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280 Bericht: Spezielle analytische Methoden Bd. 190 5 rain (3000 U/min). ~ach Befeuehten mit Veronal-]~ediaalpuffer (p]~ 8,6) werden Streffen yon chromatograplfischem Papier ,,~" (4)/40 cm) mit 0,1 ml gefiirbtem Serum mittels eines Plexiglas-Pl~ttchens (2 • 3 era) mit Handgriff betupft. Die horizontale Elektrophorese dauert in dem Puffer mit der Ionenst~rke 0,05 bei 400 V 5 Std. Man erh~lt auf weil]em Hintergrund 3 deutliehe rotorange l~ecken yon ~-, fl- und ?-Lipiden. Die Streifen werden auf 10 rain in einen Trockensehrank yon 80 ~ C gebracht. Der Gehalt der Fraktionen wird a) im FEK-~LPhotoelektro- colorimeter oder b) unmittelbar densitometrisch mit Hilfe eines entspreehenden Lichtfilters bestimmt. A4 a):Der Streifen wird in seine 3 Teile zerschnitten, die F~rbung wird mit 3 ml einer 20~ LSsung yon Eisessig in 96~ Alkohol in einem lest versehlossenen Probierglas wenigstnes 30 min extrahiert. -- Die Ab- scheidung der dritten Fraktion erfolgt auch bei Elektrophorese iu Agar. -- Bei der F~rbung des Serums mit 0,2 start 0,1 ml Acetyl-Sudan IV in Diacetin tritt regelm~l~ig zwischen den fl- und y-Lipiden eine noch nieht aufgekl~rte vierte Fraktion auf. L~b. Delo 7, Nr. 7, 16--18 (1961) [Russisch]. Abt. ffir Minische H~matologie d. Ukrain. Wiss. Forschungsinst. f. klin. Medizin (UdSSR). -- ~ Ciin. chim. Aeta (Amsterdam) 2, 586 (1957). ~t. HAAS Methoden zur Best|mmung yon Metaboliten des Kohlenhydratstoffwechsels im Iterzmuskel teilen G. MIO~AL und W. LAWIPREC~T ~ mit. Verff. ffihren ver- gleichende kritisehe Untersuchungen verschiedener Analysenverfahren zur Ermi~t- lung der in Frage stehenden Stoffwechselproduktei~ gleichenOrganproben dutch. Auf enzymatiseh-photometrischer Grundlage ffihren Verff. die Bestimmung folgen- der ~etabolite aus: Pyruvat, Dihydroxyacetonphosphat, ~ructose-l,6-diphosphat, a-Ketoglutarat, Lactat, Glycerin-l-phosphat, Adenosintriphosphat, Hexosemonophos- phate, Adenosindiphosphat und Adenosinmonophosphat. Die exakten Auforderungen entsprechenden Einzelheiten der Verfahrea sind angegeben. Die bislang in der Literatur aufgefiihrten l~ethoden zur Bestimmung yon Phosphokreatin liefern unrichtige Werte. Stimmende Werte erh~lt man mit der Methode von W. L~- PR~CnT und P. STEr~ 2, die mit Kreatinkinase arbeitet. Von den Pyridinnucleotiden bestimmen Verff. DPN + und TP~ + enzymatiseh-photometriseh, dagegen DPIqH -~ H + und TP~ -~ I-I+ fluorometriseh. Methodische Einzelheiten sind angegeben. Als Aufschlui~verfahren gibt nur die Frierstopmethode yon A. WOLL~B~m~, E.-G. K~AvSE und B. E. WA~.~3 zuverl~ssige Werte, w~hrencl Perchlors~ure- enteiweil~ung uacl besonders ttitzedenaturierung nicht genfigen, da sie zu viel Zeit beanspruehen. 1 ttoppe-Seyler's Z. physiol. Chem. 82~, 170--187 (1961). Organ.chem. Inst., Techn. Hoehschule Mihlchen. -- 2 BERG~]~Y~: ~[ethoden zur enzymatischen Ana- lyse, u Chemie, Wein_heim, 1962. -- 3 Naturwissenschaften 45, 294 (1958). E. ~i~L~, Wiirzburg 2-Desoxy-D-glueese (DOG) bestimmen ~. BLECH~R und B. DVORKIN 1 fluorimetrisch nach Reaktion mit 3,5-Diaminobenzoes~ure (DABA) zu 2-(l-Gly- cerin)-5-carboxy-7-amiaochinolin. Die Bestimmung ist geeignet fiir den Bereich yon 2,8 bis 125 10-9 Mol/ml und wird dureh die Gegenwart yon Glucose ~md Des- oxyribose nicht gestSrt. Phosphatpuffer p~ 7,4 (Krebs-Ringer), 0,154 m KC1 sowie 5"/0ige Trichloressigsi~ure (maximal 0,5 ml) zeigten keinen Effekt auf die Fluores- cenz. Im Bereich yon 0,3 bis 2,6 10 -~ Mol/ml kann die Konzentration yon DoG auch colorimetrisch bei 420 nm unter Beriicksiehtigung yon Glucose und Desoxy- ribose gemessen werden. -- Aus/i~hrung. LOstmgen mit 22 bis 1000 10 -~ Mol DoG werden mit Wasser auf 3 ml erg~nzt. Dazu gibt man 3 ml 0,01 m DABA-2HC1-

Methoden zur Bestimmung von Metaboliten des Kohlenhydratstoffwechsels im Herzmuskel

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Page 1: Methoden zur Bestimmung von Metaboliten des Kohlenhydratstoffwechsels im Herzmuskel

280 Bericht: Spezielle analytische Methoden Bd. 190

5 rain (3000 U/min). ~ach Befeuehten mit Veronal-]~ediaalpuffer (p]~ 8,6) werden Streffen yon chromatograplfischem Papier , , ~ " (4)/40 cm) mit 0,1 ml gefiirbtem Serum mittels eines Plexiglas-Pl~ttchens (2 • 3 era) mit Handgriff betupft. Die horizontale Elektrophorese dauert in dem Puffer mit der Ionenst~rke 0,05 bei 400 V 5 Std. Man erh~lt auf weil]em Hintergrund 3 deutliehe rotorange l~ecken yon ~- , fl- und ?-Lipiden. Die Streifen werden auf 10 rain in einen Trockensehrank yon 80 ~ C gebracht. Der Gehalt der Fraktionen wird a) im FEK-~LPhotoelektro- colorimeter oder b) unmittelbar densitometrisch mit Hilfe eines entspreehenden Lichtfilters bestimmt. A4 a ) :De r Streifen wird in seine 3 Teile zerschnitten, die F~rbung wird mit 3 ml einer 20~ LSsung yon Eisessig in 96~ Alkohol in einem lest versehlossenen Probierglas wenigstnes 30 min extrahiert. - - Die Ab- scheidung der dritten Fraktion erfolgt auch bei Elektrophorese iu Agar. - - Bei der F~rbung des Serums mit 0,2 start 0,1 ml Acetyl-Sudan IV in Diacetin t r i t t regelm~l~ig zwischen den fl- und y-Lipiden eine noch nieht aufgekl~rte vierte Fraktion auf.

L~b. Delo 7, Nr. 7, 16--18 (1961) [Russisch]. Abt. ffir Minische H~matologie d. Ukrain. Wiss. Forschungsinst. f. klin. Medizin (UdSSR). -- ~ Ciin. chim. Aeta (Amsterdam) 2, 586 (1957). ~t. HAAS

Methoden zur Best|mmung yon Metaboliten des Kohlenhydratstoffwechsels im I terzmuskel teilen G. MIO~AL und W. LAWIPREC~T ~ mit. Verff. ffihren ver- gleichende kritisehe Untersuchungen verschiedener Analysenverfahren zur Ermi~t- lung der in Frage stehenden Stoffwechselprodukte i~ gleichen Organproben dutch. Auf enzymatiseh-photometrischer Grundlage ffihren Verff. die Bestimmung folgen- der ~etabol i te aus: Pyruvat, Dihydroxyacetonphosphat, ~ructose-l,6-diphosphat, a-Ketoglutarat, Lactat, Glycerin-l-phosphat, Adenosintriphosphat, Hexosemonophos- phate, Adenosindiphosphat und Adenosinmonophosphat. Die exakten Auforderungen entsprechenden Einzelheiten der Verfahrea sind angegeben. Die bislang in der Literatur aufgefiihrten l~ethoden zur Bestimmung yon Phosphokreatin liefern unrichtige Werte. Stimmende Werte erh~lt man mit der Methode von W. L ~ - PR~CnT und P. STEr~ 2, die mit Kreatinkinase arbeitet. Von den Pyridinnucleotiden bestimmen Verff. DPN + und T P ~ + enzymatiseh-photometriseh, dagegen DPIqH -~ H + und T P ~ -~ I-I+ fluorometriseh. Methodische Einzelheiten sind angegeben. Als Aufschlui~verfahren gibt nur die Frierstopmethode yon A. W O L L ~ B ~ m ~ , E.-G. K~AvSE und B. E. W A ~ . ~ 3 zuverl~ssige Werte, w~hrencl Perchlors~ure- enteiweil~ung uacl besonders tti tzedenaturierung nicht genfigen, da sie zu viel Zeit beanspruehen.

1 ttoppe-Seyler 's Z. physiol. Chem. 82~, 170--187 (1961). Organ.chem. Inst., Techn. Hoehschule Mihlchen. - - 2 BERG~]~Y~: ~[ethoden zur enzymatischen Ana- lyse, u Chemie, Wein_heim, 1962. - - 3 Naturwissenschaften 45, 294 (1958).

E. ~ i ~ L ~ , Wiirzburg

2-Desoxy-D-glueese (DOG) bestimmen ~ . BLECH~R und B. DVORKIN 1 fluorimetrisch nach Reaktion mit 3,5-Diaminobenzoes~ure (DABA) zu 2-(l-Gly- cerin)-5-carboxy-7-amiaochinolin. Die Bestimmung ist geeignet fiir den Bereich yon 2,8 bis 125 �9 10 -9 Mol/ml und wird dureh die Gegenwart yon Glucose ~md Des- oxyribose nicht gestSrt. Phosphatpuffer p~ 7,4 (Krebs-Ringer), 0,154 m KC1 sowie 5"/0ige Trichloressigsi~ure (maximal 0,5 ml) zeigten keinen Effekt auf die Fluores- cenz. Im Bereich yon 0,3 bis 2,6 �9 10 -~ Mol/ml kann die Konzentration yon DoG auch colorimetrisch bei 420 nm unter Beriicksiehtigung yon Glucose und Desoxy- ribose gemessen werden. - - Aus/i~hrung. LOstmgen mit 22 bis 1000 �9 10 -~ Mol DoG werden mi t Wasser auf 3 ml erg~nzt. Dazu gibt man 3 ml 0,01 m DABA-2HC1-