PENETAPAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL DAN AKTIVITAS ... · Persetujuan Pembimbing PENETAPAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN FRAKSI ETIL-ASETAT EKSTRAK METANOL DAUN CABE

PENETAPAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL DAN AKTIVITAS

ANTIOKSIDAN FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK METANOL

DAUN CABE JAWA (Piper retrofractum Vahl.)

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Violeta Jesmile

NIM: 128114076

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2016

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i


ANTIOKSIDAN FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK METANOL

DAUN CABE JAWA (Piper retrofractum Vahl.)

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Violeta Jesmile

NIM: 128114076

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2016


Persetujuan Pembimbing


ANTIOKSIDAN FRAKSI ETIL-ASETAT EKSTRAK METANOL

DAUN CABE JAWA (Piper retrofracttrmYahl.)

Skripsi yang rirajukan oleh:

Violeta Jesrnile

NIM : \28114076

Telah disetujui oleh:

Pembimbing Utama

1'llI

Dr. Yustina Sri Hartini. M.Si.. Apt.Ll uqr.t .O/€

li.lltl-l-ill. .. . .. . . ,.j

i


Pengesahan Skripsi Berjudul

Pf,NETAPAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL DAN UJI AKTTWTASANTIOKSIDAN FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK METANOL

DAUN CABE JAWA (piper retrafractumyahL\

Oleh:

Violeta Jesmile

NIM: 1281t4076

Dipertahankan di hadapan panitia penguji Skripsi

Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma

pada tanggal: 18 Juli 2016

akultas Farmasi

(Aris ,si., Ph.D., Apt.)

Panitia Penguji:

1. Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt.

2. Yohanes Dwiatmaka, M.Si.

3. Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt.

Tanda Tangan

ilt

ill$ ,*n'r 7='"l,i1*ll


PERN} A-IAAN hE..\SLL,\N KARYI\

S:rya rnenyatakan clcngan sesungguhnya bairrva skripsi yang saya tulis ini

tidak rnemuat kar,va atilLr bagian karya orarig lain, kecr-rali y'ang telah

clisebr"rtkan clalarn kutipan clan daftar pustaka. sebagaimana layakr-i1'a karya

iir-niah.

Apabiia di kemuclian hari cliternukan rndikasi plagiarisme dalarn naskali rni.

tnaka saya berseclia urcnanggulrg scgala sanksi sesuai pcraturan pcrunrlan-rr-

undangan yang berlaku.

Yogyakarla, 27 J uni 2015

, Pt-'nuiis

mP-

iv


I,I]MBAII P!]RNYATA.\N PERSETU.I UAN

PUI}I,II({SI KNRYA II,N{I.\H UNTUK KI,PENTII{GAN,\I{.\DI'}{IS

Yans bcrtatrcla tansan cli bau,ah ini, sa.va mahasisrva Universitas Sanata l)hanirr

Nanla

Norlor Mahasisu,a

. Violeta Jesnrile

. 128114016

Dettti penuetlbangitn ilnru pcugetahuan^ saya nrcnrberikan kepaiia Pci'pr,istiikarit-r

Unlversit:rs Sanata l)hanla kerya ilmiah saya yang berjuclul :

PENI.I.Ar,AN K;\NDUNGAN FENoLIK ;,;l o,rA UJI .\K.I.I\.ITASAN'IIOKSID,\N FRAKSI ETIL i\SETAT EKSi'IRAK NI!,]'ANOL DAUNCA t] I'l .iA\l'A {P i p e r r e tr o.fi. tt ct u rtt Vahl.)

bcsertlr pcrztnukat vane cllperh-rkan (bila ada). Denuau dcntikizln sava r.r.icn'rirerikarr

kepacla Perpustakaatt lJnir'ersitas Sanaia Dharnra hak untuk nrcnr intlxr;t. irrc-

lgalrl-rkan clalant bentuk nteclia lain. rnengelolan,va Caiam bentLrk pangKal.iit d.iia.ttretrilistribusikatt sccara tertratas, dan mempublikasikannya di Inter:tel atau ntedialaitt r-tntuk kepentirigan akaclemis tanpa perlu menrinta iiin dari sava uraripuumenrberikan roy'altr kepacla sa1,a sclama tetap tnerrcantuntkan nallta sava scbagaipcnulis

1)ernikiart pcrnliataan ini yang saya buat delgan se|re11i'n1.a.

Dibr,rat cli Yogvakarta

Pacla tanggal : 27 J.rii 2016

)'li'.u1 ttertvlr tlr klr rr

q6,tsh-( \/ioleta .lesrnilc )


vi

HALAMAN PERSEMBAHAN

Kupersembahkan karya kecilku ini untuk orang-orang

terkasih.

Terima kasih atas DOA, DANA, DAYA yang diberikan kalian semua kepada

penulis.


vii

PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa atas

kebaikan hati-Nya yang penuh kasih, selalu memberikan hikmat dan kekuatan,

sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Penetapan

Kandungan Fenolik Total dan Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat

Ekstrak Metanol Daun Cabe Jawa (Piper retrofractum Vahl.) sebagai syarat

untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi dan mengakhiri pendidikan penulis di

program S1 Farmasi Universitas Sanata Dharma.

Walaupun banyak kesulitan dan hambatan dalam proses menyelesaikan

skripsi ini, peneliti dapat bertahan dan tetap berdiri teguh sampai langkah terakhir.

Keberanian dan semangat yang penulis miliki dapat terus dipertahankan bukan

karena diri penulis semata, namun juga karena bantuan dan kehadiran banyak

pihak dalam kehidupan penulis. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis

menyampaikan rasa terimakasih kepada:

1. Allah Yehuwa dan perantaraNya, Yesus Kristus. Dimana terus mendengarkan dan

menjawab doa-doa penulis dengan memberikan hikmat praktis, kekuatan dan

keberanian hingga akhir.

2. Ir. Ferdinand Hangewa, M.S. dan Martha Rumpuin, orang tua tercinta, motivator

terbesar dalam hidup penulis, yang tanpa syarat selalu setia mendoakan,

menyayangi, dan mendukung penulis kapan pun dan dimana pun.

3. Ibu Dr. Sri Hartini, M.Si., Apt. yang berperan bukan hanya sebagai dosen

pembimbing, namun juga sebagai ibu yang mau membuka dirinya untuk

memberikan bimbingan, kritik, saran dan juga semangat kepada penulis dalam

penulisan skripsi ini.

4. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si. selaku dosen penguji yang telah memberikan

dukungan, kritik dan saran yang membangun kepada penguji.

5. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt. selaku dosen penguji yang telah

memberikan kritik dan saran yang membangun kepada penguji.

6. Ibu Agustina Setiawati, M.Sc., Apt. selaku Kepala Penanggung Jawab

Laboratorium Farmasi, yang mengarahkan penulis dalam proses penelitian skripsi


viii

di laboratorium dan memberi izin dalam penggunaan fasilitas laboratorium

Farmakognosi-Fitokimia, Kimia Analisis Instrumental, Kimia Analisis, Kebun

Tanaman Obat, FTS Padat-Semisolid dan Kimia-Fisika demi kepentingan

penelitian skripsi ini.

7. Segenap laboran dan karyawan Laboratorium Farmasi Universitas Sanata

Dharma, khususnya bagi Pak Wagiran, Mas Kunto, Mas Bimo, Pak Parlan, Mas

Sigit, Mas Agung, Pak Mus dan Pak Ketul atas bantuan dan kerjasama di

laboratorium selama ini.

8. Kakak-kakak tercinta, Jeisli Forcen dan Marvel Dalty, yang selalu memberikan

nasihat dan dukungan baik secara moril maupun materiil kepada penulis. Serta

adik terkasih, Gregor Raka, yang selalu setia mewarnai hari-hari kehidupan

penulis. Kalian bertiga adalah kebanggaan penulis.

9. Bapak Enade Perdana Istyatono, Ph.D., Apt. selaku Dosen Pembimbing

Akademik, yang telah memberikan dukungan dan bimbingan selama menjalani

proses perkuliahan di Fakultas Farmasi hingga saat ini.

10. Staf Dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang selama penulis

berproses di bangku kuliah, kalian dengan sabar telah memberikan ilmu, nasihat,

motivasi, dan juga berbagai pengalaman yang nantinya dapat dimanfaatkan dalam

dunia kerja nanti.

11. Dr. Purnomo, M.S. selaku kepala Laboratorium Sistematika Tumbuhan, Fakultas

Biologi Universitas Gadjah Mada atas bantuannya dalam identifikasi tanaman

yang penulis gunakan dalam penelitian ini.

12. Saudara – saudari Yogyakarta Indonesian Congregation dan seluas dunia atas

doa, dukungan dan persaudaraan dalam Kristus yang hangat dan membangun.

13. Rekan-rekan tim payungan Piperaceae, Maria Indah Rosari, Yuliana Ratih

Kamara Dewi, Agatha Herny Sekar Natalia dan Clementia Nova untuk semua

bantuan praktis, wawasan, serta dukungan yang sangat berharga bagi penulis.

14. Teman luar biasa bagi penulis: Dayan, Anna, Dewi, dan Melani yang selalu

memberikan semangat dan menjadi tempat untuk berbagi suka dan duka. Terima

kasih penulis diberi kesempatan untuk mengenal, berteman dan belajar dari

kalian.


ix

15. Seorang kakak, sahabat dan yang terkasih, Surio. Thank you for your presence in

my life, for everysingle thing, even the smallest things. You are precious, believe

it.

16. Teman-Teman Angkatan 2012 Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma,

khususnya FSM B 2012 dan FKK A 2012 atas kebersamaannya,

Akhir kata, “tak ada gading yang tak retak”, begitu juga dengan skripsi

ini. Untuk itu, penulis berharap kritikan dan saran yang membangun dari semua

pembaca, guna perbaikan pada penelitian berikutnya. Semoga karya kecil ini

dapat bermanfaat bagi pembaca dan bagi perkembangan ilmu pengetahuan.

Yogyakarta, 27 Juni 2016

Penulis


x

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ............................................................................. i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..................................... ii

HALAMAN PENGESAHAN ................................................................. iii

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................. iv

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI.................. v

HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................. vi

PRAKATA .............................................................................................. vii

DAFTAR ISI ........................................................................................... x

DAFTAR TABEL ................................................................................... xi

DAFTAR GAMBAR .............................................................................. xii

DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................... xii

ABSTRAK .............................................................................................. xiv

ABSTRACT .............................................................................................. xv

PENDAHULUAN .................................................................................. 1

METODE PENELITIAN ........................................................................ 2

1. Bahan dan Alat ........................................................................... 2

2. Persiapan Sampel ........................................................................ 3

3. Analisis Fenolik Total ................................................................. 4

4. Analisis Aktivitas Antioksidan Metode FTC-TBA..................... 5

HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................... 5

KESIMPULAN ....................................................................................... 12

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................. 13

LAMPIRAN ............................................................................................ 16

BIOGRAFI PENULIS ............................................................................ 51


xi

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel I. Hasil Penetapan Kandungan Fenolik Total

FEA Cabe Jawa .................................................................... 6

Tabel II. Total Aktivitas Antioksidan BHT dan FEA Cabe Jawa

Metode FTC ......................................................................... 9

Tabel III. Total Aktivitas Antioksidan BHT dan FEA Cabe Jawa

Metode TBA ......................................................................... 10

Tabel IV. Aktivitas Antioksidan BHT dan FEA Cabe Jawa ................ 11


xii

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Reaksi Reagen Folin Ciocalteu dengan

Senyawa Fenol................................................................. 7

Gambar 2. Reaksi Pembentukan Kompleks Fe3+

- tiosianat dari

Kompleks Fe2+

- tiosianat oleh hidroperoksida .............. 7

Gambar 3. Profil Kenaikan Absorbansi Metode FTC

dalam Waktu 7 Hari......................................................... 8

Gambar 4. Reaksi Pembentukan Kompleks MDA-TBA .................. 9


xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Surat Pengesahan Determinasi Tanaman Cabe Jawa ..... 17

Lampiran 2. Klasifikasi Tanaman Cabe Jawa ..................................... 18

Lampiran 3. Penimbangan dalam Pembuatan Simplisia ..................... 19

Lampiran 4. Perhitungan Penetapan Kadar Air Simplisia ................... 20

Lampiran 5. Perhitungan Rendemen Ekstrak dan Fraksi .................... 20

Lampiran 6. Data Penimbangan Penetapan Kandungan Fenolik ......... 22

Lampiran 7. Data Peritungan Konsentrasi Asam Galat dan Fraksi

Etil-Asetat Penetapan Kandungan Fenolik Total ............ 22

Lampiran 8. Hasil Optimasi Operating Time Penetapan Kandungan

Fenolik Total ................................................................... 24

Lampiran 9. Hasil Optimasi Panjang Gelombang Maksimal untuk

Penetapan Kandungan Fenolik Total............................... 27

Lampiran 10. Hasil Pengukuran Kurva Baku Penetapan Kandungan

Fenolik Total ................................................................. 30

Lampiran 11. Perhitungan Kandungan Fenolik Total FEA ................. 31

Lampiran 12. Data Penimbangan untuk Uji Aktivitas Antioksidan

Metode FTC-TBA .......................................................... 32

Lampiran 13. Hasil Optimasi Metode Uji Antioksidan FTC-TBA ...... 36

Lampiran 14. Hasil Data Uji Aktivitas Antioksidan Metode FTC ....... 36

Lampiran 15. Hasil Data Uji Aktivitas Antioksidan Metode TBA ....... 42

Lampiran 16. Gambar Uji Pendahuluan dan Sampel Metode Folin

Ciocalteu ......................................................................... 48

Lampiran 17. Gambar Aktivitas Antioksidan Metode FTC-TBA ........ 49


xiv

ABSTRAK

Reaksi peroksidasi lipid dalam tubuh mengakibatkan berbagai penyakit

degeneratif. Antioksidan mampu mengurangi kecepatan peroksidasi lipid dengan

memberikan satu atau lebih elektron kepada radikal bebas sehingga membentuk

molekul normal kembali. Tanaman cabe jawa (Piper retrofractum Vahl.)

diketahui memiliki potensi sebagai antioksidan, juga mengandung senyawa

fenolik, antrakuinon, terpenoid, flavonoid dan lignin. Senyawa fenolik mampu

bertindak sebagai antioksidan dengan menangkap spesies reaktif. Penelitian

Risdian, et al. (2011) menunjukkan fraksi etil asetat memiliki IC50 terendah dan

kandungan fenolik total tertinggi, dimana menunjukkan fraksi etil asetat mampu

mengikat agen antioksidan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kandungan

fenolik total, serta aktivitas antioksidan dari fraksi etil-asetat daun cabe jawa.

Kandungan fenolik total diuji dengan menggunakan metode Folin-Ciocalteau, dan

aktivitas antioksidan pada tahap pertama peroksidasi lipid diuji menggunakan

metode FTC (ferric thiocyanate). Hasil reaksi peroksidasi lipid tersebut

selanjutnya dikonfirmasi dengan metode TBA (thiobarbituric acid). Hasil

penelitian menunjukkan kadar fenolik total fraksi etil-asetat daun cabe jawa

sebesar 140,43 ± 5,1219 mg GAE/g. Metode FTC menunjukkan bahwa potensi

antioksidan fraksi etil asetat daun cabe jawa yang dinyatakan dalam persen

inhibisi peroksida lipid dan persen inhibisi malondialdehid dengan metode TBA

berturut-turut sebesar 2,1888 ± 0,3246 % dan 90,2098 ± 0,9083 %.

Kata Kunci : Cabe Jawa, fenolik total, antioksidan, peroksidasi lipid, FTC, TBA.


xv

ABSTRACT

The reaction of lipid peroxidation in body result various degenerative disease.

Antioxidant can reduce the rate of lipid peroxidation by giving one or more

electron to the free radicals so as forming the molecules back to normal. Javanese

long pepper plant (Piper retrofractum Vahl.) that known has potential as an

antioxidant, also containing phenolics, anthraquinones, terpenoids, flavonoids and

lignin. Phenolic compound capable to act as antioxidant with scavenging a variety

of reactive species. Risdian et al. (2011) research showing ethyl acetate fraction

has lowest IC50 and highest total phenolic content, which showed the fraction

capable to binding antioxidant agent. This study aims to determine the total

phenolic contents and antioxidant activities of ethyl acetate fractions by Javanese

Long Pepper leaves. The total phenolic contents was measured by Folin-Ciocalteu

methods, and antioxidant activity on first step of lipid peroxidation was measured

by FTC (ferric thiocyanate) method. Result of lipid peroxidation reaction further

confirmed by TBA (thiobarbituric acid) method. The study result showed amount

of phenolic contents 140,43±5,1219 mg GAE/ g in ethyl acetate fraction by

Javanese Long Pepper leaves. The FTC methods showed antioxidant potential of

ethyl acetate fraction by Javanese Long Pepper leaves that be avowed in percent

inhibition of lipid peroxides and percent inhibition of malondialdehid by using

TBA methods continued in amount of 2,1888±0,3246 % and 90,2098±0,9083 %.

Key Words : Javanese Long Pepper, total phenolic, antioxidant, lipid

peroxidation, FTC, TBA.


1

PENDAHULUAN

Radikal bebas merupakan suatu senyawa molekul yang memiliki elektron

yang tidak berpasangan, tidak stabil dan cepat bereaksi dengan senyawa lain

(seperti DNA, asam lemak tak jenuh) sehingga membentuk lebih banyak radikal

bebas secara berantai. Molekul target yang paling rentan terhadap serangan

radikal bebas adalah asam lemak tak jenuh (PUFA – Poly Unsaturated Fatty

Acids). Jaringan lipid yang dirusak oleh senyawa radikal bebas akan membentuk

peroksida yang memicu munculnya berbagai penyakit degeneratif (Lamid, A.,

1995; Winarsi, 2007; Parida dan Dhal, 2011). Senyawa antioksidan mampu

mengurangi kecepatan peroksidasi lemak karena memiliki peran sebagai pemberi

elektron atau reduktan, dimana senyawa ini akan memberikan satu atau lebih

elektron kepada radikal bebas sehingga akan membentuk molekul normal kembali

dan menghentikan berbagai kerusakan yang ditimbulkan (Sasikumar, et al., 2009;

Thitilertdecha et al., 2010). Antioksidan alami lebih banyak diminati

dibandingkan antioksidan sintetik, karena antioksidan sintetik seperti butylated

hydroxytoluene (BHT) diketahui dapat meningkatkan terjadinya efek karsinogenik

(Umemura et al., 2001).

Salah satu famili tanaman yang telah diketahui menunjukkan potensi

besar sebagai antioksidan adalah Piperaceae (Dodson, et al. dalam Nahak dan

Sahu, 2011). Piper retrofractum Vahl. merupakan salah satu spesies dari famili

Piperaceae (USDA, 2016). Di Indonesia, tanaman ini dikenal dengan nama cabe

jawa (Lim, 2012). Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, ekstrak metanol

daun cabe jawa menunjukkan bahwa daun cabe jawa memiliki aktivitas

antioksidan dengan menggunakan metode penangkal radikal DPPH, dan hasil

skrining fitokimia menunjukkan bahwa daun cabe jawa memiliki kandungan

fenolik, antrakuinon, terpenoid, flavonoid, dan lignin (Prasad, et al., 2012).

Senyawa fenol dikenal sebagai salah satu konstituen terpenting tanaman,

dan memiliki kemampuan untuk menangkal radikal (Kawamura, et al., 2011).

Senyawa fenolik mampu bertindak sebagai antioksidan dengan memutuskan

ikatan rantai radikal bebas secara langsung dan menangkap berbagai spesies

reaktif seperti radikal superoksida, hidroksil dan peroksil dan asam hipoklorit


2

(Kosar, et al.; Payet, et al.; Cai, et al.; Halliwell, et al. dalam Nurmi, A., 2008).

Senyawa ini dapat mencegah penyakit jantung, mengurangi peradangan,

menurunkan kejadian kanker dan diabetes, serta mengurangi tingkat mutagenesis

pada sel (Khoddami, et al, 2013).

Pada penelitian ini, peneliti memilih untuk menggunakan fraksi etil asetat

dari ekstrak metanol daun cabe jawa. Hal ini didasari sebuah penelitian uji

aktivitas antioksidan Piper betle L. pada berbagai pelarut dengan metode DPPH

yang menunjukkan bahwa nilai IC50 (inhibitory concentration 50) terendah

terdapat dalam fraksi etil asetat sebesar 2,89 μg/mL, dan kandungan fenolik total

tertinggi dideteksi pada fraksi etil asetat sebesar 559,38 μg EGCG/mg

(micrograms epigallocatechin gallate / mg sample) dibandingkan ekstrak etanol,

fraksi heksan, fraksi butanol dan fraksi air (Risdian et al., 2011). Dari hasil ini,

dapat diasumsikan bahwa fraksi etil asetat (FEA) mampu mengikat agen

antioksidan dibandingkan fraksi lainnya.

Penelitian ini dilakukan untuk melihat seberapa besar kandungan

senyawa fenolik dan seberapa besar aktivitas antioksidan dari fraksi etil-asetat

(FEA) daun Cabe Jawa. Penggunaan metode uji aktivitas antioksidan Ferric

Thiocyanate (FTC) – Thiobarbituric Acid (TBA) didasarkan pada kemampuan

metode ini untuk mengukur jumlah peroksida pada tahap awal peroksidasi lipid,

kemudian dilanjutkan dengan mengukur jumlah peroksida pada tahap kedua

peroksidasi lipid dan mengukur radikal bebas yang ada setelah oksidasi peroksida

(Aqil, et al., 2006; Rezaeizadeh, et al., 2011).

METODE PENELITIAN

1. Bahan dan Alat

Bahan yang digunakan yaitu daun cabe jawa segar (dari kebun obat “Merapi

Farma”) yang dideterminasi di Laboratorium Taksonomi Tumbuhan Bawah

Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada, akuades, metanol pa (Merck), etil-

asetat pa (Merck), asam galat pa (Sigma), natrium karbonat 1 M teknis, etanol

(Merck), asam linoleat (Sigma), buffer fosfat 0,02 M (pH 7,0), ammonium

thiocyanate 30% (Merck), ferrous chloride 0,02 M pa dalam HCl teknis (Merck),


3

asam tiobarbiturat (Merck), reagen Folin Ciocalteau (Merck), BHT, asam

trikloroasetat (Merck).

Alat yang digunakan antara laim spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu UV-

1240), Oven, alat penyerbuk (Retsch), alat pengayak, centrifuge, Vaccum Rotary

Evaporator (Janke & Kunkel), timbangan elektrik BP 160 readability 0,10 mg,

waterbath (Emerson), micropipet 200-1000 μL (Acura 825, Socorex), orbital

shaker, corong Buchner, pompa vakum, vortex (Genie Wilten), dan alat-alat gelas

yang lazim digunakan di laboratorium analisis (Pyrex Iwaki Glass).

2. Persiapan Sampel

a) Pembuatan Simplisia Daun Cabe Jawa

Daun Cabe Jawa segar yang diperoleh dari Merapi Farma disortasi basah,

daun dipisahkan dari bahan organik asing atau bagian tumbuhan lain yang ikut

terambil, tanah, kerikil, atau pengotor lainnya. Selanjutnya, dicuci dengan air

bersih yang mengalir dan ditiriskan, kemudian dirajang menggunakan pisau

berbahan “stainless steel” dengan lebar irisan ± 1 cm. Kemudian, dikeringkan

menggunakan oven pada suhu 400C dengan lama pengeringan 8 jam selama 6

hari. Daun yang telah kering selanjutnya disortasi kering, dengan cara dipisahkan

kembali dari kotoran, bahan organik asing dan simplisia yang rusak akibat proses

pengeringan. Kemudian diserbuk menggunakan alat penyerbuk dan diayak

menggunakan pengayak dengan No. mesh 50 (Soegiharjo, 2013).

b) Pembuatan ekstrak Metanol Daun Cabe Jawa

Serbuk simplisia sebanyak 10 gram ditimbang, kemudian dimaserasi

dengan metanol teknis selama 3 hari pada suhu ruangan dengan menggunakan

orbital shaker. Filtrat disaring menggunakan corong buchner dan dikumpulkan

dalam wadah yang diberi label filtrat. Ampas sisa-nya diremaserasi kembali

seperti cara di atas hingga warna larutan penyari menjadi bening, yang berarti

sebagian besar senyawa yang larut dalam metanol telah terekstrak. Pelarut pada

filtrat dihilangkan dengan cara diuapkan menggunakan vaccum rotary evaporator


4

dan dipekatkan dengan menggunakan waterbath (T= 600C), untuk diperoleh

ekstrak kental (Artini, et al., 2013; Setyowati, et al., 2007).

c) Pembuatan Fraksi Etil-Asetat

Ekstrak metanol kental daun Cabe Jawa difraksinasi menggunakan

metode ekstraksi cair-cair, dimana ekstrak dilarutkan dengan akuades hangat,

kemudian difraksinasi menggunakan akuades : etil asetat (1:1 v/v) di dalam

corong pisah. Lapisan etil asetat (bagian atas) selanjutnya diambil, dan ditampung

dalam wadah yang diberi label fraksi etilasetat. Lapisan air (bagian bawah)

difraksinasi kembali menggunakan etil asetat dengan perbandingan yang sama.

Tahapan ini diulang hingga warna larutan menjadi jernih. Fraksi etil asetat yang

didapat dipekatkan menggunakan vaccum rotary evaporator, kemudian

dipekatkan kembali menggunakan waterbath (T = 770C) untuk diperoleh fraksi

etil asetat yang bebas dari pelarut, yang diketahui melalui selisih antara

penimbangan ekstrak pertama dan penimbangan kedua sebesar 0,0005 (Darwiati,

W., 2013; Kusumanto, 2014).

3. Analisis Fenolik Total

Penetapan kandungan fenolik total dengan metode Folin Ciocalteu

menurut Rami, et al. (2013) yaitu larutan fraksi diambil 0,5 mL dari konsentrasi

200 μg/mL dan ditambahkan 2 mL reagen Folin Ciocalteu, didiamkan selama 5

menit dalam suhu ruang. Selanjutnya ditambahkan 4 mL Na2CO3 (Natrium

Karbonat) 1 M. Berdasarkan hasil optimasi, diinkubasi 30 menit dan absorbansi

diukur pada = 735 nm dengan spektrofotometer. Hasil dinyatakan dalam mg

ekivalen asam galat per gram fraksi ± SD. Standar kurva yang digunakan adalah

asam galat dengan konsentrasi 40, 50, 60, 70, 80 μg/mL. Rumus perhitungan :

T = C.V/M

Keterangan

T = kandungan fenolik total (mg/g); C= konsentrasi hasil perhitungan dari

absorbansi yang didapat (mg/ml); V= volume senyawa uji (ml); M= massa

senyawa uji (mg).


5

4. Analisis Aktivitas Antioksidan Metode FTC-TBA (Ferric Thiocyanate –

Thiobarbituric Acid)

Metode FTC-TBA mengacu pada Aqil, et al (2006). Fraksi dan standar

BHT sebanyak 4 mg, dilarutkan dalam 4 ml etanol absolut dan ditambahkan 4,1

ml asam linoleat 2,5%, 8,0 ml buffer fosfat 0,05 M (pH 7), dan 3,9 mL akuades.

Kemudian diinkubasi dalam oven pada suhu 400C (Larutan A). Kemudian,

diambil 0,1 ml larutan ke dalam larutan yang telah berisi 9,7 mL etanol 75% dan

0,1 mL ammonium tiosianat 30% (Larutan B). Selanjutnya, ditambahkan 0,1 mL

ferrous choride 0,05 M dalam 3,5% HCl. Sesuai hasil optimasi, didiamkan selama

5 menit dan absorbansi warna merah diukur pada = 488,5 nm. Pengukuran

dilakukan setiap 24 jam sampai 1 hari setelah absorbansi kontrol negatif

maksimum. Larutan tanpa sampel sebagai kontrol negatif.

Selanjutnya, larutan A sampel pada hari pengukuran terakhir diambil

sebanyak 1 mL dan ditambahkan 2 mL asam trikloroasetat 20% dan 2 mL asam 2-

tiobarbiturat 0,67%. Campuran tersebut dipanaskan dalam waterbath pada suhu

950C selama 10 menit dan disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 30

menit. Absorbansi supernatant tersebut diukur pada = 532 nm. Rumus

perhitungan persen inhibisi :

%Inhibisi = (A0 – A1/A0) x 100%

Keterangan

A0 = absorbansi maksimum kontrol negatif; A1 = absorbansi maksimum sampel.

Dari nilai rata-rata persen inhibisi ± SD dilakukan uji distribusi

menggunakan metode Kolmogorov-Smirnov. Dilakukan analisis one sampel T-

test dan Independent Sampel T-test untuk data terdistribusi normal, dengan taraf

kepercayaan 95% untuk melihat perbedaan secara statistik.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Estimasi kandungan fenolik total tumbuhan dapat dilakukan dengan

mengunakan pereaksi Folin-Ciocalteu. Penetapan kandungan fenolik total dimulai

dengan membuat kurva baku asam galat. Asam galat digunakan sebagai standar


6

kurva baku karena asam galat merupakan turunan dari asam hidrobenzoat yang

tergolong asam fenol sederhana. Kandungan fenol asam organik ini juga bersifat

murni dan stabil (Lee, et al., 2003). Pembuatan kurva baku asam galat dilakukan

sebanyak tiga replikasi dan untuk menentukan kandungan fenolik total digunakan

persamaan dengan nilai r terbaik. Nilai r menunjukkan nilai linearitas yaitu

korelasi antara konsentrasi dan absorbansi yang dihasilkan. Semakin baik nilai

linearitas (nilai r = 1 atau mendekati 1) maka korelasi juga semakin baik.

Berdasarkan ketiga persamaan regresi yang telah didapat (Lampiran 10.),

dipilih persamaan dengan nilai r mendekati 1 yaitu persamaan replikasi III, y =

0,00662x + 0,0974 dengan nilai r sebesar 0,9924. Koefisien korelasi yang baik

dilihat dari kesebandingan antara penambahan konsentrasi asam galat dan

penambahan absorbansi. Berdasarkan perhitungan menggunakan persamaan

regresi linear , y = 0,00662x + 0,0974, maka didapatkan kandungan fenolik total

fraksi etil asetat daun Cabe Jawa sebesar 140,43 ± 5,1219 mg ekivalen asam galat

per g fraksi etil asetat ( mg GAE/g FEA cabe jawa, lihat Tabel I.).

Tabel I. Hasil Penetapan Kandungan Fenolik Total FEA Cabe Jawa

Konsentrasi Absorbansi Kandungan

Fenolik Total Rata-rata %CV

Replikasi 1 200 μg/ml 0,274 133,40 140,43 ±

5,1219 3,6472% Replikasi 2 200 μg/ml 0,286 142,45

Replikasi 3 200 μg/ml 0,290 145,45

Adapun prinsip dasar kolorimetri Folin Ciocalteu adalah reaksi oksidasi

yang cepat dengan menggunakan alkali seperti natrium karbonat, dimana

absorbansi yang terbentuk akibat fosfotungstat biru sebanding dengan jumlah

senyawa fenolik yang terdapat dalam sampel (Cicco dan Latanzio, 2011 ; Cindric

et al., 2011). Reaksi yang terjadi sebagai berikut:


7

Gambar 1. Reaksi Reagen Folin-Ciocalteu dengan Senyawa Fenol

(Sumber: Hardiana et al, 2012)

Tanaman cabe jawa diketahui mengandung senyawa fenolik seperti

senyawa piplartine/piperlongumine, sitosterol, 3,4,5-Trimehoxydihydrocinnamic

acid dan lignin (Parmar, et al., 1997; Prasad, et al., 2012). Senyawa-senyawa

inilah yang diduga bertanggung jawab dalam pembentukan kompleks warna

fosfongtungstat biru dan penetapan kandungan fenolik total yang didapat.

Uji aktivitas antioksidan dengan metode FTC dan TBA merupakan

metode pengukuran aktivitas antioksidan berdasarkan kemampuannya dalam

menghambat reaksi peroksidasi lipid. Dimana metode FTC untuk mengukur

jumlah peroksida pada tahap awal peroksidasi lipid, kemudian dilanjutkan dengan

penggunaan metode TBA untuk mengukur jumlah peroksida pada tahap kedua

peroksidasi lipid dan mengukur radikal bebas yang ada setelah oksidasi peroksida

(Aqil, et al., 2006; Rezaeizadeh, et al., 2011).

Pada metode FTC, peroksida yang terbentuk selama oksidasi asam

linoleat akan bereaksi dengan Fe2+

untuk membentuk Fe3+,

yang kemudian akan

bereaksi dengan thiocyanate untuk membentuk kompleks warna merah.

Keberadaan senyawa antioksidan akan memperlambat oksidasi asam linoleat, lihat

gambar 2. (Ono et al. dan Gulcin & Dastan dalam Charles, 2013).

Gambar 2. Reaksi Pembentukan Kompleks Fe3+

-tiosianat dari Kompleks Fe2+

-tiosianat oleh

hidroperoksida (Sumber: Moon dan Shibamoto, 2009)


8

Gambar 3. Profil kenaikan absorbansi metode FTC dalam waktu 7 hari

Pembacaan terjadinya proses peroksidasi lipid dapat dilakukan sampai

kontrol negatif menunjukkan nilai absorbansi maksimum dan pada penelitian ini,

absorbansi maksimum kontrol negatif diperoleh pada hari keenam, seperti yang

tergambar dalam profil absorbansi (gambar 3). Nilai absorbansi menunjukkan

jumlah radikal peroksida yang terbentuk selama proses oksidasi. Antioksidan

dapat menghambat oksidasi asam linoleat yang ditandai dengan penurunan kadar

oksidan hidroperoksida yang terbentuk dibandingkan kontrol. Penurunan kadar

hidroperoksida berbanding lurus terhadap absorbansi dari senyawa Fe(SCN)3

dalam larutan uji (Arif et al., 2014). Hal ini berarti, profil kenaikan absorbansi

tidak hanya digunakan untuk mengetahui kapan terjadinya absorbansi maksimal

dan penurunan reaksi peroksidasi lipid, tetapi juga menunjukkan bahwa FEA daun

Cabe Jawa positif memiliki aktivitas antioksidan atau kemampuan dalam

menghambat radikal peroksida yang ditandai dengan absorbansi yang berada di

bawah absorbansi kontrol negatif. Profil rata-rata absorbansi baik kontrol maupun

sampel uji menunjukkan absorbansi tertinggi terjadi pada hari keenam, yang

menunjukkan pembentukan peroksida terus terjadi hingga hari keenam. Kemudian

absorbansi turun pada hari ketujuh yang menyiratkan bahwa mulai terjadi

dekomposisi peroksida, dimana peroksida yang terbentuk akan berikatan dengan

1 2 3 4 5 6 7

Kontrol Negatif 1.597 1.722 2.068 2.149 2.186 2.193 1.950

Kontrol Positif 1.450 1.480 1.932 1.939 1.950 1.957 1.841

FEA Cabe Jawa 1.086 1.494 1.924 1.990 2.085 2.145 1.877

0.000

0.500

1.000

1.500

2.000

2.500

Ab

sorb

an

si

Hari ke-

Kontrol

Negatif

Kontrol Positif


9

senyawa radikal lainnya hingga membentuk senyawa baru yang lebih stabil dan

menyebabkan jumlah peroksida mulai menurun (Pane, 2013).

Adapun rata-rata absorbansi tertinggi FTC pada hari keenam inkubasi

untuk ketiga replikasi kontrol negatif, BHT, dan FEA Cabe Jawa secara berturut-

turut sebesar 2,193 ± 0,050, 1,957 ± 0,006, 2,145 ± 0,007. Persentase daya hambat

fraksi pada hari dimana absorbansi mencapai absorbansi tertinggi menunjukkan

besarnya daya penghambatan terhadap jumlah maksimal peroksida yang

terbentuk. Besarnya daya hambat BHT dan FEA Cabe Jawa terhadap peroksida

yang terbentuk pada hari keenam dapat dilihat pada tabel II, yang menunjukkan

aktivitas penghambatan peroksidasi lipid maksimum oleh BHT lebih tinggi

daripada FEA daun Cabe Jawa.

Tabel II. Total Aktivitas Antioksidan BHT dan FEA Cabe Jawa Metode FTC

Sampel Absorbansi* Persen Inhibisi*

Kontrol (-) 2,193 ± 0,050 0

BHT 1,957 ± 0,006 10,7463 ± 0,2534

FEA Cabe Jawa 2,145 ± 0,007 2,1888 ± 0,3246

Catatan: * Rata-rata ± SD, n = 3

Metode TBA juga digunakan untuk mengetahui tingkat peroksidasi lipid.

Pada pH rendah dan suhu tinggi (1000C), ikatan malondialdehid-TBA akan

berubah menjadi kompleks malondialdehid-TBA berwarna merah muda yang

dapat diukur pada panjang gelombang 532 nm, lihat gambar 4. (Naphade et al.,

2009).

Gambar 4. Reaksi Pembentukan Kompleks MDA-TBA

(Sumber: Moon dan Shibamoto, 2009)


10

Secara teoritis, Senyawa tiga karbon malondialdehid (MDA) adalah

produk dekomposisi utama karbonil pada proses autooksidasi dari lipid tak jenuh

(Tamura et al., Crawford et al., Pegg et al. dalam Tokur et al., 2006). Tujuan

dilakukannya pengukuran antioksidan dengan metode ini untuk mengetahui

banyaknya senyawa MDA yang terbentuk, dimana senyawa ini merupakan

turunan senyawa peroksida yang terbentuk pada tahap kedua reaksi peroksidasi

lemak. Sehingga diharapkan hasil uji aktivitas antioksidan dengan metode FTC

dapat dikonfirmasikan dengan hasil TBA. Sama seperti metode FTC, semakin

rendah absorbansinya maka menunjukkan aktivitas antioksidan yang semakin

meningkat. Adapun hasil pengukuran rata-rata dengan metode TBA menunjukkan

bahwa FEA Cabe Jawa memiliki daya hambat MDA yang sedikit lebih besar

daripada kontrol positif (Tabel III).

Tabel III. Total Aktivitas Antioksidan BHT dan FEA Cabe Jawa Metode TBA

Sampel Absorbansi* Persen Inhibisi*

Kontrol (-) 1,001 ± 0,0029 0

BHT 0,168 ± 0,0073 83,2168 ± 0,7250

FEA Cabe Jawa 0,098 ± 0,0091 90,2098 ± 0,9083

Catatan: * Rata-rata ± SD, n = 3.

Seperti yang terlihat pada tabel IV, aktivitas antioksidan yang terdeteksi

dengan metode TBA lebih tinggi dibandingkan dengan FTC. Menurut Aqil, et al.

(2006), kemungkinan disebabkan karena peroksida yang terbentuk pada tahap

awal peroksidasi lipid jumlahnya lebih besar dibandingkan jumlah turunan

senyawa peroksida yang terbentuk pada tahap kedua (MDA), dan produk turunan

MDA yang terbentuk lebih stabil pada beberapa waktu. Pada metode FTC,

dilakukan inkubasi pada suhu 400C selama 24 jam, dan reaksi peroksidasi

maksimum terjadi di hari ke-6 yang mana menunjukkan nilai absorbansi yang

besar untuk BHT dan FEA Cabe Jawa walaupun tidak melebihi kontrol negatif.

Nilai absorbansi yang besar (Lampiran 14a) menandakan tingginya kadar radikal

peroksida yang terbentuk dan rendahnya kemampuan BHT dan FEA Cabe Jawa

dalam menghambat pembentukan peroksida tersebut. Sedangkan untuk metode


11

TBA dilakukan pengukuran pada hari ke-8 dimana produk MDA mulai terbentuk

(Rezaeizadeh, et al., 2011), dengan cara larutan dipanaskan pada suhu 950C

selama 10 menit. Nilai absorbansi yang kecil (Lampiran 15a) menandakan

rendahnya kadar MDA yang terbentuk dan tingginya kemampuan BHT dan FEA

Cabe Jawa dalam menghambat pembentukan MDA.

Selain itu, pada tabel IV dapat dilihat perbedaan nilai %inhibisi antara

BHT dan FEA Cabe Jawa pada metode FTC dan TBA. Nilai %inhibisi pada

metode FTC menunjukkan daya penghambatan senyawa antioksidan dalam

menghambat radikal hidroperoksida pada tahap pertama peroksidasi lipid.

Sedangkan pada metode TBA, nilai %inhibisi menggambarkan daya

penghambatan senyawa antioksidan dalam menghambat radikal MDA yang

terbentuk pada tahap kedua peroksidasi lipid. Hasil pada tabel IV menunjukkan

nilai %inhibisi BHT lebih besar daripada FEA Cabe Jawa dan nilai %inhibisi

BHT lebih kecil daripada FEA Cabe Jawa pada metode TBA. Perbedaan kedua

hasil ini kemungkinan dikarenakan perbedaan mekanisme antioksidan diantara

keduanya. Dimana, BHT menghambat pada tahap pertama (pembentukan radikal

peroksida) dan FEA Cabe Jawa menghambat pada tahap kedua (pembentukan

MDA).

Tabel IV. Aktivitas Antioksidan BHT dan FEA Cabe Jawa

Sampel %Inhibisi dengan FTC %Inhibisi dengan TBA

BHT 10,7463 ± 0,2534 83,2168 ± 0,7250

FEA Cabe Jawa 2,1888 ± 0,3246 90,2098 ± 0,9083

Aktivitas antioksidan berhubungan dengan senyawa fenolik. Berdasarkan

penelitian antioksidan dan total fenolik terhadap 45 tanaman obat yang dilakukan

oleh Li, et al. (2008), menunjukkan nilai R2 antara kapasitas antioksidan metode

FRAP dengan kandungan fenolik total 0,8672, dan kapasitas antioksidan metode

TEAC dengan kandungan fenolik total 0,8500. Hasil ini menunjukkan bahwa

terdapat hubungan yang signifikan antara kapasitas antioksidan dengan

kandungan fenolik total. Senyawa fenolik diketahui mampu bertindak sebagai


12

antioksidan dengan memutuskan ikatan rantai radikal bebas secara langsung dan

menangkap berbagai spesies reaktif seperti radikal superoksida, hidroksil dan

peroksil dan asam hipoklorit (Kosar, et al.; Payet, et al.; Cai, et al.; Halliwell, et

al. dalam Nurmi, A., 2008). Hasil penelitian Li, et al. (2008) menggambarkan

korelasi yang kuat antara nilai dari metode TEAC dan FRAP dengan kandungan

fenolik total yang mengimplikasikan senyawa fenolik dari tanaman-tanaman

tersebut mampu bertindak sebagai antioksidan dengan menangkap radikal bebas

dan reduksi oksidan. Sehingga perlu dilakukan uji korelasi untuk melihat

hubungan antara kandungan fenolik total dengan nilai kapasitas antioksidan

metode FTC-TBA yang dapat menggambarkan korelasi antara kandungan fenolik

sebagai antioksidan terhadap peroksida yang terbentuk dari peroksidasi lipid.

KESIMPULAN

Kadar fenolik total fraksi etil asetat ekstrak metanol dari daun cabe jawa

sebesar 140,43 ± 5,1219 mg ekivalen asam galat per g fraksi etil asetat. Aktivitas

antioksidan fraksi etil-asetat ekstrak metanol dari daun cabe jawa yang dinyatakan

dalam %inhibisi dengan metode FTC sebesar 2,1888 ± 0,3246 % dan 90,2098 ±

0,9083 % dengan metode TBA. Fraksi etil asetat ekstrak metanol dari daun cabe

jawaa memiliki daya penghambatan radikal peroksida yang lebih rendah daripada

BHT, dan memiliki daya penghambatan MDA yang lebih tinggi daripada BHT.

Perlu dilakukan penelitian lanjutan untuk melihat korelasi antara

kandungan fenolik total terhadap mekanisme penghambatan peroksida yang

terbentuk dari reaksi peroksidasi lipid.


13

DAFTAR PUSTAKA

Aqil, F., Ahmad, I., dan Mehmood, Z., 2006, Antioxidant and Free Radical

Scavenging Properties of Twelve Traditionally Used Indian Medicinal

Plants, Turk. J. Biol., 30: 177-183.

Arif D.Y., Jose, C., dan Teruna, H.Y., 2014, Total Fenolik, Flavanoid serta

Aktivitas Antioksidan Ekstrak n-Heksana, Diklorometan dan Metanol

Amaranthus spinosus L EM5-Bawang Putih, JOM FMIPA, 1(2): 359-369.

Artini, P.U.E.D., Astuti, K.W., dan Warditiani, N.K., 2013, Uji Fitokimia Ekstrak

Etil Asetat Rimpang Bangle (Zingiber purpureum Roxb.), Jurnal Farmasi

Udayana, Indonesia, 1-7.

Charles, D.J., 2013, Antioxidant Properties of Spices, Herbs and Other Sources,

Springer, New York, 12.

Cicco, N., dan Lattanzio, V., 2011, The Influence of Initial Carbonate

Concentration on the Folin-Ciocalteu Micro-Method for the Determination

of Phenolics with Low Concentration in the Presence of Methanol: A

Comparative Study of Real-Time Monitored Reactions, Am. J. Anal. Chem.,

840-845.

Cindric, I.J., Kunstic, M., Zeiner, M., Stingeder, G., dan Rusak, G., 2011, Sample

Preparation Methods for the Determination of the Antioxidative Capacity of

Apple Juices, Croat. Chem. Acta, 84(3): 435-438.

Darwiati, W., 2013, Bioaktivitas Tiga Fraksinasi Ekstrak Biji Suren Terhadap

Mortalitas Hama Daun Eurema spp., Jurnal Penelitian Hutan Tanaman, 10

(2): 99-108.

Hardiana, R., Rudiyansyah, dan Zaharah, T.A., 2012, Aktivitas Antioksidan

Senyawa Golongan Fenol dari Beberapa Jenis Tumbuhan Famili Malvaceae,

JKK, 1(1): 8-13.

Kawamura, F., Ramle, S.F.M., Sulaiman, O., Hashim, R., dan Ohara, S., 2011,

Antioxidant and Antifungal Activities of Extracts from 15 Selected

Hardwood Species of Malaysian Timber, Eur. J. Wood Prod., 69: 207-212.

Khoddami, A., Wilkes, M.A., dan Roberts, T.H., 2013, Techniques for Analysis

of Plant Phenolic Compounds, Molecules, 18: 2328-2375.

Kusumanto, Y.K.E.P., 2015, Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode

Deoksiribosa dan Penetapan Kandungan Fenolik Total pada Fraksi Etil

Asetat Ektrak Etanol Buah Jambu Mete (Anacardium occidentale L.),

Skripsi, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, 25-26.

Lamid, A., 1995, Vitamin E sebagai Antioksidan, Media Litbangkes, V (01): 14-

16.

Lee, K.W., Kim, Y.J., Lee, H.J., dan Lee, C.Y., 2003, Cocoa Has More Phenolic

Phytochemicals and A Higher Antioxidant Capacity Than Teas and Red

Wine, J. Agric. Food Chem., 51: 7292-7295.

Li, H.B., Wong, C.C., Cheng, K.W., dan Chen, F., 2008, Antioxidant Properties in

Vitro and Total Ohenolic Contents in Methanol Extracts from Medicinal

Plants, LWT, 41: 385-390.

Lim, T.K., 2012, Edible Medicinal and Non-Medicinal Plants, Volume 4,

Springer, Netherlands, 351-357.


14

Moon, J.K., dan Shibamoto, T., 2009, Review: Antioxidant Assay for Plant and

Food Components, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 57: 1655-

1666.

Nahak, G., dan Sahu, R.K., Phytochemical Evaluation and Antioxidant Activity of

Piper cubeba and Piper nigrum, Journal of Applied Pharmaceutical

Science, 01(08): 153-157.

Naphade, S.S., Khadabadi, S.S., Deore, S.L., Jagtap, N.S. dan Hadke, S.P., 2009,

Antioxidant Activity of Different Extract of Plant Tricholepis Glaberrima

DC (Ateraceae), International Journal of PharmaTech Research,

Government Collage of Pharmacy and Phytochemistry Departement, 1(3):

502-505.

Nurmi, A., 2008, Antioxidant Studies on Selected Lamiaceae Herbs In Vitro and

In Humans, Yliopistopaino, University Print, Helsinki, Finland, 33.

Pane, E.R., 2013, Uji Aktivitas Senyawa Antioksidan dari Ekstrak Metanol Kulit

Pisang Raja (Musa paradisiaca Sapientum), Valensi, 3(2): 76-81.

Parida, R., dan Dhal, Y., 2011, A Study on The Micro-Propagation and

Antioxidant Activity of Piper longum ( An Important Medicinal Plant ),

Journal of Medicinal Plants Research, 5(32): 6691-6994.

Parmar, V.S., Jain, S.C., Bisht, K.S., Jain, R., Taneja, P., Jha, A., Tyagi, O.D.,

Prasad, A.K., Wengel, J., Olsen, C.E., dan Boll, P.M., 1997,

Phytochemistry of The Genus Piper, Phytochemistry, 46(4): 597-673.

Prasad M.P., Sushant S., dan Babhulkar A., 2012, Phytochemical Analysis and

Antioxidant Potential of Piper Species and Its Molecular Characterization

by RAPD Markers, International Journal of Fundamental & Applied

Sciences, 1(4): 71-73.

Rami, E., Sipai, S., dan Patel, I., 2013, Studies on Qualitative and Quantitative

Phytochemical Analysis of Piper Longum Linn., International Journal of

Pharma and Bio Scienes, 4(3): 1381-1388.

Rezaeizadeh, A., Zuki, A.B.Z., M., Abdollahi, Goh, Y.M., Noordin, M.M.,

Hamid, M., dan Azmi, T.I., 2011, Determination of Antioxidant Activity in

Methanolic and Cloroformic Extracts of Momordica charantia, African

Journal of Biotechnology, 10(24): 4932-4940.

Risdian, C., Widowati, W., Mozet, T., Wargasetia, T.L., dan Khong, K., 2011,

Free Radical Scaveging Activity of Ethanolic Leaves Extract and Its

Different Solvent Fractions of Piper betle L. In Vitro, Indonesian Journal of

Cancer Chemoprevention, 2(1): 141-145.

Sasikumar, J.M., Maheshu, V., dan Jayadev, R., 2009, In Vitro Antioxidant

Activity of Methanolic Extracts of Berberis Tinctoria Lesch. Root and Root

Bark, India Journal of Herbal Medicine and Toxicology, 3(2): 53-58.

Setyowati, E.P., Jenie, U.A., Sudarsono, Kardono, B., Rahmat, R., dan Meiyanto,

E., 2007, Isolasi Senyawa Sitotoksik Spons Kaliapsis, Majalah Farmasi

Indonesia, 18(4): 183-189.

Soegihardjo, C.J., 2013, Farmakognosi, PT. Citra Aji Parama, Yogyakarta, 10-11.

Thitilertdecha, N., Teerawutgulrag, A., Kilburn, J.D., dan Rakariyatham, N.,

2010, Identification of Major Phenolic Compound from Nephelium

lappaceum L. and Their Antioxidant Activities, Molecules, 15: 1453-1465.


15

Tokur, B., Korkmaz, K., dan Ayas, D., 2006, Comparison of Two Thiobarbituric

Acid (TBA) Method for Monitoring Lipid Oxidation in Fish, Journal of

Fisheries and Aquatic Sciences, Vol. 23, Issue (3-4): 331-334.

Umemura, T., Kodama, Y., Hioki, K., Inoue, T., Nomura, T., dan Kurokawa, Y.,

2001, Butylhydroxytoluene (BHT) Increases Susceptibility of Transgenic

rasH2 Mice to Lung Carcinogenesis, Journal of Cancer Research and

Clinical Oncology, 127 (10): 583-590.

United States Departement of Agriculture (USDA), 2015, Classification: Piper

retrofractum Vahl., http://plants.usda.gov/core/profile?symbol=PIRE9,

diakses pada tanggal 02 Maret 2016 pukul 18.23 WIB.

Winarsi, H., 2007, Antioksidan Alami & Radikal Bebas : Potensi dan Aplikasinya

dalam Kesehatan, Kanisius, Yogyakarta, 13-15, 17, 20, 49-60.


http://plants.usda.gov/core/profile?symbol=PIRE9

16

LAMPIRAN


17

Lampiran 1. Surat Pengesahan Determinasi Tanaman Cabe Jawa


18

Lampiran 2. Klasifikasi Tanaman Cabe Jawa

Menurut United States Department of Agriculture (2016), klasifikasi dari

tanaman Cabe Jawa sebagai berikut.

Kerajaan : Plantae

Sub-Kerajaan : Tracheobionta

Superdivisi : Spermatophyta

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Sub-Kelas : Magnoliidae

Ordo : Piperales

Suku : Piperaceae

Genus : Piper L.

Jenis : Piper retrofractum Vahl.


19

Lampiran 3. Penimbangan dalam Pembuatan Simplisia

Berat Tanaman Segar Cabe Jawa = 1 kg = 1000 gr ( Timbangan Pemasok )

Penimbangan Hasil Sortasi Basah Daun Cabe Jawa

Berat Wadah Kosong = 3.00 gram

Berat Wadah Kosong + Daun = 597.77 gram

Berat Daun = 594.77 gram

Penimbangan Hasil Sortasi Kering Daun Cabe Jawa




Penimbangan Hasil Penyerbukan Simplisia Daun Cabe Jawa




Penimbangan Hasil Pengayakan Serbuk Simplisia Daun Cabe Jawa





20

Lampiran 4. Perhitungan Penetapan Kadar Air Simplisia Daun Cabe Jawa

Kadar Air Simplisia =

Keterangan Berat Simplisia (g)

Kadar Air (%) Rata-Rata Awal Akhir

Replikasi 1 5.198 4.882 6.079 6.422 ±

0.2436 Replikasi 2 5.166 4.827 6.562

Replikasi 3 5.178 4.835 6.624

Replikasi 1


= 6.079 %

Replikasi 2


= 6.562 %

Replikasi 1


= 6.624 %

Lampiran 5. Perhitungan Rendemen Ekstrak dan Fraksi Daun Cabe Jawa

Rumus Perhitungan:


21

a. Ekstrak Metanol Daun Cabe Jawa

Berat (gram) Rendemen Ekstrak (%)

Bobot simplisia yang digunakan 53.9297

7.8979 Bobot cawan kosong 53.0113

Bobot cawan + ekstrak 57.2706

Bobot ekstrak 4.2593

%Rendemen Ekstrak = (4.3593/53.9297) x 100%

= 7.8979 %

b. Fraksi Etil Asetat Daun Cabe Jawa

Berat (gram) Rendemen Fraksi (%)

Bobot simplisia yang digunakan 53.9297

2.3362 Bobot cawan kosong 53.0308

Bobot cawan + ekstrak 54.2907

Bobot ekstrak 1.2599

%Rendemen Fraksi = (1.2599/53.9297) x 100%

= 2.3362 %


22

Lampiran 6. Data Penimbangan untuk Penetapan Kandungan Fenolik

a. Penimbangan Asam Galat

Replikasi 1

(gram)

Replikasi 2

(gram)

Replikasi 3

(gram)

Bobot Beker 63.7284 61.4635 62.1535

Bobot Beker + zat 63.7385 61.4735 62.1636

Bobot Zat 0.0101 0.0100 0.0101

b. Penimbangan Fraksi Etil Asetat Daun Cabe Jawa

Replikasi 1

(gram)

Replikasi 2

(gram)

Replikasi 3

(gram)

Bobot Cawan P. 27.9172 22.7570 27.1513

Bobot Cawan +

zat 27.9272 22.7670 27.1613

Bobot Zat 0.0100 0.0100 0.0100

Lampiran 7. Data Perhitungan Konsentrasi Asam Galat dan Fraksi Etil Asetat

untuk Penetapan Kandungan Fenolik Total

a. Perhitungan Konsentrasi Asam Galat

Bobot Asam Galat diencerkan dalam labu takar 10 ml:

Replikasi 1 = 0.0101 g = 10.1 mg C = 1.01 mg/ml




23

Seri Konsentrasi Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3

1 40.4 μg/ml 40 μg/ml 40.4 μg/ml

2 50.5 μg/ml 50 μg/ml 50.5 μg/ml

3 60.6 μg/ml 60 μg/ml 60.6 μg/ml

4 70.7 μg/ml 70 μg/ml 70.7 μg/ml

5 80.8 μg/ml 80 μg/ml 80.8 μg/ml

Contoh Perhitungan Seri Konsentrasi Replikasi 1

Seri 1:

0.4 ml x 1.01 mg/ml = 10 ml x C2

C2 = 0.0404 mg/ml = 40.4 μg/ml

Seri 2:

0.5 ml x 1.01 mg/ml = 10 ml x C2

C2 = 0.0505 mg/ml = 50.5 μg/ml

Seri 3:

0.6 ml x 1.01 mg/ml = 10 ml x C2

C2 = 0.0606 mg/ml = 60.6 μg/ml

Seri 4:

0.7 ml x 1.01 mg/ml = 10 ml x C2

C2 = 0.0707 mg/ml = 70.7 μg/ml

Rumus Pengenceran:

V1 C1 = V2 C2


24

Seri 5:

0.8 ml x 1.01 mg/ml = 10 ml x C2

C2 = 0.0808 mg/ml = 80.8 μg/ml

b. Perhitungan Konsentrasi Fraksi Etil Asetat

Konsentrasi

Fraksi Etil Asetat

Daun Cabe Jawa

Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3

200 μg/ml 200 μg/ml 200 μg/ml

Bobot Fraksi Etil Asetat Daun Cabe Jawa yang diencerkan dalam labu takar 10 ml:




Contoh Perhitungan Pengenceran Konsentrasi Replikasi 1

V1 C1 = V2 C2

2 ml x 1.00 mg/ml = 10 ml x C2

C2 = 0.200 mg/ml = 200 μg/ml

Lampiran 8. Hasil Optimasi Operating Time untuk Penetapan Kandungan

Fenolik Total

a. Replikasi 1

OT Absorbansi konsentrasi asam galat pada 750 nm


5 0.345 0.406 0.581

10 0.362 0.487 0.606


25

15 0.379 0.529 0.633

20 0.387 0.535 0.650

25 0.399 0.538 0.653

30 0.402 0.544 0.664

35 0.404 0.543 0.664

40 0.414 0.543 0.661

45 0.418 0.544 0.659

50 0.420 0.543 0.665

55 0.423 0.544 0.667

60 0.425 0.544 0.665

Pada replikasi 1, OT yang didapat 30 menit.

b. Replikasi 2



5 0.341 0.401 0.574

10 0.366 0.482 0.607

15 0.376 0.528 0.626

20 0.382 0.545 0.635

25 0.385 0.549 0.640

30 0.386 0.551 0.640

35 0.386 0.550 0.640

40 0.386 0.551 0.639

45 0.386 0.549 0.639

50 0.386 0.552 0.639

55 0.385 0.533 0.638

60 0.385 0.553 0.638

Pada replikasi 2, OT yang didapat 25 – 30 Menit.


26

c. Replikasi 3



5 0.344 0.408 0.581

10 0.368 0.490 0.610

15 0.377 0.532 0.627

20 0.384 0.544 0.636

25 0.386 0.549 0.640

30 0.386 0.548 0.641

35 0.387 0.548 0.640

40 0.386 0.549 0.640

45 0.386 0.549 0.640

50 0.386 0.550 0.639

55 0.385 0.537 0.638

60 0.385 0.546 0.638

Pada replikasi 3, OT yang didapat 25 – 30 Menit.


27

Lampiran 9. Hasil Optimasi Panjang Gelombang Maksimal untuk Penetapan

Kandungan Fenolik Total

a. Konsentrasi 40 μg/ml


28

b. Konsentrasi 60 μg/ml


29

c. Konsentrasi 80 μg/ml


30

Lampiran 10. Hasil Pengukuran Kurva Baku untuk Penetapan Kandungan

Fenolik Total

a. Replikasi 1

Seri Konsentrasi Absorbansi Persamaan Kurva Baku

1 40.4 μg/ml 0.349

y = 0.00711x + 0.07

r = 0.9831

2 50.5 μg/ml 0.430

3 60.6 μg/ml 0.499

4 70.7 μg/ml 0.606

5 80.8 μg/ml 0.620

b. Replikasi 2


1 40.0 μg/ml 0.390

y = 0.00618x + 0.1264

r = 0.9894

2 50.0 μg/ml 0.419

3 60.0 μg/ml 0.484

4 70.0 μg/ml 0.569

5 80.0 μg/ml 0.624

c. Replikasi 3


1 40.4 μg/ml 0.369

y = 0.00662x + 0.0974

r = 0.9924

2 50.5 μg/ml 0.424

3 60.6 μg/ml 0.492

4 70.7 μg/ml 0.587

5 80.8 μg/ml 0.622


31

Lampiran 11. Perhitungan Kandungan Fenolik Total FEA Cabe Jawa

Konsentrasi Absorbansi Kandungan

Fenolik Total Rata-rata %CV

Replikasi 1 200 μg/ml 0.274 133.40 140.43 ±

5.1219 3.6472% Replikasi 2 200 μg/ml 0.286 142.45

Replikasi 3 200 μg/ml 0.290 145.45

Contoh perhitungan kandungan fenolik total:

a. Replikasi 1

y = 0.00662x + 0.0974

0.274 = 0.00662x + 0.0974

x = 0.274-0.0974/0.00662

= 26.6767 μg/ml

x = 0.0266767 mg/ml 0.02668 mg/ml

Bobot fraksi = 0.0100 gram

Rumus Perhitungan:

C = x , sehingga:

Kandungan fenolik total = 0.02668 x 50/0.0100

= 133.4 mg/gram

Jadi, kandungan fenolik total dalam sampel replikasi 1 sebesar 133.4 mg asam

galat ekuivalen per gram fraksi etil asetat.


32

Lampiran 12. Data Penimbangan untuk Uji Aktivitas Antioksidan Metode FTC-

TBA

a. Penimbangan BHT untuk Optimasi Metode

OT (gram)

Lamda (gram)

Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3

Berat Cawan Kosong 63.0377 61.5081 61.7617 63.6569

Berat Cawan + sampel 63.0418 61.5122 61.7657 63.6609

Berat Sampel 0.0041 0.0040 0.0040 0.0040

b. Penimbangan Sampel Uji

BHT (gram) FEA Cabe Jawa (gram)

Rep 1 Rep 2 Rep 3 Rep 1 Rep 2 Rep 3

Berat Cawan Kosong 62.4275 61.0764 61.4654 23.3755 22.8067 28.0020

Berat Cawan + sampel 62.4316 61.0805 61.4695 23.3796 22.8109 28.0059

Berat Sampel 0.0041 0.0041 0.0041 0.0041 0.0042 0.0039

Lampiran 13. Hasil Optimasi Metode Uji Aktivitas Antioksidan FTC-TBA

a. Penentuan Operating Time (OT)

Hasil OT, CBHT = 4 mg

OT (Menit ke-) Absorbansi (Triplo)

Pengukuran 1 Pengukuran 2 Pengukuran 3

1 0.985 0.959 0.948

3 0.918 0.907 0.899

5 0.875 0.875 0.874

7 0.864 0.862 0.860

10 0.855 0.853 0.853


33

b. Penentuan Lamda Max

Replikasi 1


34

Replikasi 2


35

Replikasi 3


36

Lampiran 14. Hasil Data Uji Aktivitas Antioksidan Metode FTC

a. Nilai Absorbansi Kontrol Negatif, Kontrol Positif dan Fraksi Etil-Asetat

Berdasarkan hasil pengukuran absorbansi kontrol negatif dengan spektrofotometer

UV/Vis maka dapat disimpulkan bahwa pada hari ke-6 reaksi peroksidasi lipid telah

mencapai batas maksimum.

b. Profil Absorbansi Kontrol Negatif, Kontrol Positif dan Fraksi Etil Asetat

Hari Ke- Mean ± SD

Kontrol (-) Kontrol (+) Sampel

1 1.597 ± 0.007 1.450 ± 0.017 1.086 ± 0.104

2 1.722 ± 0.005 1.480 ± 0.011 1.494 ± 0.069

3 2.068 ± 0.010 1.932 ± 0.005 1.924 ± 0.024

4 2.149 ± 0.014 1.939 ± 0.007 1.990 ± 0.039

5 2.186 ± 0.022 1.950 ± 0.006 2.085 ± 0.041

6 2.193 ± 0.050 1.957 ± 0.006 2.145 ± 0.007

7 1.950 ± 0.006 1.841 ± 0.065 1.877 ± 0.059

c. Perhitungan Persen Inhibisi Uji Aktivitas Antioksidan FTC

Rumus Perhitungan:

Persen Inhibisi = ( A0 – A1 / A0 ) x 100%

Hari ke- Kontrol Negatif Kontrol Positif SAMPEL

R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3

1 1.604 1.587 1.599 1.457 1.426 1.466 0.959 1.087 1.213

2 1.729 1.716 1.722 1.474 1.495 1.470 1.403 1.509 1.569

3 2.081 2.057 2.065 1.927 1.930 1.939 1.950 1.892 1.931

4 2.135 2.145 2.168 1.933 1.935 1.949 1.969 2.044 1.956

5 2.157 2.194 2.208 1.955 1.942 1.954 2.027 2.107 2.121

6 2.157 2.159 2.263 1.952 1.965 1.955 2.135 2.151 2.149

7 1.959 1.946 1.945 1.749 1.889 1.885 1.950 1.806 1.874


37

Pengukuran berdasarkan hasil data absorbansi hari ke-6.

Rata-rata Absorbansi kontrol negatif hari ke-6 = 2.193

Absorbansi %Inhibisi Rata-rata %I

BHT Replikasi 1 1.952 10.9895 % 10.7463 ±

0.2534 Replikasi 2 1.965 10.3967 %

Replikasi 3 1.955 10.8527 %

FEA

Cabe

Jawa

Replikasi 1 2.135 2.6448 % 2.1888 ±

0.3246 Replikasi 2 2.151 1.9152 %

Replikasi 3 2.149 2.0064 %

Contoh Perhitungan Persen Inhibisi:

BHT

Replikasi 1

Persen Inhibisi = (2.193 – 1.952 / 2.193) x 100%

= 10.9895 %

d. Uji Statistik

1) Distribusi Normal

BHT


38

FEA Cabe Jawa

Analisis menggunakan uji One-Sample Kolmogorov-Smirnov

Hipotesis null (H0) = data terdistribusi normal

Hipotesis alternative (H1) = data tidak terdistribusi normal

Taraf kepercayaan 95%, α = 0.05 ½ α = 0.025.

Jika nilai Asymp Sig (2-Tailed) < ½ α maka H0 ditolak, H1 diterima.

Jika nilai Asymp Sig (2-Tailed) > ½ α maka H0 diterima, H1 ditolak.

Data %Inhibisi BHT dan FEA Cabe Jawa terdistribusi normal karena Asymp

Sig (2-Tailed) BHT = 0.949 dan Asymp Sig (2-Tailed) FEA Cabe Jawa =

0.871.

Jadi, H1 ditolak dan H0 diterima.

Kesimpulannya, data terdistribusi normal.


39

2) Uji One Sampel T-Test

BHT

FEA Cabe Jawa


40

Cara analisis:

Hipotesis null (H0) = mean %inhibisi sama dengan kontrol (-)

Hipotesis alternative (H1) = mean %inhibisi tidak sama dengan kontrol (-)



Jika nilai Asymp Sig (2-Tailed) > ½ α maka H0 diterima, H1 ditolak.

Rata-rata %Inhibisi BHT dan FEA Cabe Jawa tidak sama dengan kontrol (-)

karena Asymp Sig (2-Tailed) BHT = 0.000 dan Asymp Sig (2-Tailed) FEA

Cabe Jawa = 0.011.

Jadi, H1 diterima dan H0 ditolak.

Kesimpulannya, rata-rata %inhibisi BHT dan FEA Cabe Jawa berbeda

secara signifikan terhadap kontrol negatif karena nilai Asymp Sig (2-Tailed)

< 0.025.

3) Uji Independent Sampel T-Test

T-TEST

T-TEST /VARIABLES= Inhibisi /GROUPS=Kelompok (1,2) /

MISSING=ANALYSIS /CRITERIA=CI(0.95).

Group Statistics

Kelompok N Mean Std. Deviation S.E. Mean

%Inhibisi

%Inhibisi BHT 3 10.75 .31 .18

%Inhibisi FEA Cabe

Jawa

3 2.19 .40 .23


41

Independent Samples Test

Cara analisis:

Levene’s Test (Uji Varian)

Hipotesis null (H0) = kedua kelompok memiliki varian yang sama

Hipotesis alternative (H1) = kedua kelompok tidak memiliki varian yang

sama

Taraf kepercayaan 95%, α = 0.05


Jika nilai Asymp Sig (2-Tailed) > ½ α maka H0 diterima, H1 ditolak

Kesimpulan, kedua kelompok memiliki varian yang sama karena nilai Sig

= 0.543 (Sig > 0.05)


T-test

Hipotesis null (H0) = tidak ada perbedaan di antara kedua kelompok

Hipotesis alternative (H1) = ada perbedaan di antara kedua kelompok

Levene’s

Test for

Equality

of

Variances

t-test for Equality of Means

F Sig. t df

Sig.

(2-

tailed)

Mean

Difference

Std. Error

Difference

95% Confidence

Interval of the

Difference

Lower Upper

Inhibisi

Equal

variances

assumed

.44 .543

29.39 4.00 .000 8.56 .29 7.75 9.37

Equal

variances

not

assumed

29.39 3.78 .000 8.56 .29 7.73 9.39


42

Taraf kepercayaan 95%, α = 0.05 ½ α = 0.025

Jika nilai Asymp Sig (2-Tailed) < α maka H0 ditolak, H1 diterima.

Jika nilai Asymp Sig (2-Tailed) > α maka H0 diterima, H1 ditolak

Kesimpulan, terdapat perbedaan signifikan antara %Inhibisi BHT dan FEA

Cabe Jawa karena nilai Asymp Sig (2-Tailed) = 0.000 (Sig < 0.025)


Lampiran 15. Hasil Data Uji Aktivitas Antioksidan Metode TBA

a. Nilai Absorbansi Kontrol Negatif, Kontrol Positif dan Fraksi Etil Asetat

Kontrol Negatif BHT FEA Cabe Jawa

R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3

1.000 1.005 0.998 0.178 0.165 0.161 0.086 0.100 0.108

1.001 ± 0.0029 0.168 ± 0.0073 0.098 ± 0.0091

b. Perhitungan Persen Inhibisi Uji Aktivitas Antioksidan TBA

Rumus Perhitungan:

Persen Inhibisi = ( A0 – A1 / A0 ) x 100%

Rata-rata absorbansi kontrol negatif = 1.000 + 1.005 + 0.998 / 3 = 1.001

Maka, nilai persen inhibisi BHT dan FEA Cabe Jawa:

Absorbansi %Inhibisi Rata-rata %I

BHT Replikasi 1 0.178 82.2178 % 83.2168 ±

0.7250 Replikasi 2 0.165 83.5165 %

Replikasi 3 0.161 83.9161 %


43

FEA

Cabe

Jawa

Replikasi 1 0.086 91.4086 % 90.2098 ±

0.9083 Replikasi 2 0.100 90.0100 %

Replikasi 3 0.108 89.2108%

Contoh Perhitungan Persen Inhibisi:

BHT

Replikasi 1

Persen Inhibisi = (1.001 – 0.178 / 1.001) x 100%

= 82.2178 %

c. Uji Statistik

1) Distribusi Normal

BHT

FEA Cabe Jawa


44

Analisis menggunakan uji One-Sample Kolmogorov-Smirnov

Hipotesis null (H0) = data terdistribusi normal

Hipotesis alternative (H1) = data tidak terdistribusi normal




Data %Inhibisi BHT dan FEA Cabe Jawa terdistribusi normal karena Asymp

Sig (2-Tailed) BHT = 0.952 dan Asymp Sig (2-Tailed) FEA Cabe Jawa =

0.996.


Kesimpulannya, data terdistribusi normal.

4) Uji One Sampel T-Test

BHT


45

FEA Cabe Jawa

Cara analisis:

Hipotesis null (H0) = mean %inhibisi sama dengan kontrol (-)

Hipotesis alternative (H1) = mean %inhibisi tidak sama dengan kontrol (-)




Rata-rata %Inhibisi BHT dan FEA Cabe Jawa tidak sama dengan kontrol (-)

karena Asymp Sig (2-Tailed) BHT = 0.000 dan Asymp Sig (2-Tailed) FEA

Cabe Jawa = 0.000.

Kesimpulannya, rata-rata %inhibisi BHT dan FEA Cabe Jawa berbeda

secara signifikan terhadap kontrol negatif karena nilai Asymp Sig (2-Tailed)

< 0.025.



46

5) Uji Independent Sampel T-Test

T-TEST /VARIABLES= Inhibisi /GROUPS=Kelompok(1,2) /

MISSING=ANALYSIS /CRITERIA=CI(0.95).

Group Statistics

Kelompok N Mean Std.

Deviation

S.E. Mean

% Inhibisi %Inhibisi BHT 3 83.22 .89 .51

%Inhibisi FEA Cabe

Jawa

3 90.21 1.11 .64

Independent Samples Test

Levene’s

Test for

Equality

of

Variances

t-test for Equality of Means

F Sig. t df

Sig.

(2-

tailed)

Mean

Difference

Std. Error

Difference

95% Confidence

Interval of the

Difference

Lower Upper

Inhibisi

Equal

variances

assumed

.13 .735

-8.51 4.00 .001 -6.99 .82 -9.27 -4.71

Equal

variances

not

assumed

-8.51 3.81 .001 -6.99 .82 -9.32 -4.67

Cara analisis:

Levene’s Test (Uji Varian)

Hipotesis null (H0) = kedua kelompok memiliki varian yang sama

Hipotesis alternative (H1) = kedua kelompok tidak memiliki varian yang

sama

Taraf kepercayaan 95%, α = 0.05



47


Kesimpulan, kedua kelompok memiliki varian yang sama karena nilai Sig

= 0.735 (Sig > 0.05)

Jadi, H1 ditolak dan H0 diterima

T-test

Hipotesis null (H0) = tidak ada perbedaan di antara kedua kelompok

Hipotesis alternative (H1) = ada perbedaan di antara kedua kelompok

Taraf kepercayaan 95%, α = 0.05 ½ α = 0.025

Jika nilai Asymp Sig (2-Tailed) < α maka H0 ditolak, H1 diterima.

Jika nilai Asymp Sig (2-Tailed) > α maka H0 diterima, H1 ditolak

Kesimpulan, terdapat perbedaan signifikan antara %Inhibisi BHT dan FEA

Cabe Jawa karena nilai Asymp Sig (2-Tailed) = 0.001 (Sig < 0.025)



48

Lampiran 16. Gambar Uji Pendahuluan dan Sampel Metode Folin Ciocalteau

a. Uji Pendahuluan Uji Fenolik Total dengan Metode Folin Ciocalteau

b. Hasil uji total fenolik FEA Cabe Jawa dengan metode Folin Ciocalteau


49

Lampiran 17. Gambar Uji Aktivitas Antioksidan Metode FTC-TBA

a. Hasil pembentukan kompleks warna merah metode FTC

Hari Ke- Kontrol (-) dan Kontrol (+) FEA Cabe Jawa

1

2

3

4

5


50

6

7

b. Hasil reaksi MDA-TBA (Kontrol) c. Hasil reaksi MDA-TBA (Kontrol)


51

BIOGRAFI PENULIS

Violeta Jesmile, lahir di RSU Hative Ambon pada tanggal 04

Desember 1994, merupakan anak ketiga dari pasangan Ir. Ferdinand

Hangewa, M.S. dan Martha Rumpuin. Penulis memulai pendidikan

formal sekolah dasar di SD GMIH 4 TOBELO Halmahera Utara

pada tahun 2000, kemudian penulis pindah ke SDN 1 KAIRATU

Maluku dan menempuh pendidikan dari tahun 2000-2004. Penulis

kemudian pindah ke SDN 2 HALONG Ambon pada tahun 2004.

Pada tahun yang sama, penulis pindah ke SD GMIH 2 TOBELO

Halmahera Utara dan menyelesaikan pendidikan pada tahun 2006.

Pada tahun 2006-2007, penulis mengenyam pendidikan tingkat menengah pertama di SMPN

1 KAO Halmahera Utara, kemudian penulis pindah dan menyelesaikan pendidikan tingkat

menengah pertama di SMPN 1 TOBELO Halmahera Utara pada tahun 2009. Penulis

melanjutkan pendidikan menengah atas di SMAN 1 TOBELO Halmahera Utara dari tahun

2009 hingga 2012. Pada tahun 2012, penulis melanjutkan pendidikan ke jenjang Perguruan

Tinggi di Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Selama menempuh pendidikan S1, penulis aktif dalam beberapa kegiatan kepanitiaan

yang dilakukan kampus antara lain sebagai anggota sie. konsumsi pada Pengucapan Lafal

Sumpah Apoteker Baru Angkatan XXVI, dan anggota sie. humas pada Pelatihan Jurnalistik

UKM NATAS tahun 2015 dalam rangka Dies Natalis ke-60 Universitas Sanata Dharma.

Penulis juga pernah mengikuti kegiatan PKM didanai Dikti pada tahun 2015 dengan judul

“Sosialisasi dan Pelatihan Pembuatan MP-GLIW (Makanan Pendamping – Gizi Lansia Instan

Waluh) Sehatkan Jantung, Cegah Kanker dan Stroke kepada Kader Posyandu Dero, Condong

Catur, Depok-Sleman, Yogyakarta. Pada tahun 2016, penulis menjadi asisten dosen

Praktikum Peracikan Obat di Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma.


Documents

PENETAPAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL DAN AKTIVITAS ... · Persetujuan Pembimbing PENETAPAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN FRAKSI ETIL-ASETAT EKSTRAK METANOL DAUN CABE