Matakuliah Isolasi Senyawa Bioaktif

Fakultas Farmasi

Universitas Hasanuddin

PAPER

ISOLASI SENYAWA ALKALOID, TERPEN,

FLAVANOID, DAN FENOLIK

Oleh:

Elyza Aiman

N111 11 281

KELAS A

MAKASSAR

2013

ISOLASI SENYAWA ALKALOID

Judul Jurnal:

Isolasi Alkaloid Isoquinoline dari Umbi Corydalis turschaninovii dan Aktifitas

Inhibitornya terhadap Oksidasi LDL (Low Density Lipoprotein)

Pengolahan Sampel dan Ekstraksi:

Umbi C. turtschaninovii yang dikumpulkan di Kyungdong Herb

Medicine Market di Seoul pada tahun 2007. Umbi tersebut dikeringkan dan

disebukkan. Bubuk umbi tersebut (3 kg) diekstraksi dengan 80% berair

MeOH pada suhu kamar semalam dan kemudian disaring melalui kertas

saring. Filtrat diuapkan dalam vakum dan memberikan residu kecoklatan

gelap.

Isolasi:

Ekstrak metanol yang dihasilkan dituangkan ke dalam air asam (pH

2,5, 1,5 L), keasaman yang telah disesuaikan dengan 30% HCl, dan dicuci

dua kali dengan EtOAc (1,5 L dua kali). Lapisan berair kemudian di basakan

sampai pH 11.5 menggunakan larutan NaOH 20% dan diekstraksi dengan

EtOAc (1,5 L dua kali). Lapisan organik terkonsentrasi (berat: 9,3 g) yang

diambil dan dilanjutkan ke kromatografi kolom (6 × 8 cm) yang diisi dengan

silika gel (ukuran 70-230 mesh, sebanyak 250 g) dengan menggunakan

eluen CHCl3-MeOH dengan perbandingan 15:01 → 13:01 → 10:01 → 7: 1 →

→ 5:1 dan 3:1, masing-masing 1,5 L) dan MeOH (1 L) yang menghasilkan

12 fraksi (ditandai dengan nama CTE1 ~ CTE12).

Peneliti membagi fraksinya dalam beberapa kelompok komponen,

komponen 1 (fraksi CTE4) yang teridentifikasi (±)-demethylcorydalmine,

komponen 2 (fraksi CTE3) yang teridentifikasi (+)-isocorydine, komponen 3

(mengandung 7 fraksi) yang teridentifikasi (+)-stylopine, komponen 4 (fraksi

CTE3-1-4) yang teridentifikasi (+)-stylopine and (-)-α-N-methylcanadine,

komponen 5 (CTE6-7) yang teridentifikasi pseudoprotopine, komponen 6

(CTE7-5) yang teridentifikasi sebagai tetrahydroprotopapaverine, komponen

7 (CTE7-7) yang teridentifikasi sebagai allocryptopine, komponen 8 (CTE8-5)

yang teridentifikasi sebagai berberine, dan komponen 9 (CTE11-6) yang

teridentifikasi sebagai pseudocoptisine.

Pendekatan struktur:

Umbi C. turtschaninovii diekstraksi dalam 80% MeOH, dan ekstrak

yang diperoleh dipartisi menggunakan keasaman dan polaritas pelarut untuk

menghasilkan fraksi alkaloid. Kromatografi kolom SiO2 berulang untuk fraksi

alkaloid menghasilkan sembilan alkaloid murni, 1 - 9. Senyawa 3, 5, 8, dan 9

telah sebelumnya diisolasi dari tanaman ini dan diidentifikasi sebagai (+)-

stylopine.

Senyawa 1, 2, 4, 6, dan 7 diisolasi untuk pertama kalinya dari umbi C.

turtschaninovii. Ketika semua senyawa hasil isolasi elusi pada kromatograf

lapis tipis, mereka dilihat di bawah sinar UV dan divisualisasikan dengan

penyemprotan dengan reagen Dragendorff itu, dan menghasilkan warna

jingga yang menunjukkan bahwa mereka alkaloid.

Senyawa-senyawa tersebut kemudian dianalisis menggunakan

spektrum IR, ditentukan berat molekulnya dengan spektrum IE-MS, dan

ditentukan strukturnya dengan NMR.

Senyawa 1, bubuk amorf putih, menunjukkan band absorbansi karena

gugus hidroksi (3347 cm-1) dan ikatan rangkap (1590 cm-1) dalam spektrum

IR dan berat molekul ditentukan sebagai 327 dari ion molekul [M] + pada m /

z 327 dalam spektrum EI-MS. Data 1H-NMR dapat diasumsikan bahwa

senyawa 1 adalah jenis protoberberine isoquinoline alkaloid.

Senyawa 2, jarum tidak berwarna, menunjukkan serapan band karena

gugus hidroksi (3355 cm-1) dan ikatan rangkap (1606 cm-1) dalam spektrum

IR. Itu puncak ion molekul [M] + pada m / z 341 mengindikasikan berat

molekul menjadi 341. Data dari 1H-NMR mengasumsikan bahwa senyawa 2

adalah jenis aporphine isoquinoline alkaloid.

Senyawa 4, kristal berwarna, menunjukkan absorbansi band dari

ikatan rangkap (1525 cm-1) dalam spektrum IR. The EI-MS spektrum

menunjukkan puncak ion molekul [M] + pada m / z 354. 1H-NMR (400 MHz,

CDCl3) dan Spektrum 13C-NMR mengidentifikasi bahwa ia adalah

dioxymethylene dan grup quaternary-N-methyl.

Senyawa 6, kristal berwarna, menunjukkan molekul ion puncak [M] +

pada m / z 333 dalam spektrum EI-MS dan absorbansi karena hidroksi

tersebut (3380 cm-1) dan olefin (1515 cm-1) kelompok dalam spektrum IR.

Dan ditentukan bahwa senyawa 6 diidentifikasi sebagai

tetrahydroprotopapaverine berdasarkan hasil spekrtum NMR.

Senyawa 7, prisma tidak berwarna, menunjukkan serapan band

karena karbonil terkonjugasi (1655 cm-1) dan ikatan rangkap (1504 cm-1)

dalam spektrum IR. Itu berat molekul bertekad untuk menjadi 369 dari ion

molekul [M] + pada m / z 369 dalam spektrum EI-MS.dan ditentukan dengan

NMR sebagai as allocryptopine, tipe protopine alkaloid.

Data NMR dari setiap senyawa:

Rumus struktur dari setiap senyawa:

ISOLASI SENYAWA STEROID

Judul Jurnal:

Isolasi dan karakterisasi glikosida steroid dari daun Stachytarpheta

jamaicensis Linn Vahl

Penyiapan sampel dan ekkstraksi:

Daun segar dan batang S. jamaicensis dipanen dari Edibe - Edibe,

Calabar, Palang River State, Nigeria pada tanggal 10 Januari 2008.

Bahan tanaman dianalisis di laboratorium Kimia , Michael Okpara

University of Agriculture , Umudike , Nigeria. Daun ( 1kg ) yang kering di

laboratorium bench selama 10 hari . Sampel kering digiling dan ditumbuk

menjadi bubuk ( 850g ) menggunakan Thomas Wiley Machine ( Model 5 USA

) . Sampel tanaman bubuk ( 500g ) dikemas ke dalam Soxhlet aparat ( 2L )

dan diekstraksi secara mendalam dengan 1000 ml etanol selama 24 jam .

Ekstrak etanol terkonsentrasi menggunakan evaporator rotary pada 450C

dan kiri di bangku laboratorium selama 2 hari untuk mendapatkan residu

bergetah gelap ( 22.64g ) . Kolom itu dipadatkan dengan silika gel dan 20.0g

dari residu gummy ditempatkan di atas silika gel dan dielusi dengan kloroform

, ethanol , petroleum eter , ( 50:30:20 ) masing-masing untuk mendapatkan

steroid senyawa 1 ( 1.53g ) dan senyawa 2 ( 1.40G ) .

Pendekatan Struktur

Senyawa 1 : minyak gelap kuning, ( 1,53 g ) Rf 0,20 . IR Vmax

3395,41 cm - 1 ( OH ) , 3009,84 cm - 1 , 2925,05 , 2853,95 cm - 1 ( - CH2 - )

masing-masing, 1739,38 , 1710,58 cm - 1 masing-masing ( C = O ) ,

1462.89cm - 1 ( C = C aromatik ) , 1037,46 ( C - O ) eter . HREIMS m / z

971,87 dihitung untuk C49H78O19 m / z 970 . Puncak dasar m / z 301,12 .

Senyawa 2 : minyak berwarna kuning terang ( 1,40 g ) Rf 0,36 ; IR

Vmax 3376.68cm - 1 ( OH ) , 2925,15 cm - 1 , 2853,84 cm - 1 ( - CH2 - )

masing-masing, 1738,93 ( = C = O ) , 1402,97 ( C = C ) aromatik , 1040.28cm

- 1 ( CO ) eter . HREIMS m / z 963,50 dihitung untuk C49H70O19 m / z 962 .

Puncak dasar m / z 432,37 .

1H NMR dan 13C NMR disajikan dalam tabel

Rumus struktur senyawa 1

Rumus struktur senyawa 2

ISOLASI SENYAWA STEROID

Judul Jurnal:

Isolasi dan elusidasi struktural flavanoid dari perairan fern Azolla microphylla

dan evaluasi bebas radical aktivitas pemulungan

Penyiapan sampel dan ekkstraksi:

Seluruh tanaman, Azolla microphylla dicuci bersih dengan air keran

yang diikuti pembilasan dengan air suling ganda dan bayangan pengeringan

untuk 7days. The serbuk halus (≈ 60 mesh size) diperoleh dari tanaman yang

dikeringkan dengan menggunakan dapur mixer penggiling (Bajaj elektronik

Ltd, India). Serbuk tanaman yang disterilkan pada 121 ˚ C selama 15 menit.

Ekstraksi pelarut bubuk kering (40g) Azolla microphylla dilakukan

dengan menggunakan 2L dari 80% metanol (50 mL / g sampel) dalam

ekstraktor soxhlet untuk 24 h. Ekstrak dipekatkan dengan penguapan (40-50

° C) dalam evaporator vakum rotary. Ekstrak methonolic pekat (10 ml)

dihentikan pada 50 mL air suling dan selanjutnya diekstraksi berturut-turut

dengan petroleum eter, kloroform, dan etil asetat. Untuk setiap pelarut,

prosedur ekstraksi diulang tiga kali untuk ekstraksi lengkap. Ekstrak

petroleum eter (Fraksi-I) dibuang karena mengandung zat lemak. Uji

cyanidine dilakukan untuk kloroform (Fraksi-II) dan etil asetat (Fraksi-III)

ekstrak untuk seleksi lebih lanjut. Ekstrak etil asetat (Fraksi-III) dianalisis

untuk flavonoid menggunakan pemisahan kromatografi.

Isolasi:

Pelat kaca (100 × 200mm) dilapisi dengan silika gel G (0.2-0.3mm)

pasta dikeringkan secara alami (atmosfer). Selanjutnya mereka diaktifkan

pada 100 ° C selama 30 menit dan didinginkan pada suhu kamar (25oC ≈).

Ekstrak dipisahkan dengan TLC dengan fase gerak berikut: etil asetat: n-

butanol: air (50:30:10 v / v), etil asetat: asam asetat: air (60:30:10) dan

benzena: asam asetat : air (60:35: 5 v / v). Pelat tersebut dikembangkan

dengan menggunakan asap amonia dan divisualisasikan di bawah lampu UV.

Nilai Rf band dipisahkan dihitung.

Pemurnian flavonoid dengan kromatografi lapis tipis preparatif (PTLC)

Ekstrak dikurangi menjadi 5 mL dan dimuat dalam KLT preparatif piring

dilapisi dengan silika gel GF254 (0.4-0.5mm). Kromatogram dikembangkan

dengan benzena: asam asetat: air (60:35:5 v / v) dan diperiksa di bawah

lampu UV. Bintik-bintik fluorescing yang dikorek keluar dari 100 piring dan

diekstraksi dengan etanol. Campuran diencerkan kemudian disentrifugasi

pada 10000 rpm selama 10 menit pada 4 ˚ C. Supernatan dikumpulkan untuk

lebih lanjut eksperimental (HPLC, FT-IR, NMR) analisis. Senyawa yang

dielusi yang co-dikromatografi bersama dengan flavonoid standar.

Pendekatan struktur:

Analisis kemudian dilakukan dengan menggunakan instrumen KCKT

(kromatografi cair kinerja tinggi). Senyawa hasil isolasi ( dalam etanol )

disaring melalui filter membran ( Millipore , USA ) dan disuntik ( 10μL )

melalui kolom BDS Hypersil RP - C18 ( Thermo , 5μm , 120A , 250mm ×

4.6mm ) pada kolom suhu 25 ˚ C. Fase gerak terdiri dari metanol , air dan

asam format ( 70:30:1 vol . % ) Dielusi pada laju aliran 1mL/min dan effluent

tersebut dipantau pada 280nm oleh detektor UV . Puncak terdeteksi dan

dibandingkan dengan standar .

Analisis spektral kemudian dilakukan. Senyawa terisolasi 1 dan 2

dilarutkan dalam metanol dan rentang maksimal penyerapan UV dicatat

dengan menggunakan UV - Vis double- beam spektrofotometer . Senyawa 1

dan 2 dilarutkan dalam CDCl3 dan 1H dan 13C NMR spektra menggunakan

spektroskopi NMR dengan TCI Cyroprobe dicatat. Tetrametilsilan ( TMS )

digunakan sebagai standar internal . Nilai-nilai pergeseran kimia dilaporkan

dalam ppm ( δ ) unit dan konstanta kopling ( J ) dalam Hz . Spektrum FTIR

senyawa 1 dan 2 diukur dengan menggunakan IR kelas kalium bromida ( KBr

) . Senyawa 1 dan 2 secara terpisah dicampur dengan 200mg KBr untuk

mendapatkan putaran disc dengan bantuan pers hidrolik . Cakram bundar

kemudian dikenakan FTIR di kisaran 4000 - 400cm - 1 pada resolusi - 4cm 1

.

Senyawa-1

Cahaya kuning bubuk (etanol); m. p. 190 ˚ C; λmax. 300nm; mol.

rumus: C27 H30 O16, IR (KBr) Vmax-cm 1: 3408, 3321 (OH stretching),

2924,2843 (CH2-peregangan), 2714 (CH ikatan), 1462 (C = O kelompok) dan

1383 (C-OH getaran) (ditunjukkan pada Gambar 3A); 1H-NMR (600MHz di

CH3OD, δ ppm) 3,33-3,64 (m, 12H gugus gula), 3,81 (d, J = 1.15Hz, 1H-

Rham), 1.10 (3H , d, J = 6Hz, CH3-Rham), 4,52 (4H, d, J = 7.8Hz, H-1 Glu),

5.11 (1H, d, J = 2Hz H-6), 6.19 (1H, d, J = 2Hz, H-8), 6.38 (1H, d, J = 8Hz, H-

5 '), 7.66 (1H, m, H-2', H-6 '); 13C-NMR (600MHz di CH3OD, δ ppm):

ditunjukkan pada Tabel 3. Hal ini ditandai sebagai 3, 3 ', 4', 5, 7-pentahydroxy

flavon-3-rutinoside (rutin)

Senyawa-2

Bubuk kuning pucat (etanol); m. p. 300 ˚ C; λmax. 360nm; mol. rumus:

C15 H10 O7, IR (KBr) Vmax cm-1: 3428, 3369 (OH stretching), 2986 (CH2-

peregangan), 2872 (CH-peregangan), 1457 (C = O), 1362 (C-OH getaran )

(ditunjukkan dalam gambar 3B); 1H-NMR (600MHz di CH3OD, ppm δ) 6,18

(1H, d, J = 2Hz, H-6), 6.38 (1H, d, J = 2Hz, H-8), 6.88 (1H, d, J = 8Hz, H-5 '),

7.63 (1H, d, J = 7.5Hz, H-6'), 7.72 (1H, d, J = 2Hz, H-2 '); 13C-NMR (600MHz

di CH3OD, ppm δ): ditunjukkan pada Tabel 3. Hal ini ditandai sebagai 2 - (3,

4-dihydroxyphenyl) -3, 5, 7-trihidroksi-4H-1 benzopyran-4-one (quercetin)

ISOLASI SENYAWA STEROID

Judul Jurnal:

Isolasi, pemurnian dan struktur identifikasi dua fenolik

glikosida dari akar Incarvillea younghusbandii Sprague dan

aktivitas antioksidan mereka

Pengolahan sampel dan Ekstraksi:

Bubuk akar IYS (1 kg) diekstraksi dengan 10 L alkohol-air (80:20, v / v)

pada 60 untuk 24 h. Setelah pelarut diuapkan dalam vakum pada 60 ,℃ ℃

alkohol-ekstrak (368,0 g) diperoleh. Itu alkohol ekstrak (200,0 g) dilarutkan

dalam 400 mL alkohol-air (80:20, v / v) dan kemudian 1,2 L etil asetat

ditambahkan. Larutan disentrifugasi pada 1 000 r · min-1 selama 10 menit

untuk dipisahkan ke atas lapisan dan curah hujan. Lapisan atas dikeringkan

di vakum pada 60 untuk menghasilkan etil asetat-ekstrak (42 g).℃

Etil asetat - ekstrak ( 20 g ) dikromatografi pada kolom gel silika ( 300

mm × 80 mm ) , dielusi dengan gradien langkah metilen diklorida - metanol

(dari 50:1 sampai 1:1, dengan volume) sebagai fase gerak untuk

menghasilkan delapan fraksi . Disaring oleh O 2 OH scavenging assay dan

LPO penghambatan assay , fraksi 7 ( 11,05 g ) menunjukkan aktivitas

tertinggi . Fraksi 7 ( 5,0 g ) menjadi sasaran untuk dilanjutkan ke kromatografi

kolom ( 400 mm × 35 mm ) , dielusi dengan gradien langkah dari 90:10

sampai 50:50 ( berdasarkan volume) air dan alkohol untuk memberikan tiga

fraksi . pecahan 7-2 (2,09 g ) menunjukkan aktivitas tertinggi . Fraksi 7-2 ( 2,0

g ) selanjutnya dimurnikan pada atas fase-balik sistem HPLC semi

preparatif .

Kondisi : fase gerak terdiri dari 20 % asetonitril dalam air ( v / v ) ; laju alir

adalah 10 mL · min - 1 ; kolom oven suhu ditetapkan pada 25 . Dua℃

senyawa , 1 ( RT = 15,279 min , 1 582 mg ) [ 3 ] dan 2 ( RT = 21,962 min ,

216 mg ) diperoleh setelah puncak eluting dari kolom dan dikeringkan dalam

vakum pada 60 . 1 ( atau 2 ) isi kering akar IYS dianalisis pada atas℃

sistem HPLC dengan C18 kolom analitik ( asetonitril - air ( 25:75 ,v / v ) , 1,0

mL · min - 1 , 25 ) .℃

Pendekatan struktur:

Senyawa 1 diidentifikasi sebagai acteoside . pada 1D dan 2D-NMR

spektrum yang dihasilkan identik dengan yang dilaporkan dalam literatur (1H

NMR, 13C NMR, 1H-1H COSY, ROESY di CD3OD , 1H NMR dan 13C NMR

di piridin-d5).

ESI-MS dari 2, m / z 623,3 [M-H] -; HR-ESI-MS dari 2, m / z 647,194 9-

647,195 0 [M + Na] +, RDB = 11.50 (calcd. untuk C29H36O15). 1D dan 2D-

NMR spektra dari senyawa 2 menunjukkan bahwa senyawa 2 diidentifikasi

sebagai β- D-glucopyranoside, 2 - (3, 4-dihydroxyphenyl) etil 3-O-(6-deoksi-α-

L-mannopyranosyl) -, 6 - [(2E) -3 - (3, 4 - dihydroxyphenyl)-2-propenoate]

(9CI)