Diego Piedrahita MVZ – MSc - PhD

Población de roedores en zonas aledañas a granjas porcícolascomo fuente potencial de enfermedades Zoonóticas

Población de roedores en zonas aledañas a granjas porcícolascomo fuente potencias de enfermedades Zoonóticas

JUSTIFICACIÓN2

AGENTES DE INTERÉS 3

MATERIALES Y MÉTODOS4

RESULTADOS PARCIALES5

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA1

Planteamiento del problema

¿Estatus de algunas enfermedades en Colombia?

Es necesario determinar la presencia de enfermedades

zoonóticas presentes en roedores de granjas porcinas

Justificación

Backhans et al., 2012

Patógeno

estudiado

Especie de

roedorPaís Localización Método

Leptospira spp Rattus norvegicus UK Rural Ziehl-Nielsen

Cryptosporidium

parvum

Rattus norvegicus UK Granjas Porcinas IFAT

Listeria spp Rattus norvegicus UK Rural Cultivo

Trichinella spiralis Rattus rattus Croacia Granjas porcinas Digestión enzimática

Toxoplasma gondii Rattus rattus Holanda Granjas porcinas PCR TaqMan

Toxoplasma gondii Mus musculus, Rattus

norvegicus

EE.UU Granjas porcinas MAT

Hantavirus Rattus norvegicus Ucrania Rural ELISA

Trichinellaspp.

• ETA

• Reemergente

Toxoplasma gondii

• Protozoario

• Intracelular

Leptospiraspp

• Espiroqueta

• Patógena

Reservorio y

transmisor de

enfermedades. Backans et al, 2012

Justificación

Trichinella spp.

ETA

Salud Pública

33% en animales silvestres

27% en Humanos y 21% en

cerdos

Presentación en 26,8% de

los países

Suramérica: Chile,

Argentina, Uruguay, Islas

Bahamas

(Pozio, 2007)López et al., 2014

¿Colombia libre deTrichinella?

Toxoplasma gondii

• Protozoo Intracelular

obligado.

• Animales de sangre

caliente.

• Graves pérdidas

económicas.

• 40% de prevalencia a nivel

mundial (Dubey, 2004)

• Colombia 47% (1982)

• 2008: entre 3,7 y el 89.2 %

• 2015: 43% por PCR. En

carne.

Leptospira spp

• Bacteria que se caracteriza por

su flexibilidad, motilidad y forma.

• Especies:

• L. interrogans: cepas patógenas

• L. biflexa: cepas saprófitas,

aisladas del medio ambiente.

• Existen más de 225 serovares

http://muyensalud.com/2015/11

Justificación

Programa nacional integral e integrado de

zoonosis.

Incremento consumo de la carne de cerdo

en Colombia y el mundo.

Calidad e inocuidad mercado interno y

externos.

TLC con diferentes países.

Evaluación de Factores de riesgo para

entidades zoonóticas

PROPUESTA PARA EL MEJORAMIENTO DEL ESTATUS SANITARIO Y ASEGURAMIENTO DE LA INOCUIDAD DE LA PRODUCCIÓN PORCINA EN COLOMBIA

https://www.google.com.co/search?q

CONPES 3458 de 2007

Pregunta de investigación

¿La población de roedores que conviven en zonas

aledañas a sistemas de producción porcina de

Colombia están infectadas con Trichinella spp,

Toxoplasma gondii y Leptospira spp ?

Objetivo generalDeterminar la presencia y caracterización molecular para

Trichinella spp, Toxoplasma gondii y Leptospira en

roedores capturados en zonas aledañas a granjas de

producción porcina en Colombia

Presupuesto

MetodologíaLaboratorio de parasitología especial

Materiales y métodos

Donde:

N = Total de la población.

Zα = 1.96 al cuadrado (si la seguridad es del 95%)

p = Proporción esperada

q = 1 – p

d = Precisión

(Thrusfield, 2005)

Materiales y métodos

Departamento Número de granjas Número de roedores

Antioquia 38 333

Cundinamarca 13 142

Valle del Cauca 7 34

Eje Cafetero 6 31

Meta 2 15

Total 66 555

Captura de roedores en zonas aledañas a granjas de producción porcina en

Colombia por departamento junio - diciembre de 2015.

Materiales y métodos

Materiales y métodos

Captura de Roedores y Toma de Muestras

555 roedores

Trichinellaspp.

Digestión enzimática

PCR Múltiplex

Toxoplasma gondii

ELISA

Extendido cerebral

PCR cerebros

Leptospiraspp.

MAT

8 serotipos

PCR

Patógenas

Saprófitas

Identificación

Polop et al, 2011

Secuenciación

Materiales y métodos

Detección de Trichinella spp

Diagnóstico de Trichinella

Digestión enzimática demúsculo

Istituto superiore di sanitá

Universidad de Antioquia

PCR

(Controles: T. murrelli, T. 6, T. pseudospiralis, T. spiralis, T. nativa,

T. patagoniensis, )

Gen ITSI, ITSII, ESV

Chaparro, 2013

ISS Roma, Italia & Unidad de Diagnóstico UdeA, 2014

Técnicas - Toxoplasma gondii

Serología

ELISARat ELISA Kit - LS-F10245, Bioscience, empleando entre

50 -100 μL de suero de roedor dilución 1:10

Extendido cerebrales

Técnica de tinción con

Giemsa

Prueba molecular

PCR Amplificación del gen B1

Técnicas para Leptospira

World organization for animal health, 2014

L. in

terr

oga

ns

MAT suero de roedor

Icterohaemorrhagiae

Pomona

Tarasovi

Autumnalis

Ballum

Canícola

Grippotyphosa

Bratislava

PCR Tejido Renal

Amplificación del gen 16S rRNA

Amplificación del gen Lipl32

• Las muestras positivas para Trichinella spp,

Toxoplasma gondii y Leptospira spp se enviarán

a secuenciar a MACROGEN - korea.

• Método de Sanger modificado

• Análisis filogenético: DNA star®, Mega 6.0

Secuenciación

RESULTADOS

Resultados

Trichinella spp.

100% Negativo

Toxoplasma gondii

Positivo:

69.4% (385/555)

Leptospira spp

Positivo: 29,4% (163/555)

4.5% (25/163) Patógenas

24.9% (138/163) Saprófitas

555 roedores

Edad

Adulto 434 (78.2%)

Juvenil 121 (21.8%)

Especie

R. norvegicus410 (73.9%)

R. Rattus

145 (26.1%)

Género

Hembra 324 (58,4%)

Macho 231 (41.6%)

DEPARTAMENTO NÚMERO DE MUESTRAS RESULTADO DIGESTIÓN

ENZIMÁTICA

Antioquía 559 Negativo

Cundinamarca 181 Negativo

Valle del Cauca 176 Negativo

Atlántico 32 Negativo

Risaralda 16 Negativo

Caldas 16 Negativo

Eje Cafetero 16 Negativo

Santander 8 Negativo

Meta 30 Negativo

Nariño 16 Negativo

Chocó 16 Negativo

Huila 8 Negativo

Tolima 10 Negativo

TOTAL MUESTRAS 1084 100% NEGATIVAS

Resultados - Trichinella

21%

79%

RESULTADO DE SEROPOSITIVIDAD A LEPTOSPIRA PATÓGENAS POR LA TÉCNICA DE MAT

Positivo

Negativo

Resultados - Leptospira

Serología

Resultados - Leptospira

15314 28 122 21

681 5 13 1

Meta Antioquia Valle del Cauca Cundinamarca Eje Cafetero

MUESTRAS POSITIVAS A SEROVARES PATÓGENOS DE LEPTOSPIRA POR LA TÉCNICA DE MAT

Total Muestras Muestras Positivas

Serología

27%

16%

12%

11%

10%

9%

8%

7%

PORCENTAJE DE ANIMALES POSITIVOS A SEROVARES DE LEPTOSPIRA PATÓGENAS POR LA TÉCNICA DE MAT

L. Icterohaemorrhagiae

L. Canícola

L. Trassovi

L. Pomona

L. Grippotyphosa

L. Bratislava

L. Ballum

L. Autumnalis

Resultados - Leptospira

Serología

Resultados - Leptospira

PCR

4%

27%

69%

RESULTADO DE LEPTOSPIRA POR PCR

Positivo L. Patógena

Positivo L. Saprófita

Negativo

Resultados - Leptospira

7,16,7

4,8

3,3

0,00,0

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

7,0

8,0

Valle del Cauca Meta Antioquia Cundinamarca Eje Cafetero

PORCENTAJE DE POSITIVIDAD POR PCR A LEPTOSPIRA PATÓGENA POR ZONA MUESTREADA

PCR

Análisis de secuencias de Leptospira.

PCR Toxoplasma gondii.

Secuenciación T. gondii

Agradecimientos

• Ministerio de Agricultura y desarrollo Rural

• Asociación Colombiana de Porcicultores-FNP

• Dra. Jenny Chaparro

• Dra. Diana Corina Zambrano

• Estudiante de Maestría – Anderson López

• Universidad de Antioquia: Unidad de diagnóstico; Laboratorio de Parasitología

Especial

• Laboratorio de Referencia de Parásitos de Europa

• Granjas Porcícolas

• Rotantes, auxiliares y contratistas del laboratorio de parasitología y

microbiología de la Escuela de veterinaria Universidad de Antioquia