Upload
istrate-iuliana
View
311
Download
7
Embed Size (px)
DESCRIPTION
histo
Citation preview
HISTOLOGIELucrare practic 1
HISTOLOGIAtiina care se ocup cu studiul structurii microscopice a celulelor, esuturilor i organelor
Compartimente: Citologia Histologia general: studiul esuturilorHistologia special: studiul organelor: org. tubulo-cavitare, org. parenchimatoase
Legturi: Biologia celular Histopatologia
HISTOLOGIARamuri: Histologia de diagnostic Obine continuu date privitoare la structura i funcia unui anumit esut sau organ
Histologia de cercetare Evideniaz i studiaz: - o categorie celular / tisular nedescoperit nc - modul de comportament al celulelor i esuturilor n condiii fiziologice i patologice neexplorate
HISTOLOGIA
ESUTURILEStructuri supracelulare alctuite din celule unite ntre ele printr-o substan intercelular Celulele ndeplinesc n organism aceeai funcie sau acelai grup de funcii.4 categorii de esuturi: epitelial, conjunctiv, muscular, nervosesuturile alctuiesc ORGANE
Metode de studiere a celulelor i esuturilor
Metode utilizate n practica clinic
Metode utilizate n cercetare
I. Metode utilizate n practica clinic
Coloraia uzual Hematoxilin-eozinColoraiile specialeExamenul microscopic extemporaneuColoraiile imunohistochimice
Preparatul microscopicTotalitatea obiectelor pregtite pentru a fi examinate la aparate optice mritoare n vederea studierii structurii lor.Componentele: ObiectulSuportul: lamaLamela Sunt de 2 tipuri: extemporanee i permanente
Preparatul microscopic I. RecoltareaBiopsie NecropsieDe la animale
Preparatul microscopic RecoltareaExcizia Incizia Rezecia Puncia biopsie
Preparatul microscopicII. FixareaPiesa e introdus n fixatori care previn degradarea enzimatic (autoliza) i pstreaz intact structura tridimensional a esutului.
Formaldehida
Fixatorii acioneaz asupra proteinelor din esuturi prin 3 mecanisme: denaturare, coagulare i precipitare
Preparatul microscopicFixarea Aspectul unui fragment de esut dup fixare
Preparatul microscopicIII. Splareandeprteaz excesul de fixatorSe face cu ap sau alcool (deshidratarea)
Decalcificarea Preparatele de os sau dinteSe face cu acizi i rini schimbtoare de ioni sau prin electroliz
Preparatul microscopicIV. Includerea n parafinPiesa e mbibat i nglobat ntr-o substan solidificabil, denumit mas de includere.Piesa devine rigid i poate fi secionat n felii de ordinul m (5m).
Aceast secionare este necesar pentru a permite luminii s treac prin preparatul microscopic i apoi s ajung la ochiul obsevatorului, care va examina imaginea microscopic a esutului
Preparatul microscopicIncluderea n parafinEtape: Deshidratarea- introducerea n bi de alcool de concentraii crescnde alcoolul va nlocui apa din esut;Clarificarea cu solveni organici (xilen, toluen) miscibili att n alcool ct i n parafin, vor scoate alcoolul din esutmbibarea cu parafin: parafina topit intr n celule esutul va fi complet inclus n parafina care se va ntri i va forma un bloc solid ce conine esutul;Includerea propriu-zis
Preparatul microscopicIncluderea n parafin
esuturi incluse n blocuri de parafin
Preparatul microscopicV. Secionarea
Preparatul microscopicSecionarea
Preparatul microscopicVI. Colorarea Evideniaz elementele structuraleColoranii histologici se fixeaz pe anumite componente structurale Colorani artificiali: derivai din hidrocarburi aromatice i, n funcie de natura cromoforului, pot fi: Bazici: albastrul de metilen, albastrul de toluidin, fuxina bazicAcizi: eozina, fuxina acid, eritrozina, orange GNeutri: eozinatul de azur de metilenIndifereni: Sudan III, Scharlach RothColorani naturali: carminul, hematoxilina, orceina
Preparatul microscopicColorarea BazofilieAcidofilieNeutrofilie Termeni care se refer la afinitatea tinctorial (de coloraie) a diferitelor elemente fa de baze, acizi sau substane neutre.
Preparatul microscopicColorarea Clasificarea coloraiilorDup electivitate: difuze i electiveDup modul de aciune: directe i indirecteDup procedeul de executare: progresive i regresiveDup numrul de colorani folosii: simple i combinate: succesive sau simultaneColoraia ortocromaticColoraia metacromatic
Preparatul microscopicColoraia HEColoraie uzual (95% din lame); e o metod direct, progresiv, combinat, succesiv, ortocromatic.
Hematoxilina-colorant bazic- coloreaz n ALBASTRU structurile bazofile: acizii nucleici- ADN-nucleu; ARN- ribozomiEozina colorant acid- coloreaz n ROU structurile acidofile sau eozinofile: proteinele n citoplasm i n matricea extracelular
Structurile cu coninut ridicat de substane lipidice (celule adipoase, mielina) rmn optic vide;
Preparatul microscopicColoraia HECelulele: funcia biochimic i distribuia elementelor componente.
Nucleii Celulele tinere sau/i active metabolic, prezint nucleii eucromi sau hipocromi (eucromatina este palid). Celulele adulte sau mbtrnite, cu activitate metabolic redus, au nuclei hipercromi (heterocromatina inactiv se coloreaz intens bazofil)
Preparatul microscopicColoraia HECitoplasmaCelulele care sintetizeaz proteine conin numeroi ribozomi liberi i RER bine dezvoltat i prezint un aspect bazofil al citoplasmei (H coloreaz ARN din ribozomi n albastru)Celulele implicate n transportul de ioni conin numeroase mitocondrii i prezint un aspect eozinofil al citoplasmei (E coloreaz proteinele cationice: citocromii n rou). Fibrele musculare au aspect intens eozinofil datorit fixrii eozinei pe proteinele contractile din miofibrile.
Preparatul microscopicColoraia HE
Preparatul microscopicColoraia HE
Preparatul microscopicColoraii specialeTricrom Masson, tricrom Mallory - pune n eviden es. conjunctivFibrele de colagen se coloreaz n verde, respectiv albastru
Preparatul microscopicColoraii specialeRezorcin Fuxin Weigert: fibrele elastice sunt colorate n violet nchisOrcein: fibrele elastice sunt colorate n maro nchisRFWOrceina
Preparatul microscopicColoraii specialeImpregnarea argentic: pune n eviden fibrele dereticulin, neurofibrilele din neuroni (maro/negru) i cimentul intercelular n epiteliiFicat-impregnare argenticesut nervos- impregnare argentic
Preparatul microscopicColoraii specialeSudan III, Sudan negru, Scharlach Roth- folosite pentru a pune n eviden lipidele n esuturi, pe care le coloreaz n galben, negru i respectiv rou.!!! Fragmentele de esut nu sunt preparate cu solveni organici, pentru a nu dizolva subst. lipidice.
Preparatul microscopicColoraii specialeColoraia PAS (Periodic Acid Schiff)Coloreaz carbohidraii n roz intens. Evideniaz membrana bazala epiteliilor.
Preparatul microscopicColoraii specialeAcidul osmic- coloreaz n brun/negru substanele lipidiceEvideniaz teaca de mielin
Preparatul microscopicColoraii specialeHematoxilina Feric Heidenheim- coloreaz n negru miofibrilele i evideniaz aspectul striat al fibrelor musculare.
Preparatul microscopicColoraii specialeesutul osos compact lefuit, montat n balsam de Canada !!! Preparat necolorat
Preparatul microscopic VII. Montarea
VIII. Etichetarea
Preparatul microscopicExamenul extemporaneu (la ghea)Permite un diagnostic rapid (15-20 min), care orienteaz decizia terapeutic chirurgicalFrecvent utilizat n chirurgia oncologicNu are precizia examenului histologic clasic
Preparatul microscopic-examenul extemporaneu-
Imunohistochimia-principiu-Utilizeaz principiul antigen-anticorp (Ag-Ac) pentru a identifica prezena/absena unor proteine specifice la nivelul esuturilor.
antigen cautatanticorp primar (invizibil)anticorp secundar (brun)
ImunohistochimiaImunoperoxidaz Imunofluorescen
II. Metode utilizate n cercetareSEM - scanning electron microscopy
Imunoperoxidaz: Glanda tiroid: evidenierea calcitoninei n celulele parafoliculareImunofluorescen: esut epitelial infecie cu HPV: cu roz e marcat ADN-ul HPV n celulele epiteliale, nucleii celulelor apar albatri, citokeratina din celule e evideniat n verde. *