FRAKSINASI

3

Fraksinasi

Penyederhanaan komponen/pemisahan

komponen dalam ekstrak

Metode Fraksinasi

Ekstraksi cair-cair

Kromatografi

PEMISAHAN

ADALAH LANGKAH KIMIA ATAU FISIKA

UNTUK LEBIH MENYEDERHANAKAN

MATRIK SAMPEL

PEMURNIAN

ADALAH LANGKAH KIMIA ATAU FISIKA

UNTUK MENGELUARKAN ANALIT DALAM

KEADAAN MURNI DARI MATRIK SAMPEL

PEMISAHAN DAN PEMURNIAN

Pemisahan Komponen-komponen yang memanfaatkan perbedaan sifat-sifat kimia yang besar dari komponen-komponen yang akan dipisahkan

Pemisahan Kimia

Pemisahan komponen-komponen yang memanfaatkan perbedaan sifat-sifat fisika yang kecil dari komponen-komponen yang akan dipisahkan

Pemisahan Fisikia

Sistem Keseimbangan 2 Fasa

Sistem Keseimbangan Statis

Sistem keseimbangan distribusi analit pada 2 fasa tidak saling campur dan kedua fasa tidak terjadi perubahan pergeseran permukaan

Sistem Keseimbangan Dinamis

Sistem keseimbangan distribusi analit pada 2 fasa tidak saling bercampur dan kedua fasa mengalami perubahan pergeseran permukaan

Sistem Kesetimbangan

STATIS DINAMIS

Fasa Gerak

Mikhail Semyonovich Tsvet (18721919)

Beberapa Pengertian Umum Pada Teknik Kromatografi

Waktu Tambat (Absolut Retention Time, Relative Retention (tr), and Mobile Phase Retention time)

Daya Pemisahan [(Resolution (Rs), Selectivity () dan tranzah (tz)]

Persamaan Van Deemter

Jarak Setara Plat Teoritis (High Equivalent of Theoritical Plate /HETP)

Bilangan Plat [Theoritical Plate Number (N)]

Waktu Tambat Faktor Kapasitas k` (Mass Distribution Ratio)

tR- t0 t0

k`=

Resolusi

- Waktu retensi

- Lebar Puncak

2 komponen yg mempengaruhi Resolusi

Persamaan Van Deemter

Jarak Setara Plat Teori [High Equivalent of Theritical Plate (HETP)]

Bilangan Pelat Teori [Theoritical Plate Number (N)]

Kromatografi (Chromato & Graphein)

Adalah teknik pemisahan fisik campuran komponen berdasarkan perbedaan migrasi dari masing-masing komponen pada fasa diam dibawah pengaruh fasa gerak

Michael Semenovic Tswett (1872-1919)

1. KROMATOGRAFI ANALISIS

2. KROMATOGRAFI PREPARATIF

Penggolongan Kromatografi

Berdasarkan Penyangga

Berdasarkan Fase Gerak

Berdasarkan Mekanisme

Berdasarkan Penyangga

Kr. Kolom

Kr. planar

Berdasarkan Fase Gerak

Kromatografi Gas

Kromatografi Cair

Kromatografi Superkritis

Berdasarkan Mekanisme

ADSORPSI

Terjadi adsorpsi semi permanen, analisis

Sistem Keseimbangan distribusi tidak ideal

Terjadi pengekoran (Tailing)

Resolusi Kromatogram kurang baik

PARTISI

Sistem keseimbangan distribusi ideal

Bentuk kromatogram bagus : Gausian peak

Resolusi Kromatogram bagus, memenuhi persyaratan SST (System Suitability Test) Rs = 1-1,5 dimana analit terpisah 98,00% sampai 99,70%

FASA SUNGSANG

Boscot (1974) dan Boldingh (1948) berhasil memisahkan asam-asam lemak rantai panjang dengan memakai fasa diam bahan karet (non

polar) dan fasa mobil polar : air-metanol-aseton

(Reserved Phase)

FASA DIAM POLAR

(Normal Phase)

FASA DIAM NONPOLAR

(Reversed Phase)

Pembuatan Fase Sungsang

Fasa diam silika (Polar) direaksikan

dengan TMCS (Trimethylchlorosilan), terjadi silikat molekul yg non

polar

Mekanisme Pemisahan Pada Fasa Balik

Terjadinya perbedaan hydrophobicity dari analit-analit yang dipisahkan pada sistem keseimbangan cergas fasa diam dan fasa mobil

Efek hydrophobicity dari satiap analit dipengaruhi oleh transfer termodinamik analit antara : air dan silikat molekul fasa sungsang yg non polar

SOLPHOPHOBIC THEORY :

Bounded Hydrophobic Group

Methyl -CH3 RP-1

Ethyl -CH2-CH3 RP-2

Buthyl -CH2-(CH2)2-CH3 RP-4

Octhyl -CH2-(CH2)8-CH3 RP-10

Octadecyl -CH2-(CH2)16-CH3 RP-18

Triacontyl -CH2-(CH2)28-CH3 RP-30

Phenyl -CH2-(CH2)x-CH3

Perfluoro -CH2-(CF2)x-CF3

Kromatografi Penukar Ion

Penukar anion-kation

Penukar kation bisa berupa resin dengan penukar resin gugus asam kuat SO3H atau resin dengan gugus asam lemah COOH

Penukar anion bisa berupa resin dengan gugus basa kuat yaitu gugus amonium kuartener NH atau dengan gugus basa lemah amina primer, sekunder atau tersier

Penukar kation

Penukar anion

Kromatografi Eksklusi Ukuran/permeasi/filtrasi

Pemisahan solut berdasarkan ukuran molekul solut

Fase diam

Fase diam/gel: contoh, sephadex, sepharosa, fractogel, styragel

Sifat gel yang penting u diperhatikan:

1. bentuk, volume, diameter pori, distribusi ukuran bentuk

2. Tahan secara mekanik

3. Resisten sec. kimia dan biologi

4. Inert

5. Tahan terhadap pemanasan

;

Kromatografi

Gas

Gas Padat

Gas Cair Kromatografi

Superkitik

Cair

Kolom

Cair Padat

Cair Cair

Ion Exchange

Size Exlucion

Gel Permiable

Gel Filtration

Inclusion

Planar

KLT

KKT

Kromatografi Gas

Kr. Kolom

Kr.adsopsi dan partisi

Sampel harus mudah menguap/dibuat derivat yang mudah menguap

Kromatografi cair superkritis

Kr kolom

Kr. Partisi

Sampel harus larut dalam fase gerak CSK

Kromatografi Cair

Kr.kolom (klasik dan penampilan tinggi) dan planar

Kr. Adsopsi , Partisi, Pertukaran ion, Pasangan ion, Penekanan ion, Eksklusi ukuran, Afinitas, Fase terikat

Kromatografi Lapis Tipis

Mekanisme: adsorpsi

Adsorben: silika gel, alumina, selulosa (partisi)

Penyangga planar, penyangga: plat kaca, aluminium, plastik (jarang digunakan)

Untuk silika gel: bersifat polar

Silika gel G, s.g S, s.g GF254, s. g. H, s.g N

Untuk alumina, kurang polar dibanding silika gel

Terdapat KLT analitis dan KLT preparatif

Pengembang KLT

Pengembangan tunggal

Pengembangan berganda

Pengembangan 2 dimensi

Rf

Penampak bercak universal: Asam sulfat

Contoh; asam sulfat 10% dalam metanol

Senyawa polar sulit dipisahkan dengan KLT silika gel

Kromatografi Kertas

Mekanisme: partisi

Fase diam: lapisan tipis air yang menempel pada kertas

Fase gerak: pelarut pengembang

Untuk solut yang polar

Tidak bisa menggunakan asam sulfat sebagai penampak bercak

Terdapat analitik dan preparatif

Kromatografi Kolom

Konvensional

Kering

KCV

Kolom dengan tekanan (kr. Kilat, tekanan rendah, tekanan menengah, tekanan tinggi)

Konvensional

Kecepatan turun karena gravitasi shgga lambat

Telah ada data profil KLT atau KKT dengan Rf 0,2-0,3.

Ratio sampel dan silika gel minimal 1: 20

KCV silika gel yang digunakan untuk penjerap

memiliki ukuran partikel lebih kecil dibandingkan kromatografi kolom konvensional. Biasanya digunakan silika gel utuk kromatografi lapis. Ratio sampel yang akan dipisahkan dengan silica gel minimal 1:20 agar dihasilkan pemisahan yang baik.

Sistem pengelusi yang digunakan adalah sistem landaian, umunya dimulai dari sistem nonpolar hingga sistem pelarut polar.

Kromatografi Kolom Kering

Sama dengan kromatografi kolom

Pelarut dialirkan sampai dasar kolom

Umumnya dibuat dari nylon agar mudah dipotong-potong berdasarkan pita-pita pemisahan (pemisahan dapat berdasarkan warna, sinar uv, penampak bercak, setelah ditarik dan digunakan cellotape)

Pita yang telah dipotong diekstraksi dengan pelarut yang cocok

Jenis Kromatografi Tekanan yang digunakan

Kr. Kilat Kr. Cair Tekanan Rendah Kr. Cair Tekanan Menengah Kr. Cair Tekanan Tinggi

Sekitar 2 bar Kurang dari 5 bar 5-20 bar Lebih besar dari 20 bar

Jenis Kromatografi Ukuran Partikel

Kr. Kolom konv. Kr. Kilat KTM

63-200 m 40-63 m 25-40 m

KCKT

Kromatografi

Fase normal

Fase diam lebih polar dari fase gerak

Fase balik

Fase gerak lebih polar dari fase diam

Kromatografi Partisi

Dipilih 2 cairan/pelarut tidak campur untuk memperoleh distribusi maksimum dari satu solut atau lebih kedalam satu fase cairan/pelarut dan maksimum distribusi solut yang tidak diinginkan kedalam fase cairan/ pelarut kedua

Kromatografi partisi

Dibagi 2 tipe dasar, berdasarkan cara fase diam dipegang oleh penyangga

Kr. Cair-cair

Seperti pada KGC

Contoh fase diam:, -okdipropionitril (ODPN) carbowax.

Tidak dapat dilakukan elusi gradien

Kr. Cair Fase Terikat

Sering digunakan pada KCKT

Mengurangi kekurangan pada KCC, karena fase diam terikat secara kimiawi dengan penyangga

Contoh: oktadesilsilan (ODS), Spherisorb

Kromatografi kolom partisi

Perbandingan diameter/panjang kolom 1:20

Perbandingan solut/penyangga 1:100 smpai1:2000

Syarat penyangga: kapasitas besar untuk memegang fase diam, tidak bereaksi dengan fase diam atau solut, partikel penyangga cukup halus

Macam penyangga: silika gel yang diimpregnasi dengan fase gerak, selulosa spek ttt, kieselguhr

Syarat fase gerak

Solut polar memerlukan fase diam polar dan fase gerak nonpolar

Solut non polar efektif dipisahkan dengan fase diam nonpolar dan fase gerak polar

Kromatografi Lawan Arus/ Counter Current Chromatography

Ciri khas tidak ada penyangga

Sehingga tidak ada adsorsi solut oleh penyangga

Jenisnya:

1. KLA tetes

2. KLA lokular putar

3. KLA sentrifugal

KLA tetes

Fase gerak menaik

Fase gerak menurun