PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS DAN CARA PEWARNAAN

IDENTIFIKASI BAKTERIOLOGIS

MIKROSKOPJENIS-JENIS MIKROSKOP Mikroskop CahayaMikroskop lapangan gelap (Dark field microscope)Mikroskop fluoresens (Flourescence microscope)Mikroskop elektron

1. Mikroskop Cahaya

Lensa: okuler, obyektif, tubus meja preparat, diafragma, mengatur sinarkondensor sumber Cahaya : listrik atau matahari kaca cembung : foluskan cahaya.

2. Mikroskop lapangan gelap (Dark field microscope)

Melihat pergerakan bakteri. Alternatif mikroskop cahaya : kondensornya diturunkan srendah mungkin diafragma dikecilkan sekecil mungkin.Dilakukan dlm kamar gelap

3. Mikroskop fluoresens (Flourescence microscope)

Preparat fluoresens, Tes imuno-fluoresens. Sumber Cahaya: sinar ultra-violet. Dilakukan dlm kamar gelap

4. Mikroskop elektron

Melihat benda lebih kecil dari bakteri: virus dllMelihat struktur sel bakteri dllPembesaran >> tinggi dari mikroskop biasa/cahaya.

PEMBUATAN PREPARAT Diperlukan: prep basahKaca benda atau kaca obyek atau kaca khususKaca penutupSengkelitSuspensi bakteri dlm NaCl 0.9% atau specimen cairVaselinDiperlukan: preparat hapusKaca bendaSpecimen atau suspensi bakteriSengkelitLampu spiritus atau Bunsen

PREPARAT BASAH a. Tetes gantungKaca penutup diatas meja Satu-dua tetes specimen cair di tengah kaca penutup Vaselin pada keempat sudut kaca bendaLetakkan kaca benda dengan cekungannya menghadap ke bawah.Lihat di bawah mikroskop lapangan gelap.

PREPARAT BASAH

b. Praparat basah ditutup kaca penutup 1. Teteskan specimen cair di atas kaca benda 2. Tutuplah dengan kaca penutup 3. Mikroskop pembesaran 10 kali 10 - 45 kali. 4. Untuk lebih jelas: diafragma ditutup dan kondensor diturunkan

Cara buat preparat u/ pewarnaanAmbil specimen dgn ujung sengkelit, sapukan merata pd perm. kaca benda bersihKeringkan udara terbuka/chy mthrFiksasi dgn nyala api 3 kali, gunanya; u/ melekatkan pd kaca benda, u/ memudahkan zat warna masuk & berikatan dgn sitoplasma, mematikan bakteri pd specimen.

PREPARAT HAPUSPembuatan Preparat HapusAmbil specimen dengan sengkelit sapukan pd kaca benda Keringkan preparat: udara terbuka atau pada udara Fiksasi preparat: liwatkan kali pada nyala api. Manfaat fiksasi preparat:Merekatkan preparat pada kaca benda, Memudahkan zat warna masuk dan berikatan dgn sitoplasma, Mematikan bakteri pada specimen.

Pewarnaan sederhanaBahan:karbol fuchin 10% a/ Mt Blue.Cara:Buat preparat kering & fiksasiLetakkan kaca benda di atas rakTungi dgn zat warna; kf a/ Mt BlueBiarkan 1 menitBuang & bilas & keringkan dgn kertas saringLihat di mikroskop 10x100Hasil: hanya morfologi & cara berklp bakteri & warna sesuai zat warna yg digunakan

A. PEWARNAAN SERDERHANA

Bahan pewarnaan yang dibutuhkan:Larutan karbol fuchsin 10% (air fuchsin) atau larutan methylen blue.Cara mengerjakanBuat preparat, keringkan dan fiksasi Letakkan di atas rak preparatTuangi zat warna 1 menit.Buang zat warnanya, bilas & keringkan.Mikroskop: 10 X 100.

Pewarnaan negatifBahan : cairan luka & tinta gambarCara:1.Letakkan 2 sengkelit cairan luka pd salah satu ujung kaca benda2. Letakkan tinta cina 1 tetes didekatnya pelan campur keduanya3. Kaca benda 45o tarik ke blkg & dorong cepat ke depan dgn rata4. Keringkan & fiksasi nyala api 3 kali5. Mikroskop 10x100Hasil: morfologi & cara berklp bakteri ruang kosong dgn latar blkg hitam

B. PEWARNAAN NEGATIF (Morfologi, besar) Bahan yang dibutuhkanCairan lukaTinta gambarCara mengerjakanLetakkan cairan luka pada ujung kaca benda pertama.Letakkan tinta cina dekat specimen campur Letakkan kacabenda kedua 45o di didepan campuran tarik ke belakang dorong ke depan Keringkan & fiksasiMikroskop pembesaran 10 100

Pewarnaan burri-ginsBahan: bakteri kapsul dlm nacl, tinta cina a/ air fuchin.Cara:Buat p. negatif dr bakteri berkapsul.Keringkan & fiksasiWarnai dgn air fuchinBiarkan 1 mnt & bilas airKeringkan kertas saring lihat mikroskop 10x100Hasil: dilhat kapsul ruang kosong, bakteri warna merah muda dan latar blkg hitam

C. PEWARNAAN BURRY-GINS (Kapsul)Bahan yang diperlu-kanSuspensi bakteri dalam NaCl 0,9%.Tinta cinaLarutan air fuchsinCara mengerjakanBuat pewarnaan negatif Keringkan dan fiksasi.Letakkan pada rak pewarnaan, dan tuangi air fuchsin.Biarkan satu menit buang zat warna bilas & keringkanMikroskop pembesaran 10 100.

Pewarnaan gramBahan: kristal violet 0.5%, lugol, alkohol 96%, air fuchin a/ saframin (kontras)Cara:Preparat tipis rata dr specimen pd kaca benda keringkan & fiksasiTuangi kristal violet diamkan 1-2 mntCuci air mengalirTetesi lugol 30 detikBuang lugol & bilas air mengalirLunturkan alkohol 96% cuci air mengalirTetesi kontras 2 mntBuang dan cuci air mengalirPeriksa mikropkopHasil: gram positif ungu tua dan gram negatif merah muda

Pewarnaan tahan asamZN: bahan karbol fuchin, asam alkohol 3% Mt Blue a/ malachite green 0.5%Cara:Preparat hapus sputum kering & fiksasiTuangi karbol fuchinPanasi sp menguap dinginkan & panasi lagi 3 kali dlm 10 mntCuci air mengalirLunturkan asam alkohol 3% (H2SO4 1%u/ lepra)Cuci air mengalirZat kontras mt blue a/ mal green 1 mntCuci air mengalirKering dgn kertas isap lihat dgn oil emersiHasil : BTA batang merah, negatif BTA biru latar blkg biru

E. PEWARNAAN TAHAN ASAM E.1. Pewarnaan Ziehl-NeelsenBahan yang dibutuhkanLautan karbol fuchsinAsam alcohol 3 %Larutan methylen blue atau malachite green 0,5%.

Cara mengerajakanBuat preparat sputum, keringkan dan fiksasi. Letakkan pada rak dan tuangi larutan karbol fuchsin

3. Panasi menguap, dinginkan dan panasi. (3 kali:10 menit). 4. Cuci dengan air mengalir. 5. Lunturkan: n asam alcohol 3% atau H2SO4 1% (lepra). 6. Bilas & Beri zat warna kontras: larutan methylen blue 0,5%: 1 7. Bilas & keringkan . 8. Mikroskop lensa emersi.