SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

U.C.S.M. P.P. Ing. Biotecnolgica

I Semestre

Prcticas de Biologa celular I

PRACTICA N 3.TINCIN DE WRIGHT O HEMOGRAMA1. MARCO TERICO:Lleva el nombre de James Homer Wright, su descubridor, que la obtuvo modificando la tincin de Romanowsky, en 1902.

La tincin de Wright es un tipo de tincin que facilita la diferenciacin de los tipos de clulas de la sangre, es por ello que es una tcnica muy usada para el conteo de los glbulos blancos. Esta tcnica de coloracin se utiliza para el examen de hemograma que describe el tejido sanguneo desde el punto de vista cuantitativo y morfolgico.Es una solucin de buffer y alcohol metlico de un colorante cido (eosina) y otro bsico (azul de metileno). El alcohol sirve como un fijador del frotis sanguneo al portaobjetos, el buffer o amortiguador, mantiene el pH del colorante y favorece la mejor absorcin por los diferentes componentes celulares, mientras que los colorantes tienen afinidad segn su carcter cido o bsico. Las estructuras con carcter cido tales como los cidos nucleicos o las protenas cidas son afines por compuestos bsicos o catinicos como el azul de metileno contenido en la tincin, por el contrario las estructuras de carcter bsico tales como la hemoglobna y otras protenas bsicas son afines a compuestos cidos tales como la eosina contenida en la tincin por lo que a la vista estas estructuras tendrn un color rojo-rosado 2. OBJETIVOS:

2.1. Explicar el fundamento de la tincin de Wright.2.1. Identificar y diferenciar los tipos de clulas en un frotis sanguneo.2.2. Adquirir destrezas y habilidades en el manejo del microscopio ptico.

2.2. Enfatizar en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad, cooperacin y perseverancia.3. EXPLICACIN EN AULA: La tincin de Wright se encarga de caracterizar formas de la sangre: eritrocitos, leucocitos, plaquetas. Cuantificas los leucocitos: basfilos, monocitos, eosinofitos, linfocitos y neutrofitos (abastonados y segmentados). Para la Tincin de Wright: se necesita colorante de Whight que consiste en Azul B (tie el ncleo) y Eosina (tie el citoplasma).4. MATERIALES:

3.1. Material biolgico:

Sangre.3.2. Material de vidrio:

Lminas portaobjetos.

3.3. Utensilios:

Lancetas de Franke.3.4. Otros:

Algodn.

3.5. Reactivos:

Aceite de inmersin.

Alcohol isoproplico. Alcohol yodado.

Colorante de Wright.3.6. Aparatos y equipos:

Microscopio ptico.5. PROCEDIMIENTO:

Realizar un extendido de la muestra de sangre. Secar.

Cubrir con el colorante Wright.

Agregar al colorante un volumen equivalente de agua destilada.

Lavar con agua corriente y secar.

Observar al microscopio.

6. PROCEDIMIENTO DETALLADO: Limpiar con algodn y alcohol el pulpejo del dedo medio o ndice. Realizar la puncin con la lanceta de Franck.

Depositar dos gotas de sangre sobre el extremo de portaobjetos.

Realizar el extendido. Con mtodo de los 2 portaobjetos.

Esperar a que seque.

Tincin de Wright :

Cubrir con Wright por 1.

Aadir H2O destilada sobre el portaobjeto durante 1

Retirar el colorante y poner a secar.

7. RESULTADOS Y DISCUSIN: Linfocitos: Son los leucocitos de menor tamao (entre 7 y 15m), y representan aproximadamente el 20 a 45% del total en lasangreperifrica. Presentan un granncleoesfrico que se tie de violeta-azul y de escasocitoplasma. Se encarga de la formacin de anticuerpos.

Monocitos: macrfagos. Losmonocitosson un tipo deglbulos blancosagranulocitos. Es el leucocito de mayor tamao, llegando a medir 18m, y representa del 4 al 8% de losleucocitosen lasangre.

Eosinfilo: Son generados pormitosisde las clulas precursoras en lamdula seadonde permanecen unos cuatro das.Su tamao es semejante al delneutrfilo(10-12m). Representan aproximadamente el 1a 4%. Cumple la funcin inmunolgica sobre todo en alergias y/o partidas. Basfilo: Losbasfilosconforman el tipo deleucocitomenos abundante en sangre. Tiene ncleo irregular, difcil de ver por la granulacin basfila que lo cubre casi siempre.e denominabasfiloa cualquier clulaque se tie fcilmente con colorantesbsicos(hematoxilinaprincipalmente). Los basfilos son los responsables del inicio de la respuesta alrgica Los basfilos son los responsables del inicio de la respuesta alrgica. A ello se le llama que cumplen la funcin de defensa. Representan aproximadamente el 0 a 4%.

Neutrfilo: songlbulos blancosde tipogranulocito. Miden de 9 a 12my es el tipo deleucocitoms abundante de lasangreen elser humano, representando en torno al 60-70% de los mismos.Existen dos tipos:Abastonado o juvenil: representa un 2-5%

Segmentado o maduro: representa un 45% Eritrocitos: tambin llamadosglbulos rojosohemates, son loselementos formescuantitativamente ms numerosos de lasangre.La cantidad considerada normal flucta entre 4.500.000 (en lamujer) y 5.400.000 (en elhombre) pormilmetro cbico(omicrolitro) de sangre, es decir, aproximadamente 1.000 veces ms que los leucocitos. Leucocitos: Su tamao oscila entre los 8 y 20m(micrmetros).Osilan entre 6000 1000/m3. Los eritrocitos se observarn de color naranja o rosado.

El citoplasma de los monocitos presentarn una tonalidad azul griscea con grnulo rojizos bastante finos y sus vacuolas caractersticas.

El citoplasma de los linfocitos presentar varias tonalidades azules.

Los ncleos de los linfocitos y neutrfilos aparecern de color prpura oscuro.

Los ncleos de los monocitos de color prpura algo ms claros (lila).

Los grnulos de los eosinfilos son de color rojo-anaranjado intenso.

Los grnulos de los basfilos prpura azulado muy oscuro. Los grnulos de los neutrfilos se aprecian de color lila, bastante finos.

Las plaquetas toman coloracin violeta o prpura.

Tincin de Wright o hemograma:

Se pudieron observar neutrfilos dos muy claramente. Un linfocito

Y un montoncito de plaquetas

8. CONCLUSIONES:

Es el principal mtodo de extraccin de sangre en el laboratorio de anlisis clnicos, ya que es relativamente fcil de realizar.VENTAJAS. Nos permite hacer mltiples exmenes y en repetidas veces si se desea, con la misma muestra.

Las alcuotas de plasma y suero pueden congelarse para futura referencia.

DESVENTAJAS Puede provocar la coagulacin de la sangre si el procedimiento lleva mucho tiempo.

Algunos componentes no son estables en sangre anticoagulada.

Puede dificultarse en nios, pacientes obesos en estado de shock.

Puede ocasionarse hemlisis de las muestras afectando ciertas determinaciones, por las siguientes causas:

Por forzar el paso de la sangre al tubo

Por agitar el tubo enrgicamente

Por extraer sangre de un hematoma

9. CUESTIONARIO:

I. Dibujar los elementos formes (eritrocitos, leucocitos y plaquetas) de la sangre observados a travs de un hemograma.ERITROCITOSLEUCOCITOSPLAQUETAS

II. Menciona las posibles causas que determinan que en la preparacin se observe precipitados de colorante:Si en la preparacin se observa precipitados de colorante puede ser debido a varias causas: lavado insuficiente al final del proceso, utilizacin de porta o cubreobjetos sucios, mala filtracin del colorante, mala distribucin del colorante a lo largo de la extensin por no mantenerse en posicin horizontal. Durante la tincin el tampn fosfato controla el pH del colorante. Si el colorante es demasiado cido la extensin resultar demasiado rojiza y si por el contrario es demasiado alcalina la precipitacin presentar un aspecto azulado.

III. Menciona brevemente la funcin de los diferentes tipos de leucocitos en la sangre:PolinuclearesMononucleares

NeutrfilosBasfilosEosinofilosLinfocitosMonocitos

Su funcin principal es lafagocitosisde bacterias y hongosLos basfilos son los responsables del inicio de la respuesta alrgicaLos eosinfilos pueden regular la respuesta alrgica y las reacciones de hipersensibilidad mediante la neutralizacin de la histamina por lahistaminasa.Principalmente encargadas de la inmunidad especfica o adquirida. Su principal funcin es la defagocitar, es decir, comerse a diferentesmicroorganismoso restos celulares.

10. BIBLIOGRAFIA: http://es.wikipedia.org/wiki/Linfocito http://es.wikipedia.org/wiki/Monocito

http://es.wikipedia.org/wiki/Eosin%C3%B3filo http://es.wikipedia.org/wiki/Neutrfilo http://es.wikipedia.org/wiki/Eritrocito http://es.wikipedia.org/wiki/Leucocito http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Blood_smear.jpg http://qbhematologia.files.wordpress.com/2011/08/prc3a1ctica-3.pdf

100 X

A - ERITROCITOS

B - NEUTRFILOS

C - EOSINFILOS

D - LINFOCITO

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