lidasi Metode Spektrofotometer Ultraviolet pada Penentuan Kadar
Parasetamol dalam Sediaan Obat
A.Judul UsulanValidasi Metode Spektrofotometer Ultraviolet pada
Penentuan Kadar Parasetamol dalam Sediaan Obat
B.Latar BelakangPengawasan produk obat harus dilakukan untuk
menjamin mutu dan keamanannya. Salah satu jenis pengawasan mutu
tersebut adalah analisis kadar senyawa aktif dalam proses
pengendalian mutu obat. Penentuan kadar senyawa aktif memerlukan
suatu metode analisis dengan ketelitian dan ketepatan yang cukup
baik(Wulandari, 2007:1).Penentuan kadar senyawa aktif sebagai salah
satu bentuk pengukuran analitik pada prinsipnya bertujuan untuk
mencari nilai sebenarnya dari suatu parameter kuantitas kimiawi.
Nilai sebenarnya adalah nilai yang mengkarakterisasi suatu
kuantitas secara benar dan didefinisikan pada kondisi tertentu yang
eksis pada saat kuantitas tersebut diukur. Nilai sebenarnya dapat
diperoleh dengan baik jika metode yang dipakai merupakan standar
baku, serta menggunakan instrumen yang telah terkalibrasi dan
keduanya telah memenuhi parameter-parameter
validasi.Spektrofotometriultraviolet merupakan salah satu metode
yang lazim digunakan untuk penetapan kadar parasetamol dalam
sediaan obat analgesik dan antipiretik yang mengandung parasetamol.
Beberapa metode lainnya seperti titrimetri dan kromatografi cair
yang tercantum dalam farmakope Indonesia (1995:649), dapat pula
diaplikasikan dalam penetapan parasetamol dalam bentuk bahan baku
serta dalam bentuk sediaan. Dalam bentuk kompleks/kombinasi dengan
obat lainnya, parasetamol dapat ditentukan kadarnya dengan
spektrofotometri, voltametri, spektrometriFTIR (Fourier Transform
Infrared), HPLC (High Pressure Liquid Chromatography), dan
elektroforesis (Sinan Suzen, et al, 1998:94).
Sebagaisuatuanalisis kuantitatif, spektrofotometer
Ultravioletini dapat dijadikan sebagai metode alternatif dalam
pengawasan mutu obat analgesik dan antipiretik dengan senyawa aktif
parasetamol, dengan berbagai keuntungan yang dimilikinya seperti;
cepat, mudah, murah, dan tanpa adanya tahap pemisahan. Metode
analisis penentuan kadar parasetamol dapat digunakan untuk analisis
rutin jika telah tervalidasi.Seperti yang tercantum dalam ISO/IEC
klausul 5.4.5.1,validasi diartikan sebagai konfirmasi melalui
pengujian dan pengadaan bukti yang objektif bahwa persyaratan
tertentu untuk suatu maksud khusus telah dipenuhi. Sedangkan
validasi metode analisis merupakan suatu tindakan penilaian
terhadap parameter tertentu, berdasarkan percobaan laboratorium
untuk membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan
untuk penggunaannya (Harmita, 2004:117).Sebagai suatu proses yang
tidak tunggal, validasi merupakan suatu bagian dari prosedur
analisis yang tidak dapat dipisahkan (Ermer dan Miller, 2005:5-6).
Proses ini dilakukan untuk metode yang baru dikembangkan, atau jika
metode tersebut akan digunakan untuk kegiatan yang yang bersifat
rutin, jika terjadi perubahan antara kondisi analisis dan kondisi
pada saat validasi metode, dan jika terjadi perubahan metode dari
metode standar.Berdasarkan latar belakang tersebut, maka penulis
bermaksud untuk melakukan penelitian dengan judul: Validasi Metode
Spektrofotometer Ultraviolet pada Penentuan Kadar Parasetamol dalam
Sediaan Obat .
C.Rumusan Masalah Berdasarkan latar belakang yang telah
diuraikan, maka rumusan masalah yang dapat diambil adalah: apakah
validasi metode spektrofotometer ultraviolet dapat digunakan pada
penetapan kadar parasetamol dalam sediaan obat yang memenuhi uji
validasi?
D.Tujuan PenulisanPenelitian ini memiliki tujuan untuk
mengetahui validitas metode spektrofotometer ultraviolet pada
penetapan kadar parasetamol dalam sediaan obat yang dihasilkan
dengan melihat parameter validasi yang meliputi; liniearitas, limit
deteksi, limit kuantitasi, ketelitian, dan ketepatan.
E.Manfaat PenulisanHasil penelitian ini diharapkan dapat
diperoleh suatu metode yang valid dan handal sehingga dapat
digunakan sebagai acuan dalam proses analisisparasetamol dalam
sediaan obat.
F.Tinjauan Pustaka1.Validasi MetodeTujuan utama yang harus
dicapai dari suatu kegiatan analisis kimia adalah dihasilkannya
data hasil uji yang abash (valid). Secara sederhana hasil uji yang
abash dapat digambarkan sebagai hasil uji yang mempunyai akurasi
(accuracy) dan presisi (precission) yang baik.Seperti yang tertuang
dalam ISO/IEC 17025 klausul 5.4.5.1 , validasi diartikan sebagai
kegiatan konfirmasi melalui pengujian dan pengadaan bukti yang
objektif bahwa persyaratan tertentu untuk suatu maksud khusus harus
dipenuhi.Validasi metode analisis adalah suatu proses penilaian
terhadap metode analisis tertentu berdasarkan percobaan
laboratorium untuk membuktikan bahwa metode tersebut memenuhi
persyaratan untuk digunakan (Harmita, 2004: 117). Selain itu,
validasi metode dilakukan jika terjadi perubahan kondisi antara
kondisi analisis dan kondisi pada saat validasi metode, atau
terjadi perubahan metode dari metode standar. Beberapa manfaat
validasi metode analisis adalah untuk mengevaluasi unjuk kerja
suatu metode analisis, menjamin prosedur analisis, menjamin
keakuratan dan kedapat ulangan hasil prosedur analisis, dan
mengurangi resiko penyimpangan yang mungkin timbul (Wulandari,
2007: 4).Menurut Wea (2010:6), tujuandarivalidasi metode adalah
untuk mengetahui sejumlah mana penyimpangan yang tidak dapat
dihindari suatu metode kondisi normal dimana seluruh elemen terkait
telah dilaksanakan dengan baik. Disamping itu dengan memvalidasi
metode dapat diperkirakan dengan pasti tingkat kepercayaan yang
dihasilkan oleh suatu metode pengujianmaupun dari metode instrument
yang digunakan. Untuk mendapatkan hasil yang paling akurat dari
suatu validasi, maka semua variabel dari metode harus
diperhitungkan, seperti jenis atau matriks contoh, cara penyiapan
contoh dan cara evaluasi data.Dalam proses validasi metode,
parameter-parameter unjuk kerja metode ditentukan dengan
menggunakan peralatan yang memenuhi spesifikasi, bekerja dengan
baik dan terkalibrasi secara memadai. Secara umum, validasi metode
mencakup penentuan yang berkaitan dengan alat dan metode (Nugroho,
2006: 101). Prosedur analisis yang harus divalidasi meliputi
beberapa jenis pengujian, yaituadanya pengotor, uji limit untuk
mengendalikankeberadaan pengotor, serta ujikuantitatif komponen
aktif atau komponenlain dalam produk obat-obatan. Selain
itu,terdapat 8 parameter validasi metode analisis,yaitu
spesifisitas, ketelitian, ketepatan,linearitas, kisaran, limit
deteksi, limit kuantitasi,dan ketangguhan, sedangkan parameteryang
harus dipenuhi untuk validasi metodeanalisis produk obat-obatan
meliputi spesifisitas,linearitas, kisaran, limit deteksi,
limitkuantitasi, ketelitian, dan ketepatan.a.LinieritasLinearitas
menunjukkan kemampuan suatumetode analisis untuk memperoleh
hasilpengujian yang sesuai dengan konsentrasianalit dalam contoh
pada kisaran konsentrasitertentu. Hal ini dapat dilakukandengan
cara membuat kurva kalibrasi daribeberapa set larutan standar yang
telahdiketahui konsentrasinya. Persamaan garisyang digunakan pada
kurva kalibrasidiperoleh dari metode kuadrat terkecil, yaituy=a+bx.
Persamaan ini akan menghasilkankoefisien korelasi (r). Koefisien
korelasiinilah yang digunakan untuk mengetahuilinearitas suatu
metode analisis. Penetapanlinearitas minimum menggunakan
limakonsentrasi yang berbeda. Nilai koefisienkorelasi yang memenuhi
persyaratan adalahlebih besar dari 0.9970 (ICH 1995 diacudalam Chan
2004).Linearitas juga dapat diketahui darikemiringan garis,
intersep, dan residual(Ermer &Miller 2005). Residual
menyatakanbesarnya penyimpangan yang terjadi antaranilai yang
terukur (y) dan nilai teoretis yangdihitung dari persamaan regresi
(). Plotantara residual dan konsentrasi dibuat untukmengetahui
distribusi residual secara statistik.Jika residual terdistribusi
secara normal(rerata mendekati nol dan berbentuk linear),maka
persamaan regresi dapat dikatakanmempunyai bentuk yang benar.
b.Limit Deteksi dan Kimit KuantitasiLimit deteksi (LD) merupakan
jumlah ataukonsentrasi terkecil analit dalam contoh yangdapat
dideteksi, namun tidak perlu diukursesuai dengan nilai sebenarnya.
Limitkuantitasi (LK) adalah jumlah analit terkecildalam contoh yang
dapat ditentukan secarakuantitatif pada tingkat ketelitian
danketepatan yang baik. Limit kuantitasimerupakan parameter
pengujian kuantitatifuntuk konsentrasi analit yang rendah
dalammatriks yang kompleks dan digunakan untukmenentukan adanya
pengotor atau degradasiproduk (ICH 1995). Limit deteksi dan
limitkuantitasi dihitung dari rerata kemiringangaris dan simpangan
baku intersep kurvastandar yang diperoleh.
c.KetelitianKetelitian prosedur analisis menyatakankedekatan
hasil dari sederet pengukuran yangdiperoleh dari contoh yang
homogen padakondisi tertentu (ICH 1995). Ketelitiandinyatakan
dengan 3 cara, yaitu keterulangan(repeatability), ketelitian
intermediet (intermedietprecision), dan ketertiruan
(reproducibility).Keterulangan adalah pengukuranketelitian dengan
metode, peralatan, danlaboratorium yang sama pada selang
waktutertentu. Ketelitian intermediet dilakukandalam laboratorium
yang sama, namundengan operator dan peralatan yang berbedaserta
pada hari yang berlainan. Ketertiruanmerupakan pengukuran
ketelitian yangdilakukan dengan peralatan, operator,
danlaboratorium yang berbeda.
d.KetepatanKetepatan suatu metode analisisdidefinisikan sebagai
kedekatan hasil yangditerima (baik sebagai nilai teoretis
maupunsebagai nilai rujukan yang diterima) dengannilai yang
diperoleh dari hasil pengukuran(ICH 1995 diacu dalam Chan
2004).Ketepatan dinyatakan sebagai perolehankembali yang ditentukan
dengan caramenambahkan sejumlah tertentu standar darianalit yang
akan diukur ke dalam contoh.Perolehan kembali (%) yang dapat
diterimamenurut ICH adalah 98102%. ICH jugamensyaratkan minimum 9
kali pengukuranpada 3 tingkat konsentrasi yang berbeda.
2.Spektrofotometer UltravioletSpektroskopi merupakan studi
antaraksi radiasi elekromagnetik dengan materi. Radiasi
elektromagnetik adalah suatu bentuk dari energi yang diteruskan
melalui ruang dengan kecepatan yang luar biasa. Dikenal berbagai
bentuk radiasi elektromagnetik dan yang mudah dilihat adalah cahaya
atau sinar tampak. Daerah sinar tampak mulai dari warna merah pada
panjang gelombang 780 nm sampai warna ungu pada panjang gelombang
380 nm (kisaran frekuensi 12800 26300 cm-1). Sedangkan daerah
ultraviolet berkisar dari 380 nm sampai 180 nm (kisaran frekuensi
2630 55500 cm-1). Energi pada daerah ultraviolet dan sinar tampak
berkisar dari 140 sampai 660 kj/mol (Mudzakir dan Soja Fatimah,
2008: 62-65).
Gambar 1. Daerah Spektrum Radiasi
Elektromagnetik(sumber:http://gusnil45mind.files.wordpress.com/2010/09/spektrum-warna.png)
Teknik spektroskopi pada daerah ultraviolet dan sinar tampak
biasa disebut spektroskopi UV-Vis atau spektrofotometer UV-Vis.
Dari spekrum absorbsi dapat diketahui panjang gelombang dengan
absorbansi maksimum dari suatu unsur atau senyawa. Konsentrasi
suatu unsur atau senyawa juga dengan mudah dapat dihitung dari
kurva standar yang diukur pada panjang gelombang dengan absorbansi
maksimum yang telah ditentukan. Radiasi yang berasal dari
ultraviolet-visibel diabsorbsi oleh molekul organik aromatik,
molekul yang mengandung elektron- terkonjugasi dan atau atom yang
mengandung elektron-n, menyebabkan transisi elektron dari orbit
terluarnyadari tingkat energi elektron dasar ke tingkat energi
elektron tereksitasi yang lebih tinggi. Besarnya absorbansi radiasi
tersebut sebanding dengan banyaknya molekul analit yang
mengabsorbsi dan dapat digunakan untuk analisis kuantitatif
(Satiadarma, dkk, 2004:87)Spektrofotometer Spectronic-20 merupakan
salah satu contoh spektrofotometer yang dapat digunakan untuk
mengukur serapan sinar ultraviolet dan sinar tampak oleh suatu
materi dalam bentuk larutannya. Jumlah cahaya yang diserap oleh
suatu zat dalam larutan berbanding lurus dengan konsentrasi zat
dalam larutannya. Hubungan antara serapan cahaya dengan konsentrasi
zat dalam larutan dapat dinyatakan dengan
persamaanLambert-Beerberikut ini:A = - log T = b cDimana: A =
absorbansiT = transmitansi = absorptivitas molar (L/mol cm)b =
panjang sel (cm)c = konsentrasi zat yang menyerap sinar (mol/L)
Dalam aplikasinya, terdapat beberapa persyaratan agar hukum
LambertBeer dapat digunakan, yaitu:a.Syarat konsentrasi,
konsentrasi larutan yang diukur harus encerb.Syarat kimia, zat
pengabsorbsi (zat yang dianalisis) tidak boleh terdisosiasi,
berasosiasi atau bereaksi dengan pelarut menghasilkan produk
lain.c.Syarat cahaya, radiasi cahaya yang digunakan untuk
pengukuran harus monokromatis (cahaya yang mempunyai satu macam
panjang gelombang).d.Syarat kejernihan, kekeruhan larutan yang
disebabkan oleh partikel-partikel koloid misalnya menyebabkan
penyimpangan hukum Beer.
Gambar 2. Spektronik 20 (Model Camspec M-106)(Sumber:
http://teknologikimiaindustri.blogspot.com/2011/01/uv-visible.html)Penyimpangan
dari Hukum Beer dapat disebabkan oleh variabel kimia atau
instrumen. Kegagalan Hukum Beer dapat disebabkan oleh perubahan
kadar molekul terlarut sebagai akibat asosiasi molekul terlarut
atau asosiasi antara molekul terlarutdan molekul pelarut, atau
disosiasi atau ionisasi. Penyimpangan lain dapat disebabkan oleh
pengaruh instrumen seperti radiasi polikromatis, lebar celah, atau
cahaya yang menyimpang(Hendayana, 1994: 176).Secara eksperimental,
sangat mudah untuk mengukur banyaknya radiasi yang diserap oleh
suatumolekul sebagai fungsi frekuensi radiasi. Suatu grafik yang
menghubungkan antara banyaknya sinar yang diserap dengan frekuensi
(atau panjang gelombang) sinar merupakan spektrum absorpsi.
Transisi yang dibolehkan (allowed transition) untuk suatu molekul
dengan struktur kimia yang berbeda tidaklah sama, sehingga spektrum
absorpsinya juga berbeda. Dengan demikian, sepektrum dapat
digunakan sebagai bahan informasi yang bermanfaat untuk analisa
kualitatif. Banyaknya sinar yang diabsorbsi pada panjang gelombang
tertentu sebanding dengan banyaknya molekul yang menyerap radiasi,
sehingga spectrum absorpsi juga dapat digunakan untuk analisa
kuantitatif (Gandjar dan Rohman (2007) dalam Sirait, 2009:
21).Beberapa hal yang harus diperhatikan dalam analisis
spektrofotometer ultraviolet, diantaranya:a.Pemilihan panjang
gelombang maksimumPanjang gelombang yang digunakan untuk analisis
kuantitatif adalah panjang gelombang dimana terjadi serapan
maksimum. Untuk memperoleh panjang gelombang serapan maksimum,
dilakukan dengan membuat kurva hubungan antara absorbansi dengan
panjang gelombang dari suatu larutan baku pada konsentrasi
tertentu.b.Pembuatan kurva kalibrasiKurva kalibrasi dibuat seri
dari larutan baku zat yang akan dianalisis dengan berbagai
konsentrasi. Masing-masing absorbansi larutan dengan berbagai
absorbansi diukur, kemudian dibuat kurva yang merupakan hubungan
antara absorbansi dengan konsentrasi. Bila hukum Lamber-Beer
terpenuhi maka kurva kalibrasi berupa garis lurus.c.Pembacaan
absorbansi sampel atau cuplikanAbsorbansi yang terbaca pada
spektrofotometer hendaknya antara 0,2 sampai 0,6. Anjuran ini
berdasarkan anggapan bahwa pada kisaran nilai absorbansi tersebut
kesalahan fotometrik yang terjadi adalah paling minimal.
Sama halnya seperti instrumentasi spektrofotometer ultraviolet
lainnya, spektronik 20 model Camspec M-106
Spectrophotometermemiliki instrumentasi yang terdiri dari lima
komponen utama, yaitu ;a.Sumber sinarSumber sinar yang ideal untuk
spektroskopi absorpsi harus memancarkan spectrum yang kontinyu,
berintensitas tinggi dan merata pada daerah panjang gelombang yang
digunakan. Sumber sinar dapat dibedakan menjadi dua jenis:1.Sumber
sinar ultravioletSpektrum kontinyu dalam daerah UV dihasilkan dari
eksitasi electron deuterium pada tekanan rendah. Harga lampu cukup
mahal dan umur pemakaiannya relatif pendek.2.Sumber sinar
tampakSumber sinar tampak biasanya lampu Tungsten atau pijaran
kawat Wolfram. Lampu ini tidak memerlukan perawatan khusus karena
relatif murah serta sinar yang dipancarkan tidak membahayakan (Soja
Siti Fatimah, 2003:6-7).
b.Wadah sampelWadah sampel yang digunakan padaumumnya disebut
sel atau kuvet.Kuvet harus mempunyai jendela dari bahan tembus
sinar pada daerah spectra pengamatan. Bahan yang sering digunakan
adalah: gelas, kuarsa dan plastik bergantung kebutuhan. Kuvet
adalah bagian dari jalan optik, sehingga sifat-sifat optiknya
sangat penting. Kuvet mudah terkontaminasi oleh penguapan pelarut,
mudah terkena debu dan lemak bila dipegang langsung dan mudah
tergores. Keadan tersebut dapat menurunkan sifat transmisi dan
akibatnya ketelitian menurun. Beberapa macam kuvet berdasarkan
berbagai penggolongannya dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Beberapa Macam Kuvet / Wadah
SampelNo.PenggolonganMacamKeterangan
1Berdasarkan pemakaiannyaKuvet permanendibuat dari bahan gelas
atau leburan silika
Kuvet dispossabledibuat dari teflon atau plastik
2Berdasarkan bahannya
Kuvet dari silikadipakai untuk analisis kuantitatif dan
kualitatif pada daerah pengukuran 1901100 nm
Kuvet dari gelasdipakai untuk analisis kuantitatif dan
kualitatif pada daerah pengukuran 3801100 nm karena bahan dari
gelas dapat mengabsorpsi radiasi UV
3Berdasarkan penggunaannya
Kuvet bermulut sempituntuk mengukur kadar zat alam pelarut yang
mudah menguap
Kuvet bermulut lebaruntuk mengukur kadar zat alam pelarut yang
tidak mudah menguap
c.MonokromatorMonokhromator adalah alat yang paling umum dipakai
untuk menghasilkan berkas radiasi dengan satu panjang gelombang.
Monokhromator untuk radiasi ultra violet, sinar tampak, dan infra
merah adalah serupa yaitu mempunyai celah (slit), lensa, cermin,
dan prisma atau grating.Terdapat dua macam monokhromator yaitu
monokhromator prisma Bunsen dan monokhromator grating Czerney
Turner.Pada dasarnya, komponen monokromator terdiri dari :1.Celah
masuk, berperan penting dalam terbentuknya radiasi monokromatis dan
resolusi panjang gelombang.2.Filter, berfungsi untuk menyerap warna
komplementer sehingga cahaya yang diteruskan merupakan cahaya
berwarna yang sesuai dengan panjang gelombang yang
dipilih.3.Prisma, berfungsi untuk mendispersikan radiasi
elektromagnetik sebesar mungkin supaya didapatkan resolusi yang
baik dari radiasi polikromatis.4.Kisi, fungsinya sama seperti
prisma, namun karena bentuk kisi adalah konkaf, maka dapat
memberikan resolusi radiasi yang lebih baik.5.Celah keluar, tempat
keluarnya sinar monokromatis yang selanjutnya akan diteruskan
menuju sampel.
d.Detektor dan TransducerPeralatan detektor telah didukung oleh
transducer yang mampu mangubah energi radiasi menjadi isyarat
listrik yang nantinya diperkuat oleh amplifier sehingga mampu
menggerakkan jarum pembacaan atau pena rekordermelalui meter dalam
bentuk % transmitansi (%T) atau
absorbansi..Detektorsendiriberfungsi untuk mendeteksi cahaya yang
melewati larutan.Dikenal 2 macam detektor yaitu detektor foton dan
detektor panas. Detektor foton termasuk (1) sel photovoltalc, (2)
phototube, (3) photomultiplier tube, (4) detektor semi konduktor,
dan (5) detektor diode silicon. Detektor panas biasa dipakai untuk
mengukur radiasi infra merah, termasuk thermocouple dan
bolometer.
e.RekorderSignal listrik dari detector biasanya diperkuat lalu
direkam sebagai spektrum yang berbentuk puncak-puncak. Plot antara
panjang gelombang dan absorbansi akan dihasilkan spektrum. Rekorder
inilah yang berperan dalam merekam hasil senyawa yang telah masuk
detector ( Tim Kimia Anorganik, 2008:67-68).
Gambar 3. Skema Diagram Instrumen Spektrofotometer(Sumber:
http://www.tarleton.edu/Faculty/alow/1084exp2.htm)
Pada dasarnya, langkah utama di dalam analisis spektrofotometri
meliputi penetapan kondisi kerja dan pembuatan suatu kurva
kalibrasi yang menghubungkan konsentrasi dengan absorbansi.Dalam
hal pemilihan panjang gelombang, pengukuran absorbansi
spektrofotometri dilakukan pada suatu panjang gelombang yang sesuai
dengan absorbsi maksimum karena perubahan absorbansi permit.
Konsentrasi besar pada titik ini, artinya absorbansi larutan encer
masih terdeteksi. Selain itu, terdapat pula faktor-faktor yang
mempengaruhi absorbsi; meliputi jenis pelarut, pH larutan, suhu,
konsentrasi elektrolit yang tinggi, dan adanya zat pengganggu.
Pengaruh-pengaruh ini diketahui ; kondisi analisis harus dipilih
sedemikian hingga absorbansi tidak akan dipengaruhi sedikitpun.
Kebersihan juga akan mempengaruhi absorbsi termasuk bekas jari pada
dinding tabung harus dibersihkan dengan kertas tisu dan hanya
memegang bagian ujung atas tabung sebelum pengukuran. Setelah
menetapkan kondisi untuk menganalisis (seperti panjang gelombang
yang sesuai), kemudian menyiapkan kurva kalibrasi dari sederet
larutan standar sebagai penentuan hubungan antara absorbansi dan
konsentrasi (Sumar Hendayana, 1994:176).Untuk berbagai bahan
farmasi, pengukuran spectrum dalam daerah ultraviolet dan cahaya
tampak dapat dilakukan dengan ketelitian dan kepekaan yang lebih
baik daripada dalam daerah inframerah dekat dan inframerah. Apabila
larutan diamati dalam kuvet 1 cm, kadar lebih kurang 10 g specimen
per mL, sering menghasilkan serapan sebesar 0,2 hingga 0,8 di
daerah ultraviolet atau cahaya tampak. Di daerah inframerah atai
inframerah dekat, diperlukan kadar masing-masing sebesar 1 mg
hingga 10 mg per mL dan hingga 100 mg per mL, untuk menghasilkan
serapan yang memadai; untuk daerah spektrum ini biasanya dipakai
sel dengan panjang 0,01 mm hingga 3 mm.Spektrum ultraviolet dan
cahaya tampak suatu zat pada umumnya tidak mempunyai derajat
spesifikasi yang tinggi. Walaupun demikian, spektrum tersebut
sesuai untuk pemeriksaan kuantitatif dan untuk berbagai zat zat
spektrum tersebut bermanfaat sebagai tambahan untk identifikasi
(Farmakope Indonesia, 1995: 1061).
3.Parasetamol (Asetaminofen)Parasetamol merupakan zat aktif pada
obat yang banyak digunakan dan dimanfaatkan sebagai analgesik dan
antipiretik. Selain itu, zat aktif ini biasa digunakan sebagai
alternatif pengganti aspirin yang dapat diperoleh tanpa adanya
resep dari dokter sekalipun ( Suzen, et al: 1998:94).Parasetamol
yang juga dikenal sebagai asetaminofen telah digunakan secara
klinis sejak tahun 1893. Parasetamol tergolong kedalam kelompok
besar obat antiinflamasi nonsteroid (Non Steroid Antiinflamatory
Drugs/NSAID)yang merupakan antipiretik efektif dengan dosis yang
relatif rendah. Sedangkan kemampuan efisiensi analgesiknya sedikit
lebih rendah bila dibandingkan dengan NSAIDs (Munsterhjelm, 2006:
15).Asetaminofen (parasetamol) sebagai analgesik, digunakan luas
pada penderita sakit gigi dan sakit kepala. Efek penggunaan
parasetamol mulai dapat dirasakan setelah 30 menit konsumsi obat
dan kerjanya berlangsung selama 3 jam. Asetaminofen dapat
berkonjugasi dengan asam glukuronat atau sulfat dalam kelompok
hidroksil fenolik, yang kemudian terjadi penghilangan konjugatnya
di dalam lambung. Pada dosis kecil, sebagian konjugat dioksidasi
menjadi N-asetil-benzoquinonimine . Konsumsi dosis yang tinggi
(sekitar 10 g) dapat menyebabkan kerusakan pada hati. Kerusakan
pada hati dapat dihindari dengan pemberian N-asetilsitein yana
diberikan secara intravena. Konsumsi asetaminofen yang rutin dapat
menyebabkan gangguan fungsi ginjal (Lullman, et al, 2000:
198).Dalam Farmakope Indonesia Edisi IV (1995:649-650), parasetamol
memiliki beberapa sinonim yaitu; paracetamolum, asetaminofen dan
4-hidroksiasetanilida. Dengan rumus kimia C8H9NO2dan berat molekul
151,16 , senyawa ini berwujud serbuk hablur berwarna putih, tidak
berbau dengan rasa sedikit pahit. Parasetamol bersifat mudah larut
dalam etanol, air mendidih serta dalam natrium hidroksida 1
N.Identifikasi dari senyawa ini dapat dilakukan dengan 3 cara,
yaitu:a.InframerahSpektrum serapan inframerah zat yang telah
dikeringkan di atas pengering yang cocok dan didispersikan dalam
kalium bromide P menunjukkan harga maksimum hanya pada panjang
gelombang yang sama seperti pada parasetamol BPFI.b.Serapan
ultravioletSpektrum serapan ultraviolet larutan (1 dalam 200.000)
dalam campuran asam klorida 0,1 N dalam methanol P (1 dalam 100),
menunjukkan maksimum dan minimum pada panjang gelombang yang sama
seperti pada parasetamol BPFI.c.Kromatografi Lapis Tipis (KLT)Dalam
uji ini, digunakan larutan 1 mg per mL dalam methanol P dan fase
gerak diklorometana P-metanol P.
Gambar 4. Struktur Kimia Parasetamol(Sumber: Farmakope Indonesia
Edisi IV, 1995: 649)
Cara kerja parasetamol sebagai analgesik ialah bekerja dengan
meningkatkan ambang rangsang rasa sakit. Sedangakan sebagai
antipiretik, parasetamol diduga bekerja langsung pada pusat
pengatur panas di hipotalamus. Indikasi dari parasetamol ialah
kemampuannya dalam meringankan rasa sakit pada keadaan sakit
kepala, sakit gigi dan menurunkan demam, dengan kontradiksi
penderita gangguan fungsi hati yang berat dan penderita
hipersensitif terhadap zat aktif dari senyawa ini. Efek samping
yang biasa terjadi dari penggunaan bahan aktif ini pada penggunaan
jangka lama dan dosis besar dapat menyebabkan kerusakan hati dan
reaksi hipersensitivitas (http://www.actavis.co.id).Parasetamol
yang dijual dengan berbagai nama dagang beberapa diantaranya adalah
Sanmol, Pamol, Fasidol, Panadol, Itramol dan lain-lain. Menurut
peraturan Depkes, semua obat yang dijual bebas harus menuliskan
nama generic dibawah nama dagangnya yang dicantumkan di bawah
kandungan. Namun, patut diingat bila gejalanya hanya demam, tidak
dibenarkan untuk menggunakan parasetamol yang dicampur dengan bahan
aktif lainnya, misalnya untuk pilek, batuk, dan sebagainya.
Tambahan bahan lain itu selain tidak ada gunanya, juga menjadikan
harga obat menjadi lebih mahal. Belum lagi bila menimbulkan efek
sampingan.Secara kimia, parasetamol merupakan derivat dari para
amino fenol. Di Indonesia penggunaan parasetamol sebagai analgesik
dan antipiretik, telah menggantikan penggunaan salisilat. Dalam
sediannya, parasetamol sering dikombinasikan dengan kafein yang
berfungsi meningkatkan efektifitasnya tanpa perlu meningkatkan
dosisnya.Sifat antipiretik dari parasetamol disebabkan oleh gugus
amino benzene dan mekanismenya diduga berdasarkan efek sentral.
Beberapa reaksi alergi yang dilaporkan sering muncul antara lain:
kemerahan pada kulit, gatal, bengkak, dan kesulitan bernafas/sesak
(Ishak, 2009 dalamhttp://ishak.unpad.ac.id/?p=886).G.Metodologi
Penelitian1.Alat dan BahanAlatSpektrofotometer UV-VIS(Camspec
M-106),neraca analitik, spatula, labu ukur 10, 25, 50, 100, 250dan
500mL, batang pengaduk,corong gelas, beaker glass, kertas saring,
botol semprot, pipet volumetri 5 dan 10 mL.BahanParasetamol
murni,Methanol,Aquadesdan sampel parasetamol.
2.Diagram Alir Prosedur Kerja
3.Tahapan Kerja Analisisa.Larutan parasetamol standar1.larutan A
(250 mg/L)menimbang 0,0625 g parasetamol murnimelarutkannya dengan
10 mL methanolmenyaring larutan parasetamolmasukkandalam labu ukur
250 mLmenambahkan aquadest sampai tanda batas
2.Larutan Bmemipet 50 mL larutan A dan mengencerkannya dengan
aquades sampai 250mL dalam labu ukur.3.Pembuatan larutan standar
kerjamengambil larutan B sebanyak 5,00 ; 10,00 ; 15,00 ; 20,00 ;
dan 25,00 mLmemasukannya masing-masing kedalam labu ukur 100 mL,
lalu menambahkan aquadest pada masing-masing labu ukur samapi tanda
batasmengukur masing-masing larutan standar pada maksimal (200-300
nm)mengukur masing-masing sampel pada maksimalmenghitung
konsentrasi sampel dalam mg.
b.Larutan SampelMenimbang 120 mg sampel yang mengandung
parasetamolMelarutkannya dalam 10 mL methanolMenyaring
larutanMasukkan kedalam labu ukur 500 mLDiencerkan dengan aquades
sampai tanda batasMemipet 5 mL larutan, kemudian memindahkannya ke
dalam labu ukur 100 mLDiencerkan kembali dengan aquades sampai
tanda batasMenghomogenkan larutanUkur serapan larutan uji dan
larutan baku pada panjang gelombang serapan maksimum lebih lebih
kurang 244 nm, terhadap air sebagai blanko (Farmakope Indonesia
Edisi IV, 1995: 650)
H.Jadwal KegiatanNoJenis KegiatanPelaksanaan Bulan
FebruariMaretAprilMeiJuni
1.Studi literatur dan penyusunan laporan
2.Persiapan Alat dan bahan
3.Analisis Uji Standar Parasetamol dan Sampel
4.Analisis Uji Parameter-parameter validasi
5.Perhitungan dan Analisis Statistik
6.Penyusunan Laporan
I.Daftar Pustaka
Achmad, Kukuh. S. (2000).Validasi Metode Uji. Pusat Standarisasi
dan Akreditasi Laboratorium BSN Jakarta: tidak diterbitkan.
Anonim. (2004). Metode Pengujian, Metode Kalibrasi dan Validasi
Berdasarkan SNI 19-17025-2000.Info Mutu(November 2004).
Chan, C. C,. Lam, Herman. Lee, Y. C. and Zhang, Xue-Ming.
(2004).Analytical Method Validation and Instrument Performance
Verification.Canada: John Wiley & Sons.
Dwiangga, Septyanitia. (2010).Validasi Metode Penetapan Kadar
Asam Asetilsalisilat dalam Sediaan Obat Memanfaatkan Sinar
Reflektan Terukur dari Bercak yang Dihasilkan.Skripsi Sarjana Pada
Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta: tidak
diterbitkan.
Ermer, J.H. and Miller, McB. (2005).Method Validation in
Pharmaceutical Analysis.A Guide to Best Practice. Weinheim:
WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA.
Farmakope Indonesia. (1995).Farmakope Indonesia Edisi IV.
Jakarta: Departemen Kesehatan.
Fatimah, Soja Siti. (2003).Kalibrasi dan Perawatan
Spektrofotometer UV-Vis. Makalah disampaikan pada program
pengabdian pada masyarakat Jurusan Pendidikan Kimia FPMIPA UPI
Bandung: tidak diterbitkan.
Harmita. (2004). Petunjuk Pelaksanaan Metode dan Cara
Perhitungannya.Majalah Ilmu Kefarmasian(Desember 2004).
Hendayana, Sumar. (1994).KIMIA ANALTIK INSTRUMEN. Semarang: IKIP
Semarang Press.[ICH] International Conference on Harmonization.
(2005).Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology
Q2(R1)[terhubung berkala].www.ich.org. [02 Maret 2011].
[ISO] International Standart Operational. (2005).ISO/IEC 17025
(Versi Bahasa Indonesia) Persyaratan Umum Kompetensi Laboratorium
Pengujian dan Laboratorium Kalibrasi. [terhubung berkala]. [15 Mei
2005]
Lullman, Heinz. Mohr, Klaus. Ziegler, Albrech. and Bieger,
Detlef. (2000).Color Atlas of Pharmacology: 2ndedition, revised and
expanded. New York: Thieme.
Mudzakir, Ahmad. Kusrijadi, Ali. dan Fatimah Siti Soja.
(2008).Perangkat Perkuliahan (Satuan Acara Perkuliahan, Bahan Ajar,
dan Bahan Presentasi) Praktikum Kimia Anorganik. Jurusan Pendidikan
Kimia FPMIPA UPI Bandung: tidak diterbitkan.
Nugroho, Arif. Wahyono, Hendro. Dan Fatimah, S. (2006). Validasi
Metode Alat ICP-AES Plasma 40 untuk Pengukuran Unsur CR, P,
Ti.Jurnal Pusat Teknologi Bahan Bakar Nuklir, BATAN.12, (2),
100-107.
Sumardi. (2002).Validasi Metode Pengujian. Makalah disampaikan
pada pelatihan asesor laboratorium penguji, Pusat Standarisasi dan
Akreditasi Sekretariat Jenderal Departemen Pertanian.
Suryani, Yani. (2004).Validasi Metode Analisis Sorbat dan
Benzoat dengan Kromatografi Gas. Skripsi Sarjana pada FPMIPA UPI
Bandung: tidak diterbitkan.
Suzen.Et al. (1998) Quantitation of Acetaminofen in
Pharmaceutical Formulations Using High-Performance Liquid
Chromatography.J. Fac. Pharm. Ankara. 27, (2), 93-100.
Tahrir, Iqmal. (Tanpa Tahun).Arti Penting Kalibrasi pada Proses
Pengukuran Analitik Aplikasi pada Penggunaan pH Meter dan
Spektrofotometer UV-Vis.Paper Seri Manajemen Laboratorium Jurusan
Kimia FMIPA UGM Yogyakarta: tidak diterbitkan.
Wulandari, Niken. (2007).Validasi Metode Spektrofotometri
Derivatif Ultraviolet untuk Penentuan Reserpin dalam Tablet Obat.
Skripsi Sarjana pada Departemen Kimia FMIPA IPB Bogor: tidak
diterbitkan.
