48
 PENUNTUN PRAKTIKUM LABORATORIUM BIOKIMIA FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS SRIWIJAYA TIM BIOKIMIA BLOK 8 DINAMIKA BIOKIMIAWI  SISTEM TUBUH 

Penuntun Praktikum Blok 8

Embed Size (px)

DESCRIPTION

bljr

Citation preview

  • PENUNTUN PRAKTIKUM

    LABORATORIUM BIOKIMIA

    FAKULTAS KEDOKTERAN

    UNIVERSITAS SRIWIJAYA

    2014

    TIM BIOKIMIA

    BLOK 8 DINAMIKA BIOKIMIAWI SISTEM TUBUH

  • ii Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    TIM BIOKIMIA

    Drs. Sadakata Sinulingga, Apt, M.Kes

    dr. Liniyanti D. Oswari, MN, M.Sc

    Drs. Kusumo Haryadi, Apt. M.Si

    dr. H. Safyudin, M.Biomed, CGA

    Fatmawati, S.Si, M.Si

    dr. Subandrate, M.Biomed

  • iii Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    KATA PENGANTAR

    Segala puji bagi Allah swt yang mencurahkan rahmat dan nikmatnya sehingga

    kami dapat menyelesaikan buku penuntun praktikum biokimia untuk blok 8

    mahasiswa pendidikan dokter umum. Sholawat dan salam semoga selalu tercurah ke

    junjungan Nabi Muhammad saw.

    Buku panduan praktikum ini merupakan petunjuk ringkas pelaksanaan

    praktikum blok 8 (Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh). Penuntun ini disusun dengan

    tujuan agar mahasiswa, khususnya mahasiswa pendidikan dokter umum, dapat

    memahami dan melaksanakan praktikum dengan baik sehingga dapat mencapai level

    kompetensi blok 8. Untuk pemahaman yang lebih dalam mengenai dasar teori uji

    biokimia, mahasiswa bisa merujuk ke buku ajar.

    Buku penuntun ini, tentu saja jauh dari kata sempurna. Oleh karen itu kami

    sangat mengharapkan saran dan kritik yang membangun guna penyempurnaan buku

    penuntun praktikum ini di masa yang akan datang.

    Akhir kata, terima kasih untuk semua pihak yang telah membantu dan semoga

    buku penuntun praktikum ini bermanfaat banyak.

    Palembang, Februari 2014

    Tim Penyusun

  • iv Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    DAFTAR ISI

    Kata Pengantar iii

    Daftar Isi iv

    Tata Tertib Praktikum vi

    A. Urin ................................................................................................................ 1

    1. Penentuan Berat Jenis Urin ....................................................................... 4

    2. Uji Derajat Keasaman (pH) ....................................................................... 5

    3. Uji Obermeyer .......................................................................................... 5

    4. Uji Gula Mereduksi secara Benedict ......................................................... 6

    5. UJI Protein Urin Menurut Heller ............................................................... 6

    6. Uji Rothera (Nitroprusida) ........................................................................ 7

    B. Enzim ............................................................................................................. 8

    1. Pengaruh Konsentrasi Enzim terhadap Kecepatan Reaksi.......................... 10

    2. Pengaruh Konsentrasi Substrat terhadap Kecepatan Reaksi ....................... 10

    3. Pengaruh Aktivator dan pH terhadap Kerja Enzim .................................... 11

    C. Batu Traktus Urinarius.................................................................................... 13

    1. Pemeriksaan Makroskopis Batu Traktus Urinarius .................................... 14

    2. Pemeriksaan Biokimiawi Batu Traktus Urinarius (Batu Urat, Batu Fosfat

    dan Batu Oksalat) ..................................................................................... 14

    D. Metabolisme Karbohidrat ............................................................................... 15

    1. Glikolisis pada Sel .................................................................................... 15

    E. Metabolisem Lipid .......................................................................................... 17

    1. Reaksi Salkowski ...................................................................................... 17

    2. Reaksi Liebermann Burchard .................................................................... 18

    3. Uji Daya Larut Lipid ................................................................................. 18

    F. Metabolisme Protein ....................................................................................... 20

    1. Uji Denaturasi Protein oleh Suhu .............................................................. 20

    2. Uji Hidrolisis Protein dengan Peptidase .................................................... 21

    G. Oksidasi Biologi ............................................................................................. 22

    1. Uji Schardinger ......................................................................................... 22

    2. Uji Peroksidase ......................................................................................... 23

    3. Uji Amilase Pencenaan ............................................................................. 23

    4. Uji Antioksidan Vitamin C ....................................................................... 24

    H. Darah Kualitatif .............................................................................................. 25

    1. Uji Sel Darah Merah Terhadap Oksihemoglobin dan Deoksihemoglobin .. 26

    2. Pengaruh Pelarut Kimia Terhadap Membran Sel Darah Merah .................. 27

    3. Hemolisis Sel Darah Merah ...................................................................... 28

    I. Darah Kuantitatif ............................................................................................ 30

    1. Penetapan Kadar Gula Darah .................................................................... 30

    2. Penetapan Kadar Protein Serum ................................................................ 31

    J. Empedu .......................................................................................................... 32

    1. Sifat Empedu ............................................................................................ 32

    2. Uji Gmelin ................................................................................................ 33

    3. Uji Pettenkofer ......................................................................................... 33

    4. Fungsi Empedu Sebagai Emulgator .......................................................... 34

  • v Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    K. Cairan Tubuh: Saliva ...................................................................................... 35

    1. Penetapan pH Air Liur............................................................................. 36

    2. Uji Biuret ................................................................................................. 36

    3. Uji Millon ................................................................................................ 37

    4. Uji Molisch .............................................................................................. 37

    5. Uji Presipitasi ........................................................................................... 38

    6. Uji Sulfat.................................................................................................. 38

    7. Uji Fosfat ................................................................................................. 39

    Lampiran .............................................................................................................. 40

  • vi Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    TATA TERTIB PRAKTIKUM

    1. Sebelum praktikum dimulai, praktikan tidak diperkenankan memasuki ruang

    praktikum, kecuali setelah mendapat izin dari instruktur atau asisten laboratorium

    2. Praktikan harus hadir di ruang praktikum tepat pada waktunya dengan memakai

    baju praktikum (terkancing), kartu tanda pengenal, dan sandal jepit.

    3. Praktikan yang memakai celana/rok bahan jeans, baju kaos tanpa kerah, baju

    berlengan sangat pendek (1/3 lengan atas) dan rok mini (di atas lutut) tidak

    diperkenankan mengikuti praktikum dan ujian sebelum menggantinya dengan

    pakaian yang layak.

    4. Semua mahasiswa diwajibkan mengikuti seluruh kegiatan praktikum.

    5. Setiap kelompok harus menyediakan lap tangan (serbet) dan kertas tisu gulung

    minimal 1 buah.

    6. Apabila praktikan merusakkan, menghilangkan dan memecahkan alat dengan

    alasan apapun, maka yang bersangkutan diwajibkan melapor ke instruktur dan

    mengganti alat tersebut paling lambat pada saat praktikum berikutnya.

    7. Setiap kali praktikum akan diadakan responsi (pre tes) terkait praktikum pada hari

    tersebut. Bila tidak lulus responsi, praktikan tidak diperkenankan mengikuti

    praktikum pada hari itu.

    8. Pada waktu praktikum, praktikan tidak diperbolehkan meninggalkan ruang

    praktikum tanpa seizin instruktur/asisten laboratorium.

    9. Praktikan harus bekerja dengan sungguh-sungguh, teliti dan tenang dengan

    mengikuti penuntun praktikum yang telah diberikan. Hati-hati terhadap basa

    kuat, asam kuat, dan beberapa pereaksi karena bersifat korosif terhadap

    kulit/saluran nafas dan bersifat toksik. Segera cuci dengan air mengalir bila

    terkena larutan pereaksi.

    10. Setelah selesai praktikum, setiap kelompok wajib membuat laporan sementara dan

    diparaf oleh dosen dengan menunjukkan hasil praktikum (format terlampir).

    11. Setiap kelompok wajib mencuci bersih, mengeringkan dan menyerahkan peralatan

    yang digunakan selama praktikum. Meja praktikum harus bersih setelah praktikum

    dilaksanakan.

    12. Praktikan tidak diperkenankan meninggalkan ruang praktikum sebelum ada

    instruksi dari instruktur/asisten laboratorium.

    13. Setiap praktikan wajib membuat laporan praktikum tetap yang dikumpulkan pada

    hari praktikum berikutnya (format terlampir).

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    1 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    A. URIN

    Pemeriksaan urin tidak hanya memberikan gambaran tentang ada atau tidaknya

    penyakit-penyakit ginjal dan saluran-kemih, tetapi juga dapat memberikan informasi

    tentang beberapa penyakit di bagian tubuh yang lain. Pemeriksaan urin seharusnya

    diutamakan daripada pemeriksaan kimiawi darah, karena kemudahan memperoleh

    sampel yang banyak dibandingkan darah.

    Dibandingkan dengan pemeriksaan darah pemeriksaan urin merupakan pencatatan

    yang berkesinambungan. Suatu nilai fisiologis kadang-kadang tidak ditemukan dalam

    pemeriksaan darah, tetapi dapat ditemukan pada pemeriksaan urin. Namun untuk

    penafsiran yang benar diperlukan diperlukan ihtisar yang baik mengenai fisiologi

    ginjal.

    GINJAL SEBAGAI ALAT EKSKRESI

    Hasil-hasil pemecahan pada metabolisme, terbanyak dikeluarkan dari tubuh lewat

    ginjal bersama urin. Ini terutama berlaku untuk akhir metabolisme protein yang

    mengandung nitrogen. Pada keadaan sakit, sebagian metabolisme terganggu ginjal

    mengeluarkan hasil-hasil pemecahan metabolisme yang terganggu tersebut, dan

    asalkan fungsi ginjal cukup baik, maka sering ditarik kesimpulan penting dari

    pemeriksaan urine. Juga banyak racun-racun dan obat-obat dikeluarkan lewat urine,

    baik dalam keadaan tak di ubah atau hasil pemecahannya.

    Fungsi ginjal kedua yang amat penting untuk tubuh adalah mempertahankan cairan

    ekstrasel sedapat mungkin konstan (homeostasis). Pengaturan oleh ginjal dilakukan

    pengeluaran urine yang atau asam atau alkalis, tergantung kebutuhan sewaktu, dan

    dengan demikian kesetimbangan asam-basa darah dapat dipertahankan (pengaturan

    pH). Bila dalam darah kadar keseluruhan mineral terlalu tinggi atau terlalu rendah

    maka oleh ginjal air akan ditahan atau dikeluarkan sehingga kadar mineral dalam darah

    kembali normal . Ini disebut osmoregulasi, karena kadar mineral dalam darah terutama

    menentukan tekanan osmotis filtrat bebas protein darah dalam ruang interstisial.

    Dengan naiknya tekanan osmosa darah, hipofisis pers posterior mengeluarkan lebih

    banyak pituirin, yang mengerem pengeluaran air. Pada penurunan tekanan osmosa,

    misalnya setelah minum air banyak, pituirin lebih sedikit dikeluarkan dan terjadilah

    diuresis air.

    Bila sistem pembuluh darah kurang terisi, misalnya ada kegagalan kemuka

    (forward failure), ginjal menahan air dan NaCl, sehingga volume darah diperbesar.

    Pada waktu peredaran darah telah baik kembali, ginjal melepas kembali air dan NaCl

    yang ditahan. Kejadian ini tidak hanya dijumpai pada kekurangan pengisian yang

    mutlak, namun juga pada kekurangan pengisian relatif. Yaitu bila pengisian system

    pembuluh darah yang membesar tidak mencukupi untuk keperluan peredaran darah

    yang meningkat. Ini disebut pengaturan volume. Juga dibawah pengaruh hormon

    suprarenalis, air dan NaCl ditahan.

    Pengeluaran bahan-bahan kebanyakan boleh dikata tidak tergantung dari diuresis

    contoh : seseorang mengeluarkan setiap jam 25 ml urine dengan kadar protein 10%.

    Sesudah minum air terjadilah diuresis air dan urin jernih banyak dikeluarkan dengan

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    2 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    berat jenis rendah, dalam urin ini kadar protein akan turun sampai 0,5%, karena

    pengeluaran protein per jam tetap misalnya dalam contoh ini gram.

    Untuk memperoleh ihtisar yang baik mengenai banyaknya pengeluaran bahan lewat

    urin, perlu diketahui lewat peiode waktu ginjal membentuk urin yang diperiksa. Karena

    umumnya periode waktu tersebut tidak diketahui, maka dapatlah dipedomani berat

    jenis urin. Reaksi urobilin positif lemah pada berat jenis urin 1,030 menunjukkan

    pengeluaran urobilin sedikit dan dipandang normal. Namun pada berat jenis 1,003 hal

    ini menunjukkan pengeluaran urobilin yang banyak dan menunjukkan kelainan hati

    atau saluran empedu atau pemecahan darah yang meningkat.

    Pengeluaran hasil-hasil pemecahan rupanya sepanjang hari konstan. Hal ini berlaku

    untuk kreatinin, sepanjang kadarnya dalam darah konstan, yang boleh dikata konstan

    hanyalah kreatinin, lain bahan seperti glukosa, protein, kalsium dan fosfor

    menunjukkan irama pada siang hari, pada malam hari pengeluaran bahan-bahan

    tersebut lebih sedikit dari pada siang hari, rupanya dalah fungsi tubulus. Oleh karena

    ini kita dapat tidur nyenyak, tetapi tidak pada semua orang dewasa irama tersebut

    nyata, dan pada gangguan peredaran, pada perubahan sikap berdiri ke sikap tidur, irama

    ini udah kacau.

    Ginjal yang melaksanakan fungsi-fungsi tersebut terdapa dibagian belakan dinding

    perut daerah pinggang. Terdapat dua buah ginjal yang berbentuk bagai buah kacang

    dengan berat kurang lebih 300 gram, dengan pembuluh-pembuluh darah besar. Kurang

    lebih 25% darah yang dipompa jantung melewati ginjal, jadi kurang lebih 1,2 liter per

    menit. Pada masing-masing ginjal terdadat berjuta-juta nefron, disini darah disaring

    dengan tekanan tinggi dalam glomerulus, setiap hari kurang lebih 175 liter cairan

    disaring melewati glomerulus dan filtratnya masuk ke tubulus. Tubulus adalah

    pembuluh-pembuluh berkelok-kelok yang bermuara pada piala ginjal. Dalam tubuli

    terjadi absorbsi kembali secara aktif semua bahan dari filtrat glomerulus mempunyai

    komposisi sama dengan cairan intertisial, yaitu tanpa protein plasma, namun ada ion

    koloid sepanjang bahan ini tidak terikat protein plasma.

    Misalkan kadar gula darah 100 mg% dan kadar rata-rata ureum darah 300 mg/liter,

    pada penyaringan 175 liter cairan, maka lewat glomeruli akan disaring 175 gram

    glukosa dan 52,5 gram ureum. Bila setiap hari dikeluarkan rata-rata 1,5 liter urin tanpa

    glukosa dengan 20 gram ureum, maka dari tubuli diserap kembali atau berpindah

    secara difusi 175 gram glukosa dan 32,5 gram ureum.

    PENGUMPULAN SAMPEL URIN

    Hasil-hasil pemeriksaan urin hanya mempunyai arti bila didasari pada periode

    waktu kapan urin dibentuk. Pada umumnya jumlah urin yang dibentuk dalam waktu

    tertentu tidak diketahui. Untuk mempunyai gambaran mengenai jumlah tersebut maka

    dapat diambil sebagai pedoman berat jenis urin itu. Sebaiknya diperiksa urin yang

    dibentuk malam hari, karena adanya irama siang hari, urin malam hari mempunyai

    berat jenis tertinggi. Dalam urin tersebut terdapat kadar tertinggi metabolit-metabolit

    tertentu. Berikut ini waktu pengambilan urin sesuai dengan pemeriksaan yang

    diinginkan,

    1. Untuk pemeriksaan rutin urin.

    Bila mungkin digunakan urin pagi, keuntungannya ialah

    a. Tidak ada kekeruhan yang mengganggu karena perubahan kimiawi oleh

    pertumbuhan bakteri

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    3 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    b. Tidak ada oksidasi sehingga beberapa bahan lebih mudah dan lebih cepat

    ditentukan misalnya urobilinogen

    c. Kadar spontan maksimal, sehingga penetapan berat jenis mempunyai makna

    untuk menilai fungsi ginjal

    d. Tidak ada pengaruh fluktuasi siang hari, misalnya kadar urobilinogen urin sore

    sering meningkat

    2. Untuk pemeriksaaan kasus khusus seyogyanya diambil urin siang hari.

    Hal ini dilakukan pada keadaan-keadaan berikut :

    a. Albuminoria ortostasis

    Harus dibandingkan kadar protein pagi yang dibentuk sebelum seseorang

    bangun dengan urin sesudah seseorang bangun

    b. Pada pemeriksaan pembebanan, urin harus dikumpulkan pada waktu-waktu

    tertentu yang ditetapkan secara teliti.

    c. Pada pengaturan diet penderita diabetes, urin harus dikumpulkan dalam 34

    porsi selama 24 jam

    3. Untuk semua penetapan kuantitatif hanya urin yang dikumpulkan dalam 24 jam

    yang digunakan. Hanya untuk metabolit-metabolit yang diekskresi oleh ginjal

    dalam kadar relatif stabil selama 24 jam dapat diambil sebagai sampel. Contoh urin

    dalam waktu yang pendek.

    CARA MENGAMBIL URIN

    Untuk pemeriksaan rutin laki-laki, urin dapat diambil dengan jalan biasa, yaitu

    orang tersebut disuruh kencing, sebaiknya porsi urin mula-mula dibuang, dan porsi

    selanjutnya ditampung.

    Untuk wanita juga berlaku hal yang sama, porsi urin yang dikeluarkan awal

    dibuang dan baru porsi akhir ditampung.

    Semua ini dmaksudkan untuk menghindarkan pencemaran yang berasal dari saluran

    kencing sendiri, pengambila urin dengan kateter hanya dilakukan bila ada indikasi

    karena resiko infeksi saluran kencing yang besar pada kateterisasi.

    PENYIMPANAN URIN

    Pada suhu urin merupakan medium biakan yang bagus bagi bakteri. Setiap contoh

    urin sering mengandung beberapa bakteri dari vagina, preputium, maupun mulut uretra.

    Sesudah beberapa jam, komposisi urin berubah karena pertumbuhan bakteri, kecuali

    bila urin langsung sesudah dikeluarkan disimpan dalam lemari es. Juga dapat ditambah

    pengawet untuk mencegah pertumbuhan bakteri. Sebagai bahan pengawet dapat

    digunakan:

    1. Asam badan jenuh 1 ml dalam 10 ml urin

    2. Toluol : 1 ml per liter urin

    3. Timol : 100mg per liter urin

    4. Raksa oksida : 100 mg per liter urin

    Sampel urin yang digunakan untuk penetapan ureum dengan metode urease, penetapan

    diastase, uji ragi dan penetapan alkohol tidak boleh ditambah pengawet.

    Urin 24 jam untuk penetapan urobilinogen dapat disimpan dengan 5 ml 1 N NaOH

    dibawah petroleum eter dalam gelap . Bila diambil contoh dari kumpulan urin 24 jam,

    maka urin harus selalu langsung dicampur dan diaduk baik-baik sebelumnya. Untuk

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    4 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    pemeriksaan kimiawi kuantitatif urin dapat disimpan dengan dibekukan pada 10 -20o

    C dalam botol penisilin .

    1. PENENTUAN BERAT JENIS URIN

    Dasar

    Jumlah zat padat total dalam urin ditentukan oleh volume dan berat jenisnya

    Bahan dan alat

    1. Urin normal 24 jam

    2. Gelas ukur

    3. Pipet tetes

    4. Urinometer/urometer

    5. Termometer

    6. Botol timbang

    Cara kerja

    Cara A.

    1. Tetapkan vulume (ml) urin memakai gelas ukur (pengawet toluene yang ada

    dipermukaan disisihkan dengan memakai pipet tetes)

    2. Catatlah suhu tera urinometer dan tetapkan suhu urin

    3. Isi gelas ukur dengan urin 25 50 ml , masukkan urinometer, letakkan sedemikian

    rupa urinometer sehingga tidak menyentuh dinding gelas ukur dan catatlah berat

    jenis urin pada permukaan urin pada urinometer

    4. Apabila suhu urin tidak sama dengan suhu tera, tambahkan 0,001 untuk setiap 3

    derajat dibawah suhu tera.

    5. Simpanlah urin kembali dengan memakai pengawet toluene.

    Cara B.

    1. Mula-mula pipet 1 5 ml air suling dalam botol timbang dan timbang beratnya.

    2. Pipet dengan pipet yang sama 1 5 ml urin dan masukkan botol timbang dan

    timbang beratnya.

    3. Berat urin dibagi berat air suling yang sama, adalah berat jenis urin.

    Cara menera urinometer

    1. Dimasukkan urinometer pada air suhu 150 derajat Celsius BJ = 1,000

    2. Dimasukkan pada larutan sukrosa 1,28% maka BJ = 1, 005

    3. Dimasukkan pada larutan sukrosa 2,56% maka BJ = 1, 010

    4. Dimasukkan pada larutan sukrosa 5,70% maka BJ = 1, 020

    5. Dimasukkan pada larutan sukros 7,54% maka BJ = 1,030

    \

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    5 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    2. UJI DERAJAT KEASAMAN ( pH )

    Untuk mengukur derajat keasaman urin dapat digunakan kertas lakmus yang

    mempunyai daerah perubahan warna antara pH 5,4 sampai pH 7,8. Disini digunakan

    urin segar sebab bila disimpan pH dapat naik. Pengukuran derajat keasaman biasanya

    cukup dengan cara diatas sebab derajat keasaman urin tergantung faktor-faktor yang

    kerang penting seperti pangan yang dikonsumsi.

    Pengukuran derajat keasaman menjadi penting pada keadaan berikut ini:

    1. Batu ginjal, pemeriksaan pH urin berulang ulang penting untuk mendapatkan

    ihtisar mengenai difat batu , dan dengan demikian dpat diatur diet yang dianjurkan

    pada pasien

    2. Pada pengobatan infeksi saluran kencing, dengan diet berganti pH

    3. Pada keadaan asidosis berat, pH dikendalikan setelah pemberian bikarbonat

    4. Pada pengobatan seri obat sulfa, harus diberikan bikarbonat banyak, bila urin asam

    harus diberikan bikarbonat lebih banyak.

    Metode pengukuran pH lain yang lebih teliti diantaranya dengan kolorimetris,

    potensiometris dan titrasi.

    Cara Kerja

    1. Celupkan kertas pH ke dalam urin dan bandingkan dengan indikator standar.

    3. UJI OBERMEYER

    Tujuan

    Memeriksa adanya indikan dalam urin

    Dasar

    Gugus indoksil dioksidasi oleh pereaksi Obermeyer yang mengandung FeCl3 dalam

    HCl pekat membentuk warna biru indigo yang larut dalam kloroform.

    Bahan dan pereaksi

    1. Urin normal 24 jam

    2. Tabung reaksi

    3. Pereaksi Obermeyer

    4. Kloroform

    Cara kerja

    1. Masukkan 4 ml urin ke dalam tabung reaksi.

    2. Tambahkan 4 ml pereaksi Obermeyer, diamkan 2-3 menit.

    3. Tambahkan 1,5 ml kloroform, campur dengan membalik-balik tabung secara

    perlahan sebanyak sepuluh kali (jangan dikocok, karena dapat terjadi emulsi).

    Kloroform akan mengekstraksi biru indigo.

    4. Buang cairan kecoklatan dari tabung dengan hati-hati, lalu tambahkan akuades 1,5

    ml kedalam tabung. Perhatikan warna biru indigo yang terbentuk.

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    6 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    4. UJI GULA MEREDUKSI SECARA BENEDICT

    Tujuan

    Menetapkan kadar gula urin secara semikuantitatif

    Dasar

    Gula mereduksi yaitu gula yang mempunyai gugus aldehid atau keton bebas. Gula ini

    akan mereduksi ion kupri menjadi kuprooksida yang tidak larut dan berwarna merah.

    Banyaknya endapan merah yang terbentuk sesuai dengan kadar gula yang terdapat

    dalam urin.

    Bahan dan alat

    1. Urin normal 24 jam dan urin sampel (mengandung glukosa)

    2. Larutan Benedict

    3. Pipet Mohr 10 ml

    4. Pipet tetes

    5. Alat pemanas air/tangas air

    6. Pengatur waktu

    Cara kerja

    1. Campurlah dalam tabung reaksi 2,5 ml larutan Benedict dan 4 tetes urin

    2. Panaskan dalam tangas air mendidih selama 5 menit atau panaskan langsung

    hingga mendidih selama 2 menit. Dinginkan perlahan-lahan!

    3. Perhatikan endapan yang terbentuk dan simpulkan sesuai tabel berikut.

    Warna Penilaian Konsentrasi gula

    Biru/hijau keruh - -

    Hijau/hijau kekuningan + 1 kurang dari 0,5%

    Kuning kehijauan/kuning + 2 0,5 1,0 %

    Jingga + 3 1,0 2,0 %

    Merah + 4 lebih dari 2,0 %

    5. UJI PROTEIN URIN MENURUT HELLER

    Tujuan

    Memeriksa adanya protein dalam urin

    Dasar

    Protein dalam urin mengalami denaturasi oleh asam nitrat yang tampak sebagai cincin

    putih pada perbatasan kedua cairan.

    Bahan dan alat

    1. Urin normal 24 jam dan urin patologis (sampel)

    2. Asam nitrat pekat (dalam buret)

    3. Tabung reaksi

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    7 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    4. Pipet Mohr 10 ml

    Cara kerja

    1. Alirkan dari buret 1,5 ml asam nitrat pekat perlahan-lahan ke dalam tabung reaksi.

    2. Dengan memakai pipet Mohr, pelan-pelan tambahkan 1,5 ml urin normal atau

    patologis melalui dinding tabung sehingga kedua cairan tidak bercampur

    3. Perhatikan cincin putih yang terjadi antara dua lapisan (hasil diparaf dosen

    pengawas praktikum). Supaya cincinnya tidak rusak, tabung reaksi jangan

    digoyang.

    Catatan:

    Urea, asam urat dan garamnya dapat menghasilkan cincin putih, tetapi hal ini dapat

    dibedakan dengan memakai urin yang telah diencerkan 3 4 X sehingga pengaruh ini

    dapat dihilangkan.

    4. UJI ROTHERA (NITROPRUSIDA)

    Tujuan

    Identifikasi zat keton

    Dasar

    Terbentuknya warna ungu permanganat menyatakan adanya zat-zat keton. Warna

    coklat yang terbentuk bukan berarti positif.

    Bahan dan pereaksi

    1. Urin normal (mahasiswa) dan urin patologis (sampel)

    2. Kristal amonium sulfat

    3. Larutan Na-Nitroprusida 5 %

    4. Larutan amoniak pekat

    Cara Kerja

    1. Bubuhkan sedikit demi sedikit kristal amonium sulfat pada 2,5 ml urin normal dan

    patologis sampai jenuh (tidak larut).

    2. Tambahkan 2-3 tetes Na-Nitroprusida 5 % dan tambahkan 1 ml amoniak pekat

    3. Campur dan biarkan setengah jam. Perhatikan warna yang terbentuk.

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    8 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    B. ENZIM

    Enzim adalah sekelompok protein yang berfungsi sebagai katalisator untuk

    berbagai reaksi kimia dalam sistem biologik. Hampir semua reaksi kimia dalam system

    biologis dikatalisis oleh enzim. Sintesis enzim terjadi didalam sel dan sebagian besar

    enzim dapat di ekstraksi dari sel tanpa merusak fungsinya.

    Kepentingan medis enzim : Enzim terdistribusi di tempat-tempat tertentu didalam

    sel lebih kurang sesuai dengan golongannya dan juga fungsinya, sebagai contoh enzim

    yang berperan dalam sintesis dan reparasi DNA terletak didalam inti sel. Enzim yang

    mengkatalisis berbagai reaksi yang menghasilkan energi secara aerob terletah dalam

    mitokondria. Enzim yang berhubungan dengan biosintesis protein berada bersama

    ribosom, dengan demikian reaksi kimia dalam sel berjalan sangat terarah dan efisien.

    Ada beberapa penyakit yang disebabkan oleh abnormalitas sintesis enzim

    tertentu, misalnya pada defisiensi enzim glukosa 6 fosfat dehidrogenase

    (G6PDH/G6PD). Sel darah merah (SDM) penderita defisiensi G6PDH ini sangat rentan

    terhadap pembebanan oksidatif, misalnya pada pemakaian obat-obatan tertentu dan

    obat malaria dapat terjadi hemolisis intravaskuler.

    Analisis enzim dalam serum dapat dipakai untuk deteksi penyakit seperti infark

    otot jantung, kerusakan jaringan hati, bendungan saluran empedu dan penyakit prostat.

    Dasar penggunaan enzim sebagai dasar penunjang diagnosis adalah:

    1. Pada dasarnya sebagian besar enzim berada dalam sel

    2. Enzim tertentu adanya intrasel, bila berada dalam serum berarti terjadi kerusakan

    pada jaringan asalnya.

    PENGGOLONGAN ENZIM

    Jumlah enzim ada ribuan macam tapi dapat digolongkan menjadi 6 golongan, yaitu,

    1. Oksidoreduktase, kelompok enzim ini mengkatalisis reaksi reaksi redoks.

    2. Transferase, kelompok enzim ini mengkatalisis reaksi pemindahan berbagai gugus

    misal, amina , karboksil, metil, asil dll.

    3. Hidrolase, kelompok enzim ini mengkatalisis pemutusan ikatan kovalen sambil

    mengikat air.

    4. Liase, kelompok enzim memutus ikatan kovalen tanpa mengikat air.]

    5. Isomerase, kelompok enzim ini mengkatalisis reaksi isomerisasi.

    6. Ligase (sintase), kelompok enzim ini mengkatalisis pembentukan ikatan kovalen.

    KESPESIFIKAN ENZIM

    Kespesifikan enzim dibedakan menjadi kespesifikan optik dan gugus. Kespesifikan

    optik tampak pada enzim yang bekerja pada karbohidrat (misalnya hanya bekerja

    terhadap isomer D bukan L, dan asam amino dan protein (misalnya hanya bekerja pada

    isomer amino L bukan isomer D). Kespesifikan gugus yakni enzim hanya bekerja atau

    mengenali gugus tertentu misal enzim alkohol dehidrogenase tidak dapat mengkatalisis

    reaksi dehidrogenase pada senyawa bukan alkohol.

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    9 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    FAKTOR FAKTOR YANG MEMPENGARUHI KERJA ENZIM

    Seperti protein lainnya sifat biologis enzim sangat dipengaruhi oleh berbagai

    faktor fisikokimia. Enzim bekerja pada kondisi tertentu yang relatif ketat. Adapun

    faktor yang mempengaruhi kerja enzim antara lain suhu, pH, oksidasi, sinar UV, sinar

    X, alfa beta dan gama, konsentrasi enzim dan substratnya.

    Pengaruh Suhu

    Suhu rendah mendekati titik beku tidak merusak enzim namun enzim tidak

    dapat bekerja. Kenaikan suhu lingkungan akan meningkatkan energi kinetik enzim dan

    meningkatkan frekuensi benturan antar molekul enzim dan substrat dan pada suhu

    tertentu akan mencapai kecepatan reaksi maksimum, bila suhu ditingkatkan terus maka

    jumlah enzim yang aktif akan berkurang karena mengalami denaturasi. Kecepatan

    reaksi enzimatik berlangsung maksimal pada suhu optimum. Enzim pada suhu 37o C

    optimum dalam tubuh manusia . Sebagian besar enzim tidak aktif pada pemanasan

    sampai 60o C karena mengalami denaturasi.

    Pengaruh pH

    Enzim bekerja pada kisaran pH tertentu. Bila dilakukan pengukuran aktivitas

    enzim pada beberapa macam pH yang berlainan maka sebagian besar enzim akan

    menunjukkan aktivitas maksimum antara pH 5,0 9,0. Kecepatan reaksi enzimatik

    berlangsung maksimal pada pH optimum.

    Ada enzim yang mempunyai pH optimum sangat rendah yaitu pepsin, pH

    optimum pepsin adalah 2. Pada pH yang jauh diluar pH optimum enzim akan

    terdenaturasi. Selain itu pada keadaan ini baik enzim maupun substrat dapat mengalami

    perubahan muatan listrik yang mengakibatkan enzim tidak dapat berikatan dengan

    substrat.

    Pengaruh Konsentrasi Enzim

    Peningkatan konsentrasi enzim akan meningkatkan reaksi enzimatik. Dapat

    dikatakan bahwa kecepatan reaksi enzimatik (v) berbanding lurus dengan konsentrasi

    enzim (E) makin besar konsentrasi enzim reaksi enzimatik makin cepat

    Pengaruh Konsentrasi Substrat

    Pada suatu reaksi enzimatik bila konsentrasi substrat diperbesar sedangkan

    konsentrasi lainnya tetap, maka kecepatan reaksi (v) akan meningkat samapai suatu

    batas kecepatan maksimum (V) Pada titik maksimum ini enzim telah jenuh dengan

    substrat.

    Dalam suatu reaksi enzimatik, enzim akan mengikat substrat membentuk komplek

    enzim substrat (ES) kemudian komplek ini akan terurai menjadi enzim (E) dan produk

    (P) makin banyak komplek (ES) terbentuk makin cepat reaksi berlangsung sampai

    batas kejenuhan (ES). Pada konsentrasi substrat (S) melampaui batas kejenuhan

    kecepatan reaksi akan konstan, dalam keadaan ini seluruh enzim sudah berada dalam

    bentuk komplek (ES) artinya penambahan jumlah (S) tidak menambah jumlah (ES).

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    10 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    1. PENGARUH KONSENTRASI ENZIM TERHADAP KECEPATAN REAKSI

    Tujuan

    Membuktikan bahwa kecepatan reaksi enzimatik berbanding lurus dengan konsentrasi

    enzim

    Dasar

    Pada konsentrasi substrat tertentu, penambahan enzim dengan konsentrasi bertingkat

    akan meningkatkan terbentuknya jumlah komplek enzim substrat, sehingga jumlah

    produk yang terbentuk juga meningkat.

    Bahan dan pereaksi

    1. Susu

    2. Larutan enzim protease (pepsin 0,5% atau bromelin)

    3. Penangas air

    Cara Kerja:

    1. Siapkan penangas air dengan suhu 37o C letakkan kedalamnya sebuah tabung

    reaksi berisi 15 ml susu.

    2. Selain itu letakkan juga didalamnya 3 tabung reaksi masing-masing berisi 1,0 ml

    enzim protease, 0,5 ml enzim protease + 0,5 ml air , 0,25 ml enzim protease +,

    0,75 ml air.

    3. Setelah di inkubasi selama 5 menit pipetkan masing-masing 5 ml susu hangat ke

    dalam 3 tabung reaksi yang berisi enzim protease diatas.

    4. Lakukan satu demi satu jangan serentak, campurkan isi tabung dengan baik dan

    cepat, amati dan catat waktu susu mulai menggumpal dari tiap-tiap tabung (dalam

    hitungan detik).

    2. PENGARUH KONSENTRASI SUBSTRAT TERHADAP KECEPATAN

    REAKSI

    Tujuan

    Membuktikan bahwa kecepatan reaksi enzimatik sampai batas tertentu dipengaruhi

    oleh konsentrasi substrat.

    Dasar

    Pada konsentrasi tertentu penambahan substrat dengan konsentrasi meningkat sampai

    konsentarsi tertentu akan meningkatkan kecepatan reaksi enzimatik hingga mencapai

    kecepatan maksimum . Penambahan substrat setelah konsentrasi tersebut tidak akan

    meningkatkan kecepatan reaksi enzim, sebab telah mealmpaui titik jenuh enzim.

    Bahan dan pereaksi

    1. Susu

    2. Larutan enzim protease (pepsin 0,5% atau bromelin)

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    11 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    Cara kerja

    1. Siapkan 3 tabung reaksi bersih dan kering, masukkan kedalamnya pada tabung

    pertama 5 ml susu, tabung kedua 4 ml susu + 1 ml air, tabung ketiga 3 ml susu dan

    2 ml air. Siapkan juga I tabung reaksi berisi 3 ml enzim.

    2. Letakkan keempat tabung dalam penangas air 37o C selama 5 menit.

    3. Pipetkan 1 ml larutan enzim kedalam masing-masing tabung di atas dan amati

    waktu penggumpalan susu pada tiap tabung, lakukan satu persatu jangan serentak.

    4. Catatlah waktu yang diperlukan untuk penggumpalan susu dalam hitungan detik.

    3. PENGARUH pH DAN AKTIVATOR TERHADAP KERJA ENZIM

    Tujuan

    Untuk mengidentifikasi pengaruh pH dan aktivator terhadap kerja enzim

    Dasar

    Air liur mempunyai pH antara 5,6-7,6, biasanya mendekati 6,8. Pada saat makan, pH

    air liur akan meningkat, dan akan turun kembali setelah makan. Salah satu enzim yang

    penting dalam air liur adalah amilase (ptyalin). Amilase dalam air liur dapat

    menghidrolisis amilum menjadi dekstrin dan maltosa. Bila larutan amilum ditetesi

    yodium, maka secara berurutan akan terjadi perubahan warna dari biru tua yang khas

    untuk amilum hingga menjadi tidak berwarna sesuai dengan perubahan yang terjadi

    pada hidrolisis amilum.

    Hidrolisis Amilum Perubahan Warna

    Amilum Biru Tua

    Amilodekstrin + Maltosa Biru

    Eritrodekstrin + Maltosa Merah Angggur

    Akrodekstrin + Maltosa Tidak Berwarna

    Maltosa Tidak Berwarna

    Enzim ptyalin, seperti senzim-enzim lainnya, mempunyai pH optimum, inhibitor

    dan aktivator. Ptyalin memiliki pH optimum berkisar 6-7. Enzim ini tidak aktif pada

    pH 4 atau lebih rendah. Kerja enzim ptyalin dipengaruhi oleh ion klorida. Konsentrasi

    ion klorida yang tinggi dapat meningkatkan kerja enzim amilase.

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    12 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    Bahan dan pereaksi

    1. Larutan amilum 1%

    2. Larutan yodium encer

    3. Larutan NaCl 1%

    4. Larutan HCl 1N

    5. Air liur

    6. Akuades

    Cara kerja

    1. Kumpulkan air liur dan tampung pada gelas ukur. Tambahkan sedikit akuades lalu

    saringlah air liur tersebut. Sebelum mengumpulkan air liur, berkumur-kumurlah

    dahulu dengan air.

    2. Lakukan prosedur seperti tabel berikut,

    BAHAN/PEREAKSI TABUNG A TABUNG B TABUNG C

    Larutan NaCl 1% 1 ml - -

    Larutan HCl 1 N - 1 ml -

    Aquades (ml) - - 1 ml

    Lar. Amilum 1% 3 ml 3 ml 3 ml

    Lar. Yodium encer 1 tetes 1 tetes 1 tetes

    Air liur 1 ml 1 ml 1 ml

    Perubahan Warna dan

    Waktu yang

    Dibutuhkan

    .... .... .... .... .... ....

    .... .... .... .... .... ....

    .... .... .... .... .... ....

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    13 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    C. BATU TRAKTUS

    URINARIUS

    Faktor-faktor yang mempengaruhi pembentukan batu traktus urinarius

    1. Perubahan keadaan koloid pelindung di dalam urin

    2. Perubahan pH atau kepekatan urin, yang dapat menyebabkan daya larut suatu zat

    menurun.

    3. Radang dapat merubah pH urin , disamping itu kelompok bakteri, sel epitel atau

    nanah dapat menjadi inti pembentukan batu.

    4. Stasis (bendungan) urin yang berlangsung lama.

    5. Defisiensi vitamin A (perubahan sel epitel saluran urin).

    6. Gangguan endokrin, misalnya yang mempengaruhi eksresi elektrolit

    (Hiperparatiroidisme).

    Klasifikasi batu traktus urinarius

    1. Batu Asam Urat

    Paling sering ditemukan, biasanya multipel, permukaannya halus, berwarna kuning

    sampai coklat kemerahan.

    2. Batu Oksalat

    Merupakan batu yang banyak didapatkan setelah batu asam urat, berwarna coklat

    tua sampai hitam, keras dan mempunyai permukaan kasar, terutama batu yang

    besar.

    3. Batu Fosfat

    Batu yang didapatkan pada operasi ginjal sebagian besar batu oksalat dan fosfat,

    berwarna putih sampai abu-abu, biasanya kasar dan mudah dihancurkan daripada

    batu oksalat dan urat. Dapat merupakan campuran kalsium fosfat, magnesium

    fosfat atau aluminium fosfat (triple phosphate).

    4. Batu Karbonat

    Jarang terdapat, bentuknya agak kecil, warna putih atau abu-abu dengan

    permukaan licin.

    5. Batu Sistin

    Dapat terbentuk pada sistinuria, warnanya putih, kuning atau kehijauan, agak

    lunak, batu jenis ini jarang terdapat.

    6. Batu Xantin

    Lebih jarang terdapat daripada batu sistin, warna coklat sampai merah dan lebih

    besar daripada batu sistin.

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    14 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    1. PEMERIKSAAN BATU TRAKTUS URINARIUS SECARA

    MAKROSKOPIS

    Tujuan

    Identifikasi zat-zat pembentuk batu traktus urinarius secara makroskopis

    Bahan

    Batu bongkahan

    Cara kerja

    Amati batu yang ada didepan saudara. Identifikasi dan catat jenis batu tersebut beserta

    ciri-cinya.

    2. PEMERIKSAAN BATU TRAKTUS URINARIUS SECARA BIOKIMIA

    Tujuan

    Identifikasi zat-zat pembentuk batu traktus urinarius secara makroskopis

    Bahan

    1. Batu dalam bentuk serbuk atau bongkahan

    2. HNO3 pekat

    3. Amoniak

    4. HCl 10 %

    5. Amonium molibdat

    Cara kerja

    Uji Batu Urat

    a. Sedikit gerusan batu pada cawan ditambah beberapa tetes HNO3 pekat.

    b. Dipanaskan sampai kering

    c. Setelah dingin tambah 2-3 tetes amoniak pekat.

    d. Warna jingga menunjukkan batu mengandung asam urat.

    Uji Batu Fosfat

    a. Sedikit gerusan batu di tambah 2 ml HCl 10 %

    b. Dipanaskan sampai mendidih, kemudian disaring.

    c. Filtrat ditambah 1 ml amoniak pekat.

    d. Warna putih menunjukkan batu mengandung fosfat

    Uji Batu Oksalat

    a. Gerusan batu ditambah 1 ml amonium molibdat

    b. Dipanaskan sampai mendidih

    c. Setelah dingin tambah 3-4 tetes HNO3 pekat

    d. Endapan kuning menunjukkan batu mengandung oksalat.

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    15 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    D. METABOLISME

    KARBOHIDRAT

    Di dalam tubuh, metabolisme digolongkan menjadi tiga yakni jalur anabolik,

    katabolik, dan amfibolik. Jalur anabolik adalah jalur-jalur yang berperan dalam sintesis

    senyawa yang lebih besar dan kompleks dari prekursor yang lebih kecil. Jalur katabolik

    adalah jalur yang berperan dalam pemecahan molekul besar dan kompleks menjadi

    molekul kecil dengan menghasilkan energi. Jalur amfibolik adalah jalur persimpangan

    dalam metabolisme, sebagai penghubung antara jalur katabolik dan jalur

    anabolik.Karbohidrat, lemak, dan protein akan mengalami proses metabolisme di

    dalam tubuh, baik jalur anabolik, katabolik maupun amfibolik.

    Salah satu jalur metabolisme penting dalam tubuh adalah glikolisis yakni suatu

    jalur katabolik glukosa untuk menghasilkan energi (ATP). Pada setiap organisme dan

    sel proses ini pasti terjadi. Glikolisis bias terjadi dalam kondisi aerob dan anaerob.

    Urutan reaksi glikolitik pada setiap spesies berbeda hanya dalam cara pengaturan

    kecepatan reaksi, dan dalam jalur metabolik selanjutnya dari piruvat yang terbentuk.

    Glikolisis dalam sel darah merah dan sel ragi terjadi secara anaerob. Pada sel darah

    merah, piruvat akan diubah menjadi laktat, sedangkan pada sel ragi, piruvat akan

    diubah menjadi etanol dan CO2.

    GLIKOLISIS

    Tujuan

    Mempelajari proses glikolisis di dalam sel dengan mengukur kadar glukosa yang

    tersisa dan pengaruh inhibitor terhadap proses glikolisis sel.

    Dasar

    Dalam sel, glukosa akan diubah menjadi piruvat melalui glikolisis. Penambahan

    inhibitor menyebabkan sedikit glukosa yang diubah menjadi piruvat.

    Glikolisis berlangsung di sitoplasma. Glikolisis baik pada organisme aerob

    maupun anaerob akan menghasilkan piruvat. Metabolisme karbohidrat, selanjutnya

    berbeda antara kedua organisme itu. Pada organisme aerob, hasil glikolisis selanjutnya

    akan masuk dalam rangkaian siklus Krebs dan fosforilasi oksidatif sehingga

    menghasilkan banyak energi.

    Organisme anaerob tidak memiliki rantai pernafasan di mitokondria. Organisme

    harus mereoksidasi NADH yang dihasilkan dalam glikolisis melalui beberapa reaksi

    lain, karena NAD+ diperlukan untuk reaksi dehidrogenase gliseraldehida-3-fosfat. Jalur

    lengkap, termasuk glikolisis dan reoksidasi NADH, disebut

    fermentasi. Contoh, glikolisis pada sel ragi.

    Glikolisis membebaskan H+:

    Glukosa + 2 NAD+ + 2 ADP + 2 Pi 2 piruvat + 2 NADH + 2 ATP

    Fermentasi, dari glukosa menjadi laktat:

    Glukosa + 2 ADP + 2 Pi 2 laktat + 2 ATP

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    16 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    Katabolisme secara anaerob glukosa menghasilkan 2 energi tinggi sebagai ATP,

    sedangkan katabolisme aerob glukosa menghasilkan 8 energi sebagai ATP.

    Bahan dan alat

    1. Tabung reaksi 2. Suspensi ragi dan suspensi ragi yang telah dididihkan 3. Larutan glukosa 1% 4. Inhibitor proses glikolisis: larutan fluoride dan larutan arsenat 5. Spektrofotometer

    Cara kerja

    1. Sediakan 4 tabung reaksi yang bersih dan kering. Tabung 1 :kontrol positif

    Tabung 2 :kontrol negatif

    Tabung 3 :pengaruh inhibitor fluorida

    Tabung 4 :pengaruh inhibitor arsenat

    2. Pipetkan ke dalam tiap-tiap tabung larutan sebagai berikut:

    Larutan 1 2 3 4

    Suspensi ragi 14 mL - 13.5 mL 13.5 mL

    Suspensi ragi yang

    telah dididihkan

    -

    14 mL

    - -

    Larutan fluorida - - 0.5 mL -

    Larutan arsenit - - - 0.5 mL

    Larutan glukosa 1% 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL

    3. Campurkan isi tabung dengan membolak-balikkannya 3-4 kali. Biarkan 10 menit dalam suhu kamar.

    4. Setelah 10 menit, sentrifugasi dengan kecepatan 2000 rpm. 5. Lalu ambil supernatan (bagian atas) dan pipetkan ke dalam tabung baru seperti

    tabel berikut.

    Larutan Blangko

    (B)

    Standar

    (S)

    Uji (U)

    1 2 3 4

    Supernatan (mL) - - 0,1 0,1 0,1 0,1

    Standar glukosa 0.1 g/dl (mL) - 0,1 - - - -

    Akuades (mL) 2 1,9 1,9 1,9 1,9 1,9

    Reagensia (mL) 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,25

    Campurkan dengan baik lalu inkubasi selama 10 menit pada suhu 37C. Baca

    serapan dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 550 nm

    Serapan (A)

    Kadar glukosa ditentukan dengan:

    Kadar glukosa = Au Ab x 100 mg/dL As Ab

    Pertanyaan

    1. Mengapa hasil uji berbeda pada tiap tabung? Pada glikolisis, enzim apa yang

    dipengaruhi oleh fluor dan arsen?

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    17 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    E. METABOLISME

    LIPID

    SASARAN PEMBELAJARAN

    Setelah mengikuti praktikum metabolisme lipid, diharapkan mahasiswa mampu,

    1. Mengidentifikasi sterol (seperti kolesterol)

    2. Menidentifikasi daya larut lipid dalam berbagai pelarut organik

    3. Mengidentifikasi zat keton

    Lipid adalah suatu kelompok senyawa heterogen yang berhubungan dengan

    asam lemak, secara aktual maupun potensial.

    Sifat-sifat lipid,

    1. Relatif tidak larut dalam air

    2. Larut dalam pelarut non polar

    Karena sifat pelarut nion polar yang mudah menguap dan mudah terbakar, maka

    ruangan khusus bebas dari api (percobaan yang memakai pelarut-pelarut non polar

    segera dikerjakan sebelum percobaan lain yang memakai api) dan bekas pelarut harus

    dibuang pada tempat khusus!

    1. REAKSI SALKOWSKI

    Tujuan

    Untuk mengidentifikasi sterol jenuh (seperti kolesterol)

    Dasar

    Reaksi dehidrasi dan oksidasi sterol jenuh oleh H2SO4 pekat dan diikuti oleh reaksi

    warna. Percobaan ini memerlukan alat-alat yang benar-benar kering.

    Bahan

    1. Larutan kolesterol 0,05% dalam kloroform

    2. Larutan H2SO4 pekat

    Cara kerja

    1. 1 ml larutan kolesterol 0,05% dalam kloroform dicampur secara hati-hati dengan 1

    ml H2SO4 pekat.

    2. Setelah kedua lapisan cairan berpisah lagi akan timbul berturut-turut warna merah,

    biru dan ungu dalam lapisan kloroform. Selain itu dalam lapisan asam akan tampak

    flouresensi berwarna kuning.

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    18 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    2. REAKSI LIEBERMANN BURCHARD

    Tujuan

    Untuk mengidentifikasi sterol.

    Dasar

    Reaksi ini belum diketahui reaksi kimianya. Kecepatan terbentuknya warna berlainan

    untuk macam-macam sterol. Sterol tidak jenuh reaksinya lebih cepat daripada yang

    jenuh. Percobaaan ini hanya dapat dilakukan dengan alat-alat yang benar-benar kering.

    Warna yang timbul cepat berubah menjadi biru lalu biru kehijauan.

    Bahan

    1. Larutan kolesterol 0,05% dalam kloroform

    2. Larutan asam asetat anhidrida

    3. Larutan H2SO4 pekat

    Cara kerja

    1. 2 ml larutan kolesterol 0,05% dalam kloroform dicampur dengan 10 tetes asam

    asetat anhidrida.

    2. Ke dalam campuran ini ditambahkan 2-3 tetea asam sulfat pekat.

    3. Kocoklah dengan hati-hati dan perhatikan warna-warna yang timbul karena

    warnanya tidak tetap.

    3. UJI DAYA LARUT LIPID

    Tujuan

    Mengidentifikasi daya larut lipid dalam berbagai pelarut organik

    Dasar

    Sejumlah kecil lipid dilarutkan dalam beberapa pelarut organik. Derajat kelarutan dapat

    dilihat secara langsung. Apabila kurang jelas, larutan dapat diuapkan perlahan-lahan

    dengan penangas air (atau disaring dengan kertas saring kering). Jumlah residu

    menunjukkan jumlah zat yang larut dalam larutan yang diperiksa.

    Bahan

    1. Minyak kelapa 2. Air 3. Larutan H2SO4 encer 4. Larutan Na2CO3 0,5% 5. Larutan alkohol dingin 6. Larutan alkohol panas 7. Larutan bensin 8. Larutan kloroform 9. Larutan eter

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    19 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    Cara kerja

    1. Masukkan 20 tetes minyak kelapa ke dalam 3 ml air dalam tabung reaksi lalu

    dikocok. Perhatikan emulsi yang terbentuk.

    2. Tambahkan 1 ml larutan Na2CO3 0,5% dan kocok lagi. Perhatikan pengaruhnya

    terhadap kestabilan emulsi.

    3. Lakukan poin (1) terhadap larutan H2SO4 encer, alkohol dingin, alkohol panas,

    bensin, kloroform dan eter.

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    20 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    F. METABOLISME

    PROTEIN

    Secara biokimia, protein adalah heteropolimer asam amino yang terhubung

    melalui ikatan peptida yang merupakan hasil ekspresi dari gen. Protein tersusun dari 20

    jenis asam amino yang sama.

    Protein merupakan komponen utama dari makanan. Protein dicerna pertama

    dalam lambung, dan kemudian di duodenum untuk menjadi dipeptida dan asam amino.

    Protein diserap menggunakan transpor aktif symport dengan natrium.

    Protein tersimpan dalam hati dan otot.

    Sintesis protein baru sangat penting selama pertumbuhan. Pada orang dewasa

    sintesis protein baru diarahkan untuk penggantian protein yang rusak. Selian itu,

    protein juga digunakan untuk sintesis berbagai senyawa lain seperti senyawa yang

    disintesis dari asam amino (purin dan pirimidin), katekolamin (adrenalin dan

    noradrenalin) dan neurotransmitter (serotonin).

    Sebagai bahan bakar biologis, protein menyumbang sekitar 10% dari produksi

    energi pada manusia. Langkah pertama dalam katabolisme asam amino adalah

    pelepasan nitrogen (gugus amino). Setelah gugus amino semuanya telah

    "dikumpulkan" dalam bentuk asam amino glutamat, gugus amino yang dilepaskan dari

    glutamat melalui rekasi deaminasi oksidatif. Gugus amino dilepaskan sebagai amoniak

    (NH4+). Amonia adalah racun bagi sistem saraf dan akumulasinya cepat menyebabkan

    kematian. Oleh karena itu harus didetoksifikasi ke bentuk yang dapat dengan mudah

    dikeluarkan dari tubuh. Amonia diubah menjadi urea, yang larut dalam air dan mudah

    diekskresikan melalui ginjal dalam urin

    1. UJI DENATURASI PROTEIN OLEH SUHU

    Tujuan

    Untuk menunjukkan bahwa suhu dapat memutuskan ikatan peptida potein.

    Dasar

    Protein memiliki suhu optimum tertentu. Pada suhu yang ekstrim tinggi, protein dapat

    terdenaturasi melalui perusakan ikatan peptida. Residu ikatan peptida yang ada dapat

    dideteksi dengan uji biuret secara kuantitatif.

    Cara kerja

    1. Lakukan prosedur seperti pada tabel berikut!

    Penambahan Zat PROTEIN DENATURASI

    1

    (Blangko) 2 3 4 5

    Protein 1% (mL) - 2 2 2 2

    Aquades (mL) 2 - - - -

    Pemanasan (oC) 10 menit 37 37 40 50 60

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    21 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    Sentrifugasi 5000 rpm 2 menit. Ambil supernatan(bagian atas)

    Biuret I (tetes) 1 1 1 1 1

    Biuret II (tetes) 1 1 1 1 1

    Campur dengan baik, diamkan 3 menit untuk melarutkan Cu2O , kemudian baca

    absorbansinya pada 550 nm

    Serapan pada 550 nm (A)

    2. Hitung kadar protein dari masing-masing tabung!

    Kadar tabung 3 = (A3 A blangko) / ( A2 A blangko) X 1% = .%

    Kadar tabung 4 = ( A4 A blangko) / (A2 A blangko) X 1% =%

    Kadar tabung 5 = (A5 - A blangko) / ( A2 A blangko) X 1 % =..%

    2. UJI HIDROLISIS PROTEIN DENGAN PEPTIDASE

    Tujuan

    Untuk menunjukkan bahwa enzim peptidase dapat menghidrolisis ikatan peptida potein

    Dasar

    Peptidase akan menghidrolisis ikatan peptida protein. Residu ikatan peptida yang ada

    dapat dideteksi dengan uji biuret secara kuantitatif.

    Cara kerja

    1. Lakukan prosedur seperti pada tabel berikut!

    Penambahan Zat PROTEIN PEPTIDASE

    1

    (Blangko) 2 3 4 5

    Protein 1% (mL) - 2 2 2 2

    Aquades (mL) 3 1 0,75 0,5 -

    Peptidase (mL) - - 0,25 0,5 1

    Masukkan inkubator 37oC 10 menit. Sentrifugasi 5000 rpm 2 menit. Ambil

    supernatan(bagian atas)

    Biuret I (tetes) 1 1 1 1 1

    Biuret II (tetes) 1 1 1 1 1

    Campur dengan baik, diamkan 3 menit untuk melarutkan Cu2O , kemudian baca

    absorbansinya serapannya) pada 550 nm

    Serapan pada 550 nm (A)

    2. Hitung kadar protein dalam masing-masing tabung!

    Kadar tabung 3 = (A3 A blangko) / ( A2 A blangko) X 1% = .%

    Kadar tabung 4 = ( A4 A blangko) / (A2 A blangko) X 1% =%

    Kadar tabung 5 = (A5 - A blangko) / ( A2 A blangko) X 1 % =..%

    Pertanyaan

    1. Apa peran enzim peptidase dalam tubuh dan sebutkan enzim peptidase dalam

    tubuh?

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    22 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    G. OKSIDASI BIOLOGI

    Secara kimia, oksidasi adalah pelepasan elektron dan reduksi adalah

    penerimaan elektron. Reaksi oksidasi akan selalu disertai reaksi reduksi.Prinsip reaksi

    oksidasi-reduksi juga berlaku dalam sistem biokimia. Pada makhluk hidup proses

    oksidasi berperan dalam metabolisme terutama pada reaksi yang menghasilkan energi.

    Proses oksidasi dapat berlangsung secara enzimatik dan non-enzimatik, berlangsung

    dengan oksigen atau tanpa oksigen (dehidrogenasi).

    Proses oksidasi di dalam tubuh dapat membentuk suatu radikal bebas atau

    oksidan. Oleh karena itu, tubuh mempunyai senyawa untuk khusus untuk menangkal

    oksidan hasil proses oksidasi yang disebut senyawa antioksidan. Contoh senyawa

    antioksidan endogen tubuh adalah enzim superoksida dismutase, katalase, peroksidase.

    Antioksidan juga ada yang berasal dari luar tubuh seperti vitamin C, vitamin E dan

    senyawa flavonoid.

    1. UJI SCHARDINGER

    Tujuan

    1. Memperlihatkan bahwa oksidasi dapat terjadi melalui dehidrogenasi suatu substrat,

    dalam hal ini formaldehida

    2. Memperlihatkan adanya enzim dehidrogenase aerob, yaitu aldehide dehidrogenase

    dalam susu segar

    Dasar

    Aldehid dehidrogenasi mengoksidasi formaldehid dengan cara melepas hidrogen.

    Hidrogen yang terbentuk dapat dipindahkan langsung ke oksigen udara menjadi H2O2

    atau suatu senyawa penerima misalnya riboflavin atau biru metilen. Pada akhirnya

    senyawa penerima yang tereduksi tersebut akan menyerahkan hidrogen ke oksigen

    udara membentuk H2O2. Hal ini tampak jelas bila menggunakan biru metilen sebagai

    penerima hidrogen . Biru metilen tereduksi tidak berwarna (leuko biru metilen) pada

    permukaan larutan susu akan teroksidasi kembali menjadi biru karena ada kontak

    dengan udara.

    Bahan dan pereaksi

    1. Susu segar dan susu pasteurisasi

    2. Larutan biru metilen 0,02%

    3. Larutan formaldehyde 0,4%

    Cara kerja

    1. Siapkan 2 tabung reaksi, satu tabung di isi 5 ml susu segar, tabung kedua di isi 5

    ml susu pasteurisasi

    2. Kemudian tambahkan berturut-turut 1 ml biru metilen dan 1 ml formal dehide pada

    masing-masing tabung.

    3. Campur dengan baik dan masukkan penangas air suhu 60 65 oC

    4. Catat apa yang terjadi dan bandingkan antara susu segar dan susu pasteurisasi

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    23 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    Pertanyaan

    1. Tulis reaksi dehidrogenasi formal dehide menjadi asam format

    2. Mengapa susu pasteurisasi memberi uji Schardinger berbeda

    2. UJI PEROKSIDASE

    Tujuan

    Membuktikan adanya enzim peroksidase di dalam susu segar

    Dasar

    Hidrogen peroksida akan di reduksi oleh peroksidase di dalam susu segar menjadi H2O.

    Pada uji ini, larutan guaiak ditambahkan pada susu, kemudian gas O2 hasil reduksi

    hidrogen peroksida oleh enzim peroksidase akan berikatan dengan larutan guaiak dan

    membentuk larutan yang berwarna merah atau jingga

    Bahan dan pereaksi

    1. Susu segar

    2. Larutan guaiak 1% dalam alkohol atau KMnO4 1% dalam air

    3. Larutan H2O2 3%

    Cara kerja

    1. Campur 2 ml susu segar dengan 8 ml air suling, bagilah dalam 2 tabung

    2. Panaskan tabung pertama sampai mendidih dan dinginkan. Tabung kedua tidak

    dipanaskan.

    3. Teteskan 5 10 tetes KmnO4 dalam tiap tabung.

    4. Tambahkan 2 3 tetes H2O2 ke dalam tiap tabung

    5. Perhatikan apa yang terlihat.

    Pertanyaan

    1. Apa perbedaan susu yang dipanaskan dan susu segar? Mengapa?

    3. UJI AMILASE PENCERNAAN

    Tujuan

    Membuktikan adanya enzim amilase dalam pencernaan saliva

    Dasar

    Amilase akan mencerna amilum menjadi amilosa, amilopektin dan glukosa

    Amilum + I2 biru

    Amilosa + I2 biru

    Amilopektin + I2 merah

    Glukosa + I2 ungu (warna I2 tidak berubah)

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    24 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    Bahan dan Pereaksi

    1. Larutan amilum 0,1%

    2. Larutan I2 0,1% dalam air

    3. Larutan amilase (dari saliva yang dikumpulkan praktikan)

    Cara kerja

    1. Ambil 2 ml larutan amilum dalam tabung reaksi

    2. Tambahkan 0,5 ml saliva, campur homogen (dikocok perlahan)

    3. Inkubasikan 37oC pada water bath

    4. Setiap menit tetesi larutan iodium, tetap diatas water bath sambil dikocok

    5. Amati pada menit ke berapa warna iodium tidak berubah. Catat dan amati setiap

    perubahan warna yang terjadi!

    Pertanyaan

    1. Apa beda rumus molekul amilum, amilosa, amilopektin dan glukosa? Tuliskan!

    4. UJI ANTIOKSIDAN VITAMIN C

    Tujuan

    Memperlihatkan efek antioksidan vitamin C (asam askorbat)

    Dasar

    Senyawa fenol oleh adanya enzim polifenoloksidase (PPO) akan di oksidasi oleh

    oksigen udara menjadi senyawa berwarna coklat dan H2O2. Dengan adanya vitamin C

    fenol yang ada dalam buah-buahan terlindung dari oksidasi sehingga warna coklat tidak

    terbentuk.

    Bahan dan pereaksi

    1. Larutan asam askorbat 1 mg/ml

    2. Potongan pisang/apel

    Cara kerja:

    1. Siapkan 2 gelas kimia, masing masing diberi potongan pisang/apel

    2. Tambahkan air 5 ml pada gelas kimia kesatu

    3. Tambahkan 5 ml larutan asam askorbat pada gelas kimia kedua

    4. Biarkan dalam beberapa menit

    5. Amati perubahan warnanya dan catat waktunya

    Pertanyaan

    1. Mengapa vitamin C berperan sebagai antioksidan dan bagaimana reaksi kimianya?

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    25 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    H. DARAH

    KUALITATIF

    Darah merupakan jaringan tubuh yang berbentuk cair, yang beredar dalam

    system pembuluh darah. Jumlah darah didalam tubuh kira-kira 5 7 % dari berat badan

    atau pada orang dewasa kira-kira 4,5 5 liter. Darah terdiri dari berbagai sel seperti

    eritrosit atau sel darah merah (SDM) , sel darah putih (lekosit) dan trombosit. Eritrosit

    adalah sel yang terbanyak didalam darah, jumlahnya mencapai 5 juta butir/ ml ,

    trombosit jumlahnya 250.000 400.000 butir/ml dan lekosit 5.000 10.000 /ml.

    Fungsi ketiga macam sel ini berbeda. Sel darah merah berfungsi mengikat dan

    membawa oksigen dari paru paru ke seluruh tubuh, serta membawa dan melepaskan

    CO2 dari seluruh tubuh ke paru. Untuk itu SDM dilengkapi dengan molekul khusus

    yang melaksanakan fungsi tersebut dan sekaligus memberi warna merah pada darah,

    yaitu hemoglobin (HB).

    Hemoglobin adalah suatu protein dengan berat molekul 64.450 didalam

    hemoglobin terdapat atom besi dalam keadaan tereduksi ( Fe2+

    ) . Dengan bantuan Fe2+

    ini hemoglobin dpat mengikat oksigen. Hemoglobin yang mengikat oksigen disebut

    hemoglobin teroksidasi atau oksihemoglobin (HBO2), sedang hemoglobin yang sudah

    melepas oksigen disebut hemoglobin tereduksi atau deoksihemoglobin (deoksiHb )

    Peristiwa tersebut dapat dituliskan dengan reaksi sebagai berikut:

    paru

    Hb + O2 < ============= HbO2

    jaringan

    Atom besi dalam hemoglobin dapat teroksidasi bila muatan positif atom besi

    menjadi 3+ (Fe3+

    ). Hemoglobin dengan besi teroksidasi (Fe3+

    ) disebut hemoglobin

    teroksidasi atau methemoglobin (metHb) atau Hb(Fe3+

    ). Dalam keadaan ini

    hemoglobin tidak dapat lagi mengikat oksigen. Hemoglobin yang teroksidasi menjadi

    methemoglobin akan kehilangan fungsinya. Perubahan Hb menjadi metHb dapat terjadi

    karena adanya senyawa pengoksidasi. Bila ini terjadi dalam tubuh maka dapat timbul

    akibat yang fatal, misalnya karena pemberian obat-obatan tertentu terutama pada orang

    yang berbakat untuk keadaan tersebut. Selain itu hemoglobin juga dapat berikatan

    dengan suatu gas hasil pembakaran tidak sempurna dari dari suatu bahan bakar yaitu

    CO (karbon monoksida ) sehingga terbentuk HbCO. Ikatan hemoglobin dan CO ini 200

    kali lebih kuat dari pada ikatan Hb dengan O2 akibatnya hemoglobin tidak dapat lagi

    mengikat, membawa dan mendistribusikan O2.

    Hemoglobin juga mempunyai sifat seperti enzim peroksidase. Hal ini berarti

    hemoglobin dapat mengatalisis reduksi H2O2 bila ada suatu reduktor. Berbeda dengan

    enzim, pada hemoglobin sifat ini tidak hilang setelah pemanasan. Sifat ini dapat

    digunakan untuk melacak adanya darah dalam suatu bahan uji. Sifat seperti peroksidase

    ini disebabkan oleh adanya gugus hem dalam hemoglobin.

    Sel darah merah seperti sel lainnya akan mengkerut dalam larutan dengan

    tekanan osmotik yang lebih tinggi (hipertonik) dari tekanan osmotik plasma. Dalam

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    26 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    larutan dengan tekanan osmotik lebih rendah (hipotonik) maka SDM akan

    membengkak karena cairan dari luar sel akan masuk kedalam sel dan kemudian terjadi

    lisis membran (hemolisis). Hemoglobin dari SDM yang mengalami lisis larut dalam

    plasma sehingga memberi warna merah pada plasma. SDM normal akan mulai

    mengalami lisis bila dimasukkan dalam NaCl 0,48% dan pada larutan NaCl 0,33 %

    terjadi lisis sempurna. SDM juga dapat mengalami lisis oleh obat-obatan. Struktur

    membran SDM mengandung lipid bilayer, bila SDM dimasukkan dalam pelarut

    organik misalnya eter, toluene, maka membran SDM akan mengalami lisis karena

    larutnya lipid membran sehingga hemoglobin terlepas kedalam pelarutnya.

    Hemoglobin dan derivat-derivatnya dapat dibedakan dengan menggunakan

    spektroskop, yaitu berdasarkan perbedaan absorpsi warna-warna tertentu dari cahaya

    putih. Bila suatu larutan berwarna diletakkan antara alat tersebut dan sumber cahaya,

    akan terlihat daerah (pita) hitam pada spektrum dimana terjadi penyerapan warna

    tersebut. Oksihemoglobin yang encer menunjukkan 3 pita absorpsi yaitu pita sempit

    absorpsi cahaya pada panjang gelombang 578 nm, pita yang lebih lebar pada 542 nm

    dan yang ketiga pada panjang gelombang 425 nm.

    Hemoglobin tereduksi (deoksihemoglobin) sebaliknya hanya menunjukkan satu

    pita absorbsi lebar pada 559 nm. Bila pada darah ditambahkan zat pengoksidasi akan

    terbentuk methemoblobin. Dalam larutan asam, methemoglobin mempunyai satu pita

    absorpsi dengan pusat pada panjang gelombang 634 nm. Hemoglobin karbon

    monoksida menunjukkan dua pita absorpsi yang pertama pada 570 nm dan yang kedua

    pada 542 nm.

    Tujuan praktikum

    1. Memperlihatkan sifat peroksidase Hb

    2. Memperlihatkan Hb dapat mengikat dan melepas O2

    3. Memperlihatkan Hb yang mengikat CO secara kuat tidak dapat mengikat O2

    4. Memperlihatkan besi dalam Hb bila di oksidasi akan menjadi methemoglobin dan

    tidak dapat mengikat oksigen lagi.

    5. Memperlihatkan pengaruh larutan hiper/hipo tonik terhadap membran sel darah

    merah

    6. Memperlihatkan pengaruh pelarut organic terhadap fragilitas sel darah merah.

    7. Memperlihatkan bahwa Hb dan derivatnya dapat menyerap sebagian gelombang

    cahaya putih yang melewatinya.

    1. UJI SEL DARAH MERAH TERHADAP OKSIHEMOGLOBIN DAN

    DEOKSIHEMOGLOBIN

    Tujuan

    Membuktikan bahwa hemoglobin dapat mengikat oksigen menjadi HbO2 dan senyawa

    ini dapat terurai kembali deoksi Hb dan O2

    Dasar

    Dalam keadaan tereduksi Fe dalam Hb dapat mengikat dan melepaskan O2. Dalam

    lingkungan udara biasa, Hb segera mengikat O2 menjadi HbO2, sedangkan didalam

    tabung reaksi HbO2 akan melepas O2 pada penambahan pereaksi Stokes (pereduksi).

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    27 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    Bahan dan pereaksi

    1. Suspensi darah

    2. Pereaksi Stokes

    3. Larutan Amonium Hidroksida (NH4OH)

    Cara kerja

    A. OKSIHEMOGLOBIN

    1. Masukkan 2 ml darah dan 6 ml air suling ke dalam tabung reaksi, campur

    dengan baik, perhatikan dan catat terbentuknya HbO2 yang berwarna merah,

    kareana bereaksi dengan oksigen.

    2. Bagilah menjadi 2, tabung A1 dan A2 masing-masing 4 ml. Tabung A1

    digunakan sebagai kontrol. Tabung A2 untuk untuk reaksi selanjutnya

    B. PEMBENTUKAN DEOKSIHEMOGLOBIN

    1. Pipetkan kedalam tabung reaksi 0,5 ml pereaksi Stokes, dan tambahkan

    NH4OH secukupnya untuk melarutkan endapan, bila terbentuk endapan.

    2. Pada tabung A2 yang berisi HbO2 dari percobaan A teteskan 2 tetes pereaksi

    Stokes dari percobaan (B.1.) Perhatikan dan catat warna deoksiHb yang

    terbentuk dan bandingkan dengan warna HbO2 dalam tabung A1 (tabung

    kontrol).

    C. PEMBENTUKAN KEMBALI HBO2 DARI DEOKSI HB

    1. Kocok kuat-kuat tabung yang berisi deoksiHb tersebut (hasil percobaan B.2.)

    2. Perhatikan dan catat warna HbO2 yang kembali terbentuk. Bandingkan dengan

    kontrol tabung A1. O2 yang diikat oleh Hb berasal dari udara. Deoksigenasi

    dan reoksigenasi dapat dilakukan berulang-ulang.

    Catatan:

    Pereaksi Stokes: cara buat, larutkan 20 g FeSO4 (ferro sulfat) dan 30 g asam tartrat

    dalam air encerkan sampai 1000 ml. Bila hendak dipakai, ambil 5 ml dan tambahkan

    ammonium hidroksida sampai endapan yang terbentuk larut kembali.

    2. PENGARUH PELARUT KIMIA TERHADAP MEMBRAN SEL DARAH

    MERAH

    Tujuan

    Memperlihatkan bahwa membran sel darah merah dapat mengalami lisis dalam pelarut

    organik

    Dasar

    Membran sel darah merah (SDM) antara lain mengandung lipid. Bila SDM dimasukkan

    ke dalam larutan yang mengandung pelarut organik, maka membran lipid akan larut,

    sehingga terjadi hemolisis danah memberi warna merah jernih.

    Bahan dan Pereaksi

    1. Suspensi darah

    2. NaCl 0,9%

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    28 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    3. Kloroform

    4. Eter

    5. Aseton

    6. Toluen

    7. Alkohol

    Cara kerja

    1. Kedalam 6 tabung reaksi masing-masing dimasukkan 10 ml NaCl 0,9%

    2. Tabung pertama digunakan sebagai kontrol (1), dan pada ke 5 tabung lainnya

    tambahkan masing-masing 2 tetes kloroform (2); eter (3); aseton (4); toluene (5)

    dan alkohol (6) secara berurutan.

    3. Segera tambahkan ke dalam tiap tabung 2 tetes suspensi darah, campur dengan

    membaliknya perlahanlahan (hati-hati, jangan sampai lisis karena goncangan),

    biarkan setengah jam (jangan dikocok). Perhatikan warna yang terbentuk pada

    larutan bagian atas dan bandingkan dengan kontrol.

    3. HEMOLISIS SEL DARAH MERAH

    Tujuan

    Memperlihatkan pengaruh larutan hipertonik dan hipotonik terhadap membran sel

    darah merah.

    Dasar

    SDM akan mengerut bila berada dalam larutan hipertonik terhadap tekanan osmotik

    plasma. Dalam larutan yang hipotonik, cairan dari luar sel akan masuk ke dalam sel

    sehingga SDM akan membengkak, dan akhirnya terjadi hemolisis. Hemoglobin dalam

    SDM akan larut dalam larutan, sehingga memberi warna merah jernih pada larutan.

    Bahan dan Pereaksi

    1. Suspensi darah

    2. NaCl 2%

    Cara kerja

    1. Kedalam 10 tabung reaksi isikan campuran sebagai berikut:

    Tabung Air suling (ml) NaCl 2% (ml) % NaCl

    1 10 0

    2. 9 1 ...

    3. 8 2 ...

    4 7,5 2,5 ...

    5 7 3

    6. 6,5 3,5

    7 6 4 ....

    8 5,5 4,5

    9 5 5

    10 4,5 5,5

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    29 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    2. Hitung konsentrasi NaCl pada masing-masing tabung!

    3. Campur dengan baik

    4. Tambahkan 2 tetes suspensi darah ke dalam setiap tabung dan campur dengan

    membalikanya perlahan-lahan, diamkan selama 1 jam.

    5. Perhatikan dan catat derajat hemolisis pada tiap-tiap tabung reaksi. Tandai tabung

    yang tidak hemolisis, hemolisis sebagaian dan hemolisis sempurna.

    Pertanyaan

    1. Peristiwa faal apa yang ditiru pada percobaan uji oksiHB dan deoksiHb?

    2. Apa yang terjadi bila orang keracunan gas CO?

    3. Suspensi darah ditambah beberapa tetes K3Fe(CN)6 di kocok kuat dan berdasarkan

    warna yang terbentuk apakah HbO2 dapat terbentuk kembali? Jelaskan!

    4. Apakah yang dimaksud hemolisis?

    5. Berapakah retensi osmotik minimum SDM?

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    30 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    I. DARAH

    KUANTITATIF

    Analisa kuantitatif darah berguna untuk mengetahui fungsi tubuh pada keadaan

    sehat dan atau pada keadaan sakit, karena berbagai komposisi cairan tubuh termasuk

    darah akan mengalami perubahan.

    Faktor yang mempengaruhi komposisi kimia darah pada suatu penyakit secara

    umum dibagi menjadi fisik dan metabolik. Faktor fisik antara lain retensi, dapat terjadi

    akibat perubahan atau kerusakan membran permeabel seperti paru-paru, ginjal atau

    hati. Contohnya akumulasi nitrogen akibat nefritis dan obstruksi saluran empedu oleh

    batu empedu akan mengakibatkan hiperkolesterolemia. Pada gangguan metabolisme

    terjadi juga perubahan kimia darah, misalnya peningkatan glukosa darah akibat

    diabetes melitus. Dapat dikatakan bahwa pemeriksaan kimia darah dilakukan bila ada

    persangkaan gangguan pada proses pembentukan, pemanfaatan dan eliminasi. Faktor

    fisik dan metabolik kadang-kadang tidak dapat dipisahkan, seperti terlihat pada

    penyakit ginjal. Pada analisis kuantitatif darah, protein dapat dapat mengganggu

    terutama pada analisis senyawa yang mengandung nitrogen amin atau amida serta

    reaksi yang melibatkan reduksi atau oksidasi ion metal. Sebelum analisis dilakukan,

    protein darah harus dipisahkan terlebih dahulu dengan pengendapan. Pengendapan

    protein antara lain dengan asam tungstat, seng hidroksida dan asam triklor asetat,

    tergantung keperluannya. Pemeriksaan faktor metabolik dapat dilakukan pada serum.

    1. PENETAPAN KADAR GULA DARAH

    Tujuan

    Untuk menentukan kadar gula darah

    Dasar

    Glukosa dalam darah (serum) direaksikan dengan reagensia yang akan menghasilkan

    zat yang berwarna dan dapat dibaca pada spektrofotometer dengan panjang gelombang

    500 nm. Nilai serapan yang diperoleh dibandingkan dengan standar.

    Bahan dan pereaksi

    1. Serum darah pasien

    2. Reagensia Glukosa

    3. Larutan standar glukosa 1%

    Cara kerja

    1. Lakukan prosedur seperti pada tabel berikut!

    Bahan/Pereaksi 1

    (Blangko)

    2

    (Standar)

    3

    (Uji 1)

    4

    (Uji 2)

    Glukosa standar 1% (mL) - 0,1 - -

    Serum - - 0,1 0,1

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    31 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    Aquades (mL) 2 1,9 1,9 1,9

    Reagensia Glukosa 0,25 0,25 0,25 0,25

    Campur dengan baik, inkubasi 10 menit pada suhu 37C kemudian baca

    absorbansinya pada 550 nm

    Serapan pada 420 nm (A)

    2. Hitung kadar glukosa dari masing-masing tabung!

    Kadar tabung 3 = (A3 A blangko) / ( A2 A blangko) X 1% = .%

    Kadar tabung 4 = ( A4 A blangko) / (A2 A blangko) X 1% =%

    Kadar tabung 5 = (A5 - A blangko) / ( A2 A blangko) X 1 % =..%

    2. PENETAPAN KADAR PROTEIN SERUM

    Tujuan

    Untuk menetapkan kadar protein serum

    Dasar

    Protein tersusun atas asam amino-asam amino melalui ikatan peptida. Ikatan peptida

    yang ada dapat dideteksi dengan uji biuret secara kuantitatif. Banyaknya ikatan peptida

    yang dideteksi menunjukkan kadar protein dalam suatu larutan (serum).

    Cara kerja

    1. Lakukan prosedur seperti pada tabel berikut!

    Bahan/Pereaksi 1

    (Blangko)

    2

    (Standar) 3 4

    Protein standar 1% (mL) - 2 - -

    Serum - - 2 1,5

    Aquades (mL) 2 - - 0,5

    Sentrifugasi 5000 rpm 2 menit. Ambil supernatan(bagian atas)

    Biuret I (tetes) 1 1 1 1

    Biuret II (tetes) 1 1 1 1

    Campur dengan baik, diamkan 3 menit untuk melarutkan Cu2O ,

    kemudian baca absorbansinya serapannya) pada 550 nm

    Serapan pada 550 nm (A)

    3. Hitung kadar protein dari masing-masing tabung!

    Kadar tabung 3 = (A3 A blangko) / ( A2 A blangko) X 1% = .%

    Kadar tabung 4 = ( A4 A blangko) / (A2 A blangko) X 1% =%

    Kadar tabung 5 = (A5 - A blangko) / ( A2 A blangko) X 1 % =..%

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    32 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    J. EMPEDU

    Empedu diproduksi oleh hati dan disimpan sementara dalam kandung empedu

    sebelum dikeluarkan ke duodenum, diperkirakan hati menghasilkan 500 1000 ml

    empedu per hari.

    Empedu manusia berwarna kuning keemasan, namun bila dibiarkan pada udara

    terbuka maka warnanya akan berubah menjadi hijau, biru dan coklat karena pigmen

    empedu ter oksidasi. Empedu bereaksi alkalis (pH 7,8 8,6). Kandungan empe4du

    yang penting antara lain adalah garam-garam empedu, pigmen-pigmen empedu, lesitin,

    kolesterol dan garam-garam anorganik. Empedu tidak mengandung protein kecuali

    musin, yang di sekresi oleh dinding kandung empedu, dan sejumlah kecil enzim seperti

    fosfatase alkali.

    Empedu merupakan campuran hasil sekresi dan ekskresi. Bahan-bahan yang

    disekresi misalnya garam-garam empedu, sedangkan yang di ekskresi misalnya pigmen

    empedu dan kolesterol.

    Asam-asam empedu utama dalam empedu manusia adalah asam kolat dan

    asam kanodeoksikolat. Asam empedu mengaktifkan lipase dan mempengaruhi

    emulsifikasi lipid, yang diperlukan untuk hidrolisis dan absorpsi lipid, selain itu asam

    empedu juga penting untuk penyerapan kolesterol dan pembentukan ester kolesterol.

    Garam-garam empedu membantu pencernaan dan penyerapan lemak serta

    vitamin-vitamin yang larut dalam lemak ( vitamin A D E K ), aktivitas ini melalui 2

    cara :

    a. Garam empedu menurunkan tegangan permukaan dan meningkatkan emulsifikasi

    lemak sehingga mudah dicernakan oleh lipase.

    b. Garam mepedu berikatan dengan asam lemak membentuk suatu komplek yang

    lebih mudah larut dan diserap.

    Pigmen-pigmen empedu sebagian besar merupakan hasil katabolisme

    hemoglobin yang berasal dari penghancuran sel-sel darah merah oleh sistem

    retikuloendotelial dari hati, limpa dan sumsum tulang. Pigmen empedu yang utama

    adalah biliverdin yang berwarna hijau, dan bilirubin yang berwarna jingga atau kuning

    coklat. Oksidasi pigmen empedu oleh berbagai reaksi akan menghasilkan suatu turunan

    yang berwarna misalnya mesobiliverdin (berwarna hijau hingga biru), mesobilirubin

    (berwarna kuning) dan mesobilisianin (berwarna biru hingga ungu).

    Tujuan praktikum ini adalah untuk mempelajari sifat-sifat dan susunan empedu.

    1. IDENTIFIKASI SIFAT EMPEDU

    Tujuan

    Mengetahui warna, bau, konsistensi dan pH empedu.

    Bahan dan alat

    1. Empedu kental

    2. Gelas kimia

    3. Batang pengaduk

    4. Kertas indikator

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    33 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    Cara kerja

    1. Masukkan sedikit empedu asli dalam gelas kimia.

    2. Periksa warna empedu, bau, konsistensi, pH (dengan kertas indikator pH)

    2. UJI GMELIN

    Tujuan

    Membuktikan adanya pigmen empedu

    Dasar

    Penambahan asam nitrat pada pigmen empedu akan menghasilkan senyawa hasil

    oksidasi yang berwarna.

    Bahan dan alat

    1. Larutan empedu encer

    2. Larutan asam nitrat pekat

    3. Tabung reaksi

    4. Pipet volumetrik

    Cara kerja

    1. Masukkan 2 ml asam nitrat pekat dalam tabung reaksi

    2. Miringkan tabung reaksi, dengan pipet alirkan secara hati-hati 2 ml larutan empedu

    encer melalui dinding tabung sehingga kedua larutan tidak bercampur

    3. Perhatikan warna yang terbentuk pada perbatasan kedua cairan

    3. UJI PETTENKOFER

    Tujuan

    Membuktikan adanya asam empedu

    Dasar

    Asam empedu, yang terdapat dalam empedu terutama sebagai garam empedu,

    merupakan senyawa aromatik komplek. Asam empedu bereaksi dengan furfural (yang

    terbentuk pada penambahan asam pekat dan karbohidrat) membentuk turunan yang

    berwarna.

    Bahan dan alat

    1. Larutan asam empedu encer

    2. Larutan sukrosa 5%

    3. Asam sulfat pekat dalam buret

    4. Tabung reaksi

    5. Pipet volumetrik

    6. Pipet tetes

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    34 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    Cara kerja

    1. Masukkan 3 ml larutan empedu encer dalam tabung reaksi

    2. Tambahkan 3 tetes larutan sukrosa 5%

    3. Miringkan tabung reaksi lalu alirkan dengan hati-hati 2 ml asam sulfat pekat

    melalui dinding tabung sehingga membentuk 2 lapisan cairan, perhatikan cincin

    yang terbentuk pada perbatasan antara 2 lapisan

    4. FUNGSI EMPEDU SEBAGAI EMULGATOR

    Tujuan

    Membuktikan empedu bersifat sebagai emulgator (bahan penstabil emulsi)

    Dasar

    Emulsi adalah suatu suspensi metastabil yang terbentuk dari dua atau lebih zat cair

    yang tidak dapat larut satu sama lain. Untuk menstabilkan dibutuhkan emulgator yang

    berguna untuk menurunkan tegangan permukaan antar kedua fase cairan. Garam

    empedu dapat menurunkan tegangan permukaan sehingga ia berperan pada proses

    emulsifikasi lemak dalam usus.

    Bahan dan alat

    1. Larutan empedu encer

    2. Minyak goring

    3. Air suling

    4. Tabung reaksi

    Cara kerja

    1. Sediakan 2 tabung reaksi, pada masing-masing tabung masukkan 3 ml air suling

    2. Pada kedua tabung tambahkan 1 tetes minyak

    3. Pada tabung pertama tambahkan 3 ml air

    4. Pada tabung kedua tambahkan 3 ml larutan empedu encer

    5. Kocok kedua tabung, catat dan perhatikan bentuk kedua emulsi dalam tabung

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    35 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    K. CAIRAN TUBUH:

    SALIVA

    Saliva (Air liur) disekresikan oleh 3 pasang kelenjar besar yaitu parotis,

    submaksilaris dan sublingualis. Air liur parotis merupakan cairan hipotonis yang sangat

    encer dengan konsentrasi zat padat yang rendah. Sedang air liur submaksilaris dapat

    kental maupun encer tergantung pada rangsang simpatis atau parasimpatis,dan air liur

    sublingualis mengandung banyak musin.

    Selain itu air liur juga di sekresi oleh beberapa kelenjar kecil dalam mukosa mulut

    seperti labialis, lingualis, bukal dan palatal. Sekresi air liur dari kelenjar dalam mulut

    dapat disebabkan oleh rangsangan lokal dalam mulut atau oleh perangsangan pusat

    akibat rangsang psikis atau somatik.

    Air liur dalam rongga mulut berfungsi sebagai pelicin dan untuk membasahi

    makanan saat dikunyah sehingga mudah ditelan. Air liur juga merupakan tempat

    ekskresi obat obatan tertentu seperti alkohol dan morfin.

    Air liur mengandung air kira-kira 99,5%. Sekitar 2/3 dari bahan yang terlarut dalam air

    liur merupakan bahan organik dan 1/3 nya merupakan bahan anorganik. Komponen

    anorganik dalam air liur antara lain adalah Natrium, Kalium, Kalsium, Magnesium,

    Fosfat dan Bikarbonat. Sedang kandungan senyawa organik dalam air liur terdiri atas

    musin dan enzim amylase. Bahan organik lain yang juga terdapat dalam jumlah sedikit

    adalah urea, kolesterol dan hormon-hormon tertentu. Saliva juga mengandung berbagai

    macam sel seperti sel epitel mukosa mulut, leukosit dan bakteri.

    pH air liur antara 5,6 7,6 biasanya pH mendekati 6,8. Pada saat makan pH

    meningkat dan sesudah makan pH akan turun.

    Air liur dari kelenjar parotis mengandung sejumlah besar enzim amilase,

    lizozim, fosfatase asam, aldolase dan kolinesterase. Namun yang penting untuk proses

    fisiologis tubuh adalah amilase dan lizozim.

    Amilase air liur juga disebut ptyalin. Amilase bekerja mengatalisis pencernaan

    pati menjadi dekstrin (amilodekstrin, eritrodekstrin dan akrodekstrin) dan maltosa

    dengan dengan hidrolisis ikatan glukosidik alfa 1,4 pati.

    Enzim ini tidak aktif pada pH 4 atau lebih rendah sehingga pencernaan air liur

    segera terhenti setelah makanan berada dalam suasana asam lambung.

    Tujuan

    Untuk mempelajari sifat dan susunan air liur

    Pengumpulan air liur

    Untuk percobaan air liur ini tiap mahasiswa mengumpulkan air liurnya sendiri kira-kira

    20 ml dalam sebuah gelas kimia. Sebelum menampung air liur, berkumur-kumurlah

    terlebih dahulu. Untuk merangsang sekresi air liur kunyahlah sepotong paraffin (lilin)

    yang telah disediakan. Kemudian saringlah sebagian air liur tersebut.

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    36 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    1. PENETAPAN pH AIR LIUR

    Tujuan

    Menetapkan pH air liur sewaktu

    Dasar

    Pada kisaran pH tertentu suatu indikator akan memberikan perubahan warna sesuai

    dengan kadar H+ dalam larutan yang diperiksa.

    Bahan dan alat

    1. Air liur yang tidak disaring

    2. Indikator universal

    Cara kerja

    1. Celupkan sepotong indikator universal ke dalam air liur yang tidak disaring

    2. Cocokan warna indikator tersebut pada standar warna pH untuk indikator tersebut.

    Tentukan pH nya!

    2. UJI BIURET

    Tujuan

    Membuktikan adanya senyawa dengan ikatan peptida (protein) dalam air liur secara

    kualitatif

    Dasar

    Biuret adalah senyawa yang terbentuk dengan 2 ikatan peptida yang terbentuk pada

    pemanasan urea. Reaksi biuret adalah reaksi terhadap adanya paling sedikit 2 ikatan

    peptida. Reaksi biuret (larutan CuSO4 alkalis) terdiri atas larutan NaOH dan larutan

    CuSO4. Cu pada larutan alkalis bereaksi dengan protein membentuk suatu komplek

    koordinasi antara ion Cu2+

    dengan gugus C=O dan N-H pada ikatan peptida. Komplek

    tersebut memberi warna lembayung.

    Semua zat dengan 2 atau lebih ikatan peptida memberi reaksi positif. Zat zat lain yang

    mengandung gugus karbamil (-CONH) seperti CSBH2 , -C(NH)NH2 atau CH2NH2

    juga memberi rekasi yang sama.

    Bahan dan alat

    1. Air liur yang tidak di saring

    2. Larutan NaOH 10%

    3. Larutan CuSO4

    4. Tabung reaksi

    5. Pipet volumetrik

    6. Pipet tetes

    Cara kerja

    1. Masukkan 2 ml air liur yang tidak di saring dalam tabung reaksi

    2. Tambahkan 2 ml NaOH 10 % campur dengan baik

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    37 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    3. Tambahkan 1 tetes larutan CuSO4. Campur dengan baik, bila belum terbentuk

    warna lembayung tambahkan lagi 1 tetes CuSO4 hingga maksimum 10 tetes.

    3. UJI MILLON

    Tujuan

    Mengidentifikasi asam amino tirosin secara kualitatif

    Dasar

    Tirosin yang merupakan asam amino yang mengandung gugus hidroksi fenil (fenol)

    akan mengalami nitrasi dengan pereaksi Millon yang mengandung ion-ion

    merkuri/merkuro dalam asam nitrat/nitrit membentuk warna merah .

    Bahan dan alat

    1. Air liur yang tidak di saring

    2. Pereaksi Millon terdiri atas 100 g merkuri dalam 140 ml asam nitrat pekat, dan

    diencerkan dengan air sampai volumenya 3X

    3. Tabung reaksi

    4. Pipet volumetrik

    5. Pipet tetes

    6. Penangas air

    7. Gelas kimia

    Cara kerja

    1. Masukkan 2 ml air liur yang tidak di saring dalam tabung reaksi

    2. Tambahkan 2 3 tetes pereaksi Millon, campur dengan baik

    3. Panaskan hingga terbentuk warna merah

    4. UJI MOLISCH

    Tujuan

    Membuktikan adanya karbohidrat dalam air liur secara kualitatif

    Dasar

    Reaksi ini disebabkan oleh daya dehidrasi asam anorganik pekat terhadap karbohidrat,

    membentuk furfural atau turunannya seperti hidroksi metil furfural. Pereaksi Molisch

    yang terdiri atas alfa naftol akan bereaksi dengan furfural membentuk senyawa ungu.

    Bahan dan alat

    1. Air liur yang tidak di saring

    2. Pereaksi Molisch yang terdiri dari 25 g alfa naftol dalam alcohol 95% sampai 500

    ml dan dibuat baru setiap kali praktikum

    3. Asam sulfat pekat dalam buret

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    38 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    4. Tabung reaksi

    5. Pipet volumetrik

    6. Pipet tetes

    Cara kerja

    1. Masukkan 2 ml air liur yang tidak di saring dalam tabung reaksi

    2. Tambahkan 2 tetes pereaksi Molisch, campur dengan baik

    3. Miringkan tabung reaksi lalu alirkan dengan hati-hati 2ml asam sulfat pekat dari

    buret melalui dinding tabung hingga tidak bercampur.

    4. Reaksi positif ditandai dengan pembentukan cincin berwarna ungu pada batas antar

    kedua lapisan

    5. UJI PRESIPITASI

    Tujuan

    Membuktikan adanya musin dalam air liur

    Dasar

    Protein dapat dipresipitasi oleh asam asetat

    Bahan dan alat

    1. Air liur yang di saring

    2. Asam asetat encer

    3. Tabung reaksi

    4. Pipet volumetrik

    5. Pipet tetes

    Cara kerja

    1. Masukkan 2 ml air liur yang disaring ke dalam tabung reaksi

    2. Tambahkan 1 tetes asam asetat encer. Campur dengan baik

    3. Perhatikan apakah presipitasi amorf terbentuk

    6. UJI SULFAT

    Tujuan

    Membuktikan adanya sulfat dalam air liur

    Dasar

    Ion sulfat dalam suasana asam dapat di endapkan oleh Barium

    Bahan dan alat

    1. Air liur yang di saring

    2. Asam klorida encer

  • Bagian Biokimia FK Unsri

    39 Blok 8 Dinamika Biokimiawi Sistem Tubuh

    3. Larutan BaCl2 2%

    4. Tabung reaksi

    5. Pipet volumetrik

    6. Pipet tetes

    Cara kerja

    1. Masukkan 1 ml air liur yang d