LEUCEMIE AIGUI LYMPHOBLASTIQUE ET TRANSLOCATION t(12;21 ) (p 13;q22)

Sandrine Kagialis-Girard a,*, Yves Bertrand b, Marie-Pierre Pages a, Anne-Marie Manel a

1. Observation

1.1. O b s e r v a t i o n c l in ique

En juin 1999, Ber, &ge de 25 mois, est hospitalise pour persistance depuis une dizaine de jours d'une fievre a 39 °C au decours d'une angine traitee symptomatiquement par Agram ~'.

Cliniquement, cet enfant est p&le et presente quelques petits ganglions lateraux cervicaux et inguinaux, d'allure banale. Son etat general est bon ; aucune hepatosplenomegalie, ni aucune ecchymose ne sont retrouvees.

1.2. Resu l ta ts b i o t o g i q u e s

L'hemogramme montre une hyperlymphocytose (leucocytes : 21,6 x 109/I ; lymphocytes : 12,2 x 109/I) associee & une blastose (blastes : 6,91 x 10~/I, soit 32 %) et une anemie normochrome normocytaire (hemoglobine : 74 g/I), tandis que les plaquettes sont normales (pla- quettes : 137 x 109/I) (figure 1).

Le myelogramme permet de realiser un certain hombre d'examens.

• La cytologie convent ionnel le qui montre un envahissement medul laire par 99 % de cellules blastiques de type lymphdide De plus, la reaction cytochimique aux myeloperoxydases est negative dans la to ta lite des cellules blastiques de la moelle et cadre bien avec I'hypothese diagnostic de leucemie aigu~ lymphdide (LAL) (figures 2A et 2B) • L ' immunoph(~notypage des cellules blastiques, qui affirme le d ia gnostic de LAL et permet de reveler leur appartenance & la lignee ce l lulaire [] et leur stade de maturation pre-pre B ou commune (CD 10+), ou BII selon la classification de rEGIL (European group for the immu nophenotyping of leukemias)

• L'index de proliferation des cellules leucemiques medullaires (ou index du contenu en ADN) qui est de 1 Le clone analyse est par consequent diploide

• Le caryotype m(~dullaire standard, qui met en evidence la pre- sence d'une anomalie quantitative dans 5 mitoses sur les 26 exami- nees. Le clone leucemique est hyperdiplo'ide avec un mode & 48, les

a Laboratoire d'hematologie et de cytogenetique b Service d'immuno-hematologie pediatrique et de transplantation de moelle osseuse Hepital Debrousse 29, rue Soeur-Beuvier 69322 Lyon cedex 05

* Correspondance. E-mail : sandrine.girard@freesbee.fr

article re(;u le 29 mars, accepte le 12 avri12002.

© Elsevier, Paris

chromosomes 10 et 21 etant en surnombre [formule chromosomique : 46 XY (21 ) /48 , XY, +10, +21 (5)] (figure 3) • Enfin, I '~tude mol(~culaire (PCR) de ce clone blastique medul laire revele d'une part un rearrangement des cha?nes Iourdes des immu noglobulines (FR1 et FR3) et de certaines cha?nes ~' et 8 du TCR (VGU132 VG9J1J2, VD2DD3), et d autre part la presence du trans crit de fusion TEL AML1 La technique d'hybridation fluorescente in situ (FISH) retrouve egalement ce gene de fusion TEL AML1 dans 43 % des noyaux interphasiques, ainsi que dans une mitose en meta phase (figures 4A et 4B) Parmi les autres examens biologiques :

• Le ionogramme sanguin, le bilan phospho-calcique ainsi que I'uremie, la cr(~atin(~mie et le taux des transaminases sont nor- maux Uelectrophorese revele une augmentation des proteines totales & 83 g/I, avec une hypergammaglobulinemie & 128 g/I L'uricemie est elevee & 236 lJmol/I, de meme que la valeur de la LDH & 1026 U/I

• Le bilan d'extension de la leuc(~mie aigui~ ne revele aucun enva hissement meninge (analyse cytologique du LCR normale).

En conclusion, cet enfant presente une LAL de type B, commune non hyperleucocytaire et sans envahissement neuro-meninge. Aucun syn- drome tumoral majeur, ni aucune complication du syndrome de lyse tumorale ne sont documentes.

1.3. T ra i tement et suivi

Des le diagnostic (juin 1999), Ber est inclus dans le protocole chi- miotherapique multicentrique europeen EORTC CLOG 58951 (EORTC : European organisation for research and treatment of can- cer ;CLCG : Children's leukemia cooperative group) [10].

La prephase, qui comporte des glucocorticdfdes (prednisolone) et une injection intrathecale de methotrexate, est alors debutee. Elle induit une disparition progressive des cellules blastiques peripheriques qui devient ,, totale ,, au 8 e jour de traitement. ,&, partir de divers criteres pronostiques (cliniques, hematologiques, immunologiques, cytoge- netiques...), le facteur de risque de cette leucemie est etabli et Ber est inclus dans le groupe de risque intermediaire (AR1 : average risk).

En aoet 1999, au 35 e jour du traitement, Ber est en remission com- plete de sa leucemie du point de rue cytologique (myelogramme) et en biologie moleculaire (maladie residuelle). La chimiotherapie ambu- latoire est poursuivie et sa fin a lieu deux arts plus tard en juillet 2001. Par la suite, Ber est revu en consultation regulierement tous les trois mois environ et un hemogramme de contrele est realise regulierement. En fevrier 2002, Bet est toujours en remission complete.

2. Commentaires

2.1. La t rans loca t i on t ( 1 2 ; 2 1 ) : genera l i t es et mise en ev i dence

La translocation t(12;21) (pl 3;q22) est la plus frequente des ano malies chromosomiques cryptiques rencontrees dans les LAL pedia

Revue Fran0aise des Laboratoires, juin 2002, N ° 344 79

Dossier scientifique Leuc~mies aigu~s : nouvelles approches diagnostiques et interpretations

1 2

6 7

13 t4

19 20

3

{f ,i s 8 9

15

/ 21

/

~ 2 ;'* U ~

18 1~ t 2

Formule chromosomique :46, XY (21) /48, XY, +10, +21 (5).

My61ogramme (X 100, May-Grunwald-Giemsa).

80 Revue Franoaise des Laboratoires, juin 2002, N ° 344

triques de type B, puisqu'elle survient dans 25 % des cas [8]. Elle a ete mise en evidence pour la premiere fois dans les LAL communes de I'en- fant par la technique de FISH en 1994 par Romana et son equipe [7]. Elle resulte de la fusion de deux genes TEL et AML1 situes respecti- vement sur le bras court du chromosome 12 et sur le bras long du chro- mosome 21 [9]. Suite & cet evenement, un gene chimerique TEL-AML1 apparaft sur le chromosome 21 derive nomme der(21) [2].

Cependant, & cause de la situation des points de cassure sur les chro- mosomes 12 et 21, cette translocation ne peut etre identifiee que dans 0,05 % des LAL pediatriques avec les techniques de cytogenetique conventionnelle. Elle est par consequent uniquement detectable par les methodes de FISH, de RT-PCR et de southern-blot [1,2, 4].

Cette translocation est generalement associee & un facteur de bon pro- nostic et c'est pourquoi elle est recherchee systematiquement Iors du diagnostic biologique des LAL pediatriques d'appartenance B.

2.2. C a r a c t e r i s t i q u e s de la t r a n s l o c a t i o n t(1 2;21 )

Le gene de fusion TEL-AML1 est retrouve dans 76 % des cas chez des enfants &ges de 1 a 5 ans, aussi bien de sexe masculin que femi- nin [3]. D'un point de rue cytologique et cytochimique, cette translo- cation conceme des LAL dont les reactions aux esterases et aux mye- Ioperoxydases sont negatives. Elle concerne majoritairement des LAL d'appartenance B, avec un immunophenotype commun ou pre-pre-B. Enfin, I'analyse cytogenetique montre un caryotype classique normal dans 13,6 % des cas et des anomalies chromosomiques associees dans 89,7 % dont 47 % sont des anomalies numeriques [4].

La population blastique est majoritairement pseudodipldi'de avec un index ADN inferieur ou egal a 1,16 [3, 6]. Toutefois, une etude

recente menee par le Pediatric oncology group montre une forte inci- dence de ce gene de fusion (63 %) dans les LAL B near-tetraploYdes (index ADN superieur ou egal & 1,75 et nombre de chromosomes superieur & 80) [5].

2.3. Va leur p r o n o s t i q u e de la t r a n s l o c a t i o n t(1 2 ;21 )

La translocation t(12;21) a un rele incertain au niveau de la leuce- mogenese ; cependant, son implication recurrente dans les LAL pedia- triques suggere que les deux genes TEL et AML1 interviennent dans la pathogenie des leucemies.

Actuellement, les donnees pronostiques concernant cette transloca- tion sont encore preliminaires et des etudes prospectives a long terme sont necessaires pour etablir sa signification pronostique reelle. En effet, il a ete mis en evidence que plus de 90 % des patients porteurs de la t(12;21 ) sont toujours en remission 5 ans apres le diagnostic [3]. Toutefois, il a ete egalement observe que le risque de rechute de ce sous-groupe de LAL n'est que legerement plus faible et que ces rechutes surviennent plus tardivement et sont moins graves.

3. Conclusion

I I est indispensable d'identifier la presence de la translocafien t(12;21 ) au cours du diagnostic biologique des LAL de I'enfant, car

elle participe d'une part & la definition initiale du facteur de risque avec les incidences therapeutiques que cela implique et d'autre part, en tant que marqueur genetique, elle contribue a definir un sous-groupe de patients.

R f rences [1] Ameye G., Jacquy C., Zenebergh A., Stul M., Vaerman 3.L., Bilhou-Nabera C., Libouton J.M., Deneys V., Martiat P., Hagemeijer A., Cornu G., Verellen-Dumoulin C., Michaux L., The value of inter- phase fluorescence in situ hybridization for the detec- tion of translocation t(12;21 ) in childhood acute lym- phoblastic leukemia, Ann. Hematol. ?9 (2000) 259-268. [2] Avet-Loiseau H., Fish analysis at diagnosis in acute lymphoblastic leukemia, Leuk. Lymph. 33 (1999) 441-449. [3] Borkhardt A., Cazzaniga G., Viehmann S., Valsecchi M.G., Ludwig W.D., Burci L., Mangioni S., Schrappe M., Riehm H., Lampert E, Basoo G., Masera G., Harbott J., Biondi A., Incidence and cli- nical relevance of TEL/AML1 fusion genes in children with acute lymphoblaetic leukemia enrolled in the ger- man and Italian multicenter therapy trials, Blood 90 (1997) 571-577.

[4] Kagialie-Girard S., Mise au point d'une technique d'hybddation fluorescente in situ (FISH) : application la detection de la translocation t(12;21) (Iol 3;q22) dane les leuc~mies aigu~s lymphdfdes de I'enfant. Th~se de pharmacie, Memoire du dipl6me d'etudes sp~cialis~,es de biologie m~licale, Lyon I, 2001, 156 p. [5] Pui C.H., Sallan S., Relling M.V., Evans W.E., Meeting report, International childhood ALL work- shop, Sausalito, CA, 30 November-let December 2000, Leuk. 15 (2001) 707-715. [6] Raynaud S.D., Dastugue N., Zoccola D., Shurtleff S.A., Mathew S., Raimondi S.C., Cytogenetic abnormalities associated with the t(12,21 ) : a colla- borative study of 169 children with t(t 2, 21 )-positive acute lymphoblastic leukaemia, Leuk. 13 (1999) 1325-1330. [?] Romana S.P., Le Coniat M., Berger R., A new recurrent translocation in acute lymphoblastic leu- kaemia, Genes Chrom. Cancer 9 (1994) 186-191. [8] Romana S.P., Mauchauffe M., Le Coniat M., Chumakov I., Le Paslier D., Berger R., Bernard O.A.,

The t(12;21) of acute lymphoblastic leukemia results in a TEL-AML1 gene fusion, Blood 85 (1995) 3662-3670.

[9] Romana S.R, Poirel H., Le Coniat M., Flexor M.A., Mauchauffe M., .Ionveaux P., Macintyre E.A., Berger R., Bernard O.A., High frequency of t(12;21 ) in child- hood B-lineage acute lymphoblastic leukaemia, Blood 86 (1995) 4263-4269.

[10] Vilmer E., Suciu S., Ferster A., Bertrand Y., Cave H., Thyss A., Benoit Y., Dastugue N., Fournier M., Souillet G., Manel A.M., Robert A., Nelken B., Millot F., Lutz P., Rialland X., Mechinaud E, Boutard P., Behar C., Chantraine J.M., Plouvier E., Laureys G., Brock P., Uyttebroeck A., Margueritte G., Plantaz D., Norton L., Francotte N., Gyeelinck .1., Waterkeyn C., Solbu G., Often 3., Long-term results of three randomized trials (58831,58832, 58881) in childhood acute lymphoblaetic leukae- mia : a CLCG-EORTC report, Leuk. 14 (2000) 225?-2266.

Revue Frangaise des Laboratoires, ]uin 2002, N ° 344 81