lp2 aglutinare ro

  • View
    526

  • Download
    3

Embed Size (px)

Text of lp2 aglutinare ro

REACTIA DE AGLUTINARE

Aglutinarea este un test serologic care se bazeaza pe mecanismul de legare a Ac la un Ag particulat rezultand un conglomerat vizibil cu ochiul liber (aglutinat)

REACTIA DE AGLUTINAREcalitativa/semicantitativa > titrare: indicii despre concentratia relativa a Ag/Ac in proba

se utilizeaza in urmatoarele scopuri: a) dg serologic al bolilor infectioase b) detectarea Ac specifici tisulari in bolile autoimune c) detectarea prezentei DAg pe celule

se desfasoara in 2 etape:

a) combinarea specifica a Ac cu Ag pe suprafata celule /particule b) formarea agregatelor vizibile aleAg particulat

d)

tipizarea transfuziei

sangelui

in

vederea

COMPONENTELE ESENTIALE ALE TESTELOR SEROLOGICE

ANTIGENELE (Ag)

ANTICORPI (Ac)

Ag si Ac IN REACTIA DE AGLUTINARE IMUNAAg sunt:

Ac sunt (aglutinine): participa la reactie > dilutii seriate ale serului (bv) au capacitate de aglutinare diferita (~ izotipuri)ex. Ig M dpdv functional sunt decavalente teoretic si pentavalente practic

particulate Cunoscute (laborator) in cantitate constanta

TITRULTITRUL aglutinant al serului = inversul celei mai mari dilutii care produce o aglutinare acceptabilaex: daca dilutia de 1/512 a serului produce o aglutinare evidenta, >la dilutia imediat urmatoare (1/1024) aglutinarea = absenta, >titrul aglutinant este de 512 U, = serul imun contine 512 unitati aglutinante. Titrul aglutinant- exprima in: nr de unitati aglutinante de Ac/unitata de volum.

FORMAREA COMPLEXELOR IMUNEDimensiunea unui CI depinde de:

valenta Ag concentratia Ac.

Ac in exces > epitopii Ag se satureaza >> CI de dimensiuni mici Ag, Ac:concentratii echivalente: o retea extinsa de CI Ag in exces > situsurile de combinare ale Ac se satureaza > CI de dimensiuni mici

FACTORI CARE INFLUENTEAZA REACTIA DE AGLUTINARE

densitatea si dispozitia spatiala a D Ag de pe suprafata celulelor / particulelor potentialul electric al reactantilor > variatiile de pH prezenta electrolitilor in mediul de suspensie ( la conc fiziologica de NaCl) variatiile de temperatura durata incubatiei:la temp camerei

*pt aglutinarea bacteriana incubatia este de 1-2 ore la 37C;Citirea finala a rezultatelor se face dupa 24 ore

REACTIA DE AGLUTINAREPrincipiul reactieiAg particulat + Ac >> aglutinare Formarea aglutinatului:

Tipuri majore de aglutinare:Aglutinarea bacteriana Hemaglutinarea:

Ag se leaga la Fab a 2 Ac >> punti intre Ag

Imuna Pasiva virala

REACTIA DE AGLUTINARE METODOLOGIE

Ag particulat (vol. Cunoscut; orig-lab) (Ac?) Ser pacient (vol fix in dilutii seriate (scala geom= 2). omogenizare reactanti > incubare ~2h. Aglutinarea este vizibila cu ochiul liber = Ac sun prezenti in serul bv=Dg+

!* La dilutii mari ale serului nu mai obtinem aglutinarea = Ag particulatramane in suspensie.

REACTIA DE AGLUTINARE APLICATIIAGLUTINAREA BACTERIANA

se foloseste in laborator pt a stabili titrul de Ac serici in bolile infectioase exista 2 forme: flagelate in cursul careia se formeaza flocoane bacteriene mari si laxe;

EX: tifos exantematic, infectii cu Brucella,enterobacterii- Salmonella

a) aglutinare de tip H (hauch = val): produsa de o suspensie de celule bacteriene *Ag flagelare aglutineaza (flagelilor bacterieni) interactioneaza cu Ac specifici b) aglutinarea de tip O sau somatica (ohne hauch = fara val): produsa de bacteriile imobile; se formeaza conglomerate celulare dense, compacte, in care celulele bacteriene reactioneaza prin intermediul Ag somatice reprezentate de LPS (lipopolizaharide =componente majore ale suprafetei celulelor Gram -). * Ag somatice interactioneaza cu Ac specifici serici.

AGLUTINAREA BACTERIANA TESTUL WIDALUtilizare: Dg serologic al infectiilor cu Salmonella Typhi

Georges-Fernand-Isidor Widal si Sicard in 1896 au descris Reactia WidalAcest test si-a dovedit valoarea de dg in cazurile in care nu se puteau obtine cultivarea celulelor

TESTUL WIDALUtilizare: dg febrei tifoide Principiul testului Widal: Ac (ser bv) reactioneaza cu Ag (pe suport solid-lab)>aglutinare vizibila

TESTUL WIDAL

poate fi facut in tub:dilutii seriate > titrul

pe lama: calitativa

DG SEROLOGIC AL INFECTIILOR CU SALMONELLAserotipizareidentificarea tipurilor serologice de Salmonella utilizandu-se seruri imune cu specificitate cunoscuta prin reactia de aglutinare in tub sau pe lama

serodiagnostic al febrelor tifoide/paratifoide cu un set de Ag standardizate: Reactia de aglutinare = T Widal in tuburi

SERODIAGNOSTIC: REACTIA DE AGLUTINARE (T WIDAL)Materiale necesare: 1) Ag standardizate O, H: suspensie celulara alcoolata O ( 500 mil cel/ml)si suspensie celulara formolata pt H (500 mil/ml) 2) Dilutii seriate ale serurilor de la bolnavi * suspensiile antigenice Vi sunt alcoolate 2) dupa infectie cu tulpini flagelate Evidentiaza Ac anti-H care sunt puternic stimulati 1) prin vaccinare specifica

AGLUTINAREACUM APARE DUPA REACTIE

Aglutinarea O este granulara Aglutinarea H este slaba si floculara

Citirea si interpretarea rezultatelorAglutininele anti-H si anti-O apar in ser in prima saptamana de boala; titrul lor creste pana la maxim in zilele 16-29 de la debut si ramane ridicat in convalescenta si o scurta perioada dupa vindeare.

Aglutininele anti-H au un titru inalt ( 1/1000-1/5000) iar aglutininele anti-O : 1/250-1/1000.

reactie pozitiva: >1/500 pt aglutininele anti-O > 1/1000 pt aglutininele H.

AGLUTINAREA-REMEMBER

este o reactie Ag-Ac Ac specifici din ser aglutineaza bacteria at c sunt prezenti Ag correspunzatori Rezultatul este observabil ca o solutie particulata/ conglomerate vizibile Gradata dupa intensitate ca fiind 1+, 2+, 3+, si 4+ 4+ reprezinta un background clar cu o aglutinare de 100% aglutinarea O este granulara aglutinarea H este slaba si floculara

PROBLEME CU TESTUL WIDAL

detecteaza doar posibile aglutinari nespecifice

Rezultatele aglutinarii: Titrurile > 1:100= Ac+ pt Ag somatice si flagelare Titrurile > 1:40= Ac + pt Ag Vi*Titrurile pozitive variaza de la un laborator la altul!

Ac aglutinanti

CAUZE DE REZULTAT FALS-NEGATIV IN T. WIDALAg bacteriene nu sunt expuse la suprafata si nu sunt accesibile reactiei cu Ac reactie incrucisata cu Ag nespecific in cazul in care Ag impartasesc un epitop similar/ identic

TESTAREA GRUPELOR SANGVINEDIRECT / FORWARD TYPING BETH-VINCENT TEST Testare pt Ag RBC pacient = Ag ? necunoscute seruri (Ac) cunoscuti INDIRECT/REVERSE TYPING (SIMONIN TEST) Testare pt Ac Ag cunoscut (celula) Ac ? necunoscut (serul pacientului)serul este combinat cu celule cu Ag cunoscut intr-o proportie de 2:1

METODA: pe lama/in tub

METODA: pe lama/in tub

Grup O, Rh+ Fara aglutinare cu serul anti-A si anti-B Da aglutinare cu serul anti Rh

Grup B, RhFara aglutinare cu serul anti-A si anti-Rh Da aglutinare cu serul anti-B

SISTEMUL DE GROUP SANGVIN Rh CLASIFICARE/NOMENCLATURAWiener IPOTEZA ALELELOR MULTIPLE 5 Ag: Rho, rh, rh, hr, hr Rosenfeld Sistem Numeric Rh1 - Rh5 Fischer & Race 3 allele: D/d, C/c and E/e 5 Ag: D, C, E, c, e d fara locus D fara produsi antigenici Antigenele RhSistem complex reprezentat de cateva subunitati Ag : A, B, C, D, E.

Contine 3 proteine membranare integrale RhD/Rho ( important) RhCcEe Rh> Asociate cu GP:(Rh50, RhAg) Antigenul D consta intr-o proteina: RhD cel mai immunogenic > urmat de c, E, C e

TESTARE RhTestarea pt Ag Rho (D) :

Folosim ser uman RBC (Ag=parte integrala din membrana, mult mai putin numeroase decat Ag ABO) Mediu de reactie (proteine)

Rh-varianta DuWeak D Antigen (Du) Varianta Rho > Aglutinare slaba/absenta a RBC cu serul anti-D poate fi detectat doar cu reactivul anti-globulina umana (R Coombs) (anti-D bovin) Varianta slaba este produsa in 3 situatii: Lipseste o parte din Ag D Gena D este translocata pe cromozomul opus genei C (+) impiedicare sterica Mostenirea unei gene ce codifica mai putin Ag D

HEMAGLUTINAREA PASIVAOBIECTIVE: detectarea titrurilor scazute de Ac serici (ex Rh Du) PRICIPIU: Ac (bv ser) reactioneaza cu Ag adsorbit pe RBC > hemaglutinatinare *(RBC = pasive, nu participa to reactie) COMPONENTE: Suport solid pt Ag solubil (cunoscut) RBC = celule indicator Particule de latex Carbune Bentonita Serul > Ac necunoscut

HEMAGLUTINAREA PASIVA APPLICATII: TESTUL ANTIGLOBULINICTESTUL ANTIGLOBULINIC TESTUL ANTI-HUMAN GLOBULIN (AHG), TEST COOMBS

UTILIZARI: Detectarea Ac (IgG) anti-eritrocitari cu specificitate pt sistemul ABO/Rh

PRINCIPIUL TESTULUI ANTIGLOBULINICMetoda:1) RBC > sensibilizate prin acoperirea cu IgG / complement > Nu vor aglutina direct cand sunt centrifugate. Pt a obtine aglutinarea: 2) + alt Ac > reactioneaza cu RBC prin Fc (IgG) sau C3b/C3d 3) > "punte" intre : Ac /C' adaugat si IgG de pe RBC > aglutinare.

RBC acop cu IgG

RBC acop cu Complement

PRINCIPIUL TESTULUI ANTIGLOBULINIC(II)Avem nevoie de: Reactiv anti-globulinic (Reactiv Coombs ) care se va lega de Fc (IgG )atasata la RBC C3b/C3d atasata la RBC. Pt a obtine reactivul anti-globulinic (Coombs): Iepuri > immunizati cu gamma globulina umane produc Ac (reactiv AHG ) fata de IgG / C3d.

TIPURI DE TESTE ANTIGLOBULINICEPrima data Coombs si Mourant au detectat acesti Ac in vitro (prin Testul Antiglobulinic Indirect) in special cei legati de sistemul Rh, care pot produce boala hemolitica a nounascutului. Exista doua tipuri de teste antiglobulinice: 1. Direct Antiglobulin Test (DAT) detecteaza in vivo Ac /C3 de pe RBC 2. Indirect Antiglobulin Test (IAT) utilizeaza o etapa suplimentara de incubatie la 37oC > detecteaza Ac s