- 1. Informe de Tcnica deInmunodifusin Radial (IDR).porMiguel
Angel Figueroa Nez Inmunologa Clnica TM. Marcelo Ramirez
Sandoval
2. TABLA DE CONTENIDO INTRODUCCIN2QU ES LA INMUNOFLUORECENCIA
INDIRECTA? PRINCIPIO DE LA TECNICA? SU UTILIDAD EN LA INMUNOLOGA
CLNICA OBJETIVOS2 2 3 3MATERIALES Y METODOS4MATERIALES UTILIZADOS
METODO OCUPADO DESARROLLO DEL PASO PRCTICO PROCEDIMIENTOS CONTROL
DE CALIDAD INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS RESUMEN DE LA TECNICA4
4 4 5 6 7 7INTERPRETACIN8RESULTADOS OBTENIDOS LECTURA DE LOS
RESULTADOS VALORES DE REFERENCIA INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS
SIGNIFICADOS CLNICOS DISCUSIN Y CONCLUCIN BIBLIOGRAFA18 11 12 12 13
13 13 3. INTRODUCCION QUE ES LA INMUNODIFUSIN RADIAL? Desde hace
mucho tiempo que las tecnicas de una seccion de laboratorio no son
exclusivas, y este es el mejor ejemplo de como ocupamos el ingenio
para el uso de tecnicas inmunologicas. La interaccin de antgenos
solubles macromoleculas (polivalentes) y anticuerpos especficos
llevan a la formacin de complejos variables de Ag o Ac, que
frecuentemente llegan a ser insolubles y precipitan en solucin.
Este se conoce reaccin de precipitacin que es dependiente de la
relacin de concentracin Ag y Ac.PRINCIPIO DE LA TECN ICA El
procedimiento consiste en una inmunoprecipitacin en agarosa entre
un Antgeno a cuantificar y su Anticuerpo homlogo. Se realiza
incorporando uno de los 2 reactivos inmunes (generalmente
Anticuerpo) uniformemente en una capa de Agarosa y luego
introduciendo el otro reactivo en pocillos cavados en el gel. El
antgeno difunde radialmente en la mezcla gel-Anticuerpo y se forma
un disco o anillo visible en un punto que depende de la relacin
estequiomtrica antgeno-anticuerpo. A medida que ms antgeno difunde,
el anillo se redisuelve y reaparece en una distancia mayor del
pocillo. Este aumento en el dimetro de precipitacin contina hasta
que Antgeno y Anticuerpo reacciona completamente. Mientras que el
precipitado se est expandiendo (16 20 horas) la relacin entre el
dimetro del anillo y el logaritmo de la concentracin de antgeno es
aproximadamente lineal. Al completarse la reaccin, la relacin entre
el dimetro al cuadrado y la concentracin es lineal.2 4. SU UTILIDAD
EN LA IN MUNOLOGA CLNICA La deteccin de autoanticuerpos en
autoinmunes como: el diagnstico de diferentes enfermedadesLupus
Eritematoso Sistmico. Enfermedad Mixta del Tejido Conectivo.
Sndrome de Sjogren. Esclerosis Sistemtica Progresiva. Sndrome de
CREST. Cirrosis Biliar Primaria. Artritis ReumatoideOBJETIVOS
3Cuantificar las inmunoglobulinas (IGG, IGA, IGM) y Complemento (C3
y C4) mediante la tcnica de inmunodifusin radial. Identificar los
requerimientos tcnicos que debemos considerar al realizar esta
tcnica 5. MATERIALES Y MTODOS MATERIALES UTILIZADO S INSUMOS Placas
IDR anti-IGG Placas IDR anti-IGM Placas IDR anti-IGA Placas IDR
anti-complemento C3 Placas IDR anti-complemento C4 Micropipeta de
10uL-100uL Micropipeta de 1 a 10 uL Puntas desechables amarillas 10
a 100 uL Puntas desechables blancas 1 a 10 uL Tubos de Khan 75x13
mm Guantes.EQUIPOS Cmara de incubacin Refrigerador VortexDESARROLLO
DEL PASO PRCTICO PROCEDIMIENTO 1 2 3Abrir la placa (el agar
contiene Ag o Ac) para permitir que se evapore el exceso de
humedad, si lo hubiera. Sembrar las muestras problemas para
determinar los niveles de IGG, IGA, IGM, C3, C4 en sus respectivas
placas. Sembrar en orificio de la placa: 5 uL de controles y cada
una de las muestras problema utilizando micropipeta de precisin.
NOTA: debe tenerse suma precaucin al sembrar, evitando derramar
muestra fuera del pocillo, romper los bordes del mismo o introducir
burbujas de aire.44Registre en su hoja de trabajo la Posicin en que
sembr. 6. 5 6 7Colocar Algodn o papel filtro humedecido en el
centro de la placa, para mantener la humedad del agar. Cerrar
firmemente la tapa. Incubar en posicin invertida en cmara hmeda (en
este caso refrigerador) por 16-20 hr.CONTROL DE CALIDAD En esta
prueba los controles de calidad se colocaran en el los primeros 2
posillos de cada gel y se rotularn como A y B. Cada laboratorio
debe establecer su propio programa de Control deCalidad interno, as
como procedimientos de correccin en el caso de que los controles no
cumplan con las tolerancias aceptables.INTERPRETACIN DE LOS
RESULTADOS Al da siguiente DEBEN MEDIR LOS DIAMETROS DEL HALO DE
DIFUSIN con una precisin 1 mm. El punto final de la reaccin est
indicado por la aparicin de un anillo de bordes netos. El mismo se
alcanza una vez cumplido el tiempo de incubacin. A partir de ese
momento puede efectuarse la lectura, ya que el halo no aumentar de
tamao. Interpolar la concentracin en la tabla que se adjunta en el
inserto de las placas de IDR Mientras ms lejano sea el anillo de
precipitacin al sitio de la siembra, mayor ser su concentracin a)
Informe el valor obtenido para el antgeno en estudio. b) Explique
la relevancia clnica del resultado obtenido. En cada una de las
muestras problemas c) Sugiera en relaciona la interpretacin de
resultados que patologas podran estar cursando los pacientes de
quienes provienen las muestras en estudio5 7. INTERPRETACIN
RESULTADOS OBTENIDO S Los dos primeros 2 pocillos son los controles
positivo y negativo respectivamente. Cada uno puesto en una de las
tres placas y con una determinada medicin en sus halos.Control A Ig
A (6 mm): 231,9 mg/dL6Control B Ig A (5 mm): 125,8 mg/dL 8. Control
A Ig G (8 mm): 262,3 mg/dL7Control B Ig G (6 mm): 1131,8 mg/dL 9.
Control A Ig M (10 mm): >356,9 mg/dL8Control B Ig M(5 mm): 66,1
mg/dL 10. A continuacin presento los resultados de mis dos sueros,
1.1 y 1.2 de las correspondientes tres placas en el mismo
orden.PLACA IG A Suero 1.1 (8 mm): 502.2 mg/dLSuero 1.2 (6 mm):
231.9 mg/dL9 11. PLACA IG G Suero 1.1 (5.5 mm): 865,6 mg/dLSuero
1.2 (6 mm): 1131,8 mg/dL10 12. PLACA IG M Suero 1.1 (6 mm): 121.4
mg/dLSuero 1.2 (5 mm): 66.1 mg/dL11 13. LECTURA DE LOS RESULTADOS
PLACA IG A: Control A: 231,9 mg/dL Control B: 125,8 mg/dL Suero
1.1: 502.2 mg/dL Suero 1.2: 231.9 mg/dLPLACA IG G: Control A: 262,3
mg/dL Control B: 1131,8 mg/dL Suero 1.1: 865,6 mg/dL Suero 1.2:
1131,8 mg/dLPLACA IG M: Control A: >356,9 mg/dL Control B: 66,1
mg/dL Suero 1.1: 121.4 mg/dL Suero 1.2: 66.1 mg/dLVALORES DE
REFERENCIA Ig A: 220 mg/dL Ig G: 1190 mg/dL Ig M: 130
mg/dLINTERPRETACIN Y ANALISIS DE LOS RESULTADOS Se observa el halo
formado y se mide en milmetros (mm) luego se compara con la tabla
adjuntas dentro de cada placa para finalmente expresar un resultado
en mg/dL. Estos son comparados con los valores de referencia
provistos en el mismo inserto.12 14. SIGNIFICADOS CLNICOS Se
utiliza para estimar la concentracin de inmunoglobulinas en plasma.
Por ejemplo IgG, IgM, IgA en pacientes sospechosos de poseer alguna
gammaglobinopata o mieloma multiple respectivamente.DISCUSIN Y
CONCLUSIN Despus de pasar los controles y validar sus resultados
(A: Normal) (B: Patolgico), ambos fueron pasados por m y los dos
estaban dentro de los resultados esperados. Con respecto a los
sueros problemas, en el anlisis de la placa con Ig A mostro un
aumento sobre el valor de referencia para el suero 1.1 y normalidad
en el suero 1.2 estando dentro del rango de referencia. En los
controles de la Placa de Ig G los controles estn invertidos, sobre
el valor de referencia, lo que valida la placa. Ambos sueros
problemas estn dentro del rango de referencia, por lo tanto no se
ve alteracin de estos sueros (1.1 y 1.2). En el caso de Ig M fue
difcil leer, pues como se aprecia en las imgenes, en el caso del
Control A solo se aprecia someramente la difusin, mientras que en
el segundo se puede apreciar claramente el halo. Control A esta
como Patolgico y Control B como normal. Tambin es importarte
destacar que en la imagen de la lectura del suero 1.1 para esta
inmunoglobulina, nota una deformacin. Eso est dado debido a un
error de pipeteo fuera del posillo, lo que no altero mucho el halo,
pero que es importante destacar para denotar la importancia del
pipeteo en esta tcnica. Con respecto a esta ltima placa el suero
1.1 y el suero 1.2 estn dentro del rango de referencia esperado lo
que nos dice que solo Ig A en el paciente 1.1 dio alterado.
Finalmente destacar que esto que los resultados obtenidos y el
anlisis es importante de extrapolar los signos y sntomas del
paciente y los valores obtenidos en este ensayo.REFERENCIAS1)
Ramirez, Marcelo. Manual de Laboratorio de Inmunologa Clnica.
Edicin 2013. Santiago, Chile. Pags. 3-6. 2) Figueroa, Miguel.
Fotografas prueba Inmunofluorecencia Indirecta. 2013. Universidad
Iberoamericana de Ciencias y Tecnologa, Ramo Inmunologa
Clnica.13
