe merah


43/45

43

Lampiran 4. Absorbansi Kurva Baku NaNO 2

Konsentrasi (M) Absorbansi25 0,05950 0,11275 0,155

100 0,228125 0,282150 0,370175 0,391200 0,448


44/45

44

Lampiran 5. Analisis hasil kadar NO kombinasi ekstrak temulawak, kunyit dan jahe merah

Tests of Normality

Tekuja

Kolmogorov-Smirnov a Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

NO 0 .210 6 .200 * .945 6 .701

250 .328 6 .043 .759 6 .024

500 .198 6 .200 * .928 6 .565

a. Lilliefors Significance Correction

*. This is a lower bound of the true significance.

Berdasarkan Shapiro-wiki data terdistribusi normal

ANOVA

NO

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 2992.953 2 1496.477 13.230 .000

Within Groups 1696.689 15 113.113

Total 4689.643 17

Berdasarkan uji anova terdapat perbedaan bermakna diantar data diatas

dikarenakan nili p


45/45

45

Multiple Comparisons

NOTukey HSD

(I)

Tekuja

(J)

Tekuja

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound

0 250 22.53333 * 6.14038 .006 6.5839 38.4828

500 30.43500 * 6.14038 .000 14.4856 46.3844

250 0 -22.53333 * 6.14038 .006 -38.4828 -6.5839

500 7.90167 6.14038 .424 -8.0478 23.8511

500 0 -30.43500 * 6.14038 .000 -46.3844 -14.4856

250 -7.90167 6.14038 .424 -23.8511 8.0478

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Berdasarkan uji HSD Tukey index kepercayaan antara konsentrasi 250g dan500g melewati nilai 0 maka tidak terdapat perbedaan bermakna diantarkeduanya. Indek kepercayaan antar konsentrasi 0g dan 250g serta 0g dan500g tidak melewati angka 0 maka terdapat perbedaan bermakna diantarakeduanya

Documents

Fikar (Repaired).docx