Patologia Clínica Veterinária 01

8/18/2019 Patologia Clínica Veterinária 01

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Patologia Clínica Veterinária

Hematologia

Introdução:

-Composição do Sangue:

-Células: eritrócitos, leucócitos e plaquetas

-Plasma: proteínas plasmáticas (fibrinogênio, albumina e globulinas), glicose,eletrólitos, colesterol, enzimas, hormônios, vitaminas, lipídeos, aminoácidos, produtosde excreção (uréia, creatinina e ácido lático).

*Hemostasia ≠ Homeostasia

-Hemostasia: é o conjunto de mecanismos que o organismo emprega paracoibir hemorragia.

-Homeostasia: é a propriedade de um sistema aberto, seres vivos especialmente,de regular o seu ambiente interno para manter uma condição estável, mediante múltiplosajustes de equilíbrio dinâmico controlados por mecanismos de regulação inter-relacionados.

*Plasma ≠ Soro

-Plasma: é o sobrenadante obtido quando uma amostra de sangue que foicoletada com anticoagulante é centrifugada.

-Soro: é o equivalente de uma amostra que se permitiu coagular, não possuifibrinogênio.

- Funções das Células:

-Eritrócitos: é composto por hemoglobina e é responsável pelas trocas gasosas

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-Leucócitos: defesa do organismo

-Neutrófilos: defesa primária

-Monócitos: ‘limpeza’

-Eosinófilo

-Linfócitos: resposta celular e humoral

-Plaquetas: hemostasia

Hematopoese

1- Eritropoese: é a produção de eritrócitos e ocorre na medula óssea vermelha.

2- Leucopoese: é a produção de leucócitos e ocorre na medula óssea vermelha.

3-Trombocitopoese: é a produção de plaquetas e ocorre na medula ósseavermelha.

*Nas aves, répteis, anfíbios e peixes ocorre em locais diferentes dos mamíferos, assim:

-Eritropoese: ocorre intravascularmente

-Leucopoese: ocorre em sítios extravasculares

-Trombocitopoese: ocorre intravascularmente

-Tipos:

- Hematopoese Pré-Natal:

Ocorrendo:

Primeiramente no Saco vitelínico, posteriormente no Fígado, Baço e finalmentena Medula óssea

- Hematopoese Pós-Natal:

Ocorrendo na:

-Medula Óssea Vermelha (ativa): que na puberdade está presente em todos osossos

*Medula Óssea Amarela: inativa

1- Eritropoese:


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Célula Pluripotente (célula tronco)

1- Núcleo grande e contém nucléolo

2- Perde nucléolo

3- Há diminuição no tamanho e a cromatina está condensada

4- Início da síntese de hemoglobina, citoplasma cinza

5- Ocorre a perda do núcleo

6- Retículo azul (basofílico) visível com coloração especial

7- Célula adulta sem núcleo em mamíferos, em formato de disco bicôncavo.

Eritropoese ocorre na medula óssea vermelha. Conforme as hemácias

amadurecem, elas se tornam muito facilmente deformáveis (o que é necessário para queelas possam passar por vasos capilares pequenos).

A eritropoiese normal envolve um mínimo de quatro mitoses: uma na fase deeritroblasto, outra no estágio de pró-eritroblasto e duas no estágio de eritroblasto

basofílico.-Tempo de Maturação: O tempo de maturação total varia entre as

espécies de aproximadamente 4-5 dias em bovinos para cerca de uma semana no cão.

Quando há um aumento na demanda de hemácias, a produção é aumentada primeiramente ao se permitir que formas mais jovens (reticulócitos) entrem nacirculação e também ao se permitir que os estágios de maturação sejam agrupados e

Série Granulocítica

Eritroblasto

Série TrombocíticaPró - Eritroblasto

Eritroblasto Basofílico

Eritroblasto Policromatofílico

Metaeritroblasto

Reticulócito Eritrócito

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ignorados, de modo que se apresse a eritropoese Reticulócitos não é vista em todas asespécies, como, cães demonstram reticulócitos rapidamente, bovinos só em situaçõesextremas e eqüinos nunca apresentam esta resposta.

O apressamento da eritropoese ocorre em todas as espécies e, algumas vezes,

leva ao aparecimento de algumas hemácias imperfeitas na circulação, tais comocorpúsculos de Howell-Jolly, poiquilócitos e leptócitos.

- Duração de Vida: a duração de vida das hemácias varia nas espécies,assim:

Suínos: cerca de 65 dias.

Bovinos: mais de 160 dias.

Ovinos: apresentam duas populações de hemácias, uma de vida curta (70 dias) e

outra de vida mais longa (150 dias).

Cães: cerca de 120 dias

Gatos: cerca de 70 dias.

Eqüinos: cerca de 150 dias

- Destruição: esse processo ocorre de 3 formas:

-O eritrócito pode ser fragmentado em pequenos pedaços o suficiente para que

sejam captados pelo sistema retículo-endotelial

-O eritrócito pode-se tornar mais frágil e romper-se com o esgotamento dasenzimas intracelulares e assim sendo fagocitada.

-O eritrócito como um todo pode ser fagocitado.

A hemoglobina de uma hemácia morta é reutilizada. A fração protéica (globina) élisada em aminoácidos. A fração heme perde seu átomo de ferro (sendo reciclado emuma nova molécula de hemoglobina) e o restante da molécula de heme transforma-se

em bilirrubina (não é hidrossolúvel) e então precisa ser transportada no plasma pelaalbumina. Ao atingir o fígado esta bilirrubina é conjugada com o ácido glicurônico(agora torna-se hidrossolúvel) e pode ser excretada na bile.

Depois da reciclagem na circulação hepática e de um metabolismo aditivo, amaior parte dela é excretada nas fezes como urobilina e estercobilina e um pouco delatambém é excretado na urina como urobilinogênio.

-Tamanho:

Cão > Bovino > Caprino


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-Quantidade:

Caprino > Bovino > Cão

-Controle da Eritropoese:

O hormônio responsável pela regulação da taxa de eritropoese é umaglicoproteína, denominada ‘eritropoetina’ (EP ou EPO). O sítio para a produção deste

hormônio são os rins (por isso o hormônio é totalmente ausente em animaisnefrectomizados). O estímulo fundamental para a produção de eritropoetina é a hipóxiatecidual. A eritropoetina afeta a produção de hemácias de três formas:

-Mais células-tronco se diferenciam em precursores eritrocitários

-A velocidade de desenvolvimento dos estágios de maturação dehemácias é aumentada

-O tempo de trânsito para fora da medula óssea é reduzido

A eritropoetina pode ser estimulada ou inibida por hormônios, que na realidadeafetam o metabolismo celular, e por conseguinte, os requerimentos teciduais deoxigênio, exercendo uma retroalimentação na síntese de EPO.

O estímulo fundamental para a eritropoiese é a tensão tecidual de oxigênio (PO2).

A hipóxia tecidual desencadeia a produção de eritropoietina, um fator humoralespecificamente responsável pela produção de eritrócitos. É produzida pelos rins(células corticais endoteliais, glomerulares e intersticiais) e em menor proporção pelofígado (células de Kupffer, hepatócitos e células endoteliais). O rim é considerado aúnica fonte de eritropoietina no cão e o fígado é o sítio predominante no feto. Aeritropoietina é gerada pela ativação do eritropoietinogênio, uma alfa-globulina, pelofator eritropoiético renal ou eritrogenina, ou pela ativação da proeritropoietina,

produzida no rim, por um fator plasmático. A eritropoietina estimula a eritropoiese emvárias etapas, pela indução da diferenciação de progenitores eritróides (UFC-E) até

eritroblastos, estimulando a mitose de células eritróides e reduzindo seu tempo dematuração e aumentando a liberação de reticulócitos e eritrócitos jovens ao sangue periférico.

-Hormônios que aumentam a produção: andrógenos, cortisol, tiroxina,adrenalina, prolactina, hormônio do crescimento, TSH e ACTH.

-Hormônios que diminuem a produção: estrógenos

*Machos tendem a ter um volume globular (VG) maior que as fêmeas

*O excesso de um hormônio (hormônio que aumenta a produção) levará a um aumento

no VG (o exemplo mais comum é o excesso de cortisol no hiperadrenocorticismo)


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*A deficiência de um hormônio (hormônio que aumenta a produção) levará a umadiminuição do VG. São exemplos: hipotireoidismo, hipoadrenocorticismo.

- Exigência Nutricional:

-Ferro: mais componente da hemoglobina-Proteínas

-Vitaminas B2, B6 e B12

-Cobre: sistema anti-oxidante (ele se oxida no lugar de outros componentes)

-Funções:

-Equilíbrio ácido-base

-Transporte de O2 e CO2

- Hemoglobina:

-Possui 400 milhões de moléculas por eritrócito. A seqüência de aminoácidos dahemoglobina é o que diferencia a hemoglobina entre as espécies.

-Oxihemoglobina: ligada ao O2

-Desoxihemoglobina: ligado ao CO2

-Carboxihemoglobina: ligado ao CO (irreversível).

Metabolismo da Hemoglobina

Normalmente após 120 dias, as hemácias são fagocitadas pelo Sistema Retículo-Endotelial (baço e fígado) e a fração heme da hemoglobina serve de fonte para aformação da bilirrubina. Assim, cerca de 80% da bilirrubina formada no organismoderiva da hemoglobina de hemácias. O restante (20%) deriva da degradação de

hemoproteínas não hemoglobínicas como catalase e citocromos. A fração heme dahemoglobina é degradada em biliverdina pela remoção do complexo ferro- protoporfirina da globina. A biliverdina, por sua vez, é transformada em bilirrubinaindireta (não conjugada) pela ação da biliverdina-redutase. Neste processo, sãoformados bilirrubina indireta ou não conjugada (lipossolúvel).

A Bilirrubina indireta (não conjugada), sendo lipossolúvel necessita ligar-se àalbumina para ser transportada até o hepatócito. Chegando ao hepatócito, é captada nasua face sinusoidal por proteínas intracelulares que funcionam como receptores,facilitando a transferência do pigmento para o interior do hepatócito.


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O transporte intracelular é realizado através do complexo protéico-pigmentar queé transportado dentro do citoplasma até os microcosmos do Retículo EndoplasmáticoLiso (REL). Duas proteínas chamadas ‘Y’ e ‘Z’ são responsáveis por este transporte.

Nos microssomos do REL, a Bilirrubina indireta (não conjugada) é conjugada ao ácidoglicurônico por ação da enzima UDP-glicuroniltransferase, formando a bilirrubina diretaou conjugada.

A Bilirrubina direta (conjugada) é excretada do fígado sob a forma de umcomplexo micelar com o colesterol, fosfolipídios e sais biliares e atinge o intestino ondesofre ação das bactérias que promovem sua desconjugação, redução e formação dourobilinogênio e estercobilinogênio. Uma parte do urobilinogênio é reabsorvido erecaptado pelo fígado (circulação entero-hepático – 5%), voltando para a correntesanguínea e sendo excretada na urina pelos rins.O estercobilinogênio é oxidado àestercobilina que é eliminada pelas fezes.

* Hiperbilirrubinemia: alta da bilirrubina circulante, levando à uma icterícia.

Causas:

1- Pré-Hepática: hemólise intravascular. Devido à eficiência do sistemaretículo endotelial, é possível um grau leve a moderado de hemólise, sem quehaja icterícia. Entretanto, com o aumento da severidade da hemólise, acapacidade excretora é ultrapassada e há o desenvolvimento dahiperbilirrubinemia (icterícia).

2-

Hepática: insuficiência hepática. Devido à grande quantidade de funçõesexercidas pelo fígado, a insuficiência deste órgão pode apresentar diversassíndromes clínicas. Geralmente, ocorre insuficiência das funções deconjugação/excreção. A mensuração da função hepática (ALT, AST efosfatase alcalina) nem sempre estará anormal.

*Há mais esterobilinogênio na corrente sanguínea, pois quando reabsorvido, nãoconsegue ser excretado novamente pelo fígado.

3- Pós-Hepática: doença biliar obstrutiva. Pode ser uma obstrução intra-

hepática ou pós-hepática. Em casos de obstrução completa, a concentração plasmática de bilirrubina pode subir muito e as fezes ficam pálidas por causada ausência de estercobilina. Nos estágios iniciais as atividades plasmáticasdas enzimas do parênquima hepático geralmente estão normais, mas afosfatase alcalina encontra-se elevada.

*Hiperbilirrubinemia por jejum: o cavalo é a única espécie em que isto é prontamenteobservado. Em um cavalo anoréxico, a concentração de bilirrubina plasmática podesubir, mesmo na ausência de qualquer anormalidade hemolítica ou hepatobiliar. Podeocorrer devido ao fato dos ácidos graxos livres, que aumentam no plasma durante o

jejum em cavalos, competirem com a bilirrubina pela captação nos hepatócitos.


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*Hiperbilirrubinemia Pré e Pós-hepático podem ser tornar Hepático pela sobrecarga queo fígado recebe.

*Para a diferenciação do tipo de icterícia o animal apresenta, deve-se dosar as bilirrubinas (direta e indireta) e o urobilinogênio.

Icterícia

Pré-Hepática Hepática Pós-Hepática

Bil ir rubina Direta Normal

Bilirrubina

Indireta

Normal

Urobil inogênio

*Bilirrubina Direta e Indireta, a dosagem é feita pelo sangue. Consegue-se dosar a bilirrubina total e a direta, a bilirrubina indireta é obtida pela subtração dos 2 valoresobtidos. Usa-se o soro para a dosagem, e este deve ser protegido da luz.

*O Urobilinogênio, a dosagem é feita pela urina.

Metabolismo de Ferro

-Características:

-É absorvido no intestino

-Transportado pela transferrina (proteína plasmática)

- Na medula óssea há a formação do ‘heme’

-O excesso de ferro é transportado para ó fígado pela transferrina e é armazenado

sob a forma de ‘ferritina’ (ligado à apoferritina).

*Anemia da Inflamação Crônica: em uma septicemia, as bactérias necessitam deferro para seu metabolismo. O organismo para se defender retira sua própriareservas de ferro, causando uma anemia.


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Eritrograma

-É o estudo da série vermelha (eritrócitos ou hemácias). Ao microscópio, ashemácias têm coloração acidófila (afinidade pelos corantes ácidos que dão coloraçãorósea) e são desprovidos de núcleo (exceto aves, répteis e anfíbios). As hemácias

apresentam coloração central mais pálida e coloração um pouco mais escura na periferia. Elas são bicôncovas. Quando uma hemácia tem tamanho normal ela échamada de normocítica. Quando ela apresenta coloração normal é chamadade normocrômica.

-Utilizado para a determinação da concentração da Hemoglobina (Hb)

-Utilizado para a determinação do Volume Globular (VG) – Hematócrito

-Utilizado para a determinação dos índices hematimétricos (VGM, CHGM e

DDE)

-E é utilizado para a avaliação morfológica dos eritrócitos.

1-Contagem de Eritrócitos: (µL)

-Método manual: utilizando a câmara hemocitométrica ou de Neubauer.

Procedimento: Para contagem de hemácias deve-se fazer a seguintediluição: 4 ml de solução fisiológica e 20 µl de sangue (homogeneizar antes de coletaruma alíquota). Nesta diluição, cada célula contada na câmara de Neubauer equivalerá a

10.050 células reais.Este fator de 1/10.500 foi calculado da seguinte forma:-A altura da câmara corresponde a 0,1 mm 1/10 -São contados apenas 5 micro-quadrantes do quadrante central 1/5

-Método automatizado: utilizando aparelho para contagem de eritrócitos.


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2- Determinação da Concentração de Hemoglobina: (%)

-Método Químico: método de cianeto-hemoglobina (hemoglobinômetro Hemocue®).

3- Determinação do Volume Globular (VG) ou Hematócrito: -Método do Microhematócrito: o procedimento é inicialmente feito pelo

preenchimento do tubo de micro-hematócrito com sangue por capilaridade. Depois estetubo é fechado no fogareiro. Pode haver as entre o final do tubo já fechado e o sangue,mas isso não é problema porque este ar é removido pela centrifugação. Posteriormente otubo é levado à centrífuga e é encaixado corretamente. Normalmente se espera nomínimo 5 minutos com exceção de sangue de caprinos, que leva em torno de 15minutos para total compactação das hemácias no fundo pelo fato de as hemácias seremmuito menores.

Após a remoção do tubo da centrífuga, é possível notar três camadas distintas notubo: a coluna de plasma no topo, as hemácias compactadas no fundo e uma finacamada esbranquiçada de leucócitos sobre as hemácias. É necessário verificar qualqueralteração no plasma (coloração) que pode estar normal, ictérica, lipêmica e hemolisada.

-Volume Globular:

Corresponde à porcentagem de hemácias presentes no sangue. É calculado a partir de uma coluna de sangue, sua centrifugação promove compactação máxima dashemácias

VG: policitemia (relativa ou absoluta/vera)

VG: anemia (relativa ou absoluta)

VG

Normal

Eritrócitos Plasma

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1- Normal

2- Anemia Relativa: se deve basicamente ao aumento do volume do líquido

plasmático no sangue, e as principais origens relacionadas são: gestação,

hiperproteinemia e fluidos intravenosos.

3- Anemia Absoluta: se deve a diminuição no número de eritrócitos.

4- Policitemia Absoluta: a policitemia absoluta primária (ou policitemia vera,

eritropoese independente) está relacionada com processos leucêmicos, sendo de

etiologia desconhecida. Está policitemia é caracterizada pelo aumento da massa

eritrocitária, por proliferação autônoma (eritropoese independente). Neste caso a

medula produz glóbulos em quantidades acima do normal. A policitemia vera produz aumenta o eritrócito e a volemia globular (hipervolemia globular). A

eritropoetina está normal. A policitemia absoluta secundária (ou eritrocitose -

aumento da produção da eritropoetina) pode ser fisiológico ou patológico.

5- Policitemia Relativa: Observamos a policitemia relativa (ou hemoconcentração)

em casos desidratação (diarréia e vômito).

Índices Hematimétricos

Os índices hematimétricos fornecem importantes informações sobre o tamanho,concentração de hemoglobina e peso da hemoglobina de uma hemácia média.

VGM: Volume Globular Médio (ƒL)

É uma mensuração do tamanho das hemácias e é obtido por simples cálculoaritmético a partir do hematócrito (VG) e da contagem de hemácias da amostra:

VGM (ƒL )= VG x 100

Nº de eritrócitos

ƒL: fentolitro = 10-15L

VGM das espécies:

Espécie VGM (ƒL) médio

Cão 70

Suíno 60


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Bovino 50

Felino 45

Eqüino 45

Ovino 30

Caprino 15

A classificação quanto ao VGM se dá da seguinte forma:

- Normocítico: VGM normal

- Macrocítico

: VGM aumentadoEx.: eritropoese acentuada (células novas)

- Microcítico: VGM diminuído

Ex.: anemia ferro-priva

*Animais jovens tendem a ter hemácias menores em relação aos animais adultos, paradoxalmente, os neonatos, têm hemácias tão grandes quanto as de animais adultos.

-CHGM: Concentração de Hemoglobina Globular Média (% ou g/dL)

-Ó CHGM é uma mensuração da concentração de hemoglobina nas hemácias e éobtido aritmeticamente a partir do hematócrito (VG) e da concentração total dehemoglobina da amostra.

CHGM (g/dL ou %) = Hb x 100

VG

A classificação quanto ao CHGM se dá da seguinte forma:

- Normocrômico: CHGM normal

- Hipocrômico: CHGM diminuído

Ex.: anemia ferro-priva

-Hipercrômico: não existe – erro laboratorial

Ex.: amostra de sangue hemolisada, plasma lipêmico, tudo preenchido parcialmente, entre outros.


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- DDE ou RDN: Distribuição do Diâmetro Eritrocitário

É feito por aparelhos eletrônicos.

E faz a mensuração do diâmetro (calcula anisocitose numericamente).

* Policromatofilia ou Policromasia:

O termo refere-se aos eritrócitos que tem coloração róseo-azulada emconseqüência da captação simultânea da eosina (pela Hb) e dos corantes básicos (peloRNA ribossômico). Uma vez que os reticulócitos são células cujo RNA ribossômicoabsorve corantes supravitais, formando um retículo visível, há um relacionamento entreos reticulócitos e as células policromáticas. Ambos são eritrócitos imaturos, recém-saídos da medula óssea

* Anisocitose:

Anisocitose é o aumento da variabilidade do tamanho dos eritrócitos que excedea observada em um indivíduo sadio. É uma anormalidade inespecífica comumenteencontrada nas desordens hematológicas.

Reticulócitos

A enumeração dos reticulócitos é freqüentemente realizada para a obtenção deinformações a cerca da integridade funcional da medula hematopoiética (respostamedular à anemia).

O reticulócito sofre um período inicial de maturação dentro da medula óssea e éentão liberado ao sangue periférico onde diferencia-se em hemácia madura. Ele é umacélula vermelha anucleada ligeiramente maior do que a hemácia madura, e contémresquícios de RNA e outras organelas que podem ser visualizadas com o uso decorantes supravitais do tipo do azul de cresil brilhante. Os reticulócitos ‘jovens”

possuem massas densas de RNA e outras substâncias, que vão se tornando granulares efinalmente desaparecem quando o reticulócito completa a sua diferenciação a eritrócitomaduro. Possuem 80% da hemoglobina do eritrócito maduro.

Os reticulócitos maturam-se em eritrócitos 24-48 horas na circulação ou no baço, onde podem ser seqüestrados temporariamente. O processo de maturação envolvea perda de algumas superfícies de membranas, receptores para transferrina efibronectina, ribossomos e outras organelas, obtenção da concentração normal dehemoglobina, organização final do esqueleto submembranoso, redução do tamanhocelular e mudança de forma para o aspecto bicôncavo.

A contagem de reticulócitos é mais útil para cães e gatos e tem alguma aplicação para vacas. Não é utilizado em eqüinos. A faixa de normalidade para mamíferosdomésticos representa as contagens esperadas quando o hematócrito é normal:

-Pequenos Animais (carnívoros): 0 a 60.000 células/µL


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-Bovinos: 0 células/µL

-Eqüinos: não liberam reticulócitos.

Em anemia, espera-se maior nível de liberação medular de reticulócitos desde

que a medula responda à anemia. Isso implica nas orientações apresentadas a seguirquanto à interpretação da contagem de reticulócitos em relação ao tipo de anemia.

-Anemia não-regenerativa com baixíssimo grau de regeneração: 0 a 10.000células/µL

-Anemia não-regenerativa com grau mínimo de regeneração: 10.000 a 60.000células/µL

-Anemia regenerativa com liberação discreta a moderada: 60.000 a 200.000células/µL

-Regeneração máxima: 200.000 a 500.000 células/µL

Exceção:

Os gatos representam uma espécie particular de animais, pois têm mais de umtipo de reticulócitos (agregados ou pontilhados).

Os reticulócitos agregados evoluem para a forma de pontilhado (resposta maisantiga) em aproximadamente 12 horas.

Devido ao curto período de maturação dos reticulócitos agregados, essas célulassão os melhores indicadores de liberação medular ativa. Portanto, apenas osreticulócitos agregados são contados em gatos.

E depois de feita a contagem deve-se calcular o valor corrigido, que é dada pelafórmula:

VG da amostra x quantidade de reticulócitos

VG médio da espécie

Parasitas

-Hemoparasitas

-Concentram-se em sangue capilar, deve-se fazer o esfregaço com o sangue da ponta de orelha ou cauda.

- Babesia spp: cães, eqüinos e bovinos

- Anaplasma spp: bovinos, ovinos e caprinos

- Mycoplasma sp (antiga Haemobartonella sp): cães e gatos


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Corpúsculos de Howell-Jolly

São eritrócitos com resto nucleares. Um aumento no conteúdo de corpúsculos de

Howell-Jolly está associado a anemia regenerativa (eritropoese acelerada), esplectomia

e supressão da função esplênica.

Ponteado Basofílico

É a presença de considerável número de pequenas inclusões basófilas, contendo

RNA, dispersas no citoplasma de eritrócito jovens. São compostas de agregados de

ribossomos. Raras hemácias com pontilhado basófilo podem ser vistas em distensões de

indivíduos normais. Comum em intoxicação por chumbo.

Corpúsculo de Lentz

São raramente encontradas em cães com cinomose (patognomônico). Quando

encontradas, elas apresentam variações de tamanho, quantidade e cor e são mais vistas

em hemácias policromatofílicas.

Aglutinação

A aglutinação de hemácias resulta em aglomerados de células irregulares e

esféricas devido às pontes de anticorpos. Aglutinação é um sinal muito sugestivo de

anemia hemolítica imunomediada ou em transfusão sanguínea com tipo de sangue

inadequado.

Eritrócitos Nucleados

O aumento da quantidade de hemácias nucleadas está associado a anemia

regenerativa e liberação precoce dessas células em resposta à hipóxia. Uma maior

quantidade de hemácias nucleadas também pode ser notada em animais com disfunção

do baço e com alto teor de corticosteróides.

Formação de Rouleaux

Corresponde ao posicionamento espontâneo das hemácias em forma de pilhas

lineares (semelhante a uma pilha de moedas). É normal nos eqüinos e uma quantidade

discreta também é normal em cães e gatos. Nota-se maior formação de Rouleaux


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quando há aumento da concentração de proteínas plasmáticas, como o fibrinogênio e

imunoglobulinas. Este aumento normalmente sugere gamopatia.

Eritrócitos Crenados (equinócitos)

São células espiculadas com várias projeções pequenas, afiladas, distribuídas

uniformemente pela superfície. A presença de equinócitos pode ser um artefato

(crenação) decorrente da alteração de pH, além disso, sua presença tem sido associada a

doença renal, linfoma, picada de cascavel e quimioterapia.

Acantócitos

-Parecem células crenadas

São hemácias espiculadas irregulares, com poucas projeções de comrpimentos

desiguais na superfície. Acredita-se que os acantócitos sejam provenientes de alterações

nas concentrações de colesterol ou de fosfolipídeos na membrana das hemácias.

Raramente são notados em esfregaços sanguíneos de cães com hepatopatia e são muito

constatados em gatos com lipidose hepática e cães com hemangiossarcoma.

Corpúsculo de Heinz

É causado pela desnaturação oxidativa da hemoglobina. Cerca de 1 a 2% das

hemácias de gatos normais contêm esses corpúsculos. Os corpúsculos de Heinz são

pequenas estruturas pálidas excêntricas presentes nas hemácias. Quando grande

quantidade de hemácias é afetada, pode haver uma anemia hemolítica grave e algumas

substâncias oxidantes induzem a formação destes corpúsculos também.

Não se coram com corantes de rotina (tipo Romanosky) e se coram com o ‘novo

azul de metileno’.

Leptócito ou Eritrócito em Alvo

Os eritrócitos em alvo possuem uma área de coloração aumentada no meio da

área de palidez central. Eritrócitos em alvo formam-se como conseqüência de um

excesso de membrana em relação ao volume do citoplasma, resultando em dobradura da

membrama. Tem pouca importância ao diagnóstico e pode se formar in vitro, quando há

contato do sangue com EDTA em excesso. Mas pode estar relacionada com doençashepáticas ou deficiência de ferro (baixa quantidade de hemoglobina).


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Poiquilocitose

A célula que tem forma anormal. Fala-se em poiquilocitose, quando há um

número exagerado de células de forma anormal. A altitude produz um certo grau de

poiquilocitose em indivíduos hematológicamente normais. A poiquilocitose é umaanormalidade comum, inespecífica, encontrada em várias desordens hematológicas:

pode resultar de produção de células anormais pela medula óssea ou de dano às células

normais após serem liberadas para a corrente sangüínea. E pode estar relacionadas com

a troca de eritrócitos (fase fetal para a jovem nos primeiros meses).

Esquistócito ou Esquizócito

São fragmentos das hemácias e geralmente se originam de traumatismoeritrocitário intravascular. Pode estar associado à deficiência de ferro, com animais com

coagulopatia intravascular disseminada (CID) e hemangiossarcoma.

Esferócito

São hemácias de coloração escura que perdem a palidez central. Parecem

pequenos, mas seu volume é normal. É resultado da fagocitose parcial pelos macrófagos

e perda de fragmentos de membrana e sugere anemia hemolítica imunomediada.

Anemia

É a diminuição no número de eritrócitos, hemoglobina e/ou hematócrito.

-Classificação quanto a resposta medular:

- Regenerativa: quando a medula óssea responde à anemia. O eritrogramaapresenta elementos que revelam regeneração ou resposta medular, que são:

reticulocitose, anisocitose e policromasia, podendo encontrar-se, muitas vezes, presençade metarrubrícitos, principalmente no cão e no gato e corpúsculos de Howell-Jolly. Sãonecessários dois a três dias para uma resposta regenerativa tornar-se evidente no sangue.

- Não Regenerativa: quando não há resposta por parte da medula óssea. Écausada por lesões na medula óssea ou ausência de elementos necessários para a

produção de eritrócitos. Este tipo de anemia apresenta curso clínico crônico e iníciolento, é acompanhada de neutropenia e trombocitopenia. Pode ser causada poreritropoiese reduzida (medula óssea hipoproliferativa), na ausência de eritropoietina(insuficiência renal crônica), na doença endócrina (hipoadrenocorticismo,

hiperestrogenismo, hipoandrogenismo), na inflamação crônica, lesão tóxica da medula(radiação, químicos, intoxicação por samambaia, infecção por vírus e ricketsias como a


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Ehrlichia canis). São anemias normocíticas normocrômicas. Na anemia arregenerativanão existem reticulócitos e nem policromasia.

-Classificação segundo índices hematimétricos:

- Macrocítica e Hipocrômica: VGM alto e CHGM baixo. Indica uma anemiaregenerativa, pois há presença de reticulócitos grandes com pouca hemoglobina. O graude macrocitose e hipocromia depende da severidade da anemia, associada à intensidadeda resposta eritropoiética medular, o que leva a reticulocitose sangüínea. Areticulocitose em resposta à anemia aumenta o VCM e reduz o CHCM. Entretanto,muitos dias devem passar desde a manifestação da anemia antes da alteração damorfologia eritrocítica se mostrar aparente.

Ex.: Babesiose

- Normocítica e Hipocrômica: apenas o CHGM está baixo. Indica uma anemianão regenerativa.

Ex.: por alguma falta de substrato para composição da hemoglobina

- Microcítica e Hipocrômica: VGM e CHGM diminuídos. Indica uma anemia

não regenerativa.

Ex.: deficiência de Ferro

- Normocítica e Normocrômica: índices hematimétricos normais. Indica uma

anemia não regenerativa.

Ex.: insuficiência renal crônica (não produz eritropoetina)

-Macrocítica e Normocrômica: apenas o VGM está aumentado. Em bovinos, nadeficiência de cobalto ou pastagem rica em molibdênio. A anemia resulta de umaassincronia da eritropoiese causada por alterações na maturação no estágio de pró-rubrícito a rubrícito basofílico, produzindo eritrócitos megaloblásticos na medula óssea.

Em cães poodle os eritrócitos macrocíticos normocrômicos não são acompanhados poranemia.-Classificação por alterações ou achados morfológicos:

- Na anemia regenerativa:

-Anisocitose

-Policromatofilia

-Eritrócitos nucleados


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-Corpúsculos de Howell-Jolly

-Ponteado Basofílico (agregado ribossômico)

- Na anemia não regenerativa

-Não tem

Leucócitos

Função: proteção do organismo contra antígenos.

Ex.: bactérias, vírus e parasitas.

-Classificação:

1- Granulócitos ou Polimorfonucleares: possuem núcleo condensado esegmentado. São células comumente referidas como granulócitos porque contém grandenúmero de grânulos citoplasmáticos que são lisossomas, contendo enzimas hidrolíticas,agentes antibacterianos e outros compostos

-Neutrófilos

-Eosinófilos

-Basófilos

2- Agranulócitos ou Mononucleares: não são destituídas de grânulos, mas

possuem grânulos em menos número.

-Linfócitos

-Monócitos

-Granulopoiese:

Mieloblasto

Pré-Mielócito

Mielócito (eosinofílico, basofílico e neutrofílico


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*1 stem-cell geram 32 células segmentadas.

-Compartimentos (medula óssea):

1- Proliferação (mitótico): constituído de mieloblastos, pré-mielócitos e

mielócitos

2- Maturação (pós mitótico): constituído de metamielócitos e bastonetes

3- Armazenamento (estoque): constituído de alguns bastonetes e segmentados.

*A liberação do compartimento de armazenamento acontece em horas e o aumentoda produção leva de 2 a 4 dias e o aparecimento de novas células no sangueacontece por volta do 5º dia.

- Leucopoese (Linfopoese):

- Produção fetal: medula óssea

- Produção pós-natal: são produzidos na medula óssea, nos órgãos linfóidescomo o timo, linfonodos, bursa de fabricius e baço, além dos tecidos linfóides viscerais,que incluem as placas de Peyer, tonsilas e apêndices.

- Recirculação: em torno de 70% dos linfócitos do sangue periférico que saematravés do tecido retornam ao sistema vascular para recirculação. Esta propriedade doslinfócitos torna difícil e imprecisa a estimativa da meia vida dos linfócitos.

O fenômeno de recirculação é de suma importância biológica porque

proporciona um mecanismo de distribuição generalizada de células linfóides ocupadascom a resposta imune sistêmica. Como resultado, um grande número de linfócitos

podem ser expostos a um antígeno depositado localmente no tecido. Estas célulasantigenicamente expostas podem ser transportadas por vários lugares no corpo para

propagar e montar uma vigorosa resposta imune.

- Funções dos Leucócitos:

1- Neutrófilos: é a linha primária de defesa. A função primária dos neutrófilos é a

fagocitose e morte de microorganismos (bactérias, fungos, parasitos e vírus). Osneutrófilos também podem causar dano tecidual e exercer efeito citotóxico, como

Metamielócito

Bastonete

Eosinófilo NeutrófiloBasófilo


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atividade parasiticida mediada por anticorpo e atividade tumoricida. Possuem grânuloslisossomais no interior dos vacúolos fagocíticos fundem-se com a membrana vacuolar

para formar um fagolisossomo e liberar seus componentes (metabólitos reativos de O2 – H2O2, O2

- e O-) para matar e digerir a bactéria.

Estão distribuídos na circulação sanguínea (compartimento circulante emarginal), e a circulação laminar mantém os neutrófilos contra a parede do vaso. Amaioria das espécies possuem o pool circulante igual ao marginal, mas no gato o poolcirculante é menor que o marginal (1:3).

*Numa inflamação aguda, há grande presença de células jovens na circulação. Ocompartimento de mitose (proliferação) está normal, mas os compartimentos dematuração e armazenamento estão diminuídos.

*Numa inflamação crônica, há grande presença de células jovens na circulação. Os

compartimentos de mitose (proliferação), maturação e armazenamento estão todosaumentados.

*Corticóides causam um ‘estresse crônico’, então há uma demarginação dos leucócitos

(aumento de neutrófilos e monócitos) e diminuição no número de linfócitos. E há presença de neutrófilos hipersegmentados.

*Adrenalina causa um ‘estresse agudo’, então há demarginação dos leucócitos (aumentono número de neutrófilos) e também no número de linfócitos pela esplenocontração.

2- Basófilos: são mediadores da hipersensibilidade do tipo tardia ou imediata.Possuem grânulos com histamina, heparina e algumas espécies serotonina. Não são

precurssores de mastócitos, porém possuem funções similares.

Quando estimulado antigenicamente sintetiza importantes fatores como Fatorativador plaquetário (FAP), substâncias de reação à anafilaxia (SRA) e tromboxano A2(TxA2).

3- Eosinófilos: o maior sítio de produção de eosinófilos é a medula óssea, emboratambém ocorra em menor grau em outros tecidos como baço, timo e linfonodoscervicais. Em geral, os eosinófilos são produzidos em torno de 2 a 6 dias e adentram no

sangue periférico aproximadamente 2 dias após.Os eosinófilos têm participação na regulação alérgica e resposta aguda

inflamatória e pode induzir dano tecidual. Podem ainda, participar na coagulação efibrinólise através da ativação do fator XII e plasminogênio.

As principais funções dos eosinófilos são: fagocitose e atividade bactericida,atividade parasiticida, regulação das respostas alérgicas e inflamatórias e injúriatecidual.

4- Linfócitos: os linfócitos T e B exercem diferentes funções e possuemreceptores de membrana para o reconhecimento de antígenos. Existe uma terceira

população de linfócitos que não expressam receptores de antígenos em suas membranas,as células exterminadoras naturais (Natural Killer), são derivadas da medula óssea e são


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funcionalmente distintas das células T e B pela sua habilidade de lisar certas linhagensde células tumorais sem prévia sensibilização.

As principais funções dos linfócitos incluem a imunidade humoral, imunidadecelular, regulação imune, atividade citotóxica e vigilância imune e secreção delinfocinas.

5- Monócitos: as funções dos monócitos e macrófagos incluem a transformaçãode monócitos em células efetoras teciduais (macrófagos); ação fagocítica e microbicida;regulação da resposta imune; remoção fagocitária de debris e outros restos celulares;secreção de monocinas, enzimas lisossomais, e outros; efeito citotóxico contra célulastumorais e eritrócitos; regulação da hematopoiese: grânulo, mono, linfo e eritro;regulação da inflamação e reparo tecidual e ainda coagulação e fibrinólise. Dentre os

produtos secretados pelos monócitos e macrófagos, citam-se componentes do sistemacomplemento, substâncias citotóxicas e antimicrobianas, produtos do metabolismo doácido aracdônico, enzimas lisossomais, fatores moduladores de outras células incluindo

interleucinas, fatores fibrinolíticos e pró-coagulantes e outros fatores.

Leucograma -É uma contagem dos leucócitos, faz parte do hemograma.

-Deve-se fazer uma avaliação quantitativa e qualitativa

-Deve-se fazer uma contagem total e uma contagem diferencial de leucócitos.

-Deve-se fazer uma avaliação morfológica destes leucócitos.

...citose: aumento no número

Ex.: leucocitose, linfocitose, monocitose

...filia: aumento no número

Ex.: neutrofilia, eosinofilia, basofilia

...penia: diminuição no número

Ex.: leucopenia, neutropenia, linfopenia, eosinopenia e monocitopenia

Parâmetros ≠ Valores

*Parâmetros: as células a serem contadas

Ex.: eritrócitos, neutrófilos....

*Valores: a quantificação da contagem de cada célula

Ex.: nº de eritrócitos, nº de neutrófilos....


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- Leucocitose:

1- Fisiológica: ocorre como uma resposta a adrenalina (excitação, medo,exercício extremo, gestação e parto), no qual o compartimento marginal de neutrófilose/ou linfócitos são mobilizados para a circulação geral, aumentando a contagem total de

leucócitos e o número de neutrófilo absoluto e/ou linfócitos. Assim uma neutrofilia oulinfocitose transitória, ou ambas, podem se manifestar. Esta condição é comum emanimais jovens e geralmente é desencadeada por distúrbios emocionais e físicos.Raramente o número de monócitos e eosinófilos aumenta.

2- Reativa: ocorre em resposta às doenças. Certas doenças podem induzir umaresposta específica, mas usualmente um padrão geral de resposta dos leucócitos éevidente, independente da doença. A leucocitose reativa pode ocorrer com ou semdesvio à esquerda.

- Leucopenia: em muitos animais, ocorre por neutropenia e linfopenia. A neutropenia écausa primária de leucopenia em animais com uma relação N:L maior que 1, elinfopenia em animais que a relação N:L é menor que 1. A neutropenia é mais comumem infecções bacterianas e linfopenia em infecções virais. Severas infecções bacterianase virais podem causar leucopenia associada com neutropenia e linfopenia, ou ambas etambém podem reduzir o número de outros leucócitos.

Tipos de Leucopenia: demanda tecidual aguda e maciça, produção reduzida pelamedula óssea (parvovirose, leucemia felina, drogas – estrógeno), produção ineficaz(neutropenia imunomediada) ou neutropenia por seqüestro (choque anafilático)

- Alterações Leucocitárias Quantitativas:

1-Neutrofilia: ocorre devido à uma infecção (bactérias, vírus, fungos ou parasitos), necrose, distúrbios imunomediados, estresse, hiperadrenocorticismo eleucemia.

2- Neutropenia: ocorre devido à uma infecção bacteriana aguda (bovinos e

eqüinos), toxemia, septicemia, esplenomegalia, drogas (estrógenos), radiação,leucemia, vírus da leucemia felina.

3- Eosinofilia: ocorre devido à uma inflamação (IgA) no trato respiratório,digestivo, peritônio e útero, perda tecidual crônica (reações alérgicas, parasitismo),hipoadrenocorticismo, estro em cadelas, síndromes hipereosinofílicas (granulomaeosinofílico e pneumonia eosinofílica), mastocitoma.

4- Eosinopenia: ocorre devido a um estresse agudo (adrenalina), estresse crônico(glicocorticóides endógenos), hiperadrenocorticismo, inflamação/infecções agudas.


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5- Basofilia: ocorre devido a dermatites alérgicas, eczemas e reações dehipersensibilidade. E está associado à eosinofilia.

6- Monocitose: ocorre devido a um hiperadrenocorticismo, esteróides, estressesevero (piometra), doenças imunomediadas, inflamação/afecção aguda ou crônica e

animais idosos.

7- Monocitopenia: muito difícil

8- Linfocitose: ocorre em animais jovens, fisiológico (medo, excitaçãogeralmente em felinos e eqüinos), vírus da imunodeficiência felina, infecçãocrônica, hipersensibilidade, doenças auto-imunes, pós-vacinação ehipoadrenocorticismo.

9- Linfopenia: ocorre devido a efeitos de esteróides (hiperadrenocorticismo,

corticóides, estresse severo), infecção sistêmica aguda, infecção viral recente(cinomose), lesão nos linfonodos ou dos vasos linfáticos (ruptura dos vasoslinfáticos - quilotórax), quimioterapia, radiação.

-Classificação dos Desvios de Neutrófilos:

Mieloblasto – Pró-mielócito – Mielócito – Metamielócito – Bastonete – Segmentado - Hipersegmentado

1- Desvio à Esquerda: Normalmente o sangue periférico contém pequeno

número de neutrófilos imaturos. Em muitas espécies este consiste de menos de 300 bastonetes/μl de sangue. O aumento da liberação da medula óssea de neutrófilosimaturos para o sangue ocorre quando aumenta a demanda funcional de neutrófilos paraos tecidos ou em casos de leucemias mielógenas ou mielomonocíticas agudas oucrônicas. A presença de neutrófilos imaturos no sangue, acima do número normal para aespécie, constitui um desvio à esquerda.

2- Desvio à Esquerda Regenerativo: quando a contagem total de leucócitos émoderadamente elevada por causa da neutrofilia e o número de neutrófilos imaturos(bastonetes) encontra-se abaixo do número de neutrófilos maduros (segmentados) –

resposta escalonada. Isto indica uma boa resposta do hospedeiro, e ocorre quando amedula óssea tem tempo suficiente (usualmente 3-5 dias) para responder à demandatecidual aumentada de neutrófilos.

-Leve: até bastonetes-Moderada: até metamielócitos-Intensa: mielócitos ou mais jovens

*Resposta escalonada: a séria anterior (mais jovem) sempre em menor quantidade doque a série posterior (mais madura).

Desvio à esquerda Desvio à direita


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3- Desvio à Esquerda Degenerativo: A contagem total de leucócitos varia, podendo ser normal, leucocitose ou leucopenia. A resposta principal é a presença deneutrófilos imaturos acima dos neutrófilos maduros (resposta não escalonada). O desviodegenerativo à esquerda indica que a medula óssea tem um esgotamento nocompartimento de reserva de neutrófilos segmentados e conseqüentemente ocorre aliberação de células imaturas, ultrapassando os neutrófilos maduros. Em muitas espéciesisso é um sinal de prognóstico desfavorável que requer um rigoroso protocoloterapêutico.

4- Desvio à Direita: É a presença no sangue circulante de vários neutrófiloshipersegmentados, isto é, neutrófilos com mais de 5 lóbulos. A hipersegmentaçãonuclear ocorre devido a presença circulante de corticosteróides, tanto endógenos comoexógenos. A deficiência da Vitamina B12 também pode levar a hipersegmentação, masé uma condição muito rara.

5- Reação Leucemóide: A reação leucemóide é geralmente uma leucocitose

reativa, consistindo de uma alta contagem de leucócitos com uma contagem absoluta deum tipo de leucócito, ou também um acentuado a extremo desvio à esquerda sugestivode leucemia. Portanto, é um processo patológico benigno, embora se assemelhe aleucemia granulocítica. Ocasionalmente, o quadro sangüíneo leucemóide pode envolveroutros tipos de leucócitos, como os linfócitos ou eosinófilos. Os resultados laboratoriaise a avaliação do paciente revelam que a doença não é uma leucemia. Exemplos dereações leucemóides:

-Extremo desvio à esquerda regenerativo visto na piometra e peritonite ativa

crônica em cães;-Acentuada linfocitose em condições supurativas crônicas como, por exemplo,reticulite traumática.

- Resposta Leucocitária em Bovinos: -Entre 6 e 24 horas: há uma leucopenia-Entre 24 e 48 horas: há uma leucopenia com desvio à esquerda-Entre 72 e 96 horas: leucócitos normais ou leucocitose por neutrofilia.

*Deve-se dosar o fibrinogênio que é uma proteína de resposta aguda.

- Alterações Leucocitárias Qualitativas:

- Neutrófilos tóxicos: granulação tóxica e/ou difusa basofilia citoplasmáticaacontece quando há continuado estímulo à granulopoiese, pela extensão e/ou duração deum processo inflamatório, há diminuição dos prazos de maturação das células

precursoras, e os neutrófilos chegam ao sangue com persistência da granulação primária, própria dos pró-mielócitos, normalmente substituída pela granulaçãosecundária, tênue e característica. Os grânulos primários são ricos em enzimas e coram-se em pardo escuro com os corantes usuais, e impropriamente denominados de

granulações tóxicas.


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-Corpúsculos de Döhle: são áreas, na periferia dos neutrófilos, nas quais houveliquefação do retículo endoplasmático. São de rara ocorrência, mas possuem interessediagnóstico por refletirem infecções graves e/ou sistêmicas. E em felinos é normal.

- Neutrófilos Hipersegmentados: no sangue normalmente predominam os

neutrófilos com 2 a 4 lóbulos nucleares, havendo poucos com cinco ou mais. O aumentoou predomínio de neutrófilos com mais de cinco lóbulos - hipersegmentados - é vistoquando há uma maior permanência destes na circulação. Esta sobrevida intravascular

prolongada caracteriza o desvio à direita. Isto acontece na insuficiência renal crônica,neutrofilias de longa duração, tratamentos com corticóides ou estresse, defeitosgenéticos raros ou em síndromes mieloproliferativas, degeneração em amostrasenvelhecidas.

-Corpúsculos de Lentz: corpúsculo eosinofílico no citoplasma de leucócitos patognomônico da cinomose canina. Sua ocorrência se limita à fase de viremia do processo infeccioso, sendo, portanto de pouca sensibilidade diagnóstica. Ocorre emneutrófilos, linfócitos, monócitos e hemácias.

- Monócitos Ativados: os monócitos apresentam vacúolos no seu interior,normalmente em resposta à hemoparasitos.

- Linfócitos Reativos: a ocorrência de linfócitos ativados acontece quando há umestímulo da série linfocitária, com o aparecimento de linfócitos com citoplasmaaumentado e basofílico, em parte seguindo a diferenciação para plasmócitos, cuja

presença é rara na circulação. A ativação de linfócitos na circulação deve-se

principalmente a uma exacerbada resposta humoral ou a uma leucemia de células plasmocitárias (Mieloma Múltiplo).

- Parasitas:

- Hepatozoon canis: neutrófilos

- Ehrlichia equi: neutrófilos

- Ehrlichia canis: monócitos e linfócitos

*Infecções por Ehrlichia desencadeia um processo de trombocitopenia.


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Recipientes para Coleta

1-Tubo de Tampa Vermelha:

Este tubo é destinado à obtenção de amostra de soro e não contém

anticoagulante. É utilizado para obtenção de soro necessário às análises bioquímicas

comuns.

2-Tubo de Tampa Roxa:

Este tubo contém o anticoagulante EDTA à 3% ou à 10%. A concentração de

3% é utilizada para coleta sanguínea de aves e repteis e o de 10% para outras espécies

animais. É utilizado aos exames hematológicos.

O anticoagulante EDTA preserva melhor o volume celular e as características

morfológicas das células. O EDTA é um quelante de cálcio, deixando o indisponível ao

sangue, fazendo com que não ocorra a coagulação.

3-Tubo de Tampa Verde:

Este tubo contém o anticoagulante Heparina. Este anticoagulante é utilizado para

alguns testes bioquímicos especiais, principalmente aqueles que requerem o sangue total

e podem ser influenciados por outros anticoagulantes.

A heparina impede a transformação do fibrinogênio em fibrina.

4-Tubo de Tampa Azul:

Este tubo contém citrato de sódio. É utilizado para determinação bioquímica de

substâncias ou fatores relacionados à coagulação.

5-Tubo de Tampa Cinza:

Este tubo contém fluoreto de sódio (NaF) e EDTA. O NaF inibe a enzima que

participa da via glicolítica, impedindo a metabolização da glicose pelos eritrócitos.

6-Tubo de Tampa Amarela:

Este tubo possui um ativador de coagulo e disponibiliza melhor o soro para

testes. É indicado para amostras pequenas de sangue.


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Referências Bibliográficas:

THRALL. M.A, et al. Hematologia e Bioquímica Clínica Veterinária. 1 Ed. São

Paulo: Roca, 2007.

KERR M.G. Exames Laboratoriais em Medicina Veterinária – Bioquímica eHematologia. 2 Ed. São Paulo: Roca, 2003.

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