Embed Size (px)
Citation preview
ISOLASI SENYAWA TRITERPENOID
DARI EKSTRAK ASETON DAUN Garcinia celebica L
DAN UJI AKTIVITAS ANTIKANKER PAYUDARA (MCF-7)
SKRIPSI
AMBAR ILAFAH RAMADHAN
PROGRAM STUDI KIMIA
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
2018 M / 1440 H
ISOLASI SENYAWA TRITERPENOID
DARI EKSTRAK ASETON DAUN Garcinia celebica L
DAN UJI AKTIVITAS ANTIKANKER PAYUDARA (MCF-7)
SKRIPSI
Sebagai Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Sains
Program Studi Kimia
Fakultas Sains Dan Teknologi
Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta
Oleh:
AMBAR ILAFAH RAMADHAN
11140960000063
PROGRAM STUDI KIMIA
FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
2018 M / 1440 H
ABSTRAK
AMBAR ILAFAH RAMADHAN. Isolasi Senyawa Triterpenoid dari Ekstrak
Aseton Daun Garcinia celebica L dan Uji Aktivitas Antikanker Payudara
(MCF-7). Dibimbing oleh SRI HARTATI dan SITI NURBAYTI.
Tumbuhan Garcinia celebica merupakan salah satu dari sekitar 450 spesies
Garcinia yang mengandung senyawa triterpenoid, depsidon, xanton, dan
benzofenon yang berpotensi sebagai terapi kanker. Uji pendahuluan antikanker
payudara (MCF-7) terhadap ekstrak aseton daun G .celebica telah dilakukan dengan
nilai aktivitas sebesar 94,36% dalam konsentrasi 200 µg/mL dan 83,12% dalam
konsentrasi 50 µg/mL. Tujuan penelitian ini adalah mengisolasi dan
mengidentifikasi struktur metabolit sekunder dari ekstrak aseton daun G. celebica
serta aktivitas antikankernya. Tahapan yang dilakukan adalah fraksinasi
menggunakan metode kromatografi, identifikasi struktur dengan spektroskopi UV-
Vis, FTIR, LCMS, dan NMR serta uji aktivitas antikanker payudara (MCF-7)
dengan metode MTT assays. GC-2 yang diperoleh berupa gum putih sebanyak 20
mg dari 47,7 g ekstrak kasar. Hasil analisis UV-Vis menunjukkan adanya gugus
kromofor C=C (λmax 222 nm) dan C=O (λmax 272 nm). Analisis FTIR menunjukkan
vibrasi dari gugus fungsi O-H karboksilat (3378,47 cm-1), C-O (1262,46 cm-1), C=O
(1686,82 cm-1) dan C=C (1640,33 cm-1). Analisis LCMS menghasilkan puncak
dominan m/z [M+H]+ 453,4 (BM=452) dengan rumus molekul C30H44O3 diduga
merupakan senyawa asam (24E)-3-okso-17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-
trien-26-oat. Analisis 1H NMR dan 13C NMR menunjukkan sinyal khas triterpenoid
yaitu C=O keton (δc 211,2 C-3), -C=O karbonil karboksilat (δc 173,2 C-26), tiga
C=C (δc 145,7 (C-14), 145,5 (C-25), 144,2 (C-9), 126,5 (C-25), 125,0 (C-8) dan
120,3 (C-15), 7 sinyal metil, 2 metin, 9 metilen dan 4 karbon kuartener. Hasil uji
antikanker menunjukkan GC-2 memiliki aktivitas antikanker payudara yang sangat
kuat dengan nilai IC50 sebesar 24,97 µg/mL.
Kata kunci : Aktivitas antikanker, Garcinia celebica, isolasi, karakterisasi
ABSTRACT
AMBAR ILAFAH RAMADHAN. Isolation of Triterpenoid Compounds from
Garcinia celebica L Leaf Acetone Extract and Breast Anticancer (MCF-7) Activity
Test. Advisor by SRI HARTATI and SITI SURBAYTI.
The Garcinia celebica plant is one of about 450 Garcinia species containing
triterpenoid compounds, depsidone, xanthone and benzophenone which have the
potential as cancer therapy. Preliminary test of breast anticancer (MCF-7) on the
acetone extract of G .celebica leaf was carried out with an activity value of 94.36%
in a concentration of 200 µg / mL and 83.12% in a concentration of 50 µg / mL.
The purpose of this study was to isolate and identify secondary metabolite structure
of G. celebica acetone extract and its anticancer activity. The steps taken were
fractionation using chromatography method, structural identification with UV-Vis
spectroscopy, FTIR, LCMS, and NMR as well as breast anticancer (MCF-7)
activity test using MTT assays method. GC-2 obtained in the form of 20 mg of
white gum from 47.7 g of crude extract. UV-Vis analysis shows that there is a
chromophore C=C (λmax 222 nm) and C=O (λmax 272 nm). FTIR analysis showed
the vibration of OH carboxylic functional groups (3.378,47 cm-1), C-O (1.262,46
cm-1), C=O (1.686,82 cm-1), and C=C (1.640,33 cm-1). The molecular formula
C30H44O3 thought to be an acid compound (24E)-3-oxo-17,14-friedolanosta-
8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat. The 1H NMR and 13C NMR analysis showed a
typical triterpenoid signal, namely C=O ketone (δc 211,2 C-3), -C=O carboxylic
carbonyl (δc 173,2 C-26), three C = C (δc 145,7 (C-14), 145,5 (C-25), 144,2 (C-9),
126,5 (C- 25), 125 (C-8) and 120,3 (C-15), 7 methyl signals, 2 metin, 9 methylene
and 4 quaternary carbon.The results of anticancer tests showed GC-2 had very
strong breast anticancer activity with IC50 value is 24,97 µg / mL.
Keywords: Anticancer activity, Garcinia celebica, isolation, characterization
v
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah Yang Maha Esa, karena
berkat rahmat dan hidayah-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul
“Isolasi Senyawa Triterpenoid dari Ekstrak Aseton Daun Garcinia celebica L
dan Uji Aktivitas Antikanker Payudara (MCF-7)” Penulis menyadari bahwa
terselesaikannya skripsi ini tak lepas dari bantuan dan peranan banyak pihak. Pada
kesempatan ini, penulis mengucapkan terima kasih kepada:
1. Dr. Sri Hartati, M.Si selaku Pembimbing I yang telah memberikan
pengarahan serta bimbingannya baik dalam teknis di lapangan maupun dalam
menyelesaikan skripsi ini.
2. Dr. Siti Nurbayti, M.Si selaku Pembimbing II dan Pembimbing Akademik
yang telah memberikan pengarahan serta bimbingannya sehingga banyak
membantu penulis dalam menyelesaikan skripsi ini.
3. Tarso Rudiana, M.Si sebagai Penguji I yang telah memberikan saran serta
masukan yang bermanfaat.
4. Nurhasni, M.Si sebagai Penguji II yang telah memberikan saran serta
masukan yang bermanfaat.
5. Drs. Dede Sukandar, M.Si selaku Ketua Program Studi Kimia Fakultas Sains
dan Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
6. Dr. Agus Salim, M.Si selaku Dekan Fakultas Sains dan Teknologi UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta.
7. Isalmi Aziz, M.T selaku Sekretaris Program Studi Kimia Fakultas Sains dan
Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
vi
8. Bapak, Ibu, dan Adik tercinta atas segala doa, pengorbanan, nasihat dan
motivasinya kepada penulis.
9. Segenap dosen Program Studi Kimia atas ilmu pengetahuan dan pegalaman
hidup yang dengan ikhlas diajarkan dan diberikan kepada penulis.
10. Sahabat tersayang Esti, Ayu, Kak Yeni, Lucyta, Isni, Chinta, Nur Fauziyah,
Nurlathifah, Afriana, Nur Azizah, Nur Ana, Indah, dan Nadhia yang
senantiasa memberi bantuan, dukungan, nasihat dan motivasinya kepada
penulis.
11. Teman–teman Kimia Angkatan 2014 yang senantiasa memberi dukungan,
motivasi, dan keceriaan kepada penulis.
12. Serta semua pihak yang telah membantu secara langsung dan tidak langsung,
yang tidak dapat disebutkan satu persatu.
Penulis berharap skripsi ini dapat bermanfaat bagi penulis dan umumnya
bagi kemajuan ilmu dan teknologi.
Jakarta, Oktober 2018
Ambar Ilafah Ramadhan
vii
DAFTAR ISI
Halaman
KATA PENGANTAR ............................................................................................ v
DAFTAR ISI ........................................................................................................ vii
DAFTAR GAMBAR .............................................................................................. x
DAFTAR TABEL ............................................................................................... xii
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xiii
BAB I PENDAHULUAN ....................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ............................................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah .......................................................................................... 5
1.3 Hipotesis ........................................................................................................ 5
1.4 Tujuan Penelitian ........................................................................................... 6
1.5 Manfaat Penelitian ......................................................................................... 6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................... 7
2.1 Tinjauan Umum Tumbuhan Garcinia celebica L ......................................... 7
2.1.1 Fitokimia Tumbuhan Garcinia ......................................................... 8
2.1.3 Aktivitas Biologis Metabolit Sekunder dari Garcinia .................... 18
2.2 Metode Isolasi Senyawa Aktif ..................................................................... 20
2.2.1 Ekstraksi .......................................................................................... 20
2.2.2 Kromatografi Lapis Tipis ................................................................ 21
2.3.3 Kromatografi Kolom ....................................................................... 22
2.3 Karakterisasi Struktur dengan Metode Spektroskopi .................................. 23
2.4.1 Spektroskopi UV-Vis ...................................................................... 24
2.4.2 Spektroskopi FTIR .......................................................................... 25
2.4.3 Spektroskopi Massa (MS) ............................................................... 26
2.4.4 Spektroskopi 1H NMR dan 13C NMR ............................................. 27
viii
BAB III METODE PENELITIAN ..................................................................... 29
3.1 Tempat dan Waktu Penelitian ...................................................................... 29
3.2 Alat dan Bahan ............................................................................................ 29
3.2.1 Alat .................................................................................................. 29
3.2.2 Bahan............................................................................................... 29
3.3 Diagram Alir Penelitian ............................................................................... 30
3.4 Cara Kerja .................................................................................................... 31
3.4.2 Uji Fitokimia ................................................................................... 31
3.4.3 Isolasi Senyawa dari Ekstrak Aseton daun G. celebica .................. 33
3.4.5 Karakterisasi Struktur Senyawa Aktif ............................................. 36
3.4.6 Uji Aktivitas Antikanker ................................................................. 37
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................. 39
4.1 Hasil Uji Fitokimia ...................................................................................... 39
4.2 Hasil Isolasi Senyawa dari Ekstrak Aseton Daun G. celebica .................... 40
4.3 Hasil Uji Kemurnian dengan KLT 2 dimensi (2D) ..................................... 48
4.4 Hasil Analisis Data UV-Vis......................................................................... 48
4.5 Hasil Analisis Data FTIR............................................................................. 49
4.6 Hasil Analisis data LCMS ........................................................................... 51
4.7 Hasil Analisis data NMR ............................................................................. 54
4.7.1 Hasil Analisis data 1H NMR ........................................................... 54
4.7.2 Hasil Analisis data 13C NMR .......................................................... 59
4.8 Biosintesis Senyawa Asam (24E)-3-okso-17,14-friedolanosta-
8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat ................................................................... 62
4.9 Hasil Uji Aktivitas Antikanker Terhadap Sel Kanker Payudara (MCF-7) .. 64
ix
BAB V PENUTUP ................................................................................................ 68
5.1 Simpulan ...................................................................................................... 68
5.2 Saran ............................................................................................................ 68
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 69
LAMPIRAN .......................................................................................................... 78
x
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Herbarium tumbuhan daun dan buah Garcinia celebica L ................ 7
Gambar 2. Struktur senyawa golongan xanton (1-12) dari tumbuhan Garcinia . 11
Gambar 3. Struktur senyawa golongan benzofenon (13-22) dari tumbuhan
Garcinia ............................................................................................. 13 Gambar 4. Struktur senyawa golongan flavonoid (23-29) dari tumbuhan
Garcinia ............................................................................................. 15 Gambar 5. Struktur senyawa golongan triterpenoid (30-41) dari tumbuhan
Garcinia ............................................................................................. 17 Gambar 6. Struktur senyawa golongan depsidon (42-43) dari tumbuhan
Garcinia ............................................................................................. 18 Gambar 7. Kromatografi cair vakum ................................................................... 23
Gambar 8. Komponen utama spektroskopi massa .............................................. 27
Gambar 9. Diagram alir penelitian ...................................................................... 30
Gambar 10. Hasil KLT 11 fraksi dari kolom kromatografi cair vakum .............. 41
Gambar 11. Hasil KLT F13 dengan eluen n-heksana:etil asetat (6:4) ................ 43
Gambar 12. Hasil KLT kolom sephadex LH-20 ................................................. 44
Gambar 13. Hasil KLT Kromatografi Kolom Gravitasi pada F13.3c ................. 45
Gambar 14. Hasil KLT F13.3c (a) 2D dan (b) uji tiga pelarut ............................ 46
Gambar 15. Hasil KLT F13.3c dengan eluen diklorometan : aseton (85:15) ..... 47
Gambar 16. Hasil KLT 2D dari GC-2 ................................................................. 48
Gambar 17. Spektrum UV-Vis GC-2 .................................................................. 49
Gambar 18. Hasil spektrum FTIR GC- ............................................................... 50
Gambar 19. Kromatogram hasil LCMS GC-2..................................................... 51
Gambar 20. Struktur senyawa asam (24E)-3-okso-17,14-friedolanosta-
8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat (33) dan asam (24E)-3α-hidroksi-
17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat (44) ............... 53 Gambar 21. Hasil analisis 1H NMR GC-2 ........................................................... 55
Gambar 22. Perbesaran spektrum 1H NMR ........................................................ 56
Gambar 23. Spektrum hasil analisis 13C NMR pada GC-2 ................................. 59
xi
Gambar 24. Perbesaran spektrum 13C NMR ....................................................... 61
Gambar 25. Mekanisme reaksi pembentukan farnesil pirofosfat (FPP) .............. 63
Gambar 26. Mekanisme reaksi pembentukan senyawa asam (24E)-3-okso-17,14-
friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat ................................. 64
xii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1. Profil fitokimia genus Garcinia .................................................................. 8
Tabel 2. Distribusi senyawa xanton pada tumbuhan Garcinia ............................... 10
Tabel 3. Distribusi senyawa benzofenon pada tumbuhan Garcinia ........................ 12
Tabel 4. Distribusi senyawa flavonoid pada tumbuhan Garcinia ........................... 14
Tabel 5. Distribusi senyawa triterpenoid pada tumbuhan Garcinia ........................ 16
Tabel 6. Distribusi senyawa depsidon pada tumbuhan Garcinia ............................ 18
Tabel 7. Daerah serapan inframerah beberapa ikatan kimia ................................... 26
Tabel 8. Hasil uji penapisan fitokimia ekstrak aseton daun G. celebica ................. 39
Tabel 9. Berat fraksi hasil kolom kromatografi cair vakum .................................... 40
Tabel 10. Berat fraksi hasil kolom kromatografi gravitasi ...................................... 45
Tabel 11. Berat fraksi hasil kromatografi kolom gravitasi F13.3c .......................... 47
Tabel 12. Interpretasi Bilangan Gelombang FTIR GC-2 ........................................ 50
Tabel 13. Data spektrometer 1H NMR senyawa GC-2 dengan senyawa asam
(24E) -3-okso-17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat ....... 57 Tabel 14. Data spektrometer 13C NMR senyawa GC-2 dengan senyawa asam
(24E)-3-okso-17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat ........ 60 Tabel 15. Hasil uji sitotoksik GC-2 terhadap sel kanker payudara (MCF-7) .......... 66
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Perhitungan Nilai IC50 dari GC-2 ...................................................... 78
Lampiran 2. Hasil Analisis LCMS GC-2 ............................................................... 79
Lampiran 3. Spektrum 1H NMR dari GC-2 ........................................................... 81
Lampiran 4. Spektrum 13C NMR dari GC-2 .......................................................... 87
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Indonesia merupakan negara yang kaya akan tanaman obat dan memiliki
potensi untuk dikembangkan, namun belum dikelola secara maksimal. Indonesia
memiliki keanekaragaman tanaman lebih dari 38.000 jenis tumbuhan, 55%
merupakan spesies endemik, dimana 90% nya merupakan jenis tumbuhan yang
memiliki khasiat sebagai obat (Arifin dan Nakagoshi, 2011). Sekitar 80% tumbuhan
ini sudah lama dipergunakan oleh penduduk lokal sebagai obat-obatan tradisional,
namun belum diusahakan secara optimal untuk pengembangan obat. Data tersebut
menandakan jika tanaman yang memiliki potensi sebagai obat dikembangkan
secara optimal maka akan dapat membantu menanggulangi masalah kesehatan
(Nurdin et al., 2009).
Allah subhanahu wata’ala telah menunjukkan kekuasannya kepada manusia
melalui firman yang Allah turunkan dalam Q.S Asy-Syu’ara (26): 7-9
Artinya:
“Dan apakah mereka tidak memperhatikan bumi, betapa banyak Kami
tumbuhkan di bumi berbagai macam (tumbuh-tumbuhan) yang baik? (7). Sungguh,
pada yang demikian itu terdapat tanda (kebesaran Allah), tetapi kebanyakan mereka
tidak beriman (8). Dan sungguh, Tuhanmu Dialah Yang Maha Perkasa, Maha
Penyayang (9).”
2
Ath-Thabari (2009) menafsirkan maksud dari ayat tersebut adalah orang-
orang beriman dituntut untuk mempergunakan akal pikiran mereka untuk
memperhatikan dan mengamati apa yang terjadi di alam ini seperti berbagai macam
tumbuh-tumbuhan, karena pada setiap tumbuhan walau tumbuh di tanah yang sama
dan diairi dengan aliran yang sama pasti akan mempunyai kekhususan sendiri baik
dari bentuk dan warna buahnya, daunnya, bunganya hingga kandungan yang
terdapat di dalam tumbuhan tersebut. Kandungan senyawa tersebut secara ilmiah
memiliki khasiat yang berguna bagi kesehatan dan dapat dijadikan sebagai tanaman
obat.
Eksplorasi bahan alam hayati untuk menemukan obat yang dapat
menghambat atau menyembuhkan kanker secara selektif, efektif, dan tidak
menimbulkan efek samping masih tetap dilakukan sampai saat ini. Kanker
merupakan penyebab utama kematian di dunia (Suzery dan Cahyono, 2014).
Kanker payudara merupakan kanker yang paling sering menyerang wanita dengan
perkiraan 1,67 juta kasus kanker baru didiagnosis pada tahun 2012 (25% dari semua
kanker) (Ferlay et al., 2015). Pengobatan kanker umumnya seperti pembedahan,
kemoterapi, dan radioterapi memiliki efek samping toksik pada jaringan normal dan
resistensi sel kanker seringkali terjadi dengan cara pengobatan ini (Tyagi et al.,
2004). Pengembangan tanaman sebagai obat antikanker khususnya kanker
payudara terus dikembangkan hingga saat ini.
Tanaman yang berpotensi sebagai tanaman obat adalah tanaman dari genus
Garcinia. Genus Garcinia merupakan salah satu tumbuhan yang termasuk ke
dalam famili Clusiaceae dan memiliki sekitar 450 spesies yang umumnya tersebar
pada daerah tropis seperti Afrika, Amerika, Polinesia, dan Asia. Uji fitokimia
3
mengungkapkan bahwa spesies dari Garcinia kaya akan metabolit sekunder
termasuk flavonoid, biflavonoid, triterpenoid, dan xanton. Senyawa-senyawa yang
dihasilkan menunjukkan sejumlah aktivitas biologis sebagai antimikroba,
antikanker, antioksidan, anti-hyperlipidemic, dan antiinflamasi (Chen et al., 2010;
Chang dan Yang, 2012; Sukatta et al., 2013; Suttirak dan Manurakchinakorn, 2014;
Sharma dan Handique, 2015; Stark et al., 2014; Kritsanawong et al., 2016).
Penelitian dari genus Garcinia telah dilakukan diantaranya adalah senyawa
epigarcinol dan isogarcinol yang diperoleh dari ekstrak metanol akar G. ovalifolia
memiliki aktivitas penghambatan kanker leukimia dengan nilai IC50 < 10 μg/mL
(Pieme et al., 2015). Isolasi ekstrak aseton dari daun G. oblongifolia diperoleh 2
senyawa baru xanton terprenilasi yaitu oblongixanton D dan E yang memiliki
kemampuan menghambat sel kanker esophagus yang sangat kuat dengan nilai IC50
<100 μg/mL (Zhang et al., 2016). Senyawa-senyawa baru dari golongan xanton
berhasil diisolasi dari ekstrak aseton daun G. nujiangensis dan memiliki aktivitas
antikanker serviks yang sangat kuat dengan nilai IC50 <10 μg/mL (Tang et al.,
2015). Hasil isolasi ekstrak aseton daun G. cowa menghasilkan senyawa
cowaxanton dengan aktivitas antikanker liver yang sangat kuat yaitu IC50 8,09
μg/mL (Xia et al., 2015).
Hasil penelusuran pustaka di atas menunjukkan bahwa tumbuhan genus
Garcinia khususnya yang memiliki aktivitas antikanker sudah banyak dilaporkan,
namun penelitian untuk spesies G. celebica masih sedikit dilaporkan. G. celebica
merupakan salah satu spesies dari genus Garcinia dengan nama lokal di Indonesia
adalah beruwas (Dahlan et al., 2009). Menurut penelitian Subarnas et al. (2012),
ekstrak etanol daun G. celebica berpotensi sebagai obat tradisional antikanker yang
4
ditunjukkan dengan penghambatan yang kuat terhadap proliferasi sel MCF-7
(IC50<100 μg/mL). Penelitian lebih lanjut dilakukan oleh Subarnas et al. (2016)
untuk menentukan senyawa aktif yang berperan sebagai agen antikanker tersebut,
diperoleh senyawa golongan triterpenoid yaitu metil-3α,23-dihidroksi-17,14
friedolanstan-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat.
Isolasi ekstrak etil asetat dari kulit batang G. celebica diperoleh 19 senyawa,
diantaranya adalah 1 senyawa baru dari depsidon yaitu garcinisidon H, 6 senyawa
baru dari golongan triterpenoid serta 12 senyawa yang sudah diketahui yaitu 8
xanton, 3 friedolanostan dan 1 sikloartan. Uji sitotoksisitas terhadap sel kanker
payudara (MCF-7) diperoleh bahwa senyawa makluraxanton dari golongan xanton
memiliki aktivitas penghambatan yang kuat dengan nilai penghambatan IC50 2,4
μg/mL serta beberapa senyawa triterpenoid memiliki aktivitas yang sangat kuat
dengan nilai IC50<100 μg/mL (Bui et al., 2016). Elfita et al. (2009) melalui
penelitiannya memperoleh beberapa senyawa hasil isolasi ekstrak etil asetat dari
daun G. celebica antara lain friedelin dan asam 3β-hidroksi-23-okso-9,16-
lanostadien-26-oat (garcihombronan D).
Penelitian-penelitian yang telah dilaporkan sebelumnya menyatakan bahwa
tumbuhan G. celebica banyak menghasilkan senyawa triterpenoid yang memiliki
aktivitas antikanker payudara yang sangat kuat, namun belum pernah dilakukan
penelitian mengenai isolasi dan elusidasi struktur senyawa aktif menggunakan
ekstrak aseton daun G. celebica. Isolasi yang dilakukan pada penelitian ini
menggunakan ekstrak aseton karena senyawa-senyawa yang dihasilkan memiliki
aktivitas antikanker yang sangat kuat. Hasil studi pendahuluan yang telah dilakukan
pada ekstrak aseton daun G. celebica terhadap uji aktivitas sel kanker payudara
5
(MCF-7) menunjukkan aktivitas yang cukup bermakna dengan nilai aktivitas
penghambatan sel kanker payudara sebesar 94,36% dalam konsentrasi 200 µg/mL
dan 83,12% dalam konsentrasi 50 µg/mL. Nilai tersebut menunjukkan ekstrak
aseton daun G. celebica memiliki potensi dalam menghambat pertumbuhan sel
kanker payudara. Maka dilakukan penelitian lebih lanjut dengan melakukan
fraksinasi dan identifikasi struktur senyawa dari ekstrak aseton daun G. celebica
dan uji aktivitas antikankernya terhadap sel kanker payudara (MCF-7).
1.2 Rumusan Masalah
Rumusan masalah dari penelitian ini adalah:
1. Bagaimana struktur kimia senyawa triterpenoid dari ekstrak aseton daun G.
celebica?
2. Apakah isolat dari ekstrak aseton daun G. celebica memiliki aktivitas
antikanker payudara (MCF-7)?
1.3 Hipotesis
Hipotesis dari penelitian ini adalah:
1. Struktur kimia senyawa triterpenoid dari ekstrak aseton daun G. celebica
dapat ditentukan struktur kimianya menggunakan spektroskopi UV-Vis,
FTIR, MS dan NMR.
2. Isolat dari ekstrak aseton daun G. celebica mengandung senyawa
triterpenoid yang memiliki aktivitas antikanker payudara (MCF-7).
6
1.4 Tujuan Penelitian
Berdasarkan rumusan masalah di atas, tujuan penelitian ini adalah:
1. Mengisolasi dan mengkarakterisasi struktur senyawa triterpenoid yang
terkandung dalam ekstrak aseton daun G. celebica dengan spektroskopi
UV-Vis, FTIR, MS dan NMR.
2. Menguji aktivitas antikanker payudara (MCF-7) dari isolat ekstrak aseton
daun G. celebica.
1.5 Manfaat Penelitian
Manfaat dari penelitian ini adalah memberikan informasi tentang potensi
dan struktur senyawa triterpenoid yang terkandung dalam ekstrak aseton daun G.
celebica sebagai antikanker payudara (MCF-7).
7
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tinjauan Umum Tumbuhan Garcinia celebica L
Garcinia celebica merupakan tumbuhan yang termasuk dalam famili
Clusiaceae atau Guttiferae (Hemshekhar et al., 2011). Tumbuhan Garcinia
(Gambar 1) sering disebut sebagai “Asam Kandis” atau “Kandis Gajah”,
G. celebica memiliki nama lokal di Indonesia adalah “Beruwas” (Dahlan et al.,
2009). Menurut Hemshekhar et al. (2011) klasifikasi taksonomi dari tumbuhan G.
celebica adalah sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Phylum : Tracheophyta
Divisio : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Ordo : Malpighiales
Famili : Clusiaceae/Guttiferae
Subfamili : Clusioideae
Genus : Garcinia
Spesies : Garcinia celebica
Gambar 1. Herbarium tumbuhan daun dan buah Garcinia celebica L
8
Diperkirakan dari 450 jenis tumbuhan Garcinia tersebar secara luas di Asia,
Afrika selatan dan Polinesia (Kumar dan Pandey, 2013). G. celebica tersebar luas
di Indonesia seperti Jawa, Makasar, Bangka, dan Sumatera Selatan (Dahlan et al.,
2009).
2.1.1 Fitokimia Tumbuhan Garcinia
Kajian fitokimia yang telah dilakukan terhadap genus Garcinia
menunjukkan bahwa tumbuhan ini mengandung beberapa metabolit sekunder
diantaranya golongan xanton, benzofenon, flavonoid, triterpenoid, dan depsidon
yang dapat dilihat pada Tabel 1. Metabolit sekunder utama yang terdapat pada
genus Garcinia adalah xanton dan benzofenon.
Tabel 1. Profil fitokimia genus Garcinia
Spesies Bagian
tanaman Ekstrak
Golongan
senyawa Asal
Pustaka
G. celebica Daun Etanol Triterpenoid Indonesia Subarnas et
al., 2016
Daun Etil
asetat Triterpenoid Indonesia
Elfita et al.,
2009
Kulit
kayu
Etil
asetat
Depsidon
Triterpenoid Vietnam
Bui et al.,
2016
G. cowa Bunga Aseton Benzofenon
Xanton Thailand
Trisuwan
dan
Ritthiwigro
m., 2012
Buah Aseton Xanton Thailand Auranwiwat
et al., 2014
Daun Aseton Xanton China Xia et al.,
2015
G. goudotiana Daun Aseton Benzofenon
Xanton
Madagas
kar
Mahamodo
et al., 2014
G.
xipshuanbanna
ensis
Ranting Aseton Xanton China
Han et al.,
2008
G. oblongifolia Kulit
kayu Aseton
Xanton
Benzofenon China
Zhang et
al., 2014
Daun Aseton Xanton
Benzofenon China
Zhang et
al., 2016
9
Tabel 1. Profil fitokimia genus Garcinia (Lanjutan)
Spesies Bagian
tanaman Ekstrak
Golongan
senyawa Asal
Pustaka
G. multiflora Ranting Aseton Benzofenon China Liu et al.,
2010
G. nujiangensis Ranting Aseton Xanton China Tang et
al., 2015
Daun Aseton Xanton
Benzofenon China
Xia et al.,
2012
G. dulcis Daun Aseton Flavonoid Thailand Sales et
al., 2015
G. travancorica Daun Metanol Benzofenon
Flavonoid India
Aravind et
al., 2016
G. brasiliensis Daun n-heksana,
etanol Flavonoid Brazil
Arwa et
al., 2015
G. lancilimba Daun Etanol Xanton China Sun et al.,
2016
G. pauciervis Daun Etanol Flavonoid
Triterpenoid China
Jia et al.,
2017
G. nervosa Daun Etanol Flavonoid Nigeria Parveen et
al., 2017
G. speciose Daun Kloroform Benzofenon
Xanton Thailand
Pailee et
al., 2018
G. polyantha Daun Diklorometan Depsidone Kamerun
Lannang
et al.,
2017
G. oligantha Daun Petroleum
eter, etanol Xanton Thailand
Tang et
al., 2016
Xanton
Xanton adalah golongan senyawa fenolik polifrenilasi dengan kerangka
xanton-9-on. Sistem cincin dapat diganti dengan berbagai kelompok yang
memberikan berbagai macam kemungkinan struktur seperti berbagai gugus
isoprena, fenolik dan metoksi. Xanton alami dapat dibagi berdasarkan sifat
substituennya menjadi xanton teroksigenasi sederhana, glikosida xanton dan xanton
terprenilasi, dan turunannya seperti dimer xanton, xantonolignois dan
miscellaneous (Pinto et al., 2005).
10
Genus Garcinia banyak menghasilkan senyawa golongan xanton dan
turunannya. Aktivitas farmakologis dari xanton dan turunannya sangat berpotensi
untuk dikembangkan sebagai obat seperti antioksidan, antikanker, antihistamin,
antimikroba, antifungi, antivirus dan antinflamasi (Hemshekhar et al., 2011).
Distribusi dan struktur senyawa dari golongan xanton pada tumbuhan Garcinia
dapat dilihat pada Tabel 2 dan Gambar 2.
Tabel 2. Distribusi senyawa xanton pada tumbuhan Garcinia
Senyawa Asal spesies Pustaka
Garcinianon A (1) G. cowa
Trisuwan dan
Ritthiwigrom,
2012
1,3,7-trihidroksi-2-
isoprenilxanton (2) G. goudotiana
Mahamodo et al.,
2014
Garcicowanon A (3) G. cowa Auranwiwat et
al., 2014
Cowaxanton H (4) G. cowa Xia et al., 2015
Bannaxanton A (5) G. xipshuanbannaensis Han et al., 2008
Oblongixanton A (6) G. oblongifolia Huang et al.,
2009
Oblongixanton D (7) G. oblongifolia Zhang et al.,
2016
Nujiangexanton A (8) G. nujiangemsis Xia et al., 2012
Nujiangexanton C (9) G. nujiangensis Tang et al., 2015
Garcinexanton G (10) G. lancilimba Sun et al., 2016
Makluraxanton (11) G. speciose Pailee et al.,
2018
Oligantin H (12) G. oligantha Tang et al., 2016
11
OHO OH
OH
O
O
O
H3CO
HO
OHO
(1) (2) (3)
O O
OH
HO
OH
O
O
HO
HO
OH
OH
OH
O
OO
HO
OH
OH
O
(4) (5) (6)
O
OH
OCH3
OHOH
OH
HO
O
O
OH
OHO
OH
OHO
OH
OOHO
OH
OHO
(7) (8) (9)
O O
HOOH
HO
OHO
O
OHO
OH
OHO
OO
OH
HO
OH
O
O
(10) (11) (12)
Gambar 2. Struktur senyawa golongan xanton (1-12) dari tumbuhan Garcinia
12
Benzofenon
Penelusuran terhadap tumbuhan Garcinia, benzofenon dan turunannya
merupakan golongan senyawa yang cukup banyak dihasilkan dari tumbuhan ini.
Berbagai macam substituen menghasilkan kerangka struktur yang berbeda-beda.
Senyawa benxofenon yang dihasilkan dari tumbuhan garcinia banyak memiliki
aktivitas biologis yang berpotensi dikembangkan sebagai obat seperti Garcinol (14)
yang memiliki aktivitas antikanker usus, antiinflamasi, anti HIV, antiulcer, dan
antioksidan yang sangat kuat (Padhye et al., 2009) Distribusi senyawa benzofenon
pada tumbuhan Garcinia dapat dilihat pada Tabel 3 dan struktur senyawanya dapat
dilihat pada Gambar 3.
Tabel 3. Distribusi senyawa benzofenon pada tumbuhan Garcinia
Senyawa Asal spesies Pustaka
Cowanon (13) G. cowa
Trisuwan dan
Ritthiwigrom,
2012
Garcinol (14) G. goudotiana Mahamodo et
al., 2014
Oblongifolin E (15) G. oblongifolia Huang et al.,
2009
Oblongifolin V (16) G. oblongifolia Zhang et al.,
2016
Garciosone A (17)
guttiferone F (18) G. multiflora Liu et al., 2010
Nujiangefolin A (19) G. nujiangemsis Xia et al., 2012
Goudotianon 1 (20)
7-epi-nemoroson (21) G. travancorica
Aravind et al.,
2015
18-hydroxygarcimultiflorone D (22) G. speciose Pailee et al.,
2018
13
O
O
O
OH
HO
O O
HO
HO
O
(13) (14)
O
O
O
O
OH
(15) (16)
H3CO
HO
OH
OCH3O
OH
O
OH
HO
OH
O
O
(17) (18)
OHHO
OHO (19) (20)
O
O
OH
O
O
OH
HO
OH
O
O
HO
OH
(21) (22)
Gambar 3. Struktur senyawa golongan benzofenon (13-22) dari tumbuhan
Garcinia
14
Flavonoid
Flavonoid adalah kelompok senyawa berberat molekul rendah yang
tersusun dari tiga struktur cincin dengan berbagai substitusi. Flavonoid umumnya
terbagi menurut substituennya menjadi tiga kelompok, flavanol, antosianidin dan
flavon, dan kalkon. Flavonoid telah lama dikenal dan memiliki sifat anti-inflamasi,
antioksidan, antialergi, antiviral, dan antikarsinogenik (Hemshekhar et al., 2011).
Turunan flavonoid yang banyak ditemukan pada genus Garcinia adalah biflavonoid
dan isoflavon, distribusi dan struktur senyawa flavonoid pada tumbuhan Garcinia
dapat dilihat pada Tabel 4 dan Gambar 4.
Tabel 4. Distribusi senyawa flavonoid pada tumbuhan Garcinia
Senyawa Asal spesies Pustaka
Biflavonoid
Biflavonoid terprenilasi:
dulcisbiflavonoid A (23) G. dulcis
Sales et al.,
2015
Morelloflavon (24)
morelloflavon-7” -O- β -D-glikosida or
fukugisida (25)
G. travancorica Aravind et al.,
2015
Amentoflavon (26)
Podocarpusflavon (27) G. brasiliensis
Arwa et al.,
2015
Paucinervin K (28) G. pauciervis Jia et al., 2017
Isoflavon
5,7-dihidroksi-3-(3’-hidroksi-4’,5’-
dimetoksifenil)-6-metoksi-4H-chromen-
4-on (29)
G. nervosa Parveen et al.,
2016
15
OHO
OH
OH
OHO
OHO
O
OH
O
O
HO
OH
OH
OH OH
OH
R1OO
O
H
H
(23) (24,25)
R1 (24) = H; R1 (25) = Glukosa
O
OOH
OH
O
O
HO
OH
HO OH
O
OOH
OCH3
O
O
HO
OH
HO OH
(26) (27)
O
OOH
HO
OHO
OH
OH
OH
O
O
H3CO
OH
OH
OCH3
OCH3
O
HO
(28) (29)
Gambar 4. Struktur senyawa golongan flavonoid (23-29) dari tumbuhan Garcinia
Triterpenoid
Turunan senyawa golongan triterpenoid yang ditemukan dari tumbuhan
Garcinia adalah lanostan dan friedolanostan dan berdasarkan penelusuran
ditemukan pada ekstrak etil asetat dan etanol dari jenis G. celebica. Distribusi dan
struktur senyawa triterpenoid dari tumbuhan Garcinia dapat dilihat pada Tabel 5
dan Gambar 5.
16
Tabel 5. Distribusi senyawa triterpenoid pada tumbuhan Garcinia
Senyawa Asal
spesies Pustaka
Lanostan
Asam (E)-3β,9α- dihidroksilanosta-24-
en-26-oat (30)
Asam 3,23-diokso-9,16-lanostadien-26-
oat (31)
Asam 3β-hidroksi-23-okso-9,16-
lanostadien-26-oat atau garcihombronan
D (32)
G. celebica Bui et al., 2016
Elfita et al., 2009
Friedolanostan
Asam (24E)-3-okso-17,14-friedolanosta-
8,14,24-trien-26-oat (33)
Asam (22Z,24E)-9α- hidroksi-3-okso-
17,13-friedolanosta-
12(13),22(23),24(25)-trien-26-oat (34)
Asam (22Z,24E)-3-okso-17,14-
friedolanosta-8(9),14(15),22(23),24(25)-
tetraen-26-oat (35)
Asam (22Z,24E)-3-okso-17,14-
friedolanosta-8(9),14(15),22(23),24(25)-
tetraen-26-oat (36)
Asam (22Z,24E)-9α-hidroksi-3-okso-
13α,30-siklo- 17,13-friedolanosta-
22(23),24(25)-dien-26-oat (37)
Asam (22Z,24E)-9α-hidroksi-3-okso-
17,14-friedolanosta-
14(15),22(23),24(25)-trien-26-oat (38)
Asam (24E)-3β asetoksi-9α-hidroksi-
17,14,4-friedolanosta-14(15),24(25)-
dien-26-oat (39)
Asam (22Z,24E)- 3β asetoksi-9α-
hidroksi-17,14-friedolanosta-
14(15),22(23),24(25)-trien-26-oat (40)
G. celebica
Bui et al., 2016
metil-3α, 23-dihidroksi-17,14-
friedolanstan-8(9),14(15),24(25)-trien-
26-oat (41)
Subarnas et al., 2016
17
(30) (31)
(32) (33)
(34) (35)
(36) (37)
(38) (39)
(40) (41)
Gambar 5. Struktur senyawa golongan triterpenoid (30-41) dari tumbuhan
Garcinia
18
Depsidon
Senyawa golongan depsidon dari tumbuhan Garcinia ditemukan dalam
kulit kayu G. celebica yaitu Garcinidon H (42) dan daun G. polyantha
poliantadepsidon A (43) yang dapat dilihat pada Tabel 6 dan Gambar 6.
Tabel 6. Distribusi senyawa depsidon pada tumbuhan Garcinia
Senyawa Asal spesies Pustaka
Garcinidon H (42) G. celebica Bui et al., 2016
poliantadepsidon A (43) G. polyantha Lannang et al., 2017
O
O
O
HO OH
OH
OCH3
(42) (43)
Gambar 6. Struktur senyawa golongan depsidon (42-43) dari tumbuhan Garcinia
2.1.3 Aktivitas Biologis Metabolit Sekunder dari Garcinia
Garcinol (21) diperoleh dari tumbuhan G. Indica menunjukkan efek
penghambat pertumbuhan sel kanker usus, dengan nilai IC50 berkisar antara 1,95-
13,03 μg/mL setelah perlakuan 72 jam. Garcinol juga diketahui memiliki aktivitas
antiinflamasi, anti HIV, antiulcer, dan antioksidan yang sangat kuat (Padhye et al.,
2009). Hasil penetuan MIC (Minimum Inhibitory Concentration) pada ekstrak G.
nobilis menunjukkan aktivitas antituberkulosis yang baik yaitu 128 μg/mL dan
aktivitas antibakteri terhadap Escherichia coli yaitu 64 μg/mL (Fouotsa et al.,
2013). Biflavanoid G. kola telah terbukti aktif secara farmakologis dengan beberapa
keunggulan farmakokinetik. Biji G. kola memiliki beberapa aktivitas biologis
19
seperti antioksidan, antidiabetes, dan antimikrobial terhadap Helicobacter pylori
(Farombi dan Owoeye, 2011; Njume et al., 2011; Oyenihi et al., 2015)
Berdasarkan skrining fitokimia yang telah dilakukan terhadap beberapa
tanaman termasuk ekstrak G. celebica menunjukkan bahwa ekstrak tersebut
mengandung polifenol dan flavonoid yang memiliki aktivitas antioksidan dan
antikanker (Cai et al., 2004; Ren et al., 2003). Ekstrak etanol daun G. celebica
memiliki aktivitas penghambatan proliferasi sel MCF-7 yang sangat kuat dengan
nilai IC50 87 μg/mL (Subarnas et al., 2012). Menurut Subarnas et al. (2016)
berdasarkan nilai IC50, tingkat sitotoksisitas ekstrak bisa dibagi menjadi kuat (<100
μg/mL), sedang (101-200 μg/mL), dan lemah (>200μg/mL). Pengujian
sitotoksisitas lebih lanjut dilakukan oleh Subarnas et al. (2016) terhadap senyawa
metil-3α,23-dihidroksi-17,14-friedolanstan-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat (41)
dari ekstrak metanol daun G. celebica, senyawa tersebut menghambat proliferasi
sel MCF-7 dengan nilai IC50 39,68 dan 33,88 μg/mL untuk perlakuan 24 dan 48
jam.
Ekstrak metanol dari G. ovalifolia menunjukkan bahwa epigarcinol dan
isogarcinol menghambat proliferasi sel HL-60 (leukimia) dan PC-3 dengan IC50
yang bervariasi antara 4 dan 76 μg/mL (Pieme et al., 2015). Uji sitotoksisitas
ekstrak etil asetat kulit batang G. celebica terhadap sel kanker payudara (MCF-7)
menunjukkan bahwa senyawa makluraxanton (11) memiliki aktivitas
penghambatan yang paling kuat dengan nilai penghambatan IC50 24 μg/mL (Bui et
al., 2016).
20
2.2 Metode Isolasi Senyawa Aktif
2.2.1 Ekstraksi
Ekstraksi merupakan pemisahan senyawa aktif dari jaringan tumbuhan
dengan menggunakan pelarut yang selektif. Hasil dari ekstrasi biasa disebut dengan
ekstrak (Handa et al., 2008). Ekstraksi adalah penyarian zat-zat berkhasiat atau zat-
zat aktif dari bagian tanaman obat, hewan dan beberapa jenis ikan termasuk biota
laut. Zat-zat aktif terdapat di dalam sel, namun sel tanaman dan hewan berbeda,
sehingga diperlukan metode ekstraksi dengan pelarut tertentu dalam
mengekstraksinya. Tujuan ekstraksi bahan alam adalah untuk menarik komponen
kimia yang terdapat pada bahan alam. Ekstraksi ini didasarkan pada prinsip
perpindahan massa komponen zat ke dalam pelarut, dimana perpindahan mulai
terjadi pada lapisan antar muka kemudian berdifusi masuk ke dalam pelarut
(Harbone, 1987).
Teknik ekstraksi yang biasa digunakan untuk mengisolasi senyawa aktif
dalam tanaman terdiri dari beberapa macam, namun yang sering dilakukan adalah
maserasi. Pelarut yang sering digunakan untuk maserasi adalah n-heksana, aseton,
etil asetat, klorofom atau pelarut lain sesuai dengan kebutuhan. Maserasi dilakukan
dengan cara merendam sampel dalam pelarut tertentu selama beberapa hari,
biasanya dibutuhkan waktu kurang lebih 3 hari. Pada saat proses perendaman,
senyawa aktif dalam tanaman akan berdifusi melewati dinding sel untuk melarutkan
konstituen dalam sel dan juga memacu larutan dalam sel untuk berdifusi keluar
(Handa et al., 2008).
Ekstrak awal yang dihasilkan dari proses ekstrasi masih merupakan
campuran dari berbagai senyawa. Untuk mengisolasi senyawa tunggal, ekstrak awal
21
sulit dipisahkan melalui teknik pemisahan tunggal. Oleh karena itu, ekstrak awal
perlu dipisahkan ke dalam fraksi yang memiliki polaritas dan ukuran molekul yang
sama. Fraksinasi dapat dilakukan dengan metode ektraksi cair-cair atau dengan
kromatografi cair vakum (KCV), kromatografi kolom (KK), size-exclution
chromatography (SEC), dan solid-phase extraction (SPE) (Sarker et al., 2006).
2.2.2 Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) atau kromatografi planar merupakan
sebuah metode yang digunakan untuk memisahkan campuran dengan mengelusinya
melalui pelat kromatografi planar kemudian memvisualisasikan komponen yang
dipisahkan dengan pewarnaan. Pelat KLT ditempatkan dalam chamber dan
kromatogram yang dihasilkan dielusi secara visual (Braithwaite et al., 1996).
Secara luas KLT digunakan untuk analisis dalam bidang biokimia, klinis,
farmasi, forensik baik analisis kualitatif atau kuantitatif dengan cara
membandingkan nilai Rf larutan dengan nilai Rf standar. KLT secara umum
digunakan untuk menentukan banyaknya komponen dalam campuran, memantau
jalannya suatu reaksi, identifikasi suatu senyawa, menentukan efektivitas
pemurnian suatu senyawa, menentukan kondisi yang sesuai untuk kromatografi
kolom, serta untuk memantau kromatografi kolom (Ganjar dan Rohman, 2007).
Larutan sampel dalam pelarut yang mudah menguap ditotolkan
menggunakan pipa kapiler (1-2 cm) ke batas bawah dari pelat KLT (0,5 cm), setelah
pelarut menguap atau kering, pelat KLT dimasukkan ke dalam chamber dengan tepi
bawahnya terbenam dalam fase gerak yang ditentukan. Sampel akan terelusi dibawa
oleh fase gerak melalui fase diam hingga mencapai batas atas pelat KLT. Senyawa-
senyawa dalam sampel akan terjadi pemisahan yang ditunjukkan dengan
22
munculnya noda-noda pada pelat KLT berdasarkan sifat afinitas senyawa pada fase
tersebut (Braithwaite et al., 1996). Pelat KLT dikeluarkan dari chamber dan
kemudian diamati menggunakan sinar UV. Komponen terdeteksi pada panjang
gelombang pendek (254 nm) dan panjang gelombang (365 nm) atau disemprot
dengan zat pewarna bercak yang umum digunakan adalah larutan H2SO4 5-10%
dalam metanol kemudian dipanaskan pada suhu 110-120oC sampai timbul warna
bercak (Sherma dan Fried, 2003).
2.3.3 Kromatografi Kolom
Kromatografi kolom merupakan metode kromatografi yang digunakan
untuk memisahkan senyawa-senyawa dalam jumlah yang banyak berdasarkan
adsorpsi dan partisi. Kromatografi kolom merupakan kromatografi dimana fase
diam ditempatkan dalam kaca berbentuk silinder pada bagian bawahnya tertutup
dengan katup atau kran dan fase gerak dibiarkan mengalir ke bawah karena adanya
gaya gravitasi (Gritter et al., 1991). Kromatografi kolom membutuhkan zat terlarut
yang terdistribusi diantara dua fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase gerak
membawa zat terlarut melalui fase diam sehingga zat terlarut akan terpisah sesuai
dengan kepolaran fase gerak (Harborne, 1987).
Kromatografi Cair Vakum (KCV) merupakan modifikasi dari kromatografi
kolom gravitasi. KCV (Gambar 7) banyak digunakan untuk fraksinasi sampel
dalam jumlah besar (10-50 g). Penggunaan vakum atau tekanan bertujuan agar laju
aliran eluen meningkat sehingga meminimalkan terjadinya proses difusi karena
ukuran fase diam silika gel yang biasa digunakan pada lapisan kromatografi KLT
dalam kolom yang halus yaitu 200-400 mesh (Braithwaite et al., 1996)
23
Gambar 7. Kromatografi cair vakum
Kolom dibuat dengan metode kering dalam keadaan vakum agar diperoleh
kerapatan yang maksimum. Sampel yang akan dipisahkan biasanya sudah
diadsorbsikan ke dalam silika kasar terlebih dahulu (impreg) dengan ukuran silika
kasarnya adalah 30-70 mesh. Pelarut yang digunakan ditingkatkan kepolarannya,
dimulai dari pelarut non-polar hingga pelarut yang polar. Pelarut dituangkan ke
permukaan penyerap yang sebelumnya sudah dimasukkan sampel terimpregnasi.
Kolom diberi tekanan vakum sehingga akan menarik pelarut melewati sampel
hingga masuk ke penampung eluen (Braithwaite et al., 1996).
2.3 Karakterisasi Struktur dengan Metode Spektroskopi
Spektroskopi adalah studi mengenai interaksi antara energi cahaya dan
materi. Teknik-teknik spektroskopi dapat digunakan untuk menentukan struktur
senyawa yang tak diketahui dan untuk mempelajari karakteristik ikatan dari
senyawa yang diketahui (Fessenden dan Fessenden, 1981).
Tahapan terpenting dalam menentukan struktur molekul organik adalah
elusidasi struktur menggunakan analisis spektroskopi modern. Metode
spektroskopi yang biasa digunakan untuk karakterisasi struktur adalah spektroskopi
24
ultraviolet (UV-Vis), inframerah (FTIR), Nuclear Magnet Resonance (NMR) dan
spektroskopi massa (MS).
2.4.1 Spektroskopi UV-Vis
Spektrofotometri UV-Vis adalah salah satu teknik yang paling sering
digunakan dalam analisis farmasi, melibatkan pengukuran jumlah radiasi
ultraviolet atau sinar tampak yang diserap oleh zat dalam larutan (Behera et al.,
2012). Sumber Radiasi untuk spektroskopi UV adalah lampu deuterium. Cahaya
yang dipancarkan sumber radiasi adalah cahaya polikromatik. Cahaya polikromatik
UV akan melewati monokromator yaitu suatu alat yang paling umum dipakai untuk
menghasilkan berkas radiasi dengan satu panjang gelombang (Day dan Underwood,
1989). Teknik spektrofotometri sederhana, cepat, cukup spesifik dan berlaku untuk
sejumlah kecil senyawa. Hukum dasar yang mengatur analisis spektrofotometri
kuantitatif adalah hukum Lambert-Beer (Behera et al., 2012).
Hukum Beer menyatakan bahwa intensitas sinar radiasi monokromatik
paralel menurun secara eksponensial dengan jumlah molekul yang menyerap.
Dengan kata lain, absorbansi sebanding dengan konsentrasi. Hukum Lambert
menyatakan bahwa intensitas sinar radiasi monokromatik paralel menurun secara
eksponensial saat melewati media dengan ketebalan yang homogen. Kombinasi
kedua hukum ini menghasilkan hukum Lambert-Beer. Sehingga Hukum Lambert-
Beer menyatakan bahwa saat seberkas cahaya dilewatkan melalui sel transparan
yang mengandung larutan, pengurangan intensitas cahaya dapat terjadi, serapan
berbanding lurus dengan konsentrasi dan ketebalan sel (Behera et al., 2012).
Absorbsi cahaya UV-Vis mengakibatkan transisi elektronik, yaitu promosi
elektron-elektron dari orbital keadaan dasar yang berenergi rendah ke orbital
25
keadaan tereksitasi berenergi lebih tinggi. Energi yang terserap kemudian
dilepaskan sebagai cahaya. Absorpsi cahaya tampak dan radiasi ultraviolet
meningkatkan energi elektronik sebuah molekul, artinya energi yang diberikan oleh
foton-foton memungkinkan elektron-elektron itu pindah ke luar ke orbital baru
yang lebih tinggi energinya. Semua molekul dapat menyerap radiasi dalam daerah
UV-Vis karena mengandung elektron, baik berpasangan maupun menyendiri, yang
dapat dieksitasi ke tingkat energi yang lebih tinggi (Ganjar dan Rohman, 2007).
2.4.2 Spektroskopi FTIR
Spektroskopi IR adalah satu-satunya metode analisis yang memiliki
kemampuan yang secara langsung memantau getaran gugus fungsi yang mencirikan
struktur molekul. Istilah "inframerah" umumnya mengacu pada radiasi elektro-
magnetik yang jatuh di wilayah 0,7 µm sampai 1000 µm. Namun, wilayah antara
2,5 µm dan 25 µm (4000 sampai 400 cm-1) paling menarik untuk analisis kimia.
Daerah ini mencakup frekuensi yang sesuai dengan vibrasi semua gugus fungsi
molekul organik (Doyle, 1992).
Suatu molekul bila menyerap radiasi infra merah, maka energi yang
diserap menyebabkan kenaikan amplitudo getaran atom-atom yang terikat sehingga
molekul berada dalam keadaan tereksitasi. Energi yang diserap akan dilepaskan
dalam bentuk panas jika molekul kembali ke keadaan dasar. Panjang gelombang
yang diabsorpsi suatu ikatan bergantung pada jenis getaran dari ikatan tersebut,
ikatan yang berlainan akan menyerap pada panjang gelombang yang berlainan.
Dengan demikian, spekroskopi infra merah dapat digunakan untuk
mengidentifikasi adanya gugus fungsi dalam suatu molekul. Banyaknya energi
infra merah yang diserap oleh suatu molekul beraneka ragam yang disebabkan
26
perubahan momen dipol pada saat energi diserap. Ikatan non polar seperti C-H atau
C-C menyebabkan absorpsi lemah, sedangkan ikatan polar seperti O-H, N-H dan
C=O menyebabkan absorpsi yang lebih kuat (Supratman, 2010).
Serapan antara 4000 cm-1 hingga 1400 cm-1 dikenal sebagai daerah vibrasi
pokok, kebanyakan senyawa dapat dicatat pada serapan tersebut. Pada daerah
vibrasi pokok terdapat serapan-serapan yang berasal dari gugus fungsi. Pada daerah
antara 1400 cm-1 hingga 900 cm-1 terdapat serapan-serapan kompleks yang sering
disebut sebagai daerah finger print, memiliki kegunaan untuk menentukan
keidentikan dua senyawa yang sedang dianalisis. Serapan yang terdapat pada
daerah 900 cm-1 hingga 400 cm-1 dikenal sebagai daerah vibrasi bengkok keluar
bidang out of plane. Kegunaan serapan pada daerah ini dapat mendukung serapan-
serapan yang terdapat pada daerah vibrasi pokok (Sastrohamidjojo, 2013). Berikut
merupakan tabel daerah serapan inframerah beberapa ikatan kimia:
Tabel 7. Daerah serapan inframerah beberapa ikatan kimia (Supratman, 2010)
Tipe ikatan Daerah serapan (cm-1)
C-C,C-O, C-N 1.300 – 800
C=C, C=O, C=N, N=O 1.900 – 1.500
C≡C, C≡N 2.300 – 2.000
C-H, O-H, N-H 3.800 – 2.700
2.4.3 Spektroskopi Massa (MS)
Spektroskopi massa merupakan teknik analisis yang mendasarkan
pemisahan ion-ion yang sesuai dengan perbandingan massa dengan muatan dan
pengukuran intensitas dari ion-ion tersebut. Dalam spektroskopi massa, molekul–
molekul senyawa organik ditembak dengan berkas elektron dan diubah menjadi
ion-ion positif yang bertenaga tinggi (ion-ion molekuler atau ion-ion induk), yang
27
dapat terpecah menjadi ion-ion yang lebih kecil (ion-ion pecahan). Lepasnya
elektron dari molekul akan menghasilkan radikal kation (Khopkar, 2002).
Gambar 8. Komponen utama spektroskopi massa (Supratman, 2010)
Suatu diagram dari tipe spektrometer massa yang lazim dipaparkan pada
Gambar 8 yang terdiri dari sistem pemasukan cuplikan, kamar pengion dan
pemercepat, analisator, kolektor ion, penguat dan pencatat. Sampel dimasukkan dan
diuapkan dalam suatu aliran yang berkesinambungan ke dalam kamar pengion.
Sampel melewati suatu aliran elektron berenergi tinggi tinggi yang menyebabkan
ionisasi beberapa molekul sampai menjadi ion-ion molekul. Setelah terbentuk,
sebuah ion molekul dapat mengalami fragmentasi dan penataan ulang. Dari
lempeng pemercepat (accelerator plates), partikel bermuatan positif menuju ke
tabung analisator (Supratman, 2010).
2.4.4 Spektroskopi 1H NMR dan 13C NMR
NMR merupakan teknik spektroskopi yang mengandalkan sifat magnetik
dari inti atom. Informasi yang didapatkan dari NMR yaitu informasi secara
magnetis tentang sejumlah atom yang dimiliki senyawa tersebut (Pavia et al.,
2009). Spektroskopi NMR proton memberikan informasi mengenai atom-atom
hidrogen dalam molekul organik. Beberapa hal yang perlu diperhatikan dalam
mengintepretasikan spektrum 1H NMR adalah luas puncak (peak area) yang
28
menunjukkan jumlah inti 1H pada puncak tersebut, pemecahan puncak (splitting)
yang menjelaskan lingkungan dari sebuah proton dengan proton tetangganya, serta
geseran kimia (chemical shift) yang menunjukkan jenis proton tersebut. Spektrum
1H NMR biasanya diperoleh dengan cara sampel senyawa yang akan dianalisis
dilarutkan dalam pelarut inert yang tidak memiliki inti 1H. Sebagai contoh CCl4
atau pelarut dengan hidrogen yang digantikan oleh deuterium, seperti CDCl3
(deuteri kloroform) dan CD3COCD3 (heksa-deuterioaseton) (Hart et al., 2003).
Spektroskopi 1H NMR memberikan informasi tentang susunan hidrogen
dalam molekul sedangkan spektroskopi 13C NMR memberikan informasi tentang
kerangka karbon. Spektrum 13C NMR berbeda dari spektrum 1H NMR dalam
beberapa hal, antara lain pergeseran kimia 13C NMR terjadi pada kisaran yang lebih
lebar dibandingkan kisaran pergeseran kimia inti 1H NMR. Keduanya diukur
terhadap senyawa standar yang sama yaitu TMS (tetrametil silana), yang semua
karbon metilnya ekuivalen dan memberikan sinyal yang tajam. Pergeseran kimia
untuk 13C dinyatakan dalam satuan ppm yang lazim sekitar 0-200 ppm di bawah
medan TMS. Kisaran pergeseran kimia yang lebar ini cenderung menyederhanakan
spektrum 13C NMR terhadap spektrum 1H NMR (Hart et al., 2003)
29
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Pusat Penelitian Kimia LIPI Serpong.
Analisis 1H NMR dan 13C NMR di Balai Besar Riset Pengolahan Produk dan
Bioteknologi Kelautan dan Perikanan, Jakarta Pusat. Waktu penelitian
dilaksanakan mulai bulan Januari sampai Juli 2018.
3.2 Alat dan Bahan
3.2.1 Alat
Alat yang digunakan adalah alat-alat gelas, destilator, chamber CAMAG,
plat KLT, hotplate, alu dan mortar, alumunium foil, kromatografi kolom vakum,
kromatografi kolom gravitasi, botol dan botol vial. Tmbangan analitik Ohaus Scout
Pro, rotary evaporator Buchi R-215 dan R-214, lampu UV CAMAG dengan λ 254
dan 365 nm, pipa kapiler, microplate reader Varioskan Flash, spektrofotometer
UV-Vis Agilent, FTIR Shimadzu, LCMS Mariner, dan NMR Jeol Resonance.
3.2.2 Bahan
Bahan yang digunakan adalah daun Garcinia celebica yang berasal dari
Kebun Raya Bogor. Pelarut-pelarut yang digunakan adalah aseton, n-heksana, etil
asetat, metanol teknis, diklorometan, etanol, HCl 2N, akuades, pereaksi
Bouchardant, pereaksi Mayer, pereaksi Dragendroff, FeCl3 3%, asam asetat,
vanillin sulfat, asam sulfat, silika gel Kieselgel 60 (35 – 75 mesh ASTM, Merck),
silika gel 60 GF254 (Merck), sephadex LH-20.
30
- Kromatografi Cair
Vakum
- Kromatografi Kolom
Gravitasi
- Kromatografi Kolom
Gravitasi (Sephadex LH-20)
- Kromatografi Kolom
Gravitasi
3.3 Diagram Alir Penelitian
Gambar 9. Diagram alir penelitian
Ekstrak aseton daun
G. celebica
Uji Fitokimia Uji Aktivitas
Antikanker
Payudara 11 fraksi,
diambil F7
17 fraksi,
diambil F13
5 fraksi,
diambil F3
12 fraksi, diambil
F3 dan F5
Uji Kemurnian
KLT 2D
Uji Beberapa Pelarut
Pemisahan lebih lanjut
- Kromatografi Kolom Gravitasi
Isolat
- Uji Kemurnian KLT 2D
Uji Aktivitas Antikanker
Payudara (MCF-7) metode
MTT assays
Karakterisasi Struktur:
Spektroskopi UV-Vis, FTIR,
LCMS dan NMR
31
3.4 Cara Kerja
Metode yang dilakukan dalam penelitian ini meliputi ekstraksi dengan cara
pemisahan dengan fraksinasi secara gradien dengan menggunakan kromatografi
cair vakum, kromatografi kolom gravitasi, uji kemurnian dengan kromatografi lapis
tipis 2D dan uji tiga pelarut, uji aktivitas terhadap sel kanker payudara (MCF-7)
dengan metode MTT assay dan elusidasi struktur dengan menggunakan instrument
UV-Vis, FTIR, LCMS dan NMR.
3.4.2 Uji Fitokimia (Arief et al., 2017)
Uji Fitokimia merupakan screening awal untuk mengetahui golongan
senyawa yang terdapat dalam sampel. Uji fitokimia yang dilakukan adalah alkaloid,
flavonoid, tannin, saponin dan terpenoid.
Uji Alkaloid
Sebanyak 50 mg ekstrak kasar yang telah sedikit dilarutkan ditambahkan
dengan 0,1 mL HCl 2 N dan 0,9 mL akuades. Kemudian dipanaskan dalam
penangas air lalu didinginkan dan disaring. Sampel uji kemudian diuji dengan 3
Pereaksi berikut:
a) Pereaksi Bourchardant: 1 mL sampel ditambahkan 2 tetes pereaksi
Bourchardant. Uji positif ditandai dengan terbentuknya endapan hitam.
b) Pereaksi Mayer: 1 mL sampel ditambahkan 2 tetes pereaksi Mayer. Uji positif
ditandai dengan terbentuknya endapan putih yang menggumpal atau kuning
yang dapat larut dalam metanol.
c) Pereaksi Dragendroff. 1 mL sampel ditambahkan 2 tetes pereaksi
Dragendroff. Uji positif ditandai dengan terbentuknya warna jingga cokelat.
32
Uji Flavonoid
Sebanyak 4 mg ekstrak kasar ditambahkan dengan 3 mL etanol, kemudian
diambil 1,5 mL sampel uji dan ditambahkan dengan 0,1 mg serbuk Mg serta 10
tetes HCl pekat. Jika menghasilkan warna merah jingga-merah ungu maka positif
mengandung flavonoid, jika warna kuning jingga maka positif mengandung flavon,
calkon dan atau auron.
Uji Tanin
Beberapa mg ekstrak ditambahkan 15 mL akuades panas kemudian
dipanaskan hingga mendidih selama 5 menit. Sampel uji ditambahkan beberapa
tetes FeCl3 1%, uji positif mengandung tanin jika sampel uji menjadi berwarna hijau
violet.
Uji Saponin
Sebanyak 5 mg ekstrak dimasukan ke dalam tabung reaksi kemudian
ditambahkan 10 mL air panas dan didinginkan sambil dikocok kuat-kuat selama 10
detik. Uji positif mengandung saponin jika buih stabil 1-10 cm selama kurang lebih
10 menit dan ketika ditambahkan beberapa tetes HCl 2 N buih tidak hilang.
Uji Terpenoid
Sebanyak 5 mg ekstrak pekat ditambahkan 3 mL diklorometan lalu
diuapkan dalam cawan penguap. Residu hasil penguapan ditambahkan 6 tetes asam
asetat dan 3 tetes H2SO4 pekat. Uji positif mengandung terpenoid jika menghasilkan
warna merah-hijau atau violet-biru.
33
3.4.3 Isolasi Senyawa dari Ekstrak Aseton daun G. celebica
Isolasi senyawa aktif merupakan tahapan pemisahan senyawa dari suatu
campuran hingga diperoleh senyawa murni. Isolasi senyawa aktif dilakukan dengan
menggunakan metode kromatografi. Metode kromatografi yang digunakan adalah
Kromatografi Lapis Tipis (KLT), Kromatografi Cair Vakum dan Kromatografi
Kolom Gravitasi.
3.4.3.1 Kromatografi Lapis Tipis (KLT) (Braithwaite et al., 1996)
Kromatografi Lapis Tipis (KLT) digunakan untuk mengetahui profil
senyawa, menentukan eluen terbaik yang akan digunakan pada kromatografi kolom
dan memantau jalannya pemisahan senyawa menggunakan kromatografi kolom.
Selain itu dari noda yang dihasilkan juga dapat digunakan untuk menentukan
kromatografi kolom yang tepat. Caranya adalah pada plat KLT dibuat batas atas
dan bawah dengan lebar masing-masing 0,5 cm. Kemudian ditotolkan sampel tepat
pada garis bagian batas bawah kemudian dielusi dengan berbagai perbandingan
eluen. Eluen yang digunakan bisa berupa pelarut tunggal atau campuran dua
pelarut. Setelah eluen naik sampai batas atas, diangkat plat KLT dan dikeluarkan
dari chamber kemudian dikeringanginkan. Selanjutnya dideteksi dengan
menggunakan lampu UV dengan λ 254 dan 365 nm. Setelah dipendar pada lampu
UV, plat KLT disemprot dengan H2SO4 10% kemudian dipanaskan untuk
mendeteksi keberadaan senyawa triterpenoid. Profil yang dihasilkan digunakan
untuk menentukan kromatografi kolom yang akan digunakan dan untuk memantau
jalannya kromatografi kolom.
34
3.4.3.2 Kromatografi Cair Vakum (KCV) (Santoni et al., 2010)
Pada tahap fraksinasi, kromatografi kolom pertama yang digunakan adalah
kromatografi cair vakum karena pada hasil KLT, noda yang dihasilkan cukup
banyak, hal tersebut menunjukkan bahwa senyawa yang terdapat dalam sampel
cukup banyak sehingga membutuhkan kromatografi kolom yang dapat dengan
cepat memisahkan senyawa-senyawa tersebut. Hal yang pertama kali dilakukan
adalah preparasi sampel. Sampel ekstrak kasar ditimbang dalam cawan penguap,
kemudian ditambahkan silika gel kasar Kieselgel 60 (35 – 75 mesh ASTM) Merck.
Tahap ini disebut dengan impregnasi, impregnasi menggunakan silica gel kasar
bertujuan untuk mengikat sampel. Selanjutnya sampel dan silika gel diaduk hingga
homogen.
Setelah preparasi sampel, tahap selanjutnya adalah preparasi kolom. Kolom
yang digunakan adalah kolom vakum. Silika gel halus 60 GF254 Merck dimasukkan
ke dalam kolom. Silika gel yang sangat halus digunakan sebagai fase diam karena
untuk mempercepat proses pemisahan. Silika gel dipastikan rapat dan padat agar
silika gel tidak pecah pada saat proses pemisahan berlangsung. Sampel
terimpregnasi ditambahkan di atas silika gel halus dan ditutup dengan kapas.
Selanjutnya ditambahkan dengan pelarut n-heksana 100%. Metode yang digunakan
adalah metode gradien. Eluen atau fase gerak yang digunakan ditingkatkan
kepolarannya dari n-heksana, n-heksana:etil asetat yang ditingkatkan kepolarannya,
etil asetat 100%, etil asetat : metanol yang ditingkatkan kepolarannya hingga
metanol 100%. Hasil kolom ditampung dalam botol 100 mL, masing-masing botol
yang berisi hasil kolom di evaporasi menggunakan rotary evaporator Buchi
R-215 dan R-21 kemudian dipindahkan ke dalam botol vial 7 mL, kemudian
35
dimonitoring menggunakan KLT. Fraksi yang menunjukkan bercak noda yang
sama disatukan dalam satu fraksi. Fraksi-fraksi tersebut dibiarkan pelarutnya
menguap hingga kering dan selanjutnya ditimbang.
3.4.3.3 Kromatografi Kolom Gravitasi (Rauf et al., 2012)
Fase diam yang digunakan ialah Kieselgel 60 (0,063-0,200 mm) sebanyak
dengan fase gerak yang digunakan ialah pelarut yang ditingkatkan kepolarannya.
Fraksi-fraksi yang dihasilkan ditampung dalam botol 100 mL kemudian dipekatkan
dengan menggunakan rotary evaporator, fraksi-fraksi yang telah dipekatkan
dipindahkan ke dalam vial 7 mL. Fraksi-fraksi tersebut dimonitoring dengan
kromatografi lapis tipis.
Untuk memisahkan klorofil yang terdapat dalam senyawa campuran maka
dilakukan pemisahan dengan menggunakan kromatografi kolom gravitasi dengan
adsorben sephadex LH-20 dan dimonitoring dengan menggunakan KLT. Kolom
sephadex digunakan untuk memisahkan senyawa-senyawa berdasarkan perbedaaan
berat molekul (BM) khususnya untuk memisahkan klorofil. Sampel dilarutkan
dalam 1 mL metanol : CH2Cl2, kemudian dielusikan ke dalam kolom sephadex LH-
20 menggunakan metanol:diklorometan (1:1). Hasil pemisahan ditampung dalam
vial kemudian dibiarkan hingga pelarutnya menguap. Pemisahan dilakukan
pengulangan 3x, kemudian fraksi yang memiliki bercak noda yang sama disatukan.
3.4.4 Uji Kemurnian GC-2
3.4.4.1 Uji Kemurnian KLT 2 Dimensi (Paturusi et al., 2014)
Pengerjaan KLT 2 dimensi dilakukan dengan cara sampel ditotolkan pada
lempeng 5 cm x 5 cm lalu dikembangkan dengan satu sistem eluen sehingga
campuran terpisah menurut jalur yang sejajar dengan salah satu sisi. Lempeng
36
diangkat, dikeringkan dan diputar 90° dan diletakkan dalam bejana kromatografi
yang berisi eluen kedua sehingga bercak yang terpisah pada pengembangan
pertama terletak di bagian bawah sepanjang lempeng, lalu dikromatografi lagi.
3.4.4.2 Uji Kemurnian Tiga Pelarut (Widorini dan Ersam, 2014)
Pada uji tiga pelarut, eluen yang digunakan adalah (1) diklorometana :
aseton (9.5:0.5), (2) diklorometana : aseton (9:1) dan (3) aseton 100%.
3.4.5 Karakterisasi Struktur Senyawa Aktif
3.4.5.1 Analisis dengan Spektroskopi UV-Vis (Widorini dan Ersam, 2014)
Spektroskopi UV-Vis diatur pada λ 200-400 nm dan dicatat λ maks yang
diserap dalam bentuk spektrum antara λ dan absorbansi. Hasil isolat yang diperoleh
dari hasil isolasi diambil 1 mg, kemudian isolat dilarutkan ke dalam blanko yaitu
10 mL metanol p.a. Larutan metanol sampel dimasukkan ke dalam kuvet.
Selanjutnya sampel dilakukan uji pengukuran panjang gelombang UV.
3.4.5.2 Analisis dengan Spektroskopi FTIR (Ashokkumar dan Ramaswamy,
2014)
Hasil isolasi diambil 1 mg, kemudian dicampurkan dengan KBr dan digerus
sampai homogen. Campuran dimasukkan kedalam alat pembuat pellet, sehingga
didapatkan pellet dengan ketebalan ± 1 mm. Plat diletakkan pada wadah plat
kemudian diukur serapannya dengan alat FTIR-8400 Shimadzu dengan tampilan
spektrum menunjukkan puncak-puncak yang menunjukkan gugus-gugus tertentu
dengan grafik perbandingan serapan bilangan gelombang terhadap transmitan
(%T).
37
3.4.5.3 Analisis dengan Spektroskopi NMR (Wei et al., 2016)
Hasil isolasi diambil ±17 mg, kemudian dilarutkan dalam 0,5 ml pelarut
bebas proton yaitu CDCl3. Larutan sampel senyawa 1 dimasukkan kedalam tabung
injeksi kemudian diletakkan dalam spektrometer NMR Joul Resonance (400 mHz
dan 100 mHz).
3.4.5.4 Analisis dengan Spektroskopi LCMS (Maharani et al., 2016)
Sebanyak 1 mg hasil isolasi yang diperoleh dilarutkan dalam metanol.
Sebanyak 5 µL larutan sampel dimasukkan dalam syringe kemudian diinjeksikan
pada LCMS melalui kolom C-8 (15 mm x 2 mm) dengan kecepatan alir 0,1
mL/menit.
3.4.6 Uji Aktivitas Antikanker (Jenie et al., 2017)
Uji antikanker dilakukan dengan metode MTT assays. MCF-7 cell lines
dikultur menggunakan medium RPMI (Gibco) yang mengandung 10% Fetal
Bovine Serum (Gibco), dan 1% antibakteri-antifungi (Gibco). Cells line dikultur
pada densitas 104 cell/well di dalam 96-welll plates dan ditambahkan sampel
dengan berbagai variasi konsentrasi. Setelah diinkubasi dalam CO2 5% selama 24
jam, kemudian masing-masing sel ditambahkan dengan 0,5 mg/mL senyawa 3-(4,5-
Dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromida (MTT) dan diinkubasi selama 4
jam. Selama inkubasi, reaksi antara MTT dan enzim dihidrogenasi yang dihasilkan
oleh sel yang hidup akan terjadi sehingga menghasilkan senyawa formazan
berwarna ungu. Reaksi MTT dihentikan dengan menggunakan DMSO untuk
melarutkan kristal formazan. Absorbansi diiukur dengan menggunakan microplate
reader (Varioskan) pada panjang gelombang 550 nm.
38
Setelah diperoleh nilai absorbansi, kemudian dilakukan perhitungan
berdasarkan persamaan 1 dan 2 untuk menentukan persen sel hidup sel kanker
payudara (MCF-7), dengan persamaan sebagai berikut:
…………..(1)
%inhibisi = 100 - %viability……………………………………………………..(2)
IC50 sampel dihitung dengan analisis regresi linier antara persen
kelangsungan hidup dan konsentrasi sampel (Lancester dan Fields, 1996; Kiso et
al., 2001).
39
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Uji Fitokimia
Uji penapisan fitokimia dilakukan untuk menentukan golongan senyawa
metabolit sekunder yang terkandung dalam ekstrak aseton daun G. celebica.
Penapisan fitokimia yang dilakukan ialah identifikasi golongan Alkaloid,
Flavonoid, Tanin, Saponin dan Terpenoid. Adapun hasil dari uji penapisan
fitokimia tersebut dapat dilihat pada Tabel 8.
Tabel 8. Hasil uji penapisan fitokimia ekstrak aseton daun G. celebica
Golongan Hasil Keterangan
Alkaloid
Pereaksi Bouchardant Tidak ada perubahan Negatif
Pereaksi Mayer Tidak ada perubahan Negatif
Pereaksi Dragendorf Endapan jingga Positif
Flavonoid Tidak ada perubahan warna Negatif
Tanin Bening menjadi kuning kehijauan Negatif
Saponin Busa cepat hilang Negatif
Terpenoid Hijau coklat Positif
Berdasarkan hasil pengamatan uji fitokimia dapat dilihat bahwa hasil positif
hanya terdapat pada hasil uji golongan alkaloid dan terpenoid. Pereaksi Dragendorff
merupakan hasil dari campuran bismut nitrat bereaksi dengan kalium iodida
membentuk endapan hitam bismuth (III) iodida yang kemudian melarut dalam
kalium iodida berlebih membentuk kalium tetraiodobismutat. Uji alkaloid dengan
pereaksi Dragendorff yang positif ditunjukkan oleh adanya endapan jingga
(Asmara, 2017). Perubahan warna menjadi hijau coklat menunjukkan bahwa
ekstrak aseton daun G. celebica mengandung senyawa golongan terpenoid yaitu
senyawa steroid dan triterpenoid (Harbone, 1987). Senyawa-senyawa yang
40
dihasilkan dari isolasi tumbuhan G. celebica menggunakan pelarut semipolar-polar
seperti etanol dan etil asetat cukup banyak menghasilkan senyawa golongan
triterpenoid (Bui et al., 2016; Elfita et al., 2009; Subarnas et al., 2016).
4.2 Hasil Isolasi Senyawa dari Ekstrak Aseton Daun G. celebica
Isolasi merupakan tahapan yang dilakukan untuk memisahkan senyawa-
senyawa yang terdapat dalam ekstrak kasar sehingga diperoleh senyawa yang lebih
murni. Ekstrak kasar sebanyak 47,7 g difraksinasi dengan menggunakan
kromatografi kolom cair vakum. Pemilihan kolom cair vakum dilakukan untuk
memisahkan senyawa secara cepat. Fase gerak yang digunakan adalah
perbandingan eluen dengan kepolaran yang bertingkat (n-heksana, n-heksana : etil
asetat, etil asetat : metanol hingga metanol 100%). Hal tersebut dilakukan agar
senyawa-senyawa dalam sampel dapat terpisah sesuai dengan kepolaran eluennya.
Fraksi-fraksi yang diperoleh dikumpulkan dalam vial dan diperoleh 43 fraksi.
Noda-noda dari fraksi yang memiliki pola yang sama disatukan dalam 1 fraksi
sehingga diperoleh 11 fraksi. Berat masing-masing fraksi yang dihasilkan dapat
dilihat pada Tabel 9:
Tabel 9. Berat fraksi hasil kolom kromatografi cair vakum
Fraksi Berat (g)
F1 0,5481
F2 1,6547
F3 0,5079
F4 0,5586
F5 11,9724
F6 15,5178
F7 1,8147
F8 2,4738
F9 5,6379
F10 8,6105
F11 6,5763
41
Masing-masing fraksi diidentifikasi dengan kromatografi lapis tipis (KLT)
dengan menggunakan fase gerak yaitu n-heksana : etil asetat (9:1 dan 5:5). Hal ini
dilakukan supaya menghasilkan pola pemisahan yang baik sesuai dengan kepolaran
eluennya. Hasil KLT 11 fraksi dari kolom kromatografi cair vakum dapat dilihat
pada Gambar 10.
Gambar 10. Hasil KLT 11 fraksi dari kolom kromatografi cair vakum
Berdasarkan hasil KLT tersebut dapat dilihat bahwa noda yang dihasilkan
di setiap fraksinya cukup banyak. Ekstrak yang digunakan adalah ekstrak aseton
sehingga F4 dan F5 kemungkinan mengandung senyawa semipolar yang
menyebabkan pada eluen nonpolar n-heksana:etil asetat (9:1) tidak terelusi dengan
baik, dapat dilihat ketika kepolaran eluen ditingkatkan menjadi n-heksana:etil asetat
(5:5) fraksi tersebut dapat terelusi lebih baik. F9-11 kemungkinan mengandung
senyawa polar sehingga dapat terelusi dengan eluen yang polar. Fraksi yang dipilih
untuk pemisahan selanjutnya adalah fraksi yang memiliki noda yang dominan dan
mudah untuk dipisahkan. F5, F6, dan F7 mengandung noda dari senyawa dominan
9 10 11
λ 365 nm
Senyawa target
1 2 3 4 5 4 5 6 7 8
H:EA (9:1) H:EA (5:5)
H:EA (9:1) H:EA (5:5)
1 2 3 4 5 4 5 6 7 8 9 10 11
Senyawa target λ 254 nm
42
sehingga dari ketiga fraksi tersebut memiliki potensi untuk dilanjutkan pemisahan
selanjutnya. Namun F7 memiliki noda yang lebih baik pemisahannya dan lebih
sederhana dibanding F5 dan F6. Hal ini dapat dilihat juga pada UV 365 nm dari F7
bercak merah muda yang berpendar tidak terlalu terlihat sehingga yang dipilih
untuk dilanjutkan ke tahap pemisahan berikutnya adalah F7.
Pemisahan F7 (1,839 g) dengan kromatografi kolom gravitasi. Fase gerak
yang digunakan berupa campuran eluen (n-heksana : etil asetat) dengan
perbandingan yang ditingkatkan kepolarannya. Kromatografi kolom gravitasi
dipilih karena merupakan cara pemisahan yang sederhana dimana sampel akan
ditempatkan di atas permukaan fase diam yang berupa silika gel yang kemudian
dielusi dengan menggunakan fase gerak berupa eluen dengan perbandingan
kepolaran tertentu. Pemisahan tejadi karena adanya perbedaan interaksi antara
sampel dengan fase gerak dan fase diamnya serta dengan adanya gaya gravitasi
(Hermanto, 2008).
Pemisahan F7 menghasilkan 33 fraksi yang ditampung dalam vial 7 mL.
Fraksi-fraksi yang memiliki pola pemisahan yang sama disatukan dalam satu fraksi
sehingga diperoleh 17 fraksi. Dari fraksi tersebut diambil fraksi yang paling banyak
yaitu F13 dengan berat 0,867 g. Hasil KLT F13 dapat dilihat pada Gambar 11.
43
Gambar 11. Hasil KLT F13 dengan eluen n-heksana:etil asetat (6:4)
Berdasarkan hasil KLT pada Gambar 13 dapat dilihat bahwa pada fraksi 13
terdapat noda dominan yang ditandai dengan noda hitam berbentuk oval dan
membentuk warna coklat kemerahan ketika disemprotkan dengan larutan H2SO4
dalam metanol. Hal ini menunjukkan bahwa noda tersebut merupakan golongan
senyawa triterpenoid (Harborne, 1987). Hasil KLT pada λ 365 nm terdapat bercak
merah muda yang lemah yang menunjukkan bahwa dalam F13 masih terdapat
klorofil sehingga harus dipisahkan untuk mendapatkan senyawa yang lebih murni
(Khasanah et al., 2013).
Kromatografi kolom yang tepat digunakan untuk memisahkan klorofil dari
senyawa-senyawa dalam sampel adalah kromatografi kolom gravitasi dengan
adsorben berupa Sephadex LH-20 sebagai fase diam. Prinsip dari Kromatografi
kolom tersebut adalah memisahkan senyawa-senyawa berdasarkan perbedaan berat
molekulnya. Fase diamnya terdiri dari partikel yang memiliki pori-pori tertentu.
Dalam hal ini senyawa-senyawa yang memiliki berat molekul lebih besar dari fase
diamnya akan terelusi terlebih cepat terbawa fase gerak melewati fase diam
sedangkan senyawa-senyawa yang memiliki berat molekul lebih rendah dari pori-
λ 254 nm λ 365 nm Pewarnaan dengan H2SO4
44
pori fase diam akan tertahan dalam fase diam sehingga waktu elusinya lebih lama
(Hermanto, 2008). Klorofil merupakan senyawa yang memiliki berat molekul yang
besar sehingga ketika proses elusi berlangsung senyawa klorofil akan terelusi
terlebih dahulu.
Pemisahan klorofil dari senyawa dalam F13 (0,867 g) menggunakan
kromatografi kolom gravitasi dengan adsorben Sephadex LH-20. Fase gerak yang
digunakan dalam kromatografi kolom ini adalah diklorometana : metanol (1:1).
Proses elusi dilakukan 3x pengulangan dengan masing-masing bobot sampel yang
dielusi ialah 250 mg, 250 mg, dan 367 mg. Hal ini dilakukan agar proses pemisahan
dapat terjadi dengan baik serta mengumpulkan bobot fraksi yang cukup banyak.
Fraksi-fraksi tersebut digabungkan kemudian diidentifikasi kembali dengan
menggunakan KLT. Hasil KLT dapat dilihat pada Gambar 12.
Gambar 12. Hasil KLT kolom sephadex LH-20
Hasil penggabungan fraksi tersebut menunjukkan bahwa hasil elusi kolom
sephadex LH-20 mengandung senyawa dominan yang digabungkan menjadi F13.3.
Pengamatan hasil KLT pada λ 365 nm tidak menunjukkan bercak berwarna merah
muda, hal ini menunjukkan bahwa sampel sudah tidak mengandung klorofil.
Selanjutnya pemisahan F13.3 menggunakan kromatografi kolom gravitasi dengan
λ 365 nm Pewarnaan dengan larutan H2SO4
F13.3
H:EA (6:4) H:EA (6:4)
F13.1
F13.2
45
fase gerak yang digunakan adalah n-heksana : etil asetat (8:2). Total fraksi yang
dihasilkan adalah 12 fraksi, berat masing-masing fraksi dapat dilihat pada Tabel 10.
Tabel 10. Berat fraksi hasil kolom kromatografi gravitasi
Fraksi Berat (g)
F1 0,0041
F2 0,0431
F3 0,0893
F4 0,0189
F5 0,0657
F6 0,0535
F7 0,0230
F8 0,0303
F9 0,0587
F10 0,0430
F11 0,0297
F12 0,0229
Hasil fraksi tersebut kemudian diidentifikasi dengan menggunakan KLT
dengan menggunakan eluen n-heksana : etil asetat (7:3). Hasil KLT F3 dan F5
memiliki noda yang lebih sedikit pengotornya dari fraksi yang lain, selain itu F3
dan F5 jika digabungkan memiliki berat yang paling banyak sehingga digabung
menjadi F13.3c sehingga beratnya menjadi 0,155 g. Hasil KLT dapat dilihat pada
Gambar 13.
Gambar 13. Hasil KLT kromatografi kolom gravitasi pada F13.3c
Berdasarkan hasil KLT tersebut noda yang dihasilkan F13.3c pada λ 254
nm lebih bersih dari pengotor jika dibandingkan dengan fraksi lainnya, namun
λ365 nm Pewarnaan dengan H2SO4
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
46
ketika disemprot dan dipanaskan pengotornya menjadi terlihat. Oleh karena itu
dilakukan uji kemurnian dengan menggunakan KLT 2D dan uji tiga pelarut. Pada
uji KLT 2D eluen yang digunakan adalah n-heksana : etil asetat (7:3 dan 6:4). Pada
uji tiga pelarut, eluen yang digunakan adalah (1) diklorometana : aseton (9.5:0.5),
(2) diklorometana : aseton (9:1) dan (3) aseton (100%). Hasil KLT 2D dan uji tiga
pelarut dapat dilihat pada Gambar 14.
Gambar 14. Hasil KLT F13.3c (a) 2D dan (b) uji tiga pelarut
Berdasarkan hasil KLT 2D (a) noda yang dihasilkan berupa 1 noda, namun
tidak berbentuk bulat melainkan berbentuk oval yang memiliki ekor atau noda
berbayang, kemungkinan senyawa tersebut belum murni. Selain itu noda yang
dihasilkan masih berada di bawah dekat dengan batas bawah plat KLT yang
menunjukkan bahwa eluen yang dipakai kurang polar sehingga noda tidak terelusi
dengan baik. Untuk menguji kemurniannya, maka dilakukan uji tiga pelarut (b).
Dari hasil uji beberapa pelarut menunjukkan bahwa senyawa dalam sampel masih
belum murni. Pada eluen 1 senyawa tidak terpisah, kemudian pada eluen 2 senyawa
sudah terpisah dengan baik. Oleh karena itu dilakukan pemurnian lebih lanjut pada
F13.3c dengan menggunakan fase gerak berupa eluen diklorometana : aseton dalam
kromatografi kolom gravitasi.
(a) (b)
H:EA (7:3) H:EA (6:4) DC:AC
(9,5:0,5) DC:AC
(9:1)
AC
(100%)
F13.3c
F13.3c
F13.3c
F13.3c
47
Pemisahan pada F13.3c (0,155 g) dilakukan dengan menggunakan
kromatografi kolom gravitasi. Fase gerak yang digunakan adalah diklorometana :
aseton yang ditahan pada perbandingan 92:8, hal ini bertujuan untuk mengambil
senyawa pada noda pertama terlebih dahulu, diperoleh 4 fraksi. Fraksi hasil
gabungan tersebut diidentifikasi kembali dengan KLT. Berat masing-masing fraksi
dapat dilihat pada Tabel 11 dan hasil KLT dapat dilihat pada Gambar 15.
Tabel 11. Berat fraksi hasil kromatografi kolom gravitasi F13.3c
Fraksi Berat (mg)
F1 29,9
F2 20
F3 29
F4 8,6
Gambar 15. Hasil KLT F13.3c dengan eluen diklorometan : aseton (85:15)
Jika dibandingkan antara hasil KLT F1 dan F2 dengan blanko menunjukkan
bahwa senyawa telah terpisah, ditandai dengan noda F1 dan F2 berada sejajar
dengan noda pertama pada blanko. Hasil dari penyemprotan dengan menggunakan
H2SO4 dalam metanol menunjukkan bahwa pada F1 masih terdapat pengotor,
sehingga yang dilanjutkan tahap uji kemurnian selanjutnya adalah F2 yang
kemudian dinamai GC-2.
F2 F1 F1 F2
48
4.3 Hasil Uji Kemurnian dengan KLT 2 dimensi (2D)
GC-2 yang diperoleh kemudian diuji kemurnian dengan KLT 2D. Eleun
pertama yang digunakan adalah diklorometana : aseton (7:3) dan eluen kedua yang
digunakan adalah diklorometana : aseton (6:4). Hasil KLT 2D dapat dililat pada
Gambar 16.
Gambar 16. Hasil KLT 2D dari GC-2
Berdasarkan hasil KLT 2D menunjukan noda yang dihasilkan berupa satu
noda yang berbentuk bulat namun masih terdapat noda berbayang, noda berbayang
semakin terlihat jelas ketika menggunakan eluen kedua. Hal ini dapat diduga bahwa
senyawa target belum terpisah dengan baik, diduga senyawa tersebut memiliki
kemiripan sifat dan kepolaran. Oleh karena itu dilakukan pengujian instrumentasi
menggunakan UV-Vis, FTIR, LCMS, 1H NMR dan 13C NMR serta dilakukan uji
antikanker payudara dengan menggunakan metode MTT assays.
4.4 Hasil Analisis Data UV-Vis
Hasil analisis pada panjang gelombang 200-400 nm (Gambar 17)
menunjukkan adanya 2 serapan, yaitu pada panjang gelombang maksimum (λmaks)
222 nm (pita 1) dan 272 nm (pita 2). Puncak serapan pada λmaks 222 nm
menunjukkan adanya eksitasi elektron π π* dari gugus kromofor C=C dan
(a) (b)
DC:AC (7:3) DC:AC (6:4)
49
puncak serapan pada λmaks 272 nm menunjukkan adanya eksitasi elektron dari
n π* dari gugus kromofor C=O (Sastrohamidjojo, 2013).
Gambar 17. Spektrum UV-Vis GC-2
Berdasarkan penelitian Bui et al. (2016) dan Subarnas et al. (2016),
senyawa-senyawa triterpenoid yang berhasil diisolasi dari tumbuhan G.celebica
menghasilkan serapan panjang gelombang UV-Vis di sekitar 200-400 nm. Rita
(2010) menyatakan bahwa senyawa golongan triterpenoid asam karboksilat pada
rimpang temu putih muncul serapan maksimum pada panjang gelombang 242 nm
diduga akibat adanya eksitasi elektron dari π π* yang disebabkan oleh adanya
suatu kromofor C=C. Serapan landai pada panjang gelombang 280 nm
kemungkinan diakibatkan oleh terjadinya eksitasi elektron dari n π* yang
disebabkan adanya ikatan rangkap C=O.
4.5 Hasil Analisis Data FTIR
Analisis FTIR dilakukan untuk menentukan gugus fungsi yang terdapat
pada GC-2. Hasil analisis spektroskopi FTIR tersebut menunjukkan adanya serapan
dari beberapa gugus fungsi. Spektrum FTIR dapat dilihat pada Gambar 18.
222
272
50
Gambar 18. Hasil spektrum FTIR GC-
Adapun hasil interpretasi bilangan gelombang FTIR GC-2 dapat dilihat
pada Tabel 12.
Tabel 12. Interpretasi Bilangan Gelombang FTIR GC-2
Bilangan gelombang
(cm-1) Perkiraan gugus fungsi
3.378,47 O-H karboksilat
1.262,46 C-O ulur asam karboksilat
1.686,82 C=O karbonil
1.640,53 C=C (sp2)
1.378,20 Metil, CH3 ; gem dimetil, -C(CH3)2
1.450,53 -CH2- metilen
2.975,33 hingga 2.824,87 -C-H sp3 ulur
1.923,11 ; 915,26 Vinil
Hasil spektrum Inframerah (IR) dari GC-2 pada daerah 4.000-500 cm-1
memperlihatkan serapan pita O-H asam karboksilat yang khas yaitu pada rentang
3.378,47 cm-1. Serapan 1.262,46 cm-1 memperlihatkan serapan vibrasi ulur C-O
untuk asam karboksilat. Serapan kuat 1.686,82 cm-1 menyatakan adanya gugus
karbonil C=O. Selanjutnya serapan lemah pada daerah bilangan gelombang
51
1.640,53 cm-1 menunjukkan adanya ikatan antara karbon sp2 (C=C). Serapan tajam
pada daerah panjang gelombang 1.378,20 cm-1 menunjukkan adanya gugus metil –
CH3 dan gugus–C(CH3)2 (geminal atau gem dimetil, dua gugus metil pada karbon
yang sama) dan ini merupakan ciri khas dari senyawa golongan triterpenoid
(Supratman, 2010).
Serapan pada daerah 2.975,33 cm-1 hingga 2.824,87 cm-1 menunjukkan
adanya vibrasi ulur –C-H (C sp3) yang dikuatkan dengan adanya serapan pada
1.450,53 cm-1 akibat adanya gugus metilen –CH2- dan pada serapan 1.378,20 cm-1
akibat adanya gugus metil –CH3. Serapan kuat pada 915,26 cm-1 bersamaan dengan
munculnya serapan lemah pada bilangan gelombang 1.923,11 cm-1 timbul dari
gerakan keluar bidang atom-atom hidrogen pada ikatan rangkap dan ini merupakan
karakteristik dari gugus vinil (Sastrohamidjojo, 2013).
4.6 Hasil Analisis Data LCMS
Analisis LCMS pada GC-2 dilakukan untuk mengetahui puncak area, berat
molekul, serta kemurnian senyawa dalam fraksi tersebut. Kemurnian senyawa dapat
dilihat dari banyaknya puncak area yang dihasilkan, senyawa murni hanya akan
menghasilkan satu puncak area. Kromatogram hasil LCMS GC-2 dapat dilihat pada
Gambar 19.
Gambar 19. Kromatogram hasil LCMS GC-2
0 2 4 6 8 10
Retention Time (Min)
0
75.5
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
% In
ten
sit
y
BPI=>NR(2.00)
T2.7
T2.9T3.5
T1.2
52
Berdasarkan hasil identifikasi menggunakan LCMS pada GC-2 dengan
ionisasi ESI positif [M+H]+ diperoleh tiga puncak area dengan waktu retensi (Rt)
dan ion molekul [M+H]+ berturut-turut adalah 2,66 menit (453,4) ; 2,89 menit
(455,5) ; dan 3,50 menit (455,5) yang menandakan bahwa berat molekul masing-
masing adalah 452, 454, dan 454. Dengan adanya tiga puncak area yang terdapat
pada GC-2 menunjukkan adanya tiga senyawa dalam fraksi tersebut, selain itu pada
hasil KLT 2D bercak noda yang dihasilkan masih berupa noda tunggal yang
berbayang, sehingga dapat disimpulkan bahwa GC-2 tidak murni. Senyawa-
senyawa tersebut kemungkinan memiliki kepolaran yang hampir sama sehingga
sulit terpisah dengan baik.
Berdasarkan kromatogram hasil LCMS GC-2 dapat dilihat bahwa terdapat
puncak yang dominan dibanding dengan puncak lainnya, yaitu pada puncak
pertama dengan waktu retensi 2,66 menit dan % intensitasnya yaitu 76%. Senyawa
tersebut merupakan senyawa dengan berat molekul 452 dan memiliki rumus
molekul C30H44O3. Berat dan rumus molekul tersebut memiliki kesamaan dengan
senyawa golongan triterpenoid asam (24E)-3-okso-17,14-friedolanosta-
8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat (33) yang memiliki m/z 475,3186 [M+Na]+ yang
menandakan bahwa berat molekul senyawa tersebut adalah 452. Senyawa asam
(24E)-3-okso-17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat (33) merupakan
senyawa baru dari golongan triterpenoid yang berhasil diisolasi dari kulit kayu
tumbuhan Garcinia celebica (Bui et al., 2016).
Puncak lainnya yang memiliki m/z 455,55 [M+H]+ dengan berat molekul
454 diduga merupakan senyawa triterpenoid asam (24E)-3α-hidroksi-17,14-
friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat (44). Senyawa tersebut merupakan
53
senyawa yang pernah diisolasi dari daging buah G. hombroniana (Rukachaisirikul
et al., 2000). Puncak pada waktu retensi 2,89 dan 3,50 menit memiliki kesamaan
berat molekul dan pola fragmentasi, hal ini kemungkinan 2 senyawa tersebut
merupakan senyawa isomer. Adapun struktur senyawa dari asam (24E)-3-okso-
17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(26)-trien-26-oat (33) dan asam (24E)-3α-
hidroksi-17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat (44) dapat dilihat
pada Gambar 20.
Gambar 20. Struktur senyawa asam (24E)-3-okso-17,14-friedolanosta-
8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat (33) dan asam (24E)-3α-hidroksi-
17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat (44)
Berdasarkan penelitian Bui et al. (2016) senyawa asam (24E)-3-okso-17,14-
friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat (33) merupakan senyawa golongan
triterpenoid dengan rumus molekul C30H44O3 dan berat molekul 452. Senyawa asam
(24E)-3-okso-17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat memiliki
panjang gelombang maksimum UV-Vis 215 dan 249 nm, selain itu terdapat serapan
pada 1.699 cm-1 yang menandakan terdapatnya serapan karbonil (C=O) pada hasil
analisis dengan FTIR. Namun belum ada yang melaporkan aktivitas dari senyawa
tersebut.
Kemiripan senyawa dominan dari GC-2 dengan senyawa asam (24E)-3-
okso-17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat diperkuat dengan adanya
54
serapan-serapan gugus fungsi yang dihasilkan dari identifikasi menggunakan FTIR,
hasil tersebut sangat dekat dengan keberadaan gugus fungsi yang terdapat dalam
kerangka senyawa asam (24E)-3-okso-17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-
trien-26-oat. Serapan-serapan tersebut adalah gugus O-H karboksilat, C=O
karbonil, gem dimetil, C-O ulur dari asam karboksilat, dan C=C sp2. Selain itu
diperkuat juga dengan adanya kemiripan terhadap pergeseran kimia dari hasil
analisis menggunakan 1H NMR dan 13C NMR.
4.7 Hasil Analisis Data NMR
Analisis menggunakan NMR merupakan analisis terpenting dalam
penentuan senyawa organik. Analisis NMR dapat menentukan tipe dan jumlah
proton. Selain itu dapat juga menentukan kerangka karbon. Analisis NMR yang
dilakukan adalah analisis 1H NMR dan analisis 13C NMR.
4.7.1 Hasil Analisis Data 1H NMR
Analisis data 1H NMR dilakukan untuk menentukan tipe dan jumlah proton
serta lingkungan kimianya dalam suatu molekul. Tipe proton yang berbeda
memiliki lingkungan kimia yang berbeda dan lingkungan kimia yang berbeda
menentukan letak/serapan sebuah proton dalam spektrum (Sastrohamidjojo, 2013).
Hasil analisis 1H NMR pada GC-2 dapat dilihat pada Gambar 21.
55
Gambar 21. Hasil analisis 1H NMR GC-2
Hasil analisis menggunakan 1H NMR pada Gambar 21 memberikan
informasi umum bahwa pergeseran kimia < δ 3 ppm menunjukkan keberadaan
proton dari ikatan karbon sp3 dalam rangka dasar triterpenoid dan sinyal-sinyal
proton pada daerah “downfield” (δ 5 – 7) merupakan sinyal-sinyal proton alkena
(doublebond). Kebanyakan gugus metil muncul di dekat δ 1 ppm jika gugus metil
tersebut terikat pada karbon-karbon sp3 yang lain. Proton-proton gugus metilen,
-CH2- (terikat pada karbon sp3) muncul pada pergeseran kimia yang lebih besar
(dekat δ 1,2 – 1,4 ppm) daripada proton-proton gugus metil. Proton-proton metin
tersier muncul pada pergeseran kimia yang lebih besar daripada proton-proton
sekunder. Proton-proton yang cukup dekat dengan alkena akan memberikan
pengaruh kecil terhadap gejala “deshielding” dari elektron-elektron pi (π) hingga
serapan terjadi di sekitar “downfield” dari proton-proton alkil umumnya, yaitu pada
δ >2 ppm (Sastrohamidjojo, 2013).
56
Sinyal-sinyal proton alkena (double bond) muncul pada medan lemah
“downfield” (δ 5-6 ppm) diakibatkan adanya efek anistropi pada proton alkena
(Supratman, 2009). Pada kebanyakan senyawa triterpenoid, sinyal proton yang
dihasilkan pada daerah “downfield” (δ 6-7,8 ppm) menunjukkan adanya proton
alkena pada C-24 yang berdekatan dengan karbon yang tersubstitusi dengan
substituen elektronegatif (C-26) seperti pada karbonil karboksilat atau aldehida
(Bui et al., 2016; Elfita et al., 2009; Klaiklay et al., 2013; Rukachaisirikul et al.,
2000; Rukachaisirikul et al., 2005; Subarnas et al., 2016; Wu et al., 2016).
Sinyal pada daerah δH 5,32 (1H, s) dan 6,91 ppm (1H, t) merupakan sinyal
dari proton double bond yang terikat pada C-15 dan C-24. Pada C-24 diduga
merupakan sinyal dari proton double bond yang berdekatan dengan karbon yang
tersubstitusi dengan substituen elektronegatif (C-26) yaitu karbonil karboksilat,
sehingga akan berada pada daerah ”downfield” dengan pergeseran kimia yang lebih
besar. Munculnya multiplisitas triplet pada C-24 dikarenakan karbon tersebut
berikatan dengan C-23 yang memiliki 2 proton, sinyal proton pada C-24 dapat
dilihat pada Gambar 22.
Gambar 22. Perbesaran spektrum 1H NMR
57
Hasil interpretasi data pergeseran kimia pada spektrum 1H NMR dapat
dilihat pada Tabel 13. Tabel tersebut merupakan perbandingan pergeseran kimia
spektrum 1H NMR dari senyawa GC-2 dengan senyawa prediksi asam (24E)-3-
okso-17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat.
Tabel 13. Data spektrometer 1H NMR senyawa GC-2 dengan senyawa asam
(24E)-3-okso-17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat
Posisi
δH (ppm); multiplisitas (J)
Senyawa GC-2 (a)
Senyawa asam (24E)-3-okso-17,14-
friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-
oat (Bui et al., 2016) (b)
C-1 1,64; m
2,07; m
1,64; m
2,09; m
C-2 2,35; m 2,48; m
2,62; m
C-3 - -
C-4 - -
C-5 1,74; m 1,70; m
C-6 1,58; m
1,74; m
1,60; m
1,71; m
C-7 2,09; m 2,11; m
2,41; m
C-8 - -
C-9 - -
C-10 - -
C-11 2,15; m 2,15; m
C-12 1,61; m 1,61; m
1,66; m
C-13 - -
C-14 - -
C-15 5,32; s 5,33; s
C-16 1,91; d
2,29; m
1,96; dd (16,3 & 3,5)
2,29; d (16,3)
C-17 - -
C-18 0,77; s 0,77; s
C-19 1,25; s 1,13; s
C-20 1,815; m 1,84; m
C-21 0,87; d (5,6) 0,90 d (6,7)
C-22 1,66; m 1,64; m
C-23 2,20; m
2,33; m
2,13; m
2,32; m
C-24 6,91; t (7,2) 6,93; t (7,5)
C-25 - -
C-26 - -
C-27 1,84; s 1,86; s
C-28 1,12; s 1,11; s
C-29 1,05; s 1,08; s
C-30 0,86; s 0,83; s
Keterangan : (a) 400 MHz dalam CDCl3 (b) 500 MHz dalam CDCl3
58
Adanya puncak-puncak yang menumpuk pada pergeseran kimia dibawah δH
3 ppm pada Gambar 21 menunjukkan adanya ikatan karbon sp3 baik itu metil,
metilen maupun metin. Sinyal pada daerah δH 1,84 ppm (1H, s) menunjukkan
adanya ikatan karbon sp3 dari metil alilik yang terikat pada C-27. Selanjutnya lima
sinyal pada daerah δH 1,25; 1,12; 1,05; 0,86; dan 0,77 ppm (1H, s) menunjukkan
adanya metil yang masing-masing terikat pada C-19, C-28, C-29, C-30 dan C-18.
Sinyal-sinyal proton metil tersebut muncul dengan multiplisitas singlet karena
gugus metil terikat dengan karbon kuartener atau yang tidak mengikat proton.
Sedangkan sinyal pada daerah δH 0,87 ppm (1H, d) menunjukkan adanya metil yang
terikat pada C-21 dengan multisplitas doublet karena gugus metil terikat dengan
metin atau yang mengikat 1 proton. Proton-proton metil tersebut merupakan proton
metil khas yang terdapat pada senyawa triterpenoid.
Selanjutnya terdapat sembilan sinyal metilen (CH2) dari ikatan karbon sp3
yang muncul pada pergeseran kimia δH 2,35 (m); 2,20 (m); 2,15 (m); 2,09 (m); 1,91
(d); 1,66 (m); 1,64 (m); 1,61 (m); dan 1,58 (m). Masing-masing sinyal proton
tersebut berikatan dengan C-2, C-23, C-11, C-7, C-16, C-22, C-1, C12 dan C-6.
Pada sinyal metilen tersebut rata-rata menghasilkan multiplisitas triplet, hal ini
disebabkan proton pada gugus metilen tersebut berikatan dengan karbon-karbon
yang memiliki banyak proton sehingga menghasilkan puncak multiplet. Sinyal dari
proton metin (CH) muncul pada pergeseran kimia δH 1,815 dan 1,74 (m) yang
terikat pada C-20 dan C-5. Multiplisitas yang muncul adalah mutiplet, dikarenakan
gugus metin tersebut berikatan dengan karbon-karbon yang mengikat lebih dari 2
proton.
59
4.7.2 Hasil Analisis Data 13C NMR
Analisis data 13C NMR pada GC-2 dilakukan untuk menentukan kerangka
karbon yang terdapat dalam senyawa tersebut. 13C NMR dapat memberikan
informasi mengenai jumlah sinyal karbon dalam senyawa organik, pemecahan
sinyal karbon yang tergantung dari jumlah atom hidrogen yang terikat (metin,
metilena, metil, dan karbon kuartener) serta jenis karbon (sp, sp2, dan sp3)
(Supratman, 2010). Spektrum hasil analisis 13C NMR pada GC-2 dapat dilihat pada
Gambar 23.
Gambar 23. Spektrum hasil analisis 13C NMR pada GC-2
Serapan pada pergeseran sekitar δc 200 dan 170 ppm merupakan ciri khas
terdapatnya karbonil keton pada C-3 dan asam karboksilat pada C-26 dari senyawa-
senyawa triterpenoid yang dihasilkan dari tumbuhan Garcinia. Sedangkan pada
pergeseran sekitar δc 120-140 ppm menunjukkan adanya karbon-karbon double
bond (C=C) pada kerangka triterpenoid (Bui et al., 2016; Danh et al., 2014). Hasil
interpretasi data pergeseran kimia pada spektrum 13C NMR dapat dilihat pada
Tabel 14.
60
Tabel 14. Data spektrometer 13C NMR senyawa GC-2 dengan senyawa asam
(24E)-3-okso-17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat
Posisi
δc (ppm)
Senyawa GC-2 (a)
Senyawa asam (24E)-3-okso-17,14-
friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-
26-oat (Bui et al., 2016) (b)
C-1 37,0 35,2
C-2 34,4 34,6
C-3 211,2 217,7
C-4 49,2 47,5
C-5 53,9 51,3
C-6 19,8 19,7
C-7 26,6 26,9
C-8 123,0 124
C-9 144.2 140,3
C-10 37,7 37,8
C-11 22,2 22,9
C-12 29,4 30,1
C-13 45,2 48,2
C-14 145,7 148,2
C-15 120,3 117,2
C-16 45,0 45,7
C-17 49,4 50,7
C-18 15,4 15,8
C-19 18,8 18,8
C-20 38,9 38,2
C-21 15,3 15,5
C-22 31,4 31,6
C-23 27,2 27,6
C-24 145,5 145,5
C-25 126,5 126,9
C-26 173,2 172,5
C-27 12,2 12,2
C-28 25,7 26,7
C-29 20,9 21,5
C-30 17,9 17,5
Sinyal pada daerah δc 211,2 ppm memberikan informasi adanya sinyal dari
karbon karbonil keton pada C-3. Adanya karbon karbonil keton dikuatkan dengan
adanya spektrum FTIR yaitu serapan kuat pada 1.686,82 cm-1 menyatakan adanya
gugus karbonil C=O. Selanjutnya serapan δc 173,2 ppm menunjukkan adanya sinyal
dari karbonil asam karboksilat. Dugaan tersebut diperkuat dengan data FTIR yaitu
serapan pada panjang gelombang 1.262,46 cm-1 yang memperlihatkan serapan
Keterangan : (a) 400 MHz dalam CDCl3 (b) 500 MHz dalam CDCl3
61
vibrasi ulur C-O untuk asam karboksilat serta serapan khas O-H karboksilat pada
panjang gelombang 3.378,47 cm-1. Sinyal pada daerah δc 211,2 dan 173,2 ppm
dapat dilihat pada Gambar 24.
Gambar 24. Perbesaran spektrum 13C NMR
Adanya sinyal-sinyal di sekitar δc 120 – 145 ppm menunjukkan adanya
karbon sp2 double bond (C=C). Sinyal-sinyal tersebut adalah δc 145,7 (C-14); 145,5
(C-24); 144,2 (C-9); 126,5 (C-25); 123 (C-8); dan 120,3 (C-15). Adanya dugaan
sinyal karbon sp2 dikuatkan dengan spektrum FTIR pada panjang gelombang
1.640,53 cm-1. Selanjutnya terdapat 4 sinyal dari karbon kuartener yaitu sinyal pada
daerah δc 49,4 (C-17); 49,2 (C-4); 45,2 (C-13); dan 37,7 (C-10). Selain itu sinyal
pada daerah δc 53,9 dan 38,9 ppm menunjukkan adanya gugus metin pada posisi
C-5 dan C-20. Adanya 9 sinyal dari gugus metilen muncul pada daerah δc 45,0 (C-
16); 37,0 (C-1); 34,4 (C-2); 31,4 (C-22); 29,4 (C-12); 27,2 (C-23); 26,6 (C-7); 22,2
(C-11); dan 19,8 (C-6). Sinyal dari gugus metilen ini diperkuat dengan adanya
serapan FTIR pada bilangan gelombang 2.975,33 cm-1 serta 1.450,53 cm-1 yang
merupakan serapan khas akibat adanya gugus metilen –CH2-.
C=O
COOH
62
Selanjutnya terdapat 7 gugus metil khas dari senyawa triterpenoid. Sinyal
pada daerah δc 12,2 ppm menunjukkan adanya gugus metil alil pada C-27, hal ini
diperkuat dengan sinyal δH 1,84 ppm dengan multiplisitas singlet. Sinyal pada
daerah δc 15,3 ppm menunjukkan adanya gugus metil pada C-21 dan diperkuat
dengan sinyal δH 0,87 dengan multiplisitas doublet. Kemudian sinyal dari 5 gugus
metil lain muncul pada daerah δc 25,7 (C-28); 20,9 (C-29); 18,8 (C-19); 17,9 (C-
30); dan 15,4 (C-18). Masing-masing dugaan sinyal tersebut diperkuat dengan
adanya sinyal δH 1,12 (C-28); 1,05 (C-29); 1,25 (C-19); 0,86 (C-30); dan 0,77 (C-
18) yang memiliki multiplisitas singlet. Sinyal dari C-28 dan C-29 diperkuat juga
dengan adanya serapan FTIR pada daerah pergeseran gelombang 1378,20 cm-1
akibat adanya gugus gem dimetil –C(CH3)2 yang merupakan ciri khas dari kerangka
struktur triterpenoid (Supratman, 2010).
4.8 Biosintesis Senyawa Asam (24E)-3-okso-17,14-friedolanosta-
8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat
Biosintesis senyawa triterpenoid dapat dilihat pada Gambar 25, asam asetat
yang telah diaktifkan oleh koenzim A akan melakukan kondensasi Claisen
menghasilkan asetoasetil koenzim A (45). Senyawa yang dihasilkan ini dengan
asetil koenzim A melakukan kondensasi Aldol menghasilkan asam mevalonat (46).
Reaksi-reaksi berikutnya adalah fosforilasi, eliminasi asam fosfat, dan
dekarboksilasi menghasilkan isopentenil pirofosfat (IPP) (47) yang selanjutnya
berisomerisasi menjadi dimetilalil pirofosfat (DMAPP) (48) oleh enzim isomerase.
IPP sebagai unit isopren aktif bergabung secara kepala-ke-ekor dengan DMAPP.
Penggabungan ini terjadi karena serangan elektron dari ikatan rangkap IPP terhadap
atom karbon dari DMAPP yang kekurangan elektron diikuti penyingkiran ion
63
pirofosfat. Serangan ini menghasilkan geranl pirofosfat (GPP) (49). Penggabungan
selanjutnya antara satu unit IPP dan GPP dengan mekanisme yang sama seperti
antara IPP dan DMAPP akan menghasilkan farnesil pirofosfat (FPP) (50) yang
merupakan senyawa antara triterpenoid (Achmad, 1986).
Gambar 25. Mekanisme reaksi pembentukan farnesil pirofosfat (FPP) (Achmad,
1986)
Sebanyak 2 unit farnesil pirofosfat (FPP) pada Gambar 26 bergabung secara
ekor-ekor membentuk senyawa skualen yang segera diubah menjadi 2,3-
epoksiskualen (51). Siklisasi diawali oleh protonasi gugus epoksi dan diikuti oleh
pembukaan lingkar epoksida. Kemudian tejadi migrasi metil yang selanjutnya
pembentukan ikatan rangkap. Oksidasi pada C-3 dan C-26 menghasilkan gugus
64
keton dan karboksilat sehingga dihasilkan senyawa asam (24E)-3-okso-17,14-
friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat (33) (Achmad, 1986; Herbert, 1989).
Gambar 26. Mekanisme reaksi pembentukan senyawa asam (24E)-3-okso-17,14-
friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat (33) (Achmad, 1986;
Herbert, 1989)
4.9 Uji Aktivitas Antikanker Terhadap Sel Kanker Payudara (MCF-7)
Senyawa-senyawa triterpenoid yang dihasilkan dari tumbuhan G. celebica
memiliki aktivitas antikanker payudara yang sangat kuat dengan nilai IC50 <100
μg/mL. Pada penelitian Subarnas et al. (2016) senyawa metil-3α-23-dihidroksi-
65
17,14-friedolanstan-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat (41) memiliki nilai IC50
sebesar 39,68 μg/mL dalam 24 jam dan 33,88 μg/mL dalam 48 jam terhadap sel
kanker payudara (MCF-7). Selain itu pada penelitian Bui et al. (2016)
menghasilkan 4 senyawa triterpenoid yang memiliki aktivitas antikanker yang
sangat kuat terhadap sel kanker payudara yaitu asam (22Z,24E)-9α-hidroksi-3-
okso-13α,30-siklo-17,13-friedolanosta-22(23),24(24)-dien-26-oat (37); asam
(22Z,24E)-9α hidroksi-3-okso-17,14-friedolanosta-14(15),22(23),24(25)-trien-26-
oat (38); asam (24E)-3β asetoksi 9α-hidroksi-17,14,4-friedolanosta-14(15),24(25)-
dien-26-oat (39); dan asam (22Z,24E)-3β asetoksi-9α-hidroksi-17,14-
friedolanosta-14(15),22(23),24(25) -trien-26-oat (40) yang memiliki nilai IC50
berturut-turut adalah 51,3; 27,4; 31,3; dan 31,7 μg/mL.
GC-2 yang diperoleh dilakukan uji sitotoksik terhadap sel kanker payudara
(MCF-7). Uji sitotoksik dilakukan untuk mengetahui potensi suatu sampel dalam
menghambat pertumbuhan sel. Dalam penelitian ini dilakukan uji sitotoksik
menggunakan pendekatan MTT assay. Prinsip metode MTT assay didasarkan pada
jumlah sel yang masih hidup dengan reaksi yang terjadi adalah reaksi enzimatis
antara sel yang hidup dengan senyawa MTT. Dalam hal ini, sel yang hidup akan
menghasilkan enzim dehidrogenasi yang akan mereduksi senyawa MTT menjadi
senyawa formazan yang berwarna ungu (Suzery dan Cahyono, 2014). Ketika
sampel mengandung senyawa yang dapat menghambat pertumbuhan sel atau
mematikan sel maka sel yang bertahan hidup akan semakin sedikit, sehingga enzim
dehidrogenasi yang dihasilkan sel untuk mereduksi senyawa MTT menjadi
senyawa formazin yang berwarna ungu pun akan semakin sedikit. Intensitas warna
akan sebanding dengan jumlah sel yang hidup. Intensitas warna ungu tersebut
66
diukur dengan menggunakan Spektrofometer UV-Vis pada panjang gelombang 550
nm. Data hasil uji sitotoksik GC-2 terhadap sel kanker payudara (MCF-7) dapat
dilihat pada Tabel 15.
Tabel 15. Hasil uji sitotoksik GC-2 terhadap sel kanker payudara (MCF-7)
GC-2
(μg/mL)
%sel hidup rata-rata
%sel hidup IC50 (μg/mL)
1x 2x 3x
0 102.89 98.62 98.48 100
24.97
1 102.63 96.35 126.25 108.41
5 79.54 88.34 84.34 84.075
10 70.86 68.19 68.59 69.22
25 41.50 48.97 49.78 46.75
50 2.40 2.40 13.08 5.96
Berdasarkan tabel tersebut dapat dilihat bahwa persentase sel hidup semakin
menurun dengan meningkatnya konsentrasi sampel yang ditambahkan. Hal ini
menunjukkan senyawa dalam sampel mampu menghambat pertumbuhan sel kanker
payudara. Aktivitas sitotoksik dinyatakan dengan nilai IC50, nilai IC50 menunjukkan
kadar sampel uji yang dapat menghambat 50% pertumbuhan sel kanker (Fitria et
al., 2011). Nilai IC50 dari aktivitas sitotoksis GC-2 terhadap sel kanker payudara
(MCF-7) sebesar 24,97 μg/mL. Nilai IC50 diklasifikasikan menjadi tiga tingkatan yaitu
jika nilai IC50 <100 μg/mL menunjukkan sampel tersebut memiliki aktivitas yang sangat
kuat terhadap penghambatan sel. Jika nilai IC50 101-200 μg/mL menunjukkan aktivitas
yang baik, sedangkan jika nilai IC50 >200 μg/mL menunjukkan aktivitas yang lemah dalam
menghambat pertumbuhan sel (Subarnas et al., 2012). Berdasarkan tingkatan nilai IC50
tersebut senyawa GC-2 memiliki potensi penghambatan sel kanker payudara yang
sangat kuat dengan nilai IC50 sebesar 24,97 μg/mL.
Beberapa gugus fungsi seperti hidroksil, karboksil, dan ikatan rangkap
dalam senyawa triterpenoid dapat berkontribusi terhadap kapasitas penghambatan
67
proliferasi sel kanker (Petronelli et al., 2009). Senyawa dugaan yang kemungkinan
memiliki peran utama dalam menghambat pertumbuhan sel kanker payudara adalah
senyawa yang memiliki gugus hidroksil pada C-3, yaitu asam (24E)-3α-hidroksi-
17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-26-oat. Senyawa polar berinteraksi
dengan substansi fosfolipid dalam lapisan hidrofilik membran sel, kemudahan
senyawa tersebut masuk ke dalam membran dipengaruhi oleh jumlah dan posisi
gugus hidroksil. Jumlah dan posisi gugus hidroksil dalam senyawa triterpenoid
mempengaruhi aktivitas antikankernya (Qi et al., 2010). Aktivitas antikanker
payudara dari senyawa triterpenoid bekerja dengan cara menginduksi apoptosis sel
(Subarnas et al., 2016).
68
BAB V
PENUTUP
5.1 Simpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa:
1. Salah satu senyawa yang terkandung dalam isolat GC-2 adalah senyawa
golongan triterpenoid dengan rumus molekul C30H44O3 (BM=452), yaitu
senyawa asam (24E)-3-okso-17,14-friedolanosta-8(9),14(15),24(25)-trien-
26-oat.
2. Isolat GC-2 memiliki aktivitas antikanker payudara (MCF-7) yang sangat
kuat dengan nilai IC50 sebesar 24,97 μg/mL
5.2 Saran
Perlu dilakukan pemurnian lebih lanjut untuk memisahkan senyawa-
senyawa dalam GC-2 yang memiliki aktivitas antikanker payudara (MCF-7) serta
dilakukan identifikasi struktur lanjutan dengan uji NMR 2D.
69
DAFTAR PUSTAKA
Achmad SA. 1986. Kimia Organik Bahan Alam. Jakarta: Kartinika
Aravind AP, Asha KRT, Rameshkumar. 2016. Phytochemical analysis and
antioxidant potential of the leaves of Garcinia travancorica Natural Product
Research. 30(2):232–236. doi: org/10.1080/14786419.2015.1043551.
Arief DA, Sangi MS, Kamu VS. 2017. Skrining Fitokimia Dan Uji Toksisitas
Ekstrak Biji Aren (Arenga pinnata MERR.). Jurnal MIPA Unsrat. 6(2):12–
15.
Arifin HS dan Nakagoshi N. 2011. Landscape ecology and urban biodiversity in
tropical Indonesian cities. Landscape and Ecological Engineering. 7(1): 33–
43.
Arwa P, Zeraik ML, Farias XV, Fonseca L M, Silva BV, Siqueira SDH. 2015.
Redox-active biflavonoids from Garcinia brasiliensis as inhibitors of
neutrophil oxidative burst and human erythrocyte membrane damage. Journal
of Ethnopharmacology. 174:410–418. doi: org/10.1016/j.jep.2015.08.041.
Ashokkumar R dan Ramaswamy M. 2014. Phytochemical screening by FTIR
spectroscopic analysis of leaf extracts of selected Indian Medicinal plants.
International Journal of Current Microbiology and Applied Sciences.
3(1):395–406.
Asmara AP. 2017. Uji Fitokimia Senyawa Metabolit Sekunder Dalam Ekstrak
Metanol Bunga Turi Merah (Sesbania grandiflora L. Pers). Al-Kimia. 5(1):
48–59. doi:org/10.24252/al-kimia.v5i1.2856
Ath-Thabari AJM. 2009. Tafsir Ath-Thabari Surah An-Nuur, Al Furqaan, Asy-
Syu’araa’, dan An-Naml. Jakarta Selatan: Pustaka Azzam.
Auranwiwat C, Trisuwan K, Saiai A, Pyne SG, Ritthiwigrom T. 2014. Antibacterial
tetraoxygenated xanthones from the immature fruits of G. cowa. Fitoterapia.
98:179–183. doi: org/10.1016/j.fitote.2014.08.003.
Behera S, Ghanty S, Ahmad F, Santra S, Banerjee S. 2012. UV-Visible
Spectrophotometric Method Develepment and Validation of Assay of
Paracetamol Tablet Formulation. Analytical & Bioanalytical Techniques.
3(6):1–6.
Braithwaite A, Smith F, Stock R. 1996. Chromatographic Methods. Kluwer
Academic Publisher: London
70
Bui TQ, Bui AT, Nguyen KT, Nguyen VT, Trinh BTD, Nguyen LD. 2016. A
depsidone and six triterpenoids from the bark of G. celebica. Tetrahedron
Letters. doi: org/10.1016/j.tetlet.2016.04.104.
Cai Y, Luo Q, Sun M, Corke H. 2004. Antioxidant activity and phenolic compounds
of 112 traditional Chinese medicinal plants associated with anticancer. Life
Sciences. 74(17):2157–2184. doi: 10.1016/j.lfs.2003.09.047.
Chang H dan Yang L. 2012. Gamma-Mangostin, a Micronutrient of Mangosteen
Fruit, Induces Apoptosis in Human Colon Cancer Cells. Molecules. 6(3):
8010–8021. doi: 10.3390/molecules17078010.
Chen Y, Fan H, Yang G, Jiang Y, Zhong F, He H. 2010. Prenylated Xanthones from
the Bark of Garcinia xanthochymus and Their 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl
(DPPH) Radical. Molecules. 15:7438–7449. doi:
10.3390/molecules15107438.
Dahlan Z, Hanum L, Zahar E. 2009. Eksplorasi dan studi keragaman Garcinia l.
berdasarkan sumber bukti makromorfologi dan pemanfaatannya bagi
perkuliahan morfologi tumbuhan. Forum Kependidikan. 28(2):164–172.
Danh Q, Bui A, Vu MK, Nguyen HD, Nguyen LT, Dang SV, Nguyen LD. 2014. A
protostane and two lanostanes from the bark of Garcinia ferrea.
Phytochemistry Letters. 762:19–22. doi: org/10.1016/j.phytol.2014.08.019
Day RA dan AL Underwood. 1996. Analisis Kimia Kuantitatif. Edisi ke-empat.
Erlangga : Jakarta. Hal. 390.
Doyle WM. 1992. Principles and applications of Fourier transform infrared
(FTIR) process analysis. 2. 11–41. Technical Note AN–906 Rev. C.
Elfita E, Muharni M, Latief M, Darwati D, Widiyantoro A, Supriyatna S. Pieters L.
2009. Phytochemistry Antiplasmodial and other constituents from four
Indonesian Garcinia. Phytochemistry. 70(7):907–912. doi:
10.1016/j.phytochem.2009.04.024.
Farombi EO dan Owoeye O. 2011. Antioxidative and chemopreventive properties
of Vernonia amygdalina and Garcinia kola. International Journal of
Environmental Research and Public Health. 8(6):2533–2555. doi:
org/10.3390/ijerph8062533.
Ferlay J, Soerjomataram I, Dikshit R, Eser S, Mathers C, Rebelo M, Bray F. 2015.
Cancer incidence and mortality worldwide : Sources, methods and major
patterns in GLOBOCAN 2012. International Journal of Cancer. 136:359–
386. doi: org/10.1002/ijc.29210.
Fessenden RJ dan Fessenden JS. 1981. Kimia Organik, jilid 1. Jakarta: Erlangga
71
Fitria M, Armandari I, Septhea D, Ikawati A, Meiyanto E. 2011. Ekstrak Etanolik
Herba Ciplukan (Physalis angulata L.) Berefek Sitotoksik Dan Menginduksi
Apoptosis Pada Sel Kanker Payudara Mcf-7. Jurnal Ilmu-Ilmu Hayatik dan
Fisik. 13(2): 101–107.
Fouotsa H, Mbaveng AT, Mbazoa CD, Nkengfack AE, Farzana S, Iqbal CM, Kuete
V. 2013. Antibacterial constituents of three Cameroonian medicinal plants:
Garcinia nobilis, Oricia suaveolens and Balsamocitrus camerunensis. BMC
Complementary and Alternative Medicine. 13(81):1–10.
doi:org/10.1186/1472-6882-13-81.
Ganjar I, Rohman A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar.
Gritter RJ dan Schwarting AE. 1991. Pengantar Kromatografi Terjemahan dari
Introduction to Cromatoghraphy (Padwinata K dan Soediro I, Penerjemah).
Bandung: ITB Press.
Han Q, Bin, Yang NY, Tian HL, Qiao CF, Song JZ, Chang DC, Xu HX. 2008.
Xanthones with growth inhibition against HeLa cells from Garcinia
xipshuanbannaensis. Phytochemistry. 69(11):2187–2192. doi:
org/10.1016/j.phytochem.2008.05.019.
Handa SS, Khanuja SPS, Longo G, Rakesh DD. 2008. Extraction Technologies for
Medicinal and Aromatic Plants. Italy: ICS-UNIDO
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan. Terjemahan Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro. Bandung:
Penerbit ITB.
Hart H, Craine LE, Hart DJ. 2003. Kimia Organik. Achmadi, S.S., penerjemah;
Safitri, A., editor. Jakarta (ID): Penerbit Erlangga. Terjemaha n dari: Organic
Chemistry. A Short Course. Ed ke-11.
Hemshekhar M, Sunitha K, Santhosh MS, Devaraja S, Kemparaju K, Vishwanath
BS, Girish KS. 2011. An overview on genus Garcinia: Phytochemical and
therapeutical aspects. Phytochemistry Reviews. 10(3):325–351. doi:
10.1007/s11101-011-9207-3.
Herbert RB. 1989. Biosintesis Metabolit SekunderTerjemahan dari The
Biosynthesis of Secondary Metabolites (Srigandono B, Penerjemah).
Semarang: IKIP Semarang Press.
Hermanto S. 2008. Mengenal Lebih Jauh Teknik Analisis Kromatografi dan
Spektrofotometri. Jakarta (ID): Pusat Laboratorium Terpadu UIN Syarif
Hidayatullah.
72
Jenie RI, Handayani S, Susidarti RA, Udin Z, &Meiyanto, E. 2017. Cytotoxic and
Antimetastasis Effect of Ethyl Acetate Fraction from Caesalpinia sappan L.
on MCF-7 / HER2 Cells. Indonesian Journal of Cancer Chemoprevention. 8:
42–50.
Jia CC, Han T, Xu J, Li SG, Sun YT, Li DH, Hua HM. 2017. A new biflavonoid
and a new triterpene from the leaves of G. paucinervis and their biological
activities. Journal of Natural Medicines. 71(4):642–649. doi:
org/10.1007/s11418-017-1092-7.
Khasanah N, Wuryanti, Suci N. 2013. Isolasi Dan Penentuan Aktifitas Spesifik
Klorofilase Dari Daun Mahoni (Swietenia mahagoni). Cheminfo. 1(1): 386–
395.
Khopkar SM. 2002. Konsep Dasar Kimia Analitik penerjemah A. Saptorahardjo.
Jakarta: UI Press. Terjemahan dari Basic concept of analytical chemistry.
Kiso T, Usuki Y, Ping X, Fujita K, Taniguchi M, Cathepsin B. 2001. L-2.5-
Dihydrophenylalanine, an Inducer of Cathepsin-dependent Apoptosis in
Human Promyelocytic Leukemia Cells (HL-60). Journal of Antibiotics,
54(10):810–817.
Klaiklay S, Sukpondma Y, Rukachaisirikul V, Phongpaichit S. 2013.
Phytochemistry Friedolanostanes and xanthones from the twigs of Garcinia
hombroniana. Phytochemistry. 85:161–166. doi:
org/10.1016/j.phytochem.2012.08.020.
Kritsanawong S, Innajak S, Imoto M, Watanapokasin R. 2016. Antiproliferative
and apoptosis induction of α-mangostin in T47D breast cancer cells.
International Journal of Oncology. 48:2155–2165. doi:
10.3892/ijo.2016.3399.
Kumar S dan Pandey AK. 2013. Chemistry and Biological Activities of 1,8-
Naphthyridines. The Scientific World. 73(7):637–669.
Lancester MV dan Fields RD. 1996. Antibiotic and cytotoxic drug suspectibility
assays using resazurin and poising agents. U.S. Patent No. 5. 501.959.
Lannang AM, Sema DK, Tatsimo SJN, Tankeu VFT, Tegha HF, Wansi JD, Sewald
N. 2017. A new depsidone derivative from the leaves of G. polyantha. Natural
Product Research. 6419:1–6. doi: org/10.1080/14786419.2017.1378201.
Liu X, Yu T, Gao XM, Zhou Y, Qiao CF, Peng Y, Xu HX. 2010. Apoptotic effects
of polyprenylated benzoylphloroglucinol derivatives from the twigs of G.
multiflora. Journal of Natural Products. 73(8):1355–1359. doi:
org/10.1021/np100156w.
73
Mahamodo S, Rivi C, Neut C, Abedini A, Ranarivelo H, Duhal N, Andriamihaja,
B. 2014. Antimicrobial prenylated benzoylphloroglucinol derivatives and
xanthones from the leaves of G. goudotiana. Phytochemistry. 102:162–168.
doi: org/10.1016/j.phytochem.2014.03.006.
Maharani T, Sukandar D, Hermanto S. 2016. Karakterisasi Senyawa Hasil Isolasi
dari Ekstrak Etil Asetat Daun Namnam (Cynometra Cauliflora L.) yang
Memiliki Aktivitas Antibakteri. Jurnal Kimia Valensi. 2(1):55–62.
Njume C, Jide AA, Ndip RN. 2011. Aqueous and organic solvent-extracts of
selected South African medicinal plants possess antimicrobial activity against
drug-resistant strains of Helicobacter pylori: Inhibitory and bactericidal
potential. International Journal of Molecular Sciences. 12(9):5652–5665. doi:
org/10.3390/ijms12095652.
Nurdin, Kusharto CM, Tanziha I. 2009. Kandungan Klorofil Berbagai Jenis Daun
Tanaman Dan Cu-Turunan Klorofil Serta Karakteristik Fisiko-Kimianya,
Jurnal Gizi dan Pangan. 4(1):13–19.
Oyenihi OR, Brooks NL, Oguntibeju OO. 2015. Effects of kolaviron on hepatic
oxidative stress in streptozotocin induced diabetes. BMC Complementary and
Alternative Medicine. 15(1):1–7. doi: org/10.1186/s12906-015-0760-y.
Padhye S, Ahmad A, Oswal N, Sarkar FH. 2009. Emerging role of Garcinol, the
antioxidant chalcone from Garcinia indica Choisy and its synthetic analogs.
Journal of Hematology and Oncology. 2:1–13. doi: org/10.1186/1756-8722-
2-38.
Pailee P, Kuhakarn C, Sangsuwan C, Hongthong S, Piyachaturawat P, Suksen K,
Reutrakul V. 2018. Anti-HIV and cytotoxic biphenyls, benzophenones and
xanthones from stems, leaves and twigs of Garcinia speciosa. Phytochemistry.
147:68–79. doi: org/10.1016/j.phytochem.2017.12.013.
Parveen M, Azaz S, Zafar A, Ahmad F, Silva MR, Silva PSP. 2017. Structure
elucidation, DNA binding specificity and antiproliferative proficiency of
isolated compounds from G. nervosa. Journal of Photochemistry and
Photobiology.167. doi: org/10.1016/j.jphotobiol.2016.12.035.
Paturusi AAE, Nurafianty, Rusli, Rahim A. 2014. Isolasi dan Identifikasi Senyawa
Antibakteri Ekstrak n-heksana Daun Jati (Tectona grandis L.F). JF FIK
UINAM. 2(1):18–23.
Pavia DL, Lampman GM, Kriz GS, Vyvyan JR. 2009: Introduction to
Spectroscopy; Fourth Edition. Belmont. USA.
Petronelli A, Pannitteri G, Testa U. 2009. Triterpenoids as new promising
anticancer drugs. Anti-Cancer Drugs. 20(10): 880–892. doi:
74
org/10.1097/CAD.0b013e328330fd90 Pieme CA, Ambassa P, Yankep E, Saxena AK. 2015. Epigarcinol and isogarcinol
isolated from the root of Garcinia ovalifolia induce apoptosis of human
promyelocytic leukemia (HL-60 cells). BMC Research Notes. 1–10. doi:
org/10.1186/s13104-015-1596-8.
Pinto MM, Sousa ME, Nascimento MS. 2005. Xanthone derivatives: new insights
in biological activities. Current Medicinal Chemistry. 12(21):2517–2538. doi:
org/10.2174/092986705774370691.
Qi L, Wang C, Yuan C. 2010. American ginseng : Potential structure – function
relationship in cancer chemoprevention. Biochemical Pharmacology. 80:947–
954. doi:org/10.1016/j.bcp.2010.06.023
Rauf R, Santoso U, Suparmo. 2012. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Gambir yang
Dipurifikasi menggunakan Kromatografi Kolom Sephadex LH-20. Jurnal
Agritech. 32(2): 167–172.
Ren W, Qiao Z, Wang H, Zhu L, Zhang L. 2003. Flavonoids: Promising anticancer
agents. Medicinal Research Reviews. 23(4):519–534. doi:
10.1002/med.10033.
Rita WS. 2010. Isolasi, Identifikasi dan Uji Aktivitas Antibakeri Senyawa
Golongan Triterpenoid pada Rimpang Temu Putih (Curcuma zedoaria (Berg.)
Roscoe). Jurnal Kimia. 4(1):20-26
Rukachaisirikul V, Adair A, Dampawan P, Taylor WC, Turner PC. 2000.
Lanostanes and friedolanostanes from the pericarp of Garcinia hombroniana.
Phytochemistry. 55(2000): 183–188.
Rukachaisirikul V, Saelim S, Karnsomchoke P, Phongpaichit S. 2005.
Friedolanostanes and Lanostanes from the Leaves of Garcinia hombroniana.
Journal Natural Product. 68:1222–1225.
Sales L, Pezuk JA, Borges KS, Brassesco M, Scrideli CA, Tone LG, Oliveira JC.
2015. Anticancer activity of 7-epiclusianone,a benzophenone from Garcinia
brasiliensis,in glioblastoma. BMC Complementary and Alternative Medicine.
15(1):1–8. doi: org/10.1186/s12906-015-0911-1.
Santoni A, Nurdin H, Manjang Y, Achmad SA. 2010. Isolasi dan Elusidasi Struktur
Triterpenoid Kulit Batang Surian Toona sinensis dan Uji Terhadap Hama
Crosidolomia pavonana. J. Ris. Kim. 3(2):103-111.
Sarker D, Latif Z, Gray I, Alexander. 2006. Natural Product Isolation. New Jersey
(US): Humana Press.
Sastrohamidjojo H. 2013. Dasar-Dasar Spektroskopi. Yogyakarta: Gadjah Mada
University Press.
75
Sharma PB dan Handique PJ. 2015. Antioxidant properties, physico-chemical
characteristics and proximate composition of five wild fruits of Manipur,
India. Journal of Sci Technol. 52:894–902. doi: 10.1007/s13197-013-1128-2.
Sherma J dan Fried B. 2003. Handbook of Thin-Layer Chromatography edisi
ketiga. New York: Marcell Dekker.
Stark TD, Salger M, Frank O, Balemba OB, Wakamatsu J, Hofmann T. 2014.
Antioxidative Compounds from G. buchananii Stem Bark. Journal of Natural
Products. doi: 10.1021/np5007873.
Subarnas A, Diantini A, Abdulah R, Zuhrotun ADE, Nugraha PA, Hadisaputri YE,
Puspitasari IM. 2016. Apoptosis-mediated antiproliferative activity of
friedolanostane triterpenoid isolated from the leaves of Garcinia celebica
against MCF-7 human breast cancer cell lines. Biomedical report. 79–82. doi:
org/10.3892/br.2015.532.
Subarnas A, Diantini A, Abdulah R, Zuhrotun A, Yamazaki C, Nakazawa
M,Koyama H. 2012. Antiproliferative activity of primates-consumed plants
against MCF-7 human breast cancer cell lines. Biomedical report. 1(4):38–43.
Sukatta U, Takenaka M, Ono H, Okadome H, Sotome I, Nanayama K, ISobe S.
2013. Distribution of Major Xanthones in the Pericarp, Aril, and Yellow Gum
of Mangosteen (G. Mangostana Linn.) Fruit and Their Contribution to
Antioxidative Activity. 77(5):984–987. doi: 10.1271/bbb.120931.
Sun Y, Li D, Jia C, Xue C, Bai J, Li Z, Hua H. 2016. Three new xanthones from
the leaves of G. lancilimba. Journal of Natural Medicines. 70(2):173–178.
doi: org/10.1007/s11418-015-0950-4.
Supratman U. 2010. Elusidasi Struktur Senyawa Organik. Bandung: Widya
Padjajaran.
Suttirak W dan Manurakchinakorn S. 2014. In vitro antioxidant properties of
mangosteen peel extract. Journal Food Sci Technol. 51:3546–3558. doi:
10.1007/s13197-012-0887-5.
Suzery M dan Cahyono B. 2014. Evaluation of Cytotoxicity Effect of Hyptis
pectinata Poit (Lamiaceae) extracts using BSLT and MTT methods. Jurnal
Sains dan Matematika. 22(3): 84–88.
Tang YX, Fu WW, Wu R, Tan HS, Shen ZW, Xu HX. 2016. Bioassay-Guided
Isolation of Prenylated Xanthone Derivatives from the Leaves of G. oligantha.
Journal of Natural Products. 79(7):1752–1761. doi:
org/10.1021/acs.jnatprod.6b00137.
76
Tang ZY, Xia ZX, Qiao SP, Jiang C, Shen GR, Cai MX, Tang XY. 2015. Four new
cytotoxic xanthones from G. nujiangensis. Fitoterapia. 102:109–114. doi:
org/10.1016/j.fitote.2015.02.011.
Trisuwan K dan Ritthiwigrom T. 2012. Benzophenone and xanthone derivatives
from the inflorescences of G. cowa. Archives of Pharmacal Research.
35(10):1733–1738. doi: org/10.1007/s12272-012-1004-z.
Tyagi AK, Agarwal C, Chan DC, Agarwal R. 2004. Synergistic anti-cancer effects
of silibinin with conventional cytotoxic agents doxorubicin, cisplatin and
carboplatin against human breast carcinoma MCF-7 and MDA-MB468 cells.
Oncology. 11:493–499.
Wei L, Lin M, Han B, Deng X, Hou W, Liao Q, Xie Z. 2016. The Comparison of
Cinnamomi Cortex and Cinnamomum burmannii Blume Using1H NMR and
GC-MS Combined with Multivariate Data Analysis. Food Analytical
Methods. 9(9):2419–2428. doi: org/10.1007/s12161-016-0418-5.
Widorini O dan Ersam T. 2014. Isolasi dan Identifikasi Senyawa 1-hidroksi-6,7-
dimetoksi-(3’,3’:2,3)-dimetilpiranosanton dari Ekstrak Metanol Kulit Batang
Garcinia cylindrocarpa. Sains Dan Seni Pomits. 1(1):1–6.
Wu W, Chen X, Liu Y, Wang Y, Tian T, Zhao X, Ruan H. 2016. Phytochemistry
Triterpenoids from the branch and leaf of Abies fargesii. Phytochemistry. 130:
301–312. doi: org/10.1016/j.phytochem.2016.07.001
Xia ZX, Zhang DD, Liang S, Lao YZ, Zhang H, Tan HS, Xu HX. 2012. Bioassay-
guided isolation of prenylated xanthones and polycyclic acylphloroglucinols
from the leaves of G. nujiangensis. Journal of Natural Products. 75(8):1459–
1464. doi: org/10.1021/np3003639.
Xia Z, Zhang H, Xu D, Lao Y, Fu W, Tan H, Xu H. 2015. Xanthones from the
leaves of G. cowa induce cell cycle arrest, apoptosis, and autophagy in cancer
cells. Molecules. 20(6):11387–11399. doi:org/10.3390/molecules200611387.
Zhang H, Dan Z, Ding Z, Lao Y, & Tan H. 2016. UPLC-PDA-QTOFMS-guided
isolation of prenylated xanthones and benzoylphloroglucinols from the leaves
of G. oblongifolia and their migration-inhibitory activity. Nature Publishing
Group. 6:1–12. doi: 10.1038/srep39369.
Zhang H, Tao L, Fu WW, Liang S, Yang YF, Yuan QH, Xu HX. 2014. Prenylated
benzoylphloroglucinols and xanthones from the leaves of G. oblongifolia with
antienteroviral activity. Journal of Natural Products. 77(4):1037–1046. doi:
org/10.1021/np500124e.
77
78
LAMPIRAN
Lampiran 1. Perhitungan Nilai IC50 dari GC-2
GC-2 (μg/mL)
%sel hidup rata-
rata
%sel
hidup
IC50 (μg/mL) 1x 2x 3x
0 102.89 98.62 98.487 100
24.97
1 102.63 96.352 126.25 108.407
5 79.54 88.345 84.342 84.0747
10 70.86 68.19 68.594 69.2171
25 41.504 48.977 49.778 46.7527
50 2.4021 2.4021 13.078 5.96085
Perhitungan nilai IC50:
y = -1,9027x + 97,513
50 = -1,9027x + 97,513
50 – 97,513 = -1,9027x
x = −47,513
−1,9027
x = 24,9713
y = -1.9027x + 97.513R² = 0.9525
0
20
40
60
80
100
120
0 10 20 30 40 50 60
Ce
lls v
iab
ility
(%
)
GC (µg/ml)
GC
79
Lampiran 2. Hasil Analisis LCMS GC-2
Waktu Retensi (Berat Molekul) = 2.66 (452)
Waktu Retensi (Berat Molekul) = 2.89 (454)
99.0 319.2 539.4 759.6 979.8 1200.0
Mass (m/z)
0
78.1
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
% In
ten
sit
yMariner Spec /70:72 (T /2.63:2.71) -55:64 (T -2.63:2.71) ASC=>NR(2.00)[BP = 453.4, 78]
453.39
435.39
186.48 306.43
257 317 377 437 497 557
Mass (m/z)
0
78.1
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
% In
ten
sit
y
Mariner Spec /70:72 (T /2.63:2.71) -55:64 (T -2.63:2.71) ASC=>NR(2.00)[BP = 453.4, 78]
453.39
454.43
454.06
436.37488.50313.19275.62
428 442 456 470 484 498
Mass (m/z)
0
78.1
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
% In
ten
sit
y
Mariner Spec /70:72 (T /2.63:2.71) -55:64 (T -2.63:2.71) ASC=>NR(2.00)[BP = 453.4, 78]
453.39
453.64
454.06435.39
455.52435.58493.55488.50445.49438.20431.26
99.0 319.2 539.4 759.6 979.8 1200.0
Mass (m/z)
0
50.8
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
% In
ten
sit
y
Mariner Spec /76:77 (T /2.86:2.90) -73:75 (T -2.86:2.90) ASC=>NR(2.00)[BP = 455.5, 51]
455.45
457.46177.04 246.80 492.67 912.02662.01
421.0 439.8 458.6 477.4 496.2 515.0
Mass (m/z)
0
50.8
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
% In
ten
sit
y
Mariner Spec /76:77 (T /2.86:2.90) -73:75 (T -2.86:2.90) ASC=>NR(2.00)[BP = 455.5, 51]
455.45
455.20
455.86
457.46438.20
490.37452.30
80
Waktu Retensi (Berat Molekul) = 3.50 (454)
99.0 319.2 539.4 759.6 979.8 1200.0
Mass (m/z)
0
55.5
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
% In
ten
sit
yMariner Spec /93:94 (T /3.51:3.55) -85:88 (T -3.51:3.55) ASC=>NR(2.00)[BP = 455.5, 55]
455.46
437.40
456.70
490.51571.50177.03 292.79 383.75
403.0 439.6 476.2 512.8 549.4 586.0
Mass (m/z)
0
55.5
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
% In
ten
sit
y
Mariner Spec /93:94 (T /3.51:3.55) -85:88 (T -3.51:3.55) ASC=>NR(2.00)[BP = 455.5, 55]
455.46
437.40456.41
456.70438.24495.48
496.42 571.50472.52426.77
429.0 444.8 460.6 476.4 492.2 508.0
Mass (m/z)
0
55.5
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
% In
ten
sit
y
Mariner Spec /93:94 (T /3.51:3.55) -85:88 (T -3.51:3.55) ASC=>NR(2.00)[BP = 455.5, 55]
455.46
455.40
437.40456.41
456.70438.24495.48
437.88 457.69 496.42447.42 472.52 488.58483.30432.68
430.0 437.6 445.2 452.8 460.4 468.0
Mass (m/z)
0
55.5
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
% In
ten
sit
y
Mariner Spec /93:94 (T /3.51:3.55) -85:88 (T -3.51:3.55) ASC=>NR(2.00)[BP = 455.5, 55]
455.46
455.40
437.40456.41
456.70438.24
437.88 457.69447.42432.68
480.0 484.6 489.2 493.8 498.4 503.0
Mass (m/z)
0
6.5
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
% In
ten
sit
y
Mariner Spec /93:94 (T /3.51:3.55) -85:88 (T -3.51:3.55) ASC=>NR(2.00)[BP = 455.5, 55]
495.48
490.51
496.42
491.50
497.03492.25
488.58483.30
81
Lampiran 3. Spektrum 1H NMR dari GC-2
82
83
84
85
86
87
Lampiran 4. Spektrum 13C NMR dari GC-2
88
89
90
91
BIODATA MAHASISWA
IDENTITAS PRIBADI
Nama Lengkap : Ambar Ilafah Ramadhan
Tempat Tanggal Lahir : Bogor, 16 Februari 1996
NIM : 11140960000063
Anak ke : 1 dari 2 bersaudara
Alamat Rumah
:
Jl. Pancasila V Kp. Parung Tanjung
RT.02/12 Desa Cicadas Kecamatan
Gunung Putri Kabupaten Bogor
Telp/HP : 089625799445
Email : [email protected]
Hobby/Keahlian (softskill) :
PENDIDIKAN FORMAL
Sekolah Dasar :
SDN 01 Wanaherang Lulus tahun
2008
Sekolah Menengah Pertama :
SMPN 01 Gunung Putri Lulus
tahun 2011
SLTA/SMK :
SMK Farmasi Annisa, Citeureup
Lulus tahun 2014
Perguruan Tinggi :
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Masuk tahun 2014
92
PENDIDIKAN NON FORMAL
Kursus/Pelatihan
1. Tahsin Al-Qur’an Metode Qira’ati : No. Sertifikat -
2. Program Tahfidz LTTQ Fatullah : No. Sertifikat -
3. Pelatihan Keamanan dan
Kesalamatan Kerja di
Laboratorium Kimia
:
No. Sertifikat -
4. Pelatihan Kalibrasi dan Perawatan
Ph Meter dan Analytic Balance
: No. Sertifikat -
5. Training and Workshop of Perfect
Weighing Technology
: No. Sertifikat -
6. Pelatihan Karya Tulis Ilmiah
“Berkarya Tanpa Plagiarisme”
: No. Sertifikat -
Pengalaman Organisasi
1. Himpunan Mahasiswa Kimia
(HIMKA)
: Staff Ahli Kerohanian Islam Tahun
2015/2016
2. Himpunan Mahasiswa Kimia
(HIMKA)
: Staff Ahli Kerohanian Islam Tahun
2016/2017
3. Komisariat Dakwah (KOMDA)
FST LDK SYAHID
: Staff Ahli PSDM Tahun 2015/2016
4. Komisariat Dakwah (KOMDA)
FST LDK SYAHID
: Bendahara Umum Tahun
2016/2017
5. Lembaga Dakwah Kampus (LDK)
SYAHID UIN Syarif Hidayatullah
: Koordinator Biro Keuangan Tahun
2017/2018
6. 1000 Peduli Pendidikan :
Volunteer dan Sekretaris Tahun
2014-sekarang
93
PENGALAMAN KERJA
1. Praktek Kerja Lapangan (PKL) : PT. Tirta Investama (Danone Aqua)
(Bogor/2016)
2. Bimbel :
Bimbingan belajar di rumah
(Bogor/2017)
Ludjeng Master Bimbel (Tangerang
Selatan/2018)
3. Guru Tahfidz : RQ Al Jannah (Bogor/2017-
sekarang)
SEMINAR/LOKAKARYA
1. Seminar Syahid Expo 19 “Creation,
Passion and Nation”
: Mei/2015 Sertifikat Pemakalah
(ada)
2. Seminar Nasional “Strengthening
Halal Industry toward Indonesia as
the Leading of Global Lifestyle
Center”
:
April/2018 Sertifikat Pemakalah
(ada)
![Sifat Aseton, Etanol, Etilen]](https://img.pdfslide.net/doc/110x75/5571ff1749795991699c9ffd/sifat-aseton-etanol-etilen.jpg)
