Halak korai életszakaszára vonatkozó toxicitási teszt

(OECD teszt: 210)

Készítette: Sovány Márta

Tartalomjegyzék

1. A teszt célja2. A teszt alapelvei3. Validálás4. A tesztmódszer5. Az eljárás6. Statisztikai elemzésekhez felhasznált adatok7. Az eredmények kiértékelése8. A vizsgálati jelentés tartalmi követelményei

A teszt célja

• A toxikus anyagok letális hatásainak vizsgálata az egyes fejlődési szakaszokban.

• A vegyi anyagok egyéb halfajokra kifejtett hatásainak becslése.

• A teszt alkalmas a vizsgálandó toxikus anyag kiértékelésére.

• Az irányelv az Egyesült Királyság által lett előterjesztve és az OECD szakértői fogadták el.

A teszt alapelvei

• A halak a korai életszakaszaikban különböző toxikus anyagok eltérő koncentrációinak vannak kitéve.

• A letális hatások kiértékelése után az eredményeket összevetik a kontrollcsoport adataival.

• Cél: NOEC, LOEC meghatározásaNOEC: az a legnagyobb koncentráció amelynek még nincsen

hatásaLOEC: az a legkisebb koncentráció amelynek már van hatása

A teszt kivitelezését megelőző hasznos információk

• Akut toxicitási teszt eredményei• A toxikus anyag vízoldahatósága, gőznyomása• Megbízható analitikai módszer a mennyiségi

vizsgálatokhoz (pontosság, kimutatási határ)• A toxikus anyag szerkezeti képlete, stabilitása• pKa, Pow• Biológiai bonthatósági teszt eredményei

Validálás

A teszt ideje alatt:• megfelelő oldott oxigén koncentráció (60-100%

a levegő telítettségéhez képest)• megfelelő vízhőmérséklet• toxikus anyag koncentrációjának megfelelő

értéken tartása (mérésekkel kell alátámasztani)• kontroll mintában teljes túlélés• diszpergálószer hatásának elhanyagolhatósága

A tesztmódszer (1)

• Tesztkamra: anyaga-üveg, rozsdamentes acél vagy kémiailag semleges anyag, betelepítési arány megtartása, a tesztközegben véletlenszerű elhelyezés

• Kezelés: vizsgált oldat átfolyásának biztosítása, áthelyezést levegővel való érintkezés nélkül kell megoldani

A teszt elvégzéséhez ajánlott édesvízi halfajok:• Szivárványos pisztráng

• Zebradánió

• Cselle

• Medaka

Tengeri faj: Tarka fogaspontyA listától való eltéréseket minden esetben meg kell indokolni.

A tesztmódszer (3)

• Tesztoldat: kívánt koncentráció értékek megtartása

• Víz: vizsgálat ideje alatt állandó minőségű legyen és ne gyakoroljon hatást a teszt eredményeire (nehézfémek, anionok, kationok, peszticidek, összes szerves szén, szuszpendált szilárd anyag tartalom)

Az teszt követelményeinek megfelelő víz tulajdonságai az egyes kémiai

anyagokra vonatkozóan

Kémiai anyag KoncentrációSzilárd anyag < 20 mg/l

Összes szerves szén < 2 mg/l

Nemionizált ammónia < 1 µg/l

Megmaradt klórtartalom < 10 µg/l

Összes szervesfoszfor tartalmú peszticid < 50 ng/l

Összes szervesklór tartalmú peszticid + poliklórozott bifenilek < 50 ng/l

Összes szerves klór < 25 ng/l

Az eljárás (1)

• Expozíció: az alkalmazott hal fajtájával együtt változik a teszt időtartama

• Betelepítés: véletlenszerű megoszlás, legalább két párhuzamos mérés, megfelelő betelepítési arány

• Hőmérséklet: fajokhoz egyedileg alakított• Etetés: megfelelő minőség, mennyiség

többlettakarmány eltávolítása

Az eljárás (2)

• Vizsgált koncentrációk: öt különböző koncentráció tesztelése, kivéve határértékek meghatározásánál (diszpergáló szer<0,1 ml/l)

• Kontroll: diszpergálószer hatásainak felmérése• Észrevételek: elpusztult egyedek eltávolítása,

halál kritériumai különböznek az egyes szakaszokban, rendellenességek feljegyzése, tömeg, méret

Tesztkörülmények, időtartam és túlélési kritérium az ajánlott halfajokra

FajokTesztkörülmények

Időtartam

Kontroll halak túlélése

(minimális %)

Hőmér-séklet (oC)

Sótarta-lom (‰)

Fotoperió-dus (óra) Kikelési Kikelés

után

Szivárvá-nyos

pisztráng

10±2(embrió)

12±2 (lárva+fiatal hal)

Kikelés után egy hét sötétség majd

12-162 hét azután, hogy a

kontroll halak önellátóak lesznek

> 66% 70%

Zebradánió 25±2 16 32 nap (vagy 28 nap a kikelés után) > 66% 70%

Cselle 25±2 12-16 30 nap a kikelés után 70%

Medaka24±1(embrió)

23±2(lárva+fiatal hal)

12-16 30 nap a kikelés után 80%

Tarka fogasponty 25±2 15-30 12-16

32 nap (vagy 28 nap a kikelés után) > 75% 80%

Statisztikai elemzésekhez felhasznált adatok

• kumulált mortalitás• a vizsgálat végén az egészséges halak száma• a keltetés eleje és vége• a napokhoz tartozó kikelt egyedek száma• a túlélő állatok hossza és tömege• torz egyedek száma• rendellenes viselkedést mutató egyedek

száma

Az eredmények kiértékelése

Statisztikai összefüggések alkalmazása mind a :• kísérlettervezéshez• kísérletek kiértékeléséhez

pl. a párhuzamos mérések varianciaanalízise A teszt nem tartalmaz konkrét útmutatót az

alkalmazandó statisztikai módszerekre vonatkozóan.

A vizsgálati jelentés tartalmi követelményei (1)

A toxikus anyag: fizikai jellege, fizikai-kémiai tulajdonságai

Teszt fajok:• tudományos név, törzs, származás, a gyűjtés

módja valamint az ezt követő kezelés• vizsgálati eljárás/módszer• nappali periódusok• párhuzamos tesztedények száma

A vizsgálati jelentés tartalmi követelményei (2)

• a törzsoldatok készítésének módja, a vízcsere gyakorisága (ha van oldószert annak neve és koncentrációja)

• a kísérleti koncentrációk, eszközök, a mért értékek és azok szórása

• víz jellemzői (pH, keménység, oldott O2 koncentráció, összes szerves szén, sótartalom)

• etetési információk

A vizsgálati jelentés tartalmi követelményei (3)

Eredmények: • bizonyíték arra, hogy a kontroll mintában lévő

egyedek megfeleltek a túlélési előírásoknak• a kísérlet napjainak száma, egyedek száma• az egyedek hossza, tömege• egyedek előfordulási valószínűsége• koncentráció-válasz görbék• NOEC, LOEC értékek

Források

Teszt:

http://lysander.sourceoecd.org/vl=11982194/cl=14/nw=1/rpsv/cgi-bin/fulltextew.pl?prpsv=/ij/oecdjournals/1607310x/v1n2/s11/p1.idx

Képek forrásai:

http://bss.sfsu.edu/holzman/courses/fall01%20projects/rainbow%20trout.htm (Szivárványos pisztráng)

http://diszhal.info/english/cyprinds/en_Brachydanio_rerio.php (Zebradánió)

http://denr.sd.gov/des/sw/wet.aspx (Cselle)

http://hu.wikipedia.org/wiki/Makrahalalak%C3%BAak (Medaka)