MICROBIOLOGIA ŞI DIAGNOSTICUL DE ?· 21.09.2010 1 MICROBIOLOGIA ŞI DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL SPIROCHETOZELOR…

  • Published on
    11-Sep-2018

  • View
    212

  • Download
    0

Embed Size (px)

Transcript

  • 21.09.2010

    1

    MICROBIOLOGIA I

    DIAGNOSTICUL DE

    LABORATOR AL

    SPIROCHETOZELOR

    CLASIFICAREA SPIROCHETELOR

    Spirochetele bacterii helicoidale, flexibile i mobile (fibrile interne), rspndite n natur, comensale ale mucoaselor umane.

    Familii : Spirochaetaceae, Leptospiraceae

    MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE

    LABORATOR AL SIFILISULUI

    Familia Spirochaetaceae

    Genul Treponema

    Specii : - T.pallidum (patogen)

    subspecii (variante):

    T.pallidum pallidum (agentul sifilisului)

    T.pallidum endemicum (agentul bejelului, sifilis endemic nevenerian leziuni cutanate)

    T.pallidum carateum (agentul pintei/carate, nevenerian, America Central i de Sud)

    T. pertenue (agentul pianului, maladie cutanat, nevenerian, zone tropicale i subtropicale)

    Treponeme comensale:

    - Orale (T.denticola, T.orale, etc)

    - Genitale (T.phagedenis, T.refringens, etc)

    CARACTERE MORFOLOGICE I

    TINCTORIALE

    T.pallidum bacterie fin, helicoidal, cu 8-14 spire regulate i capetele ascuite, mobil cu micri de flexie, nurubare i translaie. Gram -.

    Evidenierea :

    - preparate native (microscopul cu fond negru, contrast de faz)

    - Nu se coloreaz dup Gram

    - Romanovsky-Giemsa roz-pal

    - Impregnare cu sruri de argint (filamente negre-brune pe fondul galben)

    - Frotiuri Burri necolorate pe fondul negru

  • 21.09.2010

    2

    CARACTERE DE CULTUR

    Cultivarea T.pallidum in vitro imposibil

    Pasaje succesive n testicule de iepure (tulpina Nichols de T.pallidum).

    Suspensii de astfel de treponeme supravieuiesc 72 ore n mediul Mayer-Nelson (la 25 grade n anaerobioz).

    STRUCTURA ANTIGENIC

    Haptene lipidice (antigen cardiolipinic / cardiolipin, Ag nespecific) fosfolipid prezent la treponeme patogene i esuturi ale mamiferelor (extras din cord bovin)

    Antigen proteic, de grup, comun treponemelor patogene i nepatogene (obinut din tulpina Reiter a T. phagedenis)

    Peptide i glicopeptide din membrana extern, specifice T.pallidum (obinute din tulpina Nichols a T.pallidum)

  • 21.09.2010

    3

    FACTORI DE PATOGENITATE

    Factori de adeziune

    Factori de invazie (hialuronidaza)

    Factori de sensibilizare

    Endotoxina

    Supresia rspunsului imun celular n stadiile iniiale ale bolii

    In 11 luni ale anuluiu 2009 au fost nregistrate 2164 cazuri de sifilis, inclusiv 87 cazuri la copii, comparativ cu 2201 cazuri, inclusiv 89 cazuri la copii n anul 2008.

    n 2 luni ale anului 2010 s-au nregistrat 394 cazuri de sifilis (2 luni 2009 400 cazuri) i 238 cazuri de gonoree acut i cronic (2 luni 2009 300 cazuri), inclusiv 11 i respectiv 10 cazuri la copii pn la 17 ani.

    PATOGENEZA SIFILISULUI

    Sursa de infecie omul bolnav

    Cile de transmitere:

    1. Contact direct (sexual, srut)

    2. Contact indirect (obiecte, instrumente chirurgicale recent contaminate, transfuzii de snge, etc.)

    3. Transplacentar (vertical)

    Poarta de intrare tegumentul lezat, mucoasa genital, bucal, anal

    Perioada de incubaie 2-6 sptmni (3)

    Evoluia sifilisului

    Sifilisul primar (4-6 sptmni)

    la poarta de intrare apare ancrul sifilitic: ulceraie cu baza indurat, nedureros, bogat n treponeme (99% localizare genital i anal, 1% - bucal).

    - Adenopatie satelit

    - Vindecare spontan a ancrului (imunitatea local)

    http://upload.wikimedia.org/wikipedia/en/2/29/Treponema_pallidum.jpg

  • 21.09.2010

    4

    Sifilisul secundar (urmare a diseminrii sangvine) dup 6-8 spt. de evoluie

    - Manifestri cutanate (rozeole, sifilide erozive,etc)

    - Manifestri mucoase (plci mucoase)

    - Poliadenopatie

    - Leziuni ale organelor interne (hepatite, nefrite, periostite, meningite, etc)

    - Rspunsul imun poate duce la dispariia leziunilor n 1-3 luni

    Sifilisul latent (treponemele persist n ganglioni limfatici i splin)

    - Lipsa semnelor clinice

    - Necontagios

    - Posibile recidive

    Sifilisul teriar (dup 4-30 ani de la contaminare)

    - Afeciuni cardio-vasculare (aortite, anevrisme)

    - Afeciuni neurologice (tabes, paralizie general)

    - Afeciuni osoase i cutanate (gome)

    - Deces posibil

    http://162.129.70.33/images/syphilis_2_031123.jpghttp://162.129.70.33/images/syphilis_1_031123.jpg

  • 21.09.2010

    5

    Sifilisul congenital

    - n timpul graviditii moartea ftului prin afeciuni poliviscerale

    - La finele graviditii sau la natere leziuni tardive (dentare, osoase, oculare)

    Imunitatea (nesteril)

    - Umoral

    - Celular (protectoare, deprimat n sifilisul primar i secundar)

  • 21.09.2010

    6

    DIAGNOSTICUL DE LABORATOR

    Prelevate: serozitatea din leziunile primare sau secundare, puncii din ganglioni limfatici, serul sangvin, LCR

    Metode de diagnostic

    1. Examenul microscopic

    - Microscopia pe fond negru, contrast faz

    - RIF

    - Impregnare argentic, coloraia Giemsa

    Examenul serologic (sifilis secundar, teriar)

    I Reacii nespecifice (cu Ag cardiolipinice)

    - Reacia VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) - reacie de precipitare

    Ieftin, facil, specificitate redus

    Reacii fals pozitive: viroze, colagenoze, paludism, ciroze, reumatism, graviditate, etc.

    - RFC (Wassermann)

    Reacii specifice (cu Ag treponemice)

    - RFC Wassermann sau Kolmer

    - RHAI (Ag lizat din tulpina Nichols fixat pe hematii)

    - RIFI (Ag suspensie de T.pallidum fixat pe lam)

    - RIT (testul Nelson) (Ag tulpina Nichols a T.pallidum)

    - RIE (ELISA)

    - PCR (detectarea ADN) n LCR, lichidul amniotic, esut

    EVOLUIA TITRURILOR DE AC

    RIFI se pozitiveaz la apariia ancrului (o lun dup infectare) VDRL dup 6 sptmni RHAI RIT n stadiul secundar, 2 luni dup

    infectare Dup tratamentul sifilisului: VDRL se negativeaz prima Alte reacii rmn pozitive

  • 21.09.2010

    7

    TERAPIA I PROFILAXIA SIFILISULUI

    ANTIBIOTERAPIA beta-lactamine, tetracicline, macrolide (rezisten la aminoside)

    Reacia Herxheimer este posibil (efectul endotoxinei)

    PROFILAXIA depistarea sistematic activ i tratarea bolnavilor

    MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE

    LABORATOR AL LEPTOSPIROZELOR

    Leptospirele sunt bacterii care pot infecta numeroase specii de animale (n special vertebrate) i accidental omul.

    Clasificare

    Familia Leptospiraceae

    Genul Leptospira

    Spp. L.interrogans (patogen pentru om i animale)

    L.biflexa (saprofit, ape de suprafa)

    L.parva (saprofit, apa de conduct)

    CARACTERE MORFOBIOLOGICE

    Caractere morfologice bacterii fine i spiralate, cu 10-30 spire strnse i regulate, cu capetele ndoite n crlig (aspect de S, C, ?).

    Realizeaz micri de nurubare, flexie i translaie.

    Pot fi examinate la microscopul cu fond negru sau cu contrast de faz.

    Coloraia Giemsa roz-pal

    CARACTERE MORFOBIOLOGICE

    Caractere de cultur

    - Medii lichide cu sruri anorganice tamponate cu fosfai i mbogite cu ser de iepure (mediile Korthof, Stuart), medii semisintetice

    - Aerobioz

    - 28-30 grade C

    Leptospirele se multiplic n 3-10 zile (pn la o lun) fr a tulbura mediul

    http://en.wikipedia.org/wiki/Image:Leptospira_scanning_micrograph.jpg

  • 21.09.2010

    8

    CARACTERE MORFOBIOLOGICE

    Structura antigenic a L.interrogans

    1. Antigene cu specificitate de gen, LPZ

    2. Antigene majore de grup (peste 20 serogrupuri)

    Ex.: L.icterohaemorrhagia, grippotyphosa, hebdomadis, canicola, pomona, autumnalis, etc.

    3. Antigene minore de tip (peste 200 serotipuri/variante) - proteice

    PATOGENEZA LEPTOSPIROZELOR

    Sursa de infecie: roztoarele slbatice, accidental-roztoarele peridomestice sau animalele domestice (porci, cini, cai, bovine) tubii contori proximali renali

    Poarta de intrare: tegument i mucoase

    Cile de transmitere:

    - Alimentar (alimente i apa contaminat)

    - Contact direct cu animalele infectate

    - Contact indirect (cu apa contaminat)

    Leptospirele sunt antrenate n circulaia sangvin fr leziuni la poarta de intrare

    Incubaia 1-2 sptmni (10 zile)

    Evoluia leptospirozelor:

    1. Faza septicemic (generalizat) 7 zile

    - febr, frison, sindrom meningeal

    2. Faza afebril (1-3 zile)

    3. Faza organic (febr, sindrom meningeal, sindrom hepato-renal, sindrom cardio-vascular-hemoragic, icter)

    Imunitatea: umoral, specific de tip, durabil

    DIAGNOSTICUL DE LABORATOR

    Prelevate: snge, LCR (prima sptmn), urin (din sptmna II de boal), probe necroptice (seciuni histologice renale, hepatice)

    Metode de diagnostic

    - Examenul microscopic (fond negru, contrast de faz, coloraia Giemsa sau impregnaia argentic a seciunilor histologice), RIF

    http://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Image:Leptospirosisanimalkidney.jpghttp://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Image:Humanlepto.jpg

  • 21.09.2010

    9

    - Examenul bacteriologic

    Probele sunt nsmnate n cte 3-5 tuburi cu mediu de cultur, incubate n aerobioz la 28 grade pn la 1-3 luni.

    Identificarea n baza caracterelor:

    - Microscopice

    - De cultur

    - De patogenitate

    - Serologice (RFC, RAL)

    - Examenul biologic (inocularea intraperitoneal la cobai). Peste 1-3 zile leptospirele pot fi depistate n exsudatul din cavitatea abdominal.

    - Tehnici PCR (detectarea ADN)

    - Diagnocticul serologic (din spt. II)

    1. Reacii cu specificitate de gen (RFC, RHAI, RIFI, ELISA)

    2. Reacii cu specificitate de tip (de referin)-RAL (Reacia de aglutinare-liz)

    Titrul diagnostic - 1/400 sau cretrea n dinamic de 4 ori

    TRATAMENT I PROFILAXIE

    Tratament: penicilin, tetraciclin, gama-globulina antileptospiroas

    Profilaxie: deratizarea, igiena i protecia muncii, supravegherea bazinelor de ap, vaccinarea selectiv (vaccin inactivat, durata imunitii-1 an)

    MICROBIOLOGIA I DIAGNOCTICUL DE

    LABORATOR AL BORRELIOZELOR

    CLASIFICARE:

    Familia Spirochaetaceae

    Genul Borrelia

    Specii:

    - B.recurrentis (transmis prin pduchi)

    - B.duttoni, B.hispanica, B.persica, B.burgdorferi, etc (transmise prin cpue)

    http://upload.wikimedia.org/wikipedia/en/4/43/Lepto-klein.JPGhttp://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/0/08/Leptospirosis_in_kidney.jpg

  • 21.09.2010

    10

    CARACTERE MORFOBIOLOGICE

    Morfologia: filamente spiralate cu

    5-8 spire neregulate, flexibile i mobile, cu micri de flexie i nurubare. Gram-, colorate n albastru-violet dup Giemsa.

    Caractere de cultur: bacterii anaerobe, cultiv in vitro pe medii complexe i in vivo (ou embrionat, artropode, animale de laborator)

    Structura antigenic: variabilitate pronunat

    Habitat

    - Omul bolnav n snge i esuturi infectate

    - Roztoare

    - Vectori (pduchi, cpue) n lichidul celomic

    FEBRA RECURENT

    Febra recurent epidemic

    Agentul cauzal - B.recurrentis

    Sursa de infecie omul bolnav

    Vector - Pediculus humanus

    Contaminare prin lichidul celomic eliberat la zdrobirea pduchilor

    Poarta de intrare tegumentul lezat, conjunctiva

    Febra recurent endemic

    Agenii cauzali - B.hispanica, B.persica, B.duttoni, etc

    Sursa de infecie roztoarele slbatice sau peridomestice

    Vectori cpue din genul Ornithodoros

    Contaminare prin nep-

    tur, prin intermediul

    lichidului coxal, prin

    dejecii anale

  • 21.09.2010

    11

    PATOGENEZA FEBREI RECURENTE

    Perioada de incubaie 3-14 zile (borreliile se multiplic n viscere ficat, splin, creier, etc.)

    Perioada febril debut brutal, cu febr 40-41 grade i frison (endotoxina eliberat n snge la distrugerea borreliilor). Algii difuze, stare de tifos, semne meningeale, hepato-splenomegalie, icter. Criza febril dureaz 7 zile.

    Urmeaz o perioad afebril de o sptmn, succedat de alt criz termic cu durat mai scurt

    Accesele se repet (2-4-10 recurene)

    Sub aciunea anticorpilor bactericizi formai la sfritul acceselor febrile se selecteaz varianta antigenic responsabil de urmtorul acces.

    Febra recurent endemic are o evoluie mai benign

    DIAGNOSTICUL DE LABORATOR

    AL FEBREI RECURENTE

    Prelevate: snge, LCR

    Metode de diagnostic:

    1. Examenul microscopic (n perioada febril):

    - preparate native (fond negru, contrast de faz)

    - Frotiuri colorate Giemsa

    - RIF

    2. Examenul biologic (infectarea cobailor, obolanilor)

    TRATAMENTUL I PROFILAXIA

    FEBREI RECURENTE

    Tratament: peniciline, tetracicline, cloramfenicol

    Profilaxie: lupta contra vectorilor i protecia individual

  • 21.09.2010

    12

    BOALA LYME

    Agentul cauzal Borrelia burgdorferi (B.burgdorferi sensu stricto, B.afzelii, B.garinii)

    Caractere morfoculturale bacterie helicoidal, mobil prin micri de flexie i rotaie. Nu se coloreaz prin metoda Gram.

    Se cultiv lent (cteva sptmni) numai pe medii speciale

    HABITAT I CONTAMINARE

    Rezervor de infecie: roztoare, animale domestice (cini, cai, etc), psri.

    Vectori: cpue din genurile Ixodes i Amblyomma, nari, tuni

    Contaminare: prin nep-

    tura vectorului infectat

    EVOLUIA BOLII LYME

    Incubaie 2-4 sptmni

    I Faza primar (leziune cutanat eritemul cronic migrator). Durata 3-4 sptmni

    Faza secundar durata 2-6 sptmni manifestri neurologice, cardiace, cutanate, artralgii

    Faza teriar dureaz luni, ani afeciuni cronice cutanate (acrodermatit cronic atrofiant), articulare (artrite cronice), neurologice (encefalomielite)

  • 21.09.2010

    13

    DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL

    BOLII LYME

    Prelevate: biopsii cutanate, snge, LCR, lichid sinovial

    Metode de diagnostic:

    1. Examenul microscopic (preparate native, coloraia special a biopsiilor, impregnare argentic)

    2. Examenul bacteriologic

    3. Diagnosticul serologic (RIFI, ELISA, Western-blot)

    4. PCR

    Tratament peniciline, tetracicline

    Profilaxie informarea populaiei, extragerea cpuelor

Recommended

View more >