Revisi (Repaired) Kuarto

1

BAB 1. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Radikal bebas adalah atom atau gugus atom yang memiliki satu atau lebih

elektron tak berpasangan (Fessenden & Fessenden, 1982). Elektron yang tidak

berpasangan menyebabkan senyawa tersebut sangat reaktif mencari pasangan dengan

cara menyerang dan mengikat elektron molekul yang berada di sekitarnya

(Rohmatussolihat, 2009). Radikal bebas masuk kedalam tubuh manusia melalui asap

rokok, polusi udara, bahan kimia pencemar lingkungan, obat-obatan, serta makanan

olahan dengan banyak pengawet (Arista, 2013). Bahan yang dapat menghasilkan

radikal bebas, contohnya adalah Karbontetraklorida (CCl4).

Karbontetraklorida (CCl4) banyak digunakan sebagai bahan pendingin

(refrigerator) lemari es dan bahan profelan untuk kaleng aerosol. CCl4 juga

digunakan sebagai bahan pembersih untuk keperluan rumah tangga dan sebagai

pemadam api karena sifatnya yang tidak mudah terbakar. Saat ini, CCl4 masih banyak

digunakan sebagai pestisida dari golongan chloride hydrocarbon oleh petani di

Indonesia (Faridah, 2011). CCl4 masuk kedalam tubuh bisa secara inhalasi, ingesti

dan kontak langsung dengan kulit (Junieva, 2006).

Hati menjadi salah satu target perusakan karena sebagian besar zat atau bahan

yang masuk dalam tubuh dimetabolisme oleh hati termasuk CCl4 (Guyton dan Hall,

2006). CCl4 akan masuk kedalam sirkulasi portal hepatik dan dimetabolisme oleh

enzim sitokrom P450 2E1 (CYP2E1) menjadi radikal bebas triklorometil (CCl3)

dalam retikulum endoplasmik hati. Dalam endoplasmik retikulum hati CCl4

dimetabolisme oleh sitokrom P450 2E1 (CYP2E1) menjadi radikal bebas

triklorometil (CCl3). CCl3 dengan oksigen akan membentuk radikal triklorometil

peroxi (CCl3O2) yang dapat menyerang lipid membrane endoplasmic reticulum

sehingga mengganggu homeostasis Ca2+

, dan akhirnya menyebabkan kematian sel

(Panjaitan et al., 2007). Salah satu pemeriksaan laboratorium pada kerusakan hati

2

adalah pemeriksaan integritas hepatosit dengan pengukuran serum yaitu enzim sitosol

sel hati Serum Glutamic Pyruvic Transaminase (SGPT). (Wibowo, 2005)

Antioksidan adalah senyawa kimia yang dapat menyumbangkan satu atau lebih

elektron kepada radikal bebas, sehingga radikal bebas tersebut dapat diredam

(Kuncahyo, 2007). Ada dua cara dalam mendapatkan antioksidan, yaitu dari luar

tubuh (eksogen) dan dalam tubuh (endogen). Antioksidan eksogen didapat dengan

mengkonsumsi makanan dan minuman yang mengandung vitamin C dan E, -karoten

maupun antioksidan sintetik seperti BHA, BHT dan TBHQ. Contoh antioksidan

endogen adalah enzim superoksida dismutase (SOD), glutation peroksidase (GSH.Px)

dan katalase. Antioksidan endogen sering kali tidak mampu mengatasi stress oksidatif

yang berlebih sehingga diperlukan antioksidan eksogen untuk mengatasinya

(Hartanto, 2012).

Indonesia memiliki banyak tanaman yang diketahui memiliki aktivitas

antioksidan, salah satunya yaitu daun katuk (Sauropus androgynus (L) Merr).

Masyarakat biasa menggunakan daun katuk sebagai obat diare, demam, bisul serta

memperlancar air susu ibu (ASI)(Andari, 2010).

Daun katuk memiliki kandungan minyak atsiri, sterol, saponin, flavonoid,

asam-asam organik, asam-asam amino, alkaloid, dan tannin (Khalasa et al., 2013).

Flavonoid merupakan kandungan yang memiliki aktivitas antioksidan dalam daun

katuk, dengan jumlah sekitar 143 mg/100 gfw. Daun katuk, dengan kadar flavonoid

tersebut, adalah ekstrak yang memiliki kadar flavonoid tertinggi dari sebelas ekstrak

yang diuji dalam penelitian terdahulu (Andarwulan et al., 2010). Mekanisme kerja

flavonoid sebagai antioksidan adalah dengan cara menghelat logam dan menangkap

oksigen radikal dan radikal bebas atau sebagai scavenger, dan menghambat kerja

enzim prooksidan antara lain lipoxygenase, myeloperoxidase (Rukmiasih et al.,

2011).

Dalam penelitian tentang daun katuk terdahulu pada hewan coba yang diinduksi

paracetamol, didapatkan bahwa adanya aktivitas antioksidan. Ekstrak yang digunakan

adalah ekstrak etanol 96% daun katuk (Joniada, 2011). Penelitian lain menyebutkan

3

ekstrak etanol 80% lebih baik dalam mendukung efek antioksidan dari daun katuk

dibandingkan dengan etanol 96% (Arista, 2013).

SGPT, enzim ini mengkatalisis pemindahan satu gugus amino antara lain alanin

dan asam alfa-ketoglutarat. Terdapat banyak di hepatosit dan konsentrasinya relatif

rendah di jaringan lain. Dalam sel hati, SGPT terdapat dalam sitoplasma sehingga

memiliki sensitivitas tinggi terhadap kerusakan hati akut. SGPT lebih spesifik dari

SGOT sebagai penanda kerusakan sel hati karena kadar SGOT lebih banyak

dijaringan lain dan letak SGOT berada di mitokondria hepatosit (Haki, 2009).

Berdasarkan latar belakang di atas, diperlukan suatu penelitian mengenai uji

aktivitas antioksidan ekstrak etanol 80% daun katuk. Untuk mengetahui aktivitas

antioksidan tersebut digunakan parameter kadar SGPT yang merupakan indikator

terjadinya kerusakan hati.

1.2 Rumusan Masalah

Berdasarkan uraian di atas, maka permasalahan yang dapat dirumuskan adalah:

1. Apakah ada perbedaan kadar SGPT dari tikus putih galur wistar (Rattus

novergicus) kelompok dosis 2800 mg/kgBB, 4200 mg/kgBB dan 5600

mg/kgBB ekstrak etanol daun katuk (Sauropus androgynus (L) Merr)

dibandingkan dengan kelompok kontrol setelah diinduksi CCl4?

2. Apakah ada hubungan respon dosis 2800 mg/kgBB, 4200 mg/kgBB dan

5600 mg/kgBB ekstrak etanol daun katuk (Sauropus androgynus (L)

Merr) dalam mencegah peningkatan kadar SGPT dari tikus putih galur

wistar (Rattus novergicus) yang diinduksi CCl4?

1.3 Tujuan Penelitian

Tujuan dari penelitian ini adalah sebagai berikut:

1. Tujuan Umum

Tujuan umum dari penelitian ini adalah untuk mengetahui efek ekstrak etanol

daun katuk (Sauropus androgynus (L) Merr) dalam mencegah peningkatan

4

kadar SGPT pada tikus putih galur wistar (Rattus novergicus) yang diinduksi

CCl4.

2. Tujuan Khusus

Tujuan khusus dari penelitian ini antara lain:

1. Untuk mengetahui perbedaan kadar SGPT dari tikus putih galur wistar (Rattus



dibandingkan dengan kelompok kontrol setelah diinduksi CCl4.

2. Untuk mengetahui ada hubungan respon dosis 2800 mg/kgBB, 4200

mg/kgBB dan 5600 mg/kgBB ekstrak etanol daun katuk (Sauropus

androgynus (L) Merr) dalam mencegah peningkatan kadar SGPT dari tikus

putih galur wistar (Rattus novergicus) yang diinduksi CCl4.

1.4 Manfaat Penelitian

Manfaat penelitian ini terbagi dua, yaitu manfaat ilmiah dan manfaat praktis.

1. Manfaat Ilmiah

Secara ilmiah, hasil dari penelitian ini diharapkan memberikan informasi

tentang efektifitas ekstrak etanol daun katuk (Sauropus androgynus (L) Merr)

dalam mencegah peningkatan kadar SGPT pada tikus putih galur wistar

(Rattus novergicus) yang diinduksi CCl4. .

2. Manfaat Praktis

Secara praktis, hasil dari penelitian ini diharapkan dapat sebagai:

1. Data acuan dan informasi ilmiah untuk penelitian lebih lanjut mengenai

efektifitas ekstrak etanol daun katuk (Sauropus androgynus (L) Merr) dalam

mencegah peningkatan kadar SGPT pada tikus putih galur wistar (Rattus

novergicus) yang diinduksi CCl4.

2. Bahan pertimbangan ekstrak etanol daun katuk (Sauropus androgynus (L)

Merr) menjadi bahan antioksidan di masyarakat.

5

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Radikal Bebas

Radikal bebas adalah atom atau gugus atom yang memiliki satu atau lebih

elektron tak berpasangan (Fessenden & Fessenden, 1982). Elektron yang tidak

berpasangan menyebabkan senyawa tersebut sangat reaktif mencari pasangan dengan

cara menyerang dan mengikat elektron molekul yang berada di sekitarnya

(Rohmatussolihat, 2009). Radikal bebas mempunyai waktu paruh yang sangat pendek

dan merupakan salah satu contoh dari oksidan. Oksidan adalah bahan kimia elektrofil

yang sangat reaktif dan dapat memindahkan elektron dari molekul lain dan

menghasilkan oksidasi pada molekul tersebut (Anggraini, 2011). Radikal bebas dapat

mengoksidasi asam nukleat, protein, lemak, bahkan DNA sel dan menginisiasi

timbulnya penyakit degeneratif (Rohmatussolihat, 2009). Radikal bebas masuk

kedalam tubuh manusia melalui asap rokok, polusi udara, bahan kimia pencemar

lingkungan, obat-obatan, serta makanan olahan dengan banyak pengawet (Arista,

2013).

Radikal bebas terpenting adalah kelompok oksigen reaktif (reactive

oxygenspecies/ROS). ROS merupakan senyawa yang mempunyai bentuk oksigen

reaktif baik radikal maupun non-radikal termasuk didalamnya adalah triplet (3O2),

tunggal (singlet/1O2), anion superoksida (O2-), radikal hidroksil (-OH), nitrit oksida

(NO-), peroksi nitrit (ONOO), asam hipoklorus (HOCl), hidrogen peroksida (H2O2),

dan radikal peroksil (ROO.). Radikal bebas yang mengandung karbon (CCL3-) yang

berasal dari oksidasi radikal molekul organik, dan radikal hidrogen hasil dari

penyerangan atom H (H-) (Sholihah, 2008). Kelompok oksigen reaktif dapat dilihat

pada Tabel 2.1

6

Tabel 2.1 Kelompok Oksigen Reaktif

Kelompok oksigen reaktif

O2. Radikal Superoksida (Superoxide radical)

.OH Radikal hidroksil (Hydroxyl radical)

ROO. Radikal peroksil (Peroxyl radical)

H2O2 Hidrogen peroksida (Hydrogen peroxide)

1O2 Oksegen tunggal (Singlet oxygen)

NO. Nitrit oksida (Nitric oxide)

ONOO Nitrit peroksida (Peroxynitrite)

HOCl Asam hipoklor (Hypochlorous acid)

Sumber: (Sholihah, 2008).

Dari beberapa ROS tersebut, yang termasuk tipe radikal bebas adalah Radikal

Superoksida, Radikal hidroksil, Radikal peroksil dan Nitrit oksida.

2.1.1 Reaksi Perusakan

Kerusakan molekul lemak karena rentan terhadap radikal bebas terjadi pada

proses berikut; (1) Kerusakan DNA, kerusakan di DNA menjadi suatu reaksi berantai,

biasanya kerusakan terjadi bila ada delesi pada susunan molekul, apabila tidak dapat

diatasi, dan terjadi sebelum replikasi maka akan terjadi mutasi. Radikal oksigen dapat

menyerang DNA jika terbentuk disekitar DNA seperti pada radiasi biologis. (2)

Kerusakan protein, dimana protein dan asam nukleat lebih tahan terhadap radikal

bebas daripada PUFA. Serangan radikal bebas terhadap protein sangat jarang kecuali

bila sangat ekstensif. (3) Peroksidasi lipid, dimana terjadi kerusakan pada membran

sel yang kaya akan sumber poly unsaturated fatty acid (PUFA), yang mudah dirusak

oleh bahan-bahan pengoksidasi (Panjaitan et al., 2008). Efek merusak tersebut akibat

produksi radikal bebas (ROO, RO, OH) pada proses pembentukan peroksida dari

asam lemak. Peroksidasi lipid merupakan reaksi berantai yang memberikan pasokan

radikal bebas secara terus-menerus yang menginisiasi peroksidasi lebih lanjut (Pazil,

7

2009). Proses peroksidasi lipid meliputi tiga tahap yaitu inisiasi, propagasi dan

terminasi.

Inisiasi adalah tahap dimana pembentukan awal radikal-radikal bebas.

Propagasi merupakan tahap dimana radikal bebas yang sudah terbentuk akan

mengalami sederetan reaksi untuk membentuk radikal bebas yang baru. Terminasi

merupakan tahap akhir dan pemutus dari tahap propagasi. Semua reaksi yang

memusnahkan atau mengubah radikal bebas menjadi stabil dan tidak reaktif disebut

tahap terminasi (Fessenden & Fessenden, 1982).

2.1.2 Kerusakan Sel Hati Akibat Obat dan Bahan Kimia

Kerusakan sel hati karena radikal bebas dapat disebabkan oleh berbagai macam

zat, baik itu obat atau bahan kimia. Pada kerusakan yang disebabkan obat, kerusakan

sel hati dapat terjadi dalam berbagai macam mekanisme Ada 3 jenis mekanisme,

yaitu kerusakan bergantung dosis (dose-dependent toxicity), kerusakan idiosinkratik

(idiosyncratic toxicity), dan alergi obat (drug allergy). Kerusakan sel hati tergantung

dosis cukup sering terjadi dan dapat karena dosis obat terlalu tinggi. Kerusakan

idiosinkratik ditemukan pada orang yang mewarisi gen spesifik yang mengontrol

perubahan senyawa kimia obat tertentu dan mengakibatkan akumulasi obat tersebut

atau produk metabolitnya yang berbahaya bagi hati. Resiko kerusakan idiosinkrasi

rendah, namun jenis ini yang umum terjadi karena banyaknya pemakaian obat dan

penggunaan beberapa macam obat. kerusakan idiosinkrasi sulit dideteksi dalam uji

klinis awal yang biasanya melibatkan paling banyak beberapa ribu pasien. Alergi obat

juga dapat menyebabkan kerusakan sel hati, meskipun jarang. Pada alergi obat, hati

mengalami peradangan ketika terjadi reaksi antigen-antibodi antara sel imun tubuh

terhadap obat. Gangguan fungsi hati akibat obat berupa kerusakan hepatoseluler dan

kolestasis parah bahkan berakibat fatal. Mekanisme kerusakannya disebabkan

langsung atau reaksi hipersensitivitas sekunder (dimediasi sistem imun) (Rianyta,

2013).

8

Kerusakan sel hati karena bahan kimia yang sering terjadi adalah kerusakan

akibat pemakaian etanol. Etanol atau disebut juga sebagai etil alkohol merupakan

senyawa kimia yang penggunaannya sering digunakan pada kehidupan sehari-hari,

sebagai bahan farmako kinetik maupun sebagai bahan minuman yang dikenal dengan

minuman beralkohol. Penggunaan etanol yang berlebihan atau dalam jangka waktu

yang panjang dapat menyebabkan kerusakan pada hati, karena metabolisme etanol

sebagian besar terjadi didalam hepar. Kerusakan akibat etanol dapat menyebabkan

degenerasi pada sel hepar, steatosis sampai nekrosis. Etanol dapat menimbulkan

kerusakan pada hepar disebabkan karenaradikal bebas, asetaldehid dan rasio NAD :

NADH. Metabolisme etanol di dalamsel hepar menyebabkan peningkatan produksi

radikal bebas dengan berbagaimekanisme sehingga terjadi stres oksidatif yang akan

merusak jaringan hati (Nabila, 2011).

2.2 Karbontetraklorida (CCl4)

Karbontetraklorida (CCl4) adalah produk hasil karbon disulfida atau reaksi dari

disulfida dengan sulfur monoklorida. CCl4 tidak dapat larut dalam air namun dapat

larut dalam alkohol, kloroform, ether, dan minyak volatil. CCl4 cair berwarna jernih

dan mudah menguap sehingga jarang ditemukan dalam bentuk cair. Sebagian besar

CCl4 di lingkungan dapat ditemukan dalam bentuk gas, hanya sedikit yang terlarut

dalam air. Sifatnya stabil, meskipun dapat diuraikan oleh reaksi kimia untuk

mencapai kadar separuhnya. Pada rentang tahun 1980-1990 diperkirakan kadar CCl4

di atmosfer mencapai 0,5-1 mg/m3. Karbon tetraclorida menyebabkan kerusakan

lapisan ozon dan pemanasan global (Faridah, 2011).

2.2.1 Penggunaan CCl4 dan Cara Masuk CCl4 Kedalam Tubuh

CCl4 banyak digunakan sebagai bahan pendingin (refrigerator) lemari es dan

bahan profelan untuk kaleng aerosol. CCl4 juga digunakan sebagai bahan pembersih

untuk keperluan rumah tangga dan sebagai pemadam api karena sifatnya yang tidak

mudah terbakar. Saat ini, karbon tetraclorida masih banyak digunakan sebagai

9

pestisida dari golongan chloride hydrocarbon oleh petani di Indonesia. Sumber

radikal bebas yang dihasilkan dari luar yang dapat menimbulkan stress oksidatif

adalah senyawa toksik seperti karbon tetraklorida (CCl4) (Faridah, 2011). CCl4 masuk

kedalam tubuh bisa secara inhalasi, ingesti dan kontak langsung dengan kulit

(Junieva, 2006).

2.2.2 Metabolisme CCl4

CCl4 akan masuk kedalam sirkulasi portal hepatik dan dimetabolisme oleh

enzim sitokrom P450 2E1 (CYP2E1) menjadi radikal bebas triklorometil (CCl3)

dalam retikulum endoplasmik hati. Triklorometil dengan oksigen akan membentuk

radikal triklorometil peroksi (CCl3O2) yang dapat menyerang lipid membran

retikulum endoplasmik dan menyebabkan peroksidasi lipid sehingga mengganggu

homeostasis Ca2+

dan akhirnya menyebabkan kematian sel (Panjaitan et al., 2007).

2.2.3 Kerusakan Hati Akibat Karbon Tetraklorida (CCl4)

Asam lemak penyusun membran sel khususnya asam lemak rantai panjang tak

jenuh (PUFAs) amat rentan terhadap radikal bebas. Jumlah PUFAs dalam fosfolipid

membran retikulum endoplasmik akan berkurang sebanding dengan jumlah CCl4

yang diinduksikan. Pemberian CCl4 dalam dosis tinggi dapat merusak retikulum

endoplasmik, mengakumulasi lipid, mengurangi sintesis protein, mengacaukan proses

oksidasi, menurunkan berat badan, menyebabkan pembengkakan hati sehingga berat

hati menjadi bertambah, dan pemberian jangka panjang dapat menyebabkan nekrosis

sentrilobular serta degenerasi lemak di hati (Panjaitan et al., 2007).

2.3 Antioksidan

Antioksidan adalah senyawa kimia yang dapat menyumbangkan satu atau lebih

elektron kepada radikal bebas, sehingga radikal bebas tersebut dapat diredam.

Penggunaan senyawa antioksidan juga anti radikal saat ini semakin meluas seiring

dengan semakin besarnya pemahaman masyarakat tentang peranannya dalam

10

menghambat penyakit degeneratif seperti penyakit jantung, arteriosklerosis, kanker,

serta gejala penuaan. Masalah-masalah ini berkaitan dengan kemampuan antioksidan

untuk bekerja sebagai inhibitor (penghambat) reaksi oksidasi oleh radikal bebas

reaktif yang menjadi salah satu pencetus penyakit-penyakit di atas (Kuncahyo, 2007).

Fungsi utama antioksidan digunakan sebagai upaya untuk memperkecil

terjadinya proses oksidasi dari lemak dan minyak, memperkecil terjadinya proses

kerusakan dalam makanan, memperpanjang masa pemakaian dalam industri

makanan, meningkatkan stabilitas lemak yang terkandung dalam makanan serta

mencegah hilangnya kualitas sensori dan nutrisi. Peroksidasi lipid merupakan salah

satu faktor yang cukup berperan dalam kerusakan selama dalam penyimpanan dan

pengolahan makanan. Antioksidan tidak hanya digunakan dalam industri farmasi,

tetapi juga digunakan secara luas dalam industri makanan, industri petroleum,

industri karet, dan sebagainya (Kuncahyo, 2007).

Antioksidan memberikan perlindungan pada hati secara langsung maupun tidak

langsung. Secara langsung, antioksidan melindungi sel hati dari gangguan radikal

bebas dengan mekanisme menghambat oksidasi radikal bebas. Secara tidak langsung,

antioksidan menjaga fungsi hati dengan menetralisir radikal bebas yang dapat

mengganggu fungsi hati misalnya dengan menetralisir radikal bebas yang dapat

menghambat laju asupan nutrisi dan mineral yang dibutuhkan hati untuk

kelangsungan fungsi hati. (Joniada, 2011)

2.3.1 Jenis Antioksidan

Antioksidan terbagi menjadi antioksidan enzim dan vitamin. Antioksidan enzim

meliputi superoksida dismutase (SOD), katalase dan glutation peroksidase (GSH.Px).

Antioksidan vitamin lebih populer sebagai antioksidan dibandingkan enzim.

Antioksidan vitamin mencakup alfa tokoferol (vitamin E), beta karoten dan asam

askorbat (vitamin C) yang banyak didapatkan dari tanaman dan hewan. (Kuncahyo,

2007).

11

Berdasarkan mekanismenya, Antioksidan dibagi menjadi lima yaitu

Antioksidan primer, antioksidan sekunder, antioksidan tersier, oxygen scavenger dan

Chelators/Sequesstrants. Antioksidan primer mengikuti mekanisme pemutusan rantai

reaksi radikal dengan mendonorkan atom hidrogen secara cepat pada suatu lipid yang

radikal, produk yang dihasilkan lebih stabil dari produk inisial. Contohnya flavonoid,

tokoferol, senyawa thiol, yang dapat memutus rantai reaksi propagasi dengan

menyumbang elektron pada peroksi radikal dalam asam lemak. Antioksidan sekunder

dapat menghilangkan penginisiasi oksigen maupun nitrogen radikal atau bereaksi

dengan komponen atau enzim yang menginisiasi reaksi radikal antara lain dengan

menghambat enzim pengoksidasi dan menginisiasi enzim pereduksi atau mereduksi

oksigen tanpa membentuk spesies radikal yang reaktif. Contohnya adalah sulfit,

vitamin C, betakaroten, asam urat, bilirubin dan albumin. Antioksidan tersier

merupakan senyawa yang memperbaiki sel-sel jaringan yang rusak karena serangan

radikal bebas. Contohnya adalah metionin sulfoksidan reduktase yang dapat

memperbaiki DNA dalam inti sel. Enzim tersebut bermanfaat untuk perbaikan DNA

pada penderita kanker. Oxygen Scavenger bekerja dengan mengikat oksigen sehingga

tidak mendukung oksidasi. Chelators/Sequesstrants berkerja dengan cara mengikat

logam yang mampu mengkatalisis reaksi oksidasi seperti asam sitrat dan asam amino.

(Joniada, 2011)

Berdasarkan sumbernya, antioksidan dibagi menjadi dua yaitu antioksidan

eksogen dan endogen. Antioksidan eksogen didapat dengan mengkonsumsi makanan

dan minuman yang mengandung vitamin C dan E, -karoten maupun antioksidan

sintetik seperti BHA, BHT dan TBHQ. Antioksidan endogen adalah enzim

superoksida dismutase (SOD), glutation peroksidase (GSH.Px) dan katalase.

Antioksidan endogen seringkali tidak mampu mengatasi stres oksidatif yang berlebih

sehingga diperlukan antioksidan eksogen untuk mengatasinya (Hartanto, 2012).

12

2.4 Vitamin E

Vitamin E adalah vitamin yang larut lemak dan dibutuhkan tubuh. Vitamin E

dapat disimpan didalam tubuh sehingga tidak harus dikonsumsi setiap hari. Vitamin E

biasanya dicerna bersama makan yang mengandung lemak. Makanan yang

mengandung vitamin E diantaranya adalah minyak zaitun, kacang, kuning telur,

margarin, soya, keju dan sayuran hijau (Colombo, 2010).

Vitamin E berfungsi melindungi asam-asam lemak dari oksidasi dengan cara

menangkap radikal-radikal bebas. Radikal vitamin E bersifat stabil dan tidak bereaksi

dengan asam-asam lemak PUFA. Dari penelitian yang dilakukan secara in vitro

diperoleh informasi bahwa antara vitamin E terdapat interaksi yang bersifat

senergistik dalam fungsinya sebagai antioksidan. Vitamin E berperan sebagai

antioksidan lipofilik. Vitamin E dalam pakan akan dideposit ke dalam daging

banyaknya Vitamin E yang dideposit (mg/kg) tergantung pada dosis vitamin E dalam

pakan dan lamanya pemberian (Rukmiasih et al., 2011)

2.5 Katuk (Sauropus androgynus (L) Merr).

Indonesia memiliki banyak tanaman yang diketahui memiliki aktivitas

antioksidan, salah satunya yaitu daun katuk (Sauropus androgynus (L) Merr).

Masyarakat biasa menggunakan daun katu sebagai obat diare, demam, bisul serta

memperlancar air susu ibu (ASI)(Andari, 2010).

Klasifikasi katuk (Sauropus androgynus (L) Merr) adalah:

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Subdivisi : Angiospermae

Kelas : Dicotyledonae

Ordo : Euphorbiales

Famili : Euphorbiaceae

Genus : Sauropus

Spesies : Sauropus androgynus (L.) Merr

13

Katuk berdasarkan penamaan ilmiah berarti Sauropus androgynus (L.) Merr

dan memiliki sinonim Sauropus albicus Bl., S. indicus Wight., S. sumatranus Miq.

Katuk memiliki beberapa nama daerah yaitu Memata (bahasa Melayu), katuk

(Sunda), kebing dan katukan (Jawa), karekur (Madura), simani (Minangkabau)

(Yuniarty, 2011).

Katuk diduga berasal dari India, kemudian menyebar ke Malaysia, Indonesia

dan negara-negara Asia Tenggara lainnya. Tumbuhan ini dapat tumbuh di daerah

berketinggian 8 m sampai 1300 m di atas permukaan laut, tetapi tumbuh paling baik

di daerah berhawa sejuk dengan kelembaban dan curah hujan yang tinggi (Wijono,

2003).

Gambar 2.1 Tanaman Katuk (Manik, 2011)

Tanaman katuk tumbuh menahun, berbentuk semak perdu dengan ketinggian

antara 2,5 m 5 m. Tanaman katu terdiri dari akar, batang, daun, bunga, buah dan

biji. Sistem perakarannya menyebar ke segala arah dan dapat mencapai kedalaman

antara 30-50 cm. Batang tanaman tumbuh tegak dan berkayu. Tanaman katuk

mempunyai daun majemuk genap, berukuran kecil, berbentuk bulat seperti daun

kelor. Permukaan atas daun berwarna hijau gelap, sedangkan permukaan bawah daun

berwarna hijau muda. Produk utama tanaman katuk berupa daun yang masih muda.

Daun katuk sangat potensial sebagai sumber gizi karena memiliki kandungan gizi

yang setara dengan daun singkong, daun papaya, dan sayuran lainnya (Manik, 2011).

14

2.5.1 Morfologi Katuk

Tanaman katuk memiliki karakteristik antara lain : bentuk tanaman seperti

semak kecil dan bisa mencapai tinggi 3 m, batang muda berwarna hijau dan yang tua

berwarna coklat, daun tersusun selang-seling pada satu tangkai, seolah-olah terdiri

dari daun majemuk. Bentuk helaian daun lonjong sampai bundar, kadang-kadang

permukaan atasnya berwarna hijau gelap. Bunganya tunggal atau terdapat diantara

satu daun dengan daun lainnya. Bunga sempurna mempunyai helaian kelopak

berbentuk bulat telur sungsang atau bundar, berwarna merah gelap atau merah dengan

bintik-bintik kuning. Cabang dari tangkai putik berwarna merah, tepi kelopak bunga

berombak atau berkuncup enam, berbunga sepanjang tahun (Gaol, 2011).

2.5.2 Efektifitas Daun Katuk sebagai Antioksidan

Berdasarkan penelitian yang dilakukan Joniada yang berjudul Pengaruh

Pemberian Ekstrak Etanol Daun Katuk (Sauropus androgynous L) Sebagai

Hepatoprotektor pada Mencit yang Diinduksi Paracetamol, dosis ekstrak etanol daun

katuk dibagi menjadi tiga dosis yaitu 400, 600, dan 800 mg/kgBB. Perlakuan tersebut

diberikan selama tujuh hari dan pada hari kedelapan dilakukan pembedahan dan

pengambilan darah dari ventrikel kanan. Ketiga dosis tersebut dapat mencegah

peningkatan dari SGOT dan SGPT dari mencit yang diinduksi paracetamol (Joniada,

2011).

2.5.3 Ekstrak Etanol 80% Daun Katuk

Ekstrak daun katuk yang digunakan merupakan sediaan yang dibuat dengan

mengekstraksi daun katuk dengan menggunakan pelarut etanol 80% sebanyak 800 ml

dengan metode maserasi, lalu pelarutnya diuapkan. Etanol 80% dipilih sebagai

pelarut dikarenakan etanol 80% memiliki nilai EC50 lebih rendah jika dibandingkan

dengan etanol 96%. Menurut Arista (2013), ekstrak etanol 80% daun katuk lebih baik

sebagai pengikat radikal bebas dibandingkan dengan ekstrak etanol 96% daun katuk.

15

Hal ini dikarenakan adanya kemungkinan senyawa yang berperan sebagai antioksidan

lebih bersifat polar dan lebih banyak terekstrak pada etanol 80% (Arista, 2013)

2.5.4 Kandungan Gizi Katuk

Katuk memiliki banyak kandungan gizi yang bermanfaat bagi tubuh.

Kandungan gizi katuk dapat dilihat pada Tabel 2.1. Flavonoid merupakan kandungan

yang memiliki aktivitas antioksidan dalam daun katuk, dengan jumlah sekitar 143

mg/100 g fw. Daun katuk, dengan kadar flavonoid tersebut, adalah ekstrak yang

memiliki kadar flavonoid tertinggi dari sebelas ekstrak yang diuji dalam penelitian

terdahulu.

Tabel 2.2 Kandungan Gizi Katu per 100 mg

No. Komponen gizi (satuan) Jumlah

1. Kalori (kal) 59

2. Protein (g) 4,8

3. Lemak (g) 1,0

4. Karbohidrat (g) 11,0

5. Kalsium (g) 204

6. Fosfor (g) 83

7. Besi (mg) 2,7

8. -karoten (g) 10370

9. Thiamin (mg) 0,10

10. Asam askorbat (mg) 239

11. Air (%) 81

13. Flavonoid (mg/100 g fw) 1436

Sumber: (Joniada, 2011 dan Andarwulan et al., 2010)

2.6 Flavonoid

Flavonoid merupakan salah satu kelompok senyawa metabolit sekunder yang

paling banyak ditemukan di dalam jaringan tanaman. Flavonoid termasuk dalam

16

golongan senyawa phenolik dengan struktur kimia C6-C3-C6. Kerangka flavonoid

terdiri atas satu cincin aromatik A, satu cincin aromatik B, dan cincin tengah berupa

heterosiklik yang mengandung oksigen dan bentuk teroksidasi cincin ini dijadikan

dasar pembagian flavonoid ke dalam sub-sub kelompoknya. Sistem penomoran

digunakan untuk membedakan posisi karbon di sekitar molekulnya. Berbagai jenis

senyawa, kandungan dan aktivitas antioksidatif flavonoid sebagai salah satu

kelompok antioksidan alami yang terdapat pada sereal, sayur-sayuran dan buah, telah

banyak dipublikasikan (Redha, 2010 dan Joniada, 2011).

2.6.1 Mekanisme Kerja Flavonoid

Flavonoid adalah antioksidan kuat terhadap radikal bebas sebagai radikal bebas

scavengers. Aktivitas ini didukung dengan kemampuan menyumbang hidrogen

flavonoid. Kelompok phenolik dari flavonoid merupakan sumber atom hidrogen yang

dapat melokalisasi pembentukan radikal. Aktivitas pengikatan radikal bebas dapat

digambarkan sebagai berikut.

Gambar 2.2 Aktivitas Pengikatan Radikal Bebas (Sandhar et al., 2011)

Gambar tersebut menjelaskan flavonoid (F-OH) dapat mendonorkan atom

hidrogennya untuk mengikat radikal bebas (R.). Aktivitas ini juga terjadi pada proses

pencegahan peroksidasi lipid. Flavonoid menyumbangkan atom hidrogen kepada

peroksi radikal untuk memotong rantai reaksi radikal (Sandhar et al., 2011).

2.6.2 Flavonoid dalam Daun Katuk

Flavonoid terdiri atas banyak golongan yang mempunyai aktivitas antioksidan.

Golongan tersebut terdiri atas flavon, flavonol, flavanon, isoflavon, dll. Kandungan

flavonoid dalam daun katuk adalah sebesar 1436 mg/100 g fw (Andarwulan et al.,

2010). Senyawa flavonoid yang terkandung dalam daun katuk diketahui ada enam

jenis. Salah satunya adalah rutin dan lima yang lain adalah senyawa flavonol dan

F-OH + R. F-O

. + RH

17

flavon. Rutin dan flavonol merupakan antioksidan kuat terhadap peroksidasi lipid

(Sandhar et al., 2011; Redha, 2010 dan Wijono, 2003).

2.6.3 Lethal Dose 50 (LD50) Daun Katuk

Nilai LD50 adalah besarnya dosis dalam satu kali pemberian yang dapat

menyebabkan kematian sebanyak 50% dari jumlah hewan dalam satu kelompok.

LD50 merupakan salah satu cara untuk mengukur potensi toksisitas akut suatu

senyawa. Semakin rendah nilai LD50 maka semakin toksik senyawa tersebut dan juga

sebaliknya. Klasifikasi toksisitas akut dapat dilihat pada tabel berikut.

Tabel 2.3 Klasifikasi Toksisitas Akut

No. Kelas Dosis (mg/KgBB)

1 Luar biasa toksik 1 atau kurang

2 Sangat toksik 1-50

3 Cukup toksik 50-500

4 Sedikit toksik 500-5000

5 Praktis tidak toksik 5000-15000

6 Relative kurang berbahaya Lebih dari 15000

Sumber: (Wisnuaji, 2012)

Berdasarkan penelitian Wisnuaji yang berjudul Identifikasi Efek Toksik Akut

Jus Daun Katuk (Sauropus androgynus (L) Merr) pada Hepar Tikus Galur Wistar

disimpulkan bahwa nilai LD50 jus daun katuk pada tikus betina galur wistar adalah

>5000 mg/KgBB sehingga jus daun katuk tergolong praktis tidak toksik pada uji

toksisitas akut (Wisnuaji, 2012).

2.7 Organ Hati

Hati merupakan organ terbesar tubuh, menyumbang sekitar 2 persen berat

tubuh total, atau sekitar 1,5 kg pada rata-rata manusia dewasa. Hampir semua zat

yang masuk dalam tubuh dimetabolisme oleh hati. Organ ini memiliki banyak fungsi

18

dan berbagai fungsinya tersebut saling berhubungan satu sama lain (Guyton dan Hall,

2006).

2.7.1 Anatomi dan Fungsi Hati

Posisi terletak di sebelah kanan atas rongga perut di bawah diafragma. Sebagian

besar posisi hati terdapat pada daerah hipokondrium kanan dan memanjang ke daerah

epigastrium. Hati terdiri dari dua lobus besar, kanan dan kiri, lobus kanan lebih besar

dari lobus kiri. Batas atas hati berada sejajar dengan ruang intercostal V kanan dan

batas bawah menyerong ke atas dari iga IX kanan ke iga VIII kiri (Perhimpunan

Dokter Spesialis Penyakit Dalam Indonesia, 2009).

Fungsi utama hati adalah pembentukan dan eksresi empedu. Hati

mengekskresikan empedu sebanyak 1 liter per hari kedalam usus halus. Unsur utama

empedu adalah air (97%), elektrolit, garam empedu. Hati juga memliki peran dalam

fungsi metabolisme tubuh. Hati dapat memetabolisme karbohidrat, protein dan lemak.

Hati merupakan komponen sentral imun. Sel kupffer merupakan sel yang sangat

penting dalam menanggulangi antigen yang berasal dari luar tubuh dan

mempresentasikan antigen tersebut kepada limfosit (Joniada, 2011).

2.7.2 Enzimatik Hati

Didalam hati banyak terdapat enzim yang memiliki peran berbeda. Enzim-

enzim tersebut antara lain SGPT, SGOT, Laktat Dehidrogenase (LDH), Alkali

Fosfatase (ALP) dan gamma GT. SGOT berfungsi sebagai katalisator reaksi antara

asam aspartat dan asam alfa-ketoglutarat. SGOT terdapat lebih banyak di jantung

dibandingkan di hati. Enzim ini juga terdapat di otot rangka, otak dan ginjal.

Meningkat tajam ketika terjadi perubahan infark miokardium. SGOT banyak terdapat

dalam mitokondria dan sitoplasma hati, karena itu SGOT kurang spesifik untuk

pemeriksaan kerusakan hati akut (Haki, 2009). LDH adalah enzim intraseluler yang

terdapat pada hampir semua sel yang bermetabolisme, dengan konsentrasi tertinggi

dijumpai di jantung, otot rangka, hati, ginjal, otak, dan sel darah merah. ALP

19

merupakan enzim yang berperan dalam mempercepat hidrolisis fosfat organik dengan

melepaskan fosfat anorganik. Enzim ini terdapat dalam banyak jaringan, terutama di

hati, tulang, mukosa usus, dan plasenta (Panjaitan, 2007). Gamma GT merupakan

enzim mikrosomal yang tersebar diberbagai jaringan yang umumnya sering

digunakan sebagai penanda kolestasis. SGPT, enzim ini mengkatalisis pemindahan

satu gugus amino antara lain alanin dan asam alfa-ketoglutarat. Terdapat banyak di

hepatosit dan konsentrasinya relatif rendah di jaringan lain. Dalam sel hati, SGPT

terdapat dalam sitoplasma sehingga memiliki sensitivitas tinggi terhadap kerusakan

hati akut. (Haki, 2009).

2.8 Diagnosis Enzimatik Hati

Pemeriksaan enzim dapat dibagi dalam beberapa bagian. Pertama, untuk

pemeriksaan kerusakan sel yaitu SGPT dan SGOT. Kedua, untuk pemeriksaan

kolestasis yaitu gamma GT dan ALP. Untuk peningkatan kadar ALP, agar didapatkan

hasil yang lebih spesifik maka digunakan pemeriksaan tambahan yaitu uji 5

nukleotidase (5NT). Ketiga, untuk pemeriksaan kapasitas sintesis hati yaitu

kolinesterase. Pemeriksaan lain untuk menegakkan diagnosis ada banyak, contohnya

bilirubin dan galaktosa untuk uji fungsi ekskresi dan metabolisme (Perhimpunan

Dokter Spesialis Penyakit Dalam Indonesia, 2009). Penanda akut dari hepatotoksik

adalah peningkatan enzim-enzim transaminase dalam serum alanine

aminotransferase/Serum glutamate pyruvate transaminase (ALT/ SGPT). World

Health Organization mengklasifikasikan hepatotoksik menjadi 4 gradasi. Grade I

ditandai dengan peningkatan SGPT 1,25-2,5 normal, grade II SGPT meningkat 2,6-

5 normal, grade III SGPT meningkat 5,1-10 normal dan grade IV bila SGPT

meningkat > 10 normal (Prihatni, 2004). Dalam keadaan hepatitis akut, kadar SGPT

bias naik sampai 20-50 normal, sedangkan pada keadaan pada hepatitis kronik naik

2-3 normal (Perhimpunan Dokter Spesialis Penyakit Dalam Indonesia, 2009). Rasio

Deritis merupakan nilai perbandingan antara SGOT dan SGPT. Rasio Deritis banyak

digunakan sebagai penentu jenis hepatitis. Dalam keadaan normal, rasio Deritis selalu

20

bernilai

21

Keterangan :

: merangsang

: mencegah

Kerangka konseptual pada Gambar 2.3 menjelaskan bahwa CCl4 akan masuk ke

dalam sirkulasi portal hepatik dan dimetabolisme dalam retikulum endoplamik hati

oleh sitokrom P-450 2E1 (CYP2E1) menjadi bentuk radikal bebas triklorometil

(CCl3). Selanjutnya CCl3

akan bergabung dengan Oksigen dan membentuk radikal

triklorometil peroksi (CCl3O2) yang dapat menyerang lipid membran retikulum

endoplasmik dan menyebabkan peroksidasi lipid sehingga mengganggu homeostasis

Ca2+

dan akhirnya menyebabkan kematian sel hati. Kerusakan sel-sel hati

menyebabkan menyebabkan enzim-enzim hati (SGPT) keluar ke ekstrasel dan

meningkat di sirkulasi. Kandungan ekstrak etanol daun katuk (Sauropus androgynus

(L) Merr), flavonoid, berperan sebagai antioksidan (radikal bebas scavenger) akan

mendonorkan atom Hidrogen (H) untuk mengikat radikal bebas (CCl3O2) dan

memotong rantai radikal. Aktivitas tersebut akan mencegah kerusakan sel-sel hati

sehingga diharapkan mampu mencegah peningkatan kadar SGPT.

2.10 Hipotesis Penelitian

Hipotesis penelitian ini adalah

1. Terdapat perbedaan kadar SGPT dari tikus putih galur wistar (Rattus




2. Terdapat hubungan respon dosis 2800 mg/kgBB, 4200 mg/kgBB dan 5600


dalam mencegah peningkatan kadar SGPT dari tikus putih galur wistar

(Rattus novergicus) yang diinduksi CCl4.

22

BAB 3. METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Penelitian ini adalah penelitian eksperimental yang bertujuan untuk mengetahui

suatu gejala atau pengaruh yang timbul sebagai akibat dari adanya perlakuan tertentu.

Jenis penelitian eksperimental yang digunakan adalah True Experimental. Rancangan

penelitian yang digunakan adalah Posttest Only Control Group Design

(Notoadmodjo, 2002).

3.2 Rancangan penelitian

Rancangan penelitian ditunjukkan pada Gambar 3.1

Gambar 3.1 Skema Rancangan Penelitian

Keterangan :

Po : populasi normal diet.

R : randomisasi

S : sampel normal diet

R

Adaptasi

7 hari

Perlakuan

7 hari

Induksi CCl4

Hari ke 8

Pengambilan serum

Hari ke 9

Na-CMC

Na-CMC

p.o vit E

p.o I

p.o II

p.o III

-

i.p CCL4

i.p CCL4

i.p CCL4

i.p CCL4

i.p CCL4 P3

P2

P1

K(+)

K(-)

K(N)

Po S

T6

T5

T4

T3

T2

T1

23

K (N) : kontrol dengan pemberian Na-CMC 1 % 3 ml

K (-) : kelompok kontrol negatif dengan pemberian Na-CMC 1 % 3 ml dan

CCl4 1 ml/kgBB

K (+) : kelompok kontrol positif dengan pemberian vitamin E 7 mg/200

g/bb/haridan CCl41 ml/kgBB

P1 : kelompok perlakuan dengan pemberian ekstrak etanol daun

katuk (Sauropus androgynus (L) Merr) dosis 2800 mg/kgBB dan

CCl4 1 ml/kgBB



CCl4 1 ml/kgBB



CCl4 1 ml/kgBB

Na-CMC : Perlakuan dengan pemberian Na-CMC 1% 3 ml per oral selama 7

hari

p.o. vit. E : Perlakuan dengan pemberian vitamin E 7 mg/200 g/bb/hari per

oral selama 7 hari

p.o. I : Perlakuan dengan pemberian ekstrak etanol daun katuk

(Sauropus androgynus (L) Merr) dosis 2800 mg/kg BB per oral

selama 7 hari

p.o. II : Perlakuan dengan pemberian ekstrak etanol daun katu


selama 7 hari

p.o. III : Perlakuan dengan pemberian ekstrak etanol daun katu


selama 7 hari

i.p CCL4 : Induksi kelompok kontrol negatif dengan CCl4 1 ml/kgBB secara

intraperitoneal pada hari ke 8

24

T1-6 : Pembedahan tikus dan pengambilan serum 3 ml dari ventrikel kanan

pada hari ke-9

3.3 Populasi dan Sampel

3.3.1 Populasi

Populasi pada penelitian ini adalah Rattus novergicus Wistar Jantan yang

diperoleh dari peternak tikus yang ada di Malang.

3.3.2 Sampel

Pada penelitian ini terdapat kriteria inklusi dan eksklusi yang bertujuan untuk

membuat homogen sampel yang akan digunakan. Kriteria inklusi sampel penelitian

adalah sebagai berikut:

a. Rattus Novergicus galur wistar jantan.

b. Sehat (bergerak aktif).

c. Umur 2 bulan.

d. Berat 150-200 gram.

Sedangkan kriteria eksklusi sampel penelitian adalah tikus yang sakit, yang

mati dalam proses penelitian.

3.3.3 Jumlah Sampel

Sampel dipilih dengan menggunakan teknik simple random sampling yang

kemudian dibagi menjadi 6 kelompok. Penelitian eksperimen dengan rancangan acak

lengkap, acak kelompok atau faktorial secara sederhana untuk estimasi jumlah

pengulangan atau besar sampel dalam penelitian ini dapat dihitung dengan

menggunakan rumus Federer sebagai berikut:

(t-1) (n-1) 15

(6-1) (n-1) 15

5(n-1) 15

5n-5 15

5n 20

n 4

25

Keterangan :

n : jumlah sampel tiap kelompok perlakuan

t : jumlah kelompok perlakuan

Besar sampel yang dibutuhkan berdasarkan perhitungan dengan rumus di atas

minimal sebanyak 4 ekor tikus masing-masing kelompok. Dalam penelitian ini

jumlah sampel yang digunakan untuk 6 kelompok adalah 24 ekor tikus.

3.4 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Fakultas Kedokteran Gigi Universitas

Jember untuk perawatan tikus, penyondean ekstrak daun katuk dan pembedahan

tikus. Laboratorium Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Jember untuk

pembuatan ekstrak daun katuk. Laboratorium swasta di Jember untuk uji pengukuran

kadar enzim SGPT. Penelitian ini dilakukan bulan September 2014.

3.5 Variabel Penelitian

3.5.1 Variabel Bebas

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah ekstrak etanol daun katuk (Sauropus

androgynus (L) Merr).

3.5.2 Variabel Terikat

Variabel terikat dalam penelitian ini adalah kadar SGPT tikus putih galur wistar

(Rattus novergicus).

3.5.3 Variabel Terkendali

Variabel terkendali dalam penelitian ini adalah:

a. Pemeliharaan dan perlakuan hewan coba

b. Lama perlakuan hewan coba

c. Dosis dan frekuensi pemberian CCl4

d. Frekuensi pemberian ekstak daun katuk

26

3.6 Definisi Operasional

3.6.1 Ekstrak Etanol 80% Daun Katuk

Daun katuk yang digunakan adalah daun katuk yang segar. Daun katuk segar

dicuci bersih dengan air, dikeringkan dengan cara diangin-anginkan (tanpa terkena

sinar matahari langsung). Daun katuk yang sudah kering kemudian dihaluskan

menggunakan blender hingga menjadi serbuk, ditimbang kemudian diayak

menggunakan mesh 30 hingga diperoleh serbuk halus. Serbuk daun katuk yang telah

dikeringkan dan dihaluskan dimaserasi kinetik selama 1 jam dengan menggunakan

peralut etanol 80 % sebanyak 800 ml, didiamkan semalam kemudian disaring dan

dipisahkan ampas dan filtratnya. Dari filtrat yang didapat dikumpulkan dan campuran

ekstrak tersebut dipekatkan dengan rotatory evaporator dan diuapkan di atas

waterbash 0 sampai didapatkan bobot konstan (Arista, 2013). Ekstrak daun katuk

dalam bentuk serbuk dilarutkan dengan Na-CMC lalu diinduksi setiap hari selama 7

hari secara peroral.

3.6.2 Natrium Karboksi Methyl Selulosa (Na-CMC)

Natrium Karboksi Methyl Selulosa (Na-CMC) adalah bahan kimia yang umum

digunakan sebagai formula obat-obatan baik secara oral maupun topikal. Untuk bahan

bentuk serbuk, Na-CMC banyak digunakan sebagai pelarut untuk mendukung

penggunaan obat yang dalam penelitian ini sebagai pembantu absorbsi ekstrak

ethanol daun katu (Rowe et al., 2009).

3.6.3 Dosis CCl4

Dosis larutan CCl4 yang digunakan adalah 1 ml/kgBB hanya diberikan 1 kali

selama percobaan yaitu diberikan pada hari ke-7 setelah pemberian proteksi ekstrak

daun katuk selama 7 hari. Pemberian dosis larutan CCl4 1 mg/KgBB karena dengan

dosis tersebut dalam 24 jam mampu merusak membran sel dan komponen intrasel

hati (Panjaitan et al., 2007).

27

3.6.4 Serum Glutamic Pyruvic Transaminase (SGPT)

Serum Glutamic Pyruvic Transaminase (SGPT) merupakan enzim yang banyak

ditemukan pada sel hati serta efektif untuk mendiagnosis destruksi hepatoseluler.

Pemeriksaan kadar SGPT menggunakan darah yang dibutuhkan sebanyak 3 ml yang

diambil ventrikel kanan jantung tikus. Serum 0,1 ml akan direaksikan dengan 1 ml

Working Reagent (ALT Buffer 25 ml + ALT Enzyme 5 ml). Kemudian absorbansi

akan dibaca dan direkam pada dalam waktu 1, 2 dan 3 menit. Kemudian rata-rata

absorbansi (A/min) dikali dengan faktor 17 8 atau 337 untuk mendapatkan nilai

dalam U/L.

3.6.5 Hewan coba

Hewan coba yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus galur wistar

berjenis kelamin jantan yang sehat (bergerak aktif), berbulu putih dengan berat badan

berkisar 150-200 gram dan usia berkisar 2bulan.

3.7 Alat dan Bahan

3.7.1 Alat

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah:

a. Alat untuk pemeliharaan tikus adalah bak plastik ukuran 30 cm x 15 cm,

penutup kawat berukuran 30 cm x 15 cm, botol air,dan label.

b. Alat untuk pembuatan ekstrak daun katuk adalah blender, ayakan 30 mesh,

timbangan, pengaduk, rotary evaporator dan waterbash.

c. Alat yang digunakan untuk menyonde tikus adalah handscoone, masker,

beeker glass, pengaduk dan spuit sonde.

d. Alat yang digunakan untuk pengambilan darah tikus adalah spuit.

3.7.2 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah:

28

a. Bahan untuk pemeliharaan tikus adalah makanan standar, minuman dan

sekam.

b. Bahan untuk pembuatan ekstrak daun katuk adalah daun katuk segar, air,

etanol 80% dan Na-CMC.

c. Bahan untuk menyonde tikus adalah vitamin E, CCl4 dan ekstrak daun

katuk.

d. Tikus wistar jantan

3.8 Prosedur Kerja

3.8.1 Pemilihan Tikus Wistar Jantan

Jumlah hewan coba adalah 24 ekor tikus wistar dibagi menjadi 6 kelompok

dengan kriteria: berjenis kelamin jantan yang sehat (bergerak aktif), berbulu putih

dengan berat badan berkisar 150-200 gram dan usia berkisar 2 bulan.

3.8.2 Persiapan Tikus Wistar Jantan

Sebelum perlakuan, tikus diadaptasi pada kondisi laboratorium selama 7 hari

dengan tujuan untuk menyesuaikan dengan lingkungan baru. Selama adaptasi tikus

diletakkan di kandang dan diberi makanan standar dan diberi minuman ad libitum.

3.8.3 Pembagian Kelompok Perlakuan

Jumlah kelompok pada penelitian ini adalah 6 kelompok sehingga tikus wistar

jantan dibagi menjadi 6 kelompok :

a. Kelompok K(N) : Pemberian Na-CMC 1 % 3 ml

b. Kelompok K(-) : Pemberian Na-CMC 1 % 3 ml dan CCl4 1 ml/kgBB

c. Kelompok K(+) : Pemberian Vitamin E 7 mg/200g/bb/hari+ CCl4 1

ml/kgBb

d. Kelompok P1 : Pemberian ekstrak daun katuk (Sauropus androgynus (L)

Merr) dosis 2800 mg/ kgBB + CCl4 1 ml/kgBB

29

e. Kelompok P2 : Pemberian ekstrak daun katuk (Sauropus androgynus (L)


f. Kelompok P3 : Pemberian ekstrak daun katuk (Sauropus androgynus (L)


3.8.4 Pembuatan Ekstrak Daun Katuk

Daun katuk segar dicuci bersih dengan air, dikeringkan dengan cara diangin-

anginkan (tanpa terkena sinar matahari langsung). Daun katuk yang sudah kering

kemudian dihaluskan menggunakan blender hingga menjadi serbuk, ditimbang

kemudian diayak menggunakan mesh 30 hingga diperoleh serbuk halus. 100 gram

serbuk daun katuk yang telah dikeringkan dan dihaluskan dimaserasi kinetik selama 1

jam dengan menggunakan peralut etanol 80 % sebanyak 800 ml, didiamkan semalam

kemudian disaring dan dipisahkan ampas dan filtratnya. Pada ampas dilakukan

maserasi kinetik ulang (maserasi kinetik ulang dilakukan 3 kali). Cara maserasi

kinetik dilakukan dengan cara merendam simplisia dengan etanol kemudian diaduk

secara terus-menerus. Dari filtrat yang didapat dikumpulkan dan campuran ekstrak

tersebut dipekatkan dengan rotatory evaporator dan diuapkan di atas waterbash 0

sampai didapatkan bobot konstan (Arista, 2013).

3.8.5 Dosis Vitamin E

Beradasarkan penelitian terdahulu, dosis vitamin E sebesar 7 mg/200 g/bb/hari

pada tikus dapat digunakan sebagai antioksidan (Suarsana, 2011).

3.8.6 Penginduksian CCl4

Masing-masing tikus pada kelompok (-),(+),(P1),(P2) dan (P3) diberi CCl4

secara intraperitoneal dengan dosis 1 mg/KgBB.CCl4 hanya diberikan 1 kali selama

percobaan yaitu pada hari ke-8. Pengamatan dilakukan sampai dengan 24 jam setelah

pemberian. Selanjutkan dilakukan pengukuran terhadap kadar SGPT (Panjaitan et al.,

2007).

30

3.8.7 Pemeriksaan SGPT

Pemeriksaan SGPT dilakukan di Laboratorium Klinik Piramida dengan

menggunakan metode kinetik rekomendasi dari International Federation of Clinical

Chemistry (IFCC). Sampel yang digunakan yaitu (1) Serum, (2) Plasma: Li-heparin

atau K2-EDTA plasma.

3.8.8 Perlakuan Hewan Coba

Sejumlah 24 ekor tikus ditempatkan di dalam kandang dengan diberi makan

standart dan minuman.Setelah tikus diadaptasikan selama 1 minggu, tikus dibagi

menjadi 6 kelompok terdiri dari 4 ekor tikus yang dipilih secara acak. Tikus-tikus

tersebut diberi perlakuan selama 8 hari dengan perlakuan sebagai berikut:

a. Kelompok K(N) : tikus diberi Na-CMC 1% 3 ml selama 7 hari

b. Kelompok K(-) : tikus diberi Na-CMC 3 ml selama 7 hari dan diberi CCl4 1

ml/kgBB secara intraperitoneal pada hari ke-8

c. Kelompok K(+) : tikus diberi Vitamin E 7 mg/200g/bb/hari selama 7 hari dan

diberi CCl4 1 ml/kgBb secara intraperitoneal pada hari ke-8

d. Kelompok P1 : tikus diberi ekstrak daun katu (Sauropus androgynus (L)

Merr) dosis 2800 mg/ kgBB dan diberi CCl4 1 ml/kgBB

intraperitoneal pada hari ke-8

e. Kelompok P2 : tikus diberi ekstrak daun katu (Sauropus androgynus (L)

Merr) dosis 4200 mg/kgBB selama 7 hari dan diberi CCl4

1ml/kgBBsecara intraperitoneal pada hari ke-8

f. Kelompok P3 : tikus ekstrak daun katu (Sauropus androgynus (L) Merr)

dosis 5600 mg/ kg BB selama 7 hari dan diberi CCl4

1 ml/kgBB secara intraperitoneal pada hari ke-8

Pada hari ke-9 seluruh tikus kemudian diambil organ hepar untuk dilakukan

pengukuran kadar SGPT tikus.

31

3.9 Analisis Data

Analisis data perbedaan efektifitas dosis secara statistik dilakukan uji

normalitas dan homogenitas varian p > 0,05. Jika data yang diperoleh normal dan

homogen, maka dilanjutkan uji One Way ANOVA (p < 0,05). Apabila data yang

diperoleh tidak homogen, maka dilanjutkan uji Kruskal Wallis (p < 0,05). Jika data

yang diperoleh terdapat perbedaan nyata antara kelompok kontrol dan perlakuan,

maka dilanjutkan dengan uji LSD (Least Significantly Different) (p < 0,05) sebagai

lanjutkan uji One Way ANOVA dan Mann Whitney. Untuk mengetahui hubungan

antar dosis terhadap respon pencegahan peningkatan SGPT dilakukan uji Pearson

Correlation.

3.10 Uji Kelayakan Etik

Sebelum melakukan penelitian, prosedur penelitian telah dimintakan ijin ethical

clearance dari Komisi Etika Penelitian Kedokteran Fakultas Kedokteran Universitas

Jember.

32

3.11 Alur Penelitian

3.11.1 Skema Pembuatan Ekstrak daun katuk

Gambar 3.2 Skema Pembuatan Ekstrak Daun Katuk

Daun Katuk Segar

Dicuci bersih dengan air

Dikeringkan dengan cara diangin-anginkan (tanpa terkena

matahari langsung)

Dihaluskan dengan blender hingga jadi serbuk

Ditimbang, diayak menggunakan 30 mesh

100 mg serbuk daun katuk

Di maserasi kinetik selama 1 jam menggunakan etanol

80% sebanyak 800 ml

Didiamkan semalan

Disaring, pisahkan ampas dan filtrat

Ampas Filtrat

Dimaserasi kinetik ulang 3 kali Dikumpulkan

campuran ekstrak tersebut dipekatkan dengan rotatory evaporator

dan diuapkan di atas waterbash 0 sampai didapatkan bobot konstan

33

3.11.2 Skema Perlakuan Terhadap Hewan Coba

Gambar 3.3 Skema Perlakuan Hewan Coba

24 Sampel

Randomisasi

Pembedahan tikus dan pengambilan serum pada hari ke-9

Pengukuran kadar SGPT tikus

Analisis Statistik

Na-CMC 3

ml peroral,

selama 7

hari

K(N)

Na-CMC 3

ml peroral

selama 7

hari

K(-) K(+)

Ekstrak

daun katuk

2800 mg/

kgBB

selama 7

hari

P1

Ekstrak

daun katuk

4200mg/

kgBB

selama 7

hari

P2

Ekstrak

daun katuk

5600mg/

kgBB

selama 7

hari

P3

Vit E

7 mg/200

g/bb/hari

selama 7

hari

CCl4 1 ml/kgBB secara intraperitoneal pada hari ke-8

34

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Penelitian

4.1.1 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Katuk

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun katuk (Sauropus

androgynus (L.) Merr.). Daun katuk segar dikeringkan dengan cara diangin-anginkan

(tanpa terkena sinar matahari langsung) selama 3 hari kemudian dihaluskan sehingga

didapatkan 790 gram serbuk kering. Sebanyak 790 gram serbuk kering kemudian

diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan larutan etanol 80% sehingga

didapatkan 130 gram ekstrak kental.

4.1.2 Perlakuan pada Hewan Coba

Sampel penelitian yaitu 24 ekor tikus putih diberikan perlakuan selama 7 hari,

kemudian pada hari ke-8 diberikan induksi CCl4 pada semua kelompok kecuali

kelompok K (N). Penghitungan kadar SGPT serum darah sampel penelitian dilakukan

di Laboratorium Klinik Piramida dengan menggunakan metode kinetic pada hari ke

9. Data SGPT dari masing-masing kelompok dapat dilihat pada lampiran. Rata-rata

kadar SGPT serum tikus berdasarkan data tersebut dapat dilihat pada Tabel 4.1.

Tabel 4.1 Hasil Kadar SGPT

Kelompok Perlakuan Rata-Rata Kadar SGPT (U/LSD)

K(N) 83,7515,22

K(-) 203,2530,68

K(+) 17158,58

P1 116,7560,6

P2 1098,45

P3 94,2564,75

Hasil pemeriksaan kadar SGPT serum darah tikus dalam bentuk grafik terdapat

pada gambar di bawah ini.

35

Gambar 4.1 Grafik Perbandingan Nilai Rata-Rata Kadar SGPT

Tabel 4.1 dan Gabar 4.1 memperlihatkan bahwa kelompok K(-) yang diberikan

induki CCl4 memiliki kadar SGPT yang lebih tinggi daripada kelompok K(N). Hal ini

menunjukkan pemberian CCl4 dapat meningkatkan kadar SGPT jika dibandingkan

dengan kelompok K(N) yang hanya diberikan Na CMC 1%. Pada kelompok K(+)

yang diberikan CCl4 dan vitamin E terlihat terjadi penurunan kadar SGPT

dibandingkan K(-). Berdasarkan tabel dan gambar diatas terlihat adanya penurunan

SGPT pada kelompok dosis ekstrak daun katuk yaitu P1, P2 dan P3 dibandingkan

kelompok K(-).

Data persentase pencegahan peningkatan kadar SGPT dapat digunakan untuk

mengetahui efek dari perlakuan pada kelompok perlakuan dosis ekstrak daun katuk

dalam menurunkan kadar SGPT. Hasil perhitungan persentase penurunan kadar

SGPT terhadap kelompok K(-) dapat dilihat pada tabel 4.2.

83,7515,22

203,2530,68

17158,58

116,7560,6 1098,45

94,2564,75

36

Tabel 4.2 Persentase Pencegahan Peningkatan SGPT

Kelompok Perlakuan Persentase pencegahan peningkatan SGPT

P1 42,81 %

P2 46,38 %

P3 53,63 %

Dalam grafik, data tersebut dapat dilihat sebagai berikut

Gambar 4.2 Grafik Persentase Pencegahan Peningkatan SGPT

4.1.3 Analisis Data

Uji normalitas yang digunakan pada analisis data penelitian ini adalah uji

Shapiro Wilk. Kelompok K(N) mendapatkan hasil p = 0,962, kelompok K(-)

mendapatkan hasil p = 0,975, kelompok K(+) mendapatkan hasil p = 0,433,

kelompok P1 mendapatkan hasil p = 0,862, kelompok P 2 mendapatkan hasil p =

0,686 dan P3 mendapatkan hasil p = 0,757. Pada uji ini menunjukkan bahwa data

kadar SGPT serum terdistribusi normal dengan nilai p > ( = 0,05).

Uji yang digunakan untuk mengetahui data homogen atau tidak dengan

menggunakan uji Levene Test. Berdasarkan hasil uji tersebut didapatkan data p =

37

0,141. Hasil tersebut menunjukkan bahwa data kadar SGPT serum memiliki varian

yang homogen dengan nilai p > ( = 0,05).

Berdasarkan hasil uji Saphiro Wilk dan uji Levene Test dapat disimpulkan

bahwa data terdistribusi dengan normal dan memiliki varian yang homogen. Hal ini

menunjukkan syarat untuk menggunakan One Way ANOVA sudah terpenuhi. Hasil

uji ANOVA menunjukkan p = 0,010 (p < 0,05) sehingga dapat dikatakan terdapat

perbedaan yang signifikan diantara keenam kelompok. Uji ANOVA dilanjutkan

dengan LSD (Least Significant Difference) untuk mengetahui kelompok mana yang

memiliki perbedaan selisih rerata kadar SGPT tikus yang signifikan.

Berdasarkan hasil uji LSD kadar SGPT antar kelompok perlakuan diketahui

bahwa kelompok K(N) berbeda signifikan dengan kelompok K(-), dan K(+), tetapi

tidak berbeda signifikan terhadap kelompok P1, P2 dan P3. Kelompok K(-) berbeda

signifikan dengan kelompok K(N), P1, P2 dan P3. Kelompok K(+) hanya berbeda

signifikan dengan K(N) dan P3. Antar kelompok P1, P2 dan P3 menunjukkan hasil

yang tidak berbeda signifikan.

Uji korelasi pada penelitian ini menggunakan uji Pearson Correlation. Untuk

hubungan antara dosis ekstrak daun katuk dengan penurunan kadar SGPT diperoleh

nilai sig = 0,113. Nilai tersebut menunjukkan bahwa korelasi antar ketiga dosis

ekstrak daun katuk adalah tidak bermakna. Nilai Pearson Correlation sebesar -0,984

menunjukkan korelasi negatif.

4.2 Pembahasan

Berdasarkan hasil penelitian, dapat dilihat bahwa rata-rata kadar SGPT

kelompok K(N) adalah 83,75 U/L. Berdasarkan rata-rata kadar tersebut dapat

diketahui bahwa pemberian Na CMC 1% pada K(N) tidak mempengaruhi kadar

SGPT. Jika dibandingkan dengan kelompok K(-) terlihat perbedaan yang signifikan

(p < 0,05), kelompok K(-) yang diberikan CCl4 1 ml/kgBB terlihat adanya

peningkatan rata-rata kadar SGPT dengan nilai 203,25 U/L. Dari hasil tersebut,

pemberian karbon tetraklorida (CCl4) dapat meningkatkan kadar SGPT. CCl4 akan

38

masuk kedalam sirkulasi portal hepatik dan dimetabolisme oleh enzim sitokrom P450

2E1 (CYP2E1) menjadi radikal bebas triklorometil (CCl3) dalam retikulum

endoplasmik hati. Triklorometil dengan oksigen akan membentuk radikal

triklorometil peroksi (CCl3O2) yang dapat menyerang lipid membran retikulum

endoplasmik dan menyebabkan peroksidasi lipid sehingga mengganggu homeostasis

Ca2+

dan akhirnya menyebabkan kematian sel (Panjaitan et al., 2007).

Kelompok K(N) dibandingkan dengan kelompok P1, P2 dan P3 tidak memiliki

perbedaan yang signifikan. Ini berarti kelompok P1, P2 dan P3 yang masing diberi

dosis ekstrak 2800, 4200 dan 5600 mg/ kgBB dapat menurunkan kadar SGPT

mendekati kelompok K(N) yang sebagai kontrol normal. Berdasarkan gambar 4.1,

grafik kadar SGPT dari masing-masing dosis menunjukkan bahwa penambahan dosis

dapat menambah pencegahan peningkatan kadar SGPT tikus wistar. Hal ini sesuai

dengan penelitian terdahulu yang menjadi acuan penelitian ini. Penelitian terdahulu

yang memakai mencit sebagai hewan coba, menunjukkan dosis 800 mg/ kgBB

memiliki kadar SGPT paling rendah (Joniada, 2011).

Kelompok K(N) memiliki perbedaan yang signifikan dengan kelompok K(+).

Kelompok K(+), sebagai kontrol positif yang diberi vitamin E 7 mg/200g/bb/hari

diharapkan dapat mencegah peningkatan kadar SGPT agar dapat dijadikan tolak ukur

pencegahan pengingkatan SGPT dari ekstrak etanol 80% daun katuk. Vitamin E

dipilih sebagai kontrol positif karena mekanisme kerja dari vitamin E sama dengan

flavonoid dari ekstark daun katuk yang berfungsi melindungi asam-asam lemak dari

oksidasi dengan cara menangkap radikal bebas (Rukmiasih et al., 2011). Dalam

penelitian ini terjadi sebaliknya. Jika dibandingkan dengan kelompok K(-), kelompok

K(+) tidak memiliki perbedaan yang signifikan. Ini berarti terjadi sesuatu yang

menghambat mekanisme perlindungan dari vitamin E terhadap kerusakan yang

disebabkan CCl4. Ternyata dalam pemberiannya, CCl4 selain mengakibatkan

perusakan lipid membran, CCl4 juga menghambat kerja berbagai antioksidan

enzimatik seperti superoxide dismutase (SOD), katalase (CAT) dan hepatik glutation

(GSH) (Ganie et al, 2010). GSH sendiri berfungsi mengubah radikal vitamin E, yang

39

terbentuk setelah vitamin E mengikat radikal bebas, menjadi vitamin E kembali.

Karena GSH dihambat oleh CCl4, vitamin E tetap dalam bentuk radikal dan menjadi

prooksidan, sehingga terjadilah perusakan sel hati (Lone et al, 2013).

Kelompok K(-) memiliki perbedaan yang signifikan dengan kelompok P1, P2

dan P3. Hal ini menunjukkan bahwa pada ketiga kelompok tersebut dengan dosis

masing-masing 2800, 4200 dan 5600 mg/kgBB mampu menurunkan kadar SGPT

secara signifikan terhadap kelompok K(-). Penurunan kadar SGPT pada ketiga

kelompok menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun katuk memiliki kemampuan

sebagai hepatoprotektor dari kerusakan sel hati akibat adanya radikal bebas.

Flavonoid merupakan kandungan yang memiliki aktivitas antioksidan dalam daun

katuk, dengan jumlah sekitar 143 mg/100 g fw yang terdiri dari rutin dan senyawa

flavonol dan flavon. Rutin dan flavonol merupakan antioksidan kuat terhadap

peroksidasi lipid (Sandhar et al., 2011; Redha, 2010 dan Wijono, 2003). Aktivitas

pengikatan radikal bebas dapat dilihat pada gambar 2.2

Flavonoid (F-OH) dapat mendonorkan atom hidrogennya untuk mengikat

radikal bebas (R.). Aktivitas ini juga terjadi pada proses pencegahan peroksidasi lipid.

Flavonoid menyumbangkan atom hidrogen kepada peroksi radikal untuk memotong

rantai reaksi radikal (Sandhar et al., 2011).

Kelompok K(+) memiliki perbedaan yang signifikan dengan kelompok K(N)

dan P3 tetapi tidak dengan kelompok K(-), P1 dan P2. Perbedaan signifikan dengan

kelompok K(N) dan P3 ini dikarenakan vitamin E dari kelompok K(+) menjadi

prooksidan dan menyebabkan perusakan sel hati. Hal ini juga menjadi alasan terjadi

perbedaan yang tidak signifikan antara kelompok K(+) dan K(-). Perbedaan yang

tidak signifikan dengan kelompok P1 dan P2 menunjukkan bahwa kelompok P1 dan

P2 masih belum dapat mencegah peningkatan kadar SGPT tikus wistar sebaik

kelompok P3.

40

BAB 5. PENUTUP

5.1 Kesimpulan

Dari hasil penelitin dapat ditarik kesimpulan bahwa :

1. Terdapat perbedaan kadar SGPT dari tikus putih galur wistar (Rattus




2. Tidak terdapat hubungan respon dosis 2800 mg/kgBB, 4200 mg/kgBB dan

5600 mg/kgBB ekstrak etanol daun katuk (Sauropus androgynus (L) Merr)

dalam mencegah peningkatan kadar SGPT dari tikus putih galur wistar

(Rattus novergicus) yang diinduksi CCl4.

5.2 Saran

Berdasarkan hasil penelitian, telah terbukti ekstrak etanol daun katuk (Sauropus

androgynus (L) Merr) dapat digunakan sebagai hepatoprotektor pada tikus putih galur

wistar (Rattus novergicus) yang diinduksi CCl4 dalam mencegah peningkatan kadar

SGPT. Saran yang diberikan oleh peneliti yaitu :

1. Perlu adanya penelitian lebih lanjut mengenai aktivitas hepatoprotektor daun

katuk dengan pemeriksaan fungsi hati yang berbeda.

2. Perlu adanya penelitian lebih lanjut mengenai aktivitas hepatoprotektor daun

katuk dengan pemeriksaan histopatologi hati.

3. Perlu adanya penelitian lebih lanjut untuk mengisolasi senyawa aktif daun

katuk sehingga dimungkinkan digunakan dosis yang lebih efektif.

41

DAFTAR PUSTAKA

Andari, A. 2010. Uji Aktifitas Ekstrak Daun Katu (Sauropus androgynus (L) Merr)

Sebagai Antioksidan Pada Minyak Kelapa. Yogyakarta: Fakultas SAINS dan

Teknologi Universitas Islam Negeri Sunan Kalijaga.

Anggraini, H. 2011. Pengaruh Pemberian Jus Mengkudu (Morinda citrifolia)

Terhadap Nitric Oxide (NO) dan Reaktive Oxygen Intermediate (ROI)

Makrofag Tikus yang Terpapar Asap Rokok. Program Pascasarjana Magister

Ilmu Biomedik Universitas Diponegoro Semarang.

Andarwulan, Batari, Sandrasari, Bolling, dan Wijaya. 2010. Flavonoid Content and

Antioxidant Activity of Vegetables From Indonesia. Food Chemistry. Vol 121:

1231-1235.

Arista, M. 2013. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol 80% dan 96% Daun Katuk

(Sauropus androgynus (L.) Merr). Jurnal Ilmiah Mahasiswa Universitas

Surabaya. Vol 2 (2) : 2-5.

Botros, M. dan Sikaris, K. A. 2013. The Deritis Rayio: The Test of Time: The Clinical

Biochemis. The Clinillas Biochemist Review. Vol

BioColombo, M. L. 2010. An Update on Vitamin E, Tocopherol and Tocotrienol-

Perspectives. Torino: Department of Drug Science and Technology, University

of Torino.

Faridah, H. 2009. Pengaruh Pemberian buah Pepaya (Carica Papaya L) Terhadap

Anatomi Alveolus Paru-Paru Mencit (Mus Musculus) yang Diinhalasi CCL4

(Carbon Tetraclorida). Malang : Fakultas Sains dan Teknologi Universitas

Islam Negeri Malang.

Fessenden, R. J. dan Fessenden, J. S. 1982. Kimia Organik: Edisi Ketiga. Jakarta:

Penerbit Erlangga

Ganie, Haq, Masood, dan Zargar. 2010. Podophyllum Hexandrum Rhizome Methanolic Extract Ameliorates Carbon Tetrachloride Induced Hepatotoxicity

In Albino Rats. Pharmacologyonline 2: 496-506

Gaol, J. F. L. 2011. Isolasi Zat Warna Hijau Daun Katuk (Sauropus androgynus

Merr.) Sebagai Pewarna Tablet. Medan: Fakultas Farmasi Unversitas Sumatera

Utara.

42

Guyton, A. C. & Hall, J. E. 2006. Buku Ajar Fisiologi Kedeokteran, Edisi 11. Jakarta:

EGC.

Haki, M. 2009. Efek Ekstrak Daun Talok (Muntingia calabura L.) Terhadap Aktivitas

Enzim SGPT Pada Mencit Yang Diinduksi Karbon Tetraklorida. Surakarta:

Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret.

Hartanto, H. 2012. Identifikasi Potensi Antioksidan Minuman Cokelat dari Kakao

Lindak (Theobroma Cacao L.) dengan Berbagai Cara Preparasi: Metode

Radikal Bebas 1,1 Diphenyl-2-Picrylhidrazyl (DPPH). Surabaya: Fakultas

Teknologi Pertanian Universitas Katolik Widya Mandala.

Joniada, I. M. 2009. Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Daun Katuk (Sauropus

androgynous L) Sebagai Hepatoprotektor pada Mencit yang Diinduksi

Paracetamol. Jember: Fakultas Farmasi Universitas Jember.

Junieva, P. N. 2006. Pengaruh Pemberian Ekstrak Meniran ( Phyllanthus sp. )

Terhadap Gambaran Mikroskopik Paru Tikus Wistar yang Diinduksi Karbon

Tetraklorida. Semarang: Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro

Khalasa, T., Winarsih, S., dan Widodo, M. A. 2013. Uji Efektivitas Ekstrak Etanol

Daun Katuk (Sauropus androgynus) Sebagai Antibakteri Terhadap Methicillin

Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Secara In Vitro. Malang: Fakultas

Kedokteran Universitas Brawijaya.

Kuncahyo, I. & Sunardi. 2007. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Belimbing Wuluh

(Averrhoa bilimbi, L.) Terhadap 1,1-Diphenyl-2-Picrylhidrazyl (DPPH).

Yogyakarta: Teknologi Farmasi Fakultas Teknik Universitas Setia Budi.

Lone, Ganai, Ahanger, Bhat1, Wani, dan Bhat

2. 2013. Free radicals and antioxidants:

Myths, facts and mysteries. India : Sher-e-Kashmir University of Agricultural

Sciences and Technology.

Manik, N. D. 2011. Penetapan Kadar Kalsium Pada Daun Katuk (Sauropus

androgynus (L.) Merr.) Dari Daerah Karo Dengan Daerah Pematang Johar

Secara Spektrofotometri Serapan Atom. Medan: Fakultas Farmasi Unversitas

Sumatera Utara.

Nabila, N. 2011. Pengaruh Pemberian Metanol dan Etanol Terhadap Tingkat

Kerusakan Sel Hepar Tikus Wistar. Semarang: Fakultas Kedokteran Universitas

Diponegoro.

Notoatmojo, S. 2002. Metodologi Penelitian Kesehatan. Jakarta: Rineka Cipta.

43

Panjaitan, Handharyani, Chairul, Masriani, Zakiah, dan Manalu. 2007. Pengaruh

Pemberian Karbon Tetraklorida Terhadap Fungsi Hati dan Ginjal Tikus.

Makara, Kesehatan, Vol. 11. (1): 11-16.

Panjaitan, T. D., Prasetyo, B., dan Limantara, L. 2008. Peranan Karotenoid Alami

dalam Menangkal Radikal Bebas. Info Kesehatan Masyarakat, Vol. 12 (1): 79-

86.

Pazil, Siti N.BT. 2009. Perbandingan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daging Pisang

Raja (Musa AAB Pisang Raja) dengan Vitamin A, Vitamin C, dan Katekin Melalui Penghitungan Bilangan Peroksida. Jakarta: Fakultas Kedokteran

Universitas Indonesia.

Perhimpunan Dokter Spesialis Penyakit Dalam Indonesia. 2009. Buku Ajar Ilmu

Penyakit Dalam, Jilid I, Edisi V. Jakarta: Interna Publishing.

Prihatni, Parwati, Sjahid, dan Rita. 2005. Efek Hepatotoksik Anti Tuberkulosis

Terhadap Kadar Aspartate Aminotransferase dan Alanine Aminotransferase

Serum Penderita Tuberkulosis Paru. Indonesian Journal of Clinical Pathology

and Medical Laboratory, Vol. 12, (1), 1-5.

Redha, A. 2010. Flavonoid: Struktur, Sifat Antioksidatif dan Peranannya Dalam

Sistem Biologis. Jurnal Belian Vol. 9 (2): 196 202.

Rianyta & Utami, S. 2013. Drug-Induced Liver Injury (DILI) pada Penggunaan

Propiltiourasil (PTU). CDK-203. Vol. 40 (4): 278-281.

Rohmatussolihat. 2009. Antioksidan, Penyelamat Sel-Sel Tubuh Manusia. BioTrends.

Vol. 4 (1): 5-9.

Rowe, R. C., Sheskey, P. J., dan Quinn, M. E. 2009. Handbook of Pharmaceutical

Excipients, Sixth Edition. Great Britain: Pharmaceutical Press.

Rukmiarsih, Hardjosworo, Ketaren, dan Matitaputty. 2011. Penggunaan Beluntas,

Vitamin C dan E sebagai Antioksidan untuk Menurunkan Off-Odor Daging Itik

Alabio dan Cihateup. JITV Vol. 16 (1): 9-16.

Sandhar, Kumar, Prasher, Tiwari, Salhan, dan Sharma. 2011. A Review of

Phytochemistry and Pharmacology of Flavonoids. Phagwara: Dept. of

Pharmaceutical Sciences, Lovely Professional University.

44

Sholihah, Q. & Widodo, M. A. 2008. Pembentukan Radikal Bebas Akibat Gangguan

Ritme Sirkadian dan Paparan Debu Batubara. Jurnal Kesehatan Lingkungan,

VOL.4, (2): 89 100.

Suarsana, Utama, Agung, dan Suartini. 2011. Pengaruh Hiperglikemia dan Vitamin E

pada Kadar Malonaldehida dan Enzim Antioksidan Intrasel Jaringan Pankreas

Tikus. MKB, Volume 43 (2): 72-76.

Wibowo, W.A., Maslachah, L., dan Bijanti, R. 2005. Pengaruh Pemberian Perasan

Buah Mengkudu (Morinda citrifolia) Terhadap Kadar SGOT dan SGPT Tikus

Putih (Rattus norvegicus) Diet Tinggi Lemak. Surabaya: Fakultas Kedokteran

Hewan Universitas Airlangga.

Wijono, S. H. S. 2003. Isolasi dan Identifikasi Flavonoid Pada Daun Katu (Sauropus

androgynus (L.) Merr). Makara, SAINS, VOL. 7, NO

Wisnuaji, L. K. 2012. Identifikasi Efek Toksik Akut Jus Daun Katuk (Sauropus

androgynous) Pada Hepar Tikus Galur Wistar. Surabaya : Fakultas Farmasi

Universitas Surabaya.

Yuniarty, D. S. T. 2011. Persentase Berat Karkas dan Berat Lemak Abdominal

Broiler yang Diberi Ransum Mengandung Tepung Daun Katuk (Sauropus

androgynus), Tepung Rimpang Kunyit (Curcuma domestica) dan

Kombinasinya. Makassar: Fakultas Peternakan Universitas Hasanuddin.

45

LAMPIRAN

A. Volume Maksimal Pemberian Larutan Sediaan Uji Pada Beberapa Hewan Uji

Jenis hewan uji Voluma maksimal (mL) sesuai jalur pemberian

i.v i.m i.p s.c p.o

Mencit (20-30 g) 0,5 0,05 1,0 0,5-1,0 1,0

Tikus (100 g) 1,0 0,1 2-5 2-5 5,0

Hamster (50 g) - 0,1 1-2 2,5 2,5

Marmot (250 g) - 0,25 2-5 5,0 10,0

Kelinci (2,5 Kg) 5-10 0,5 10-20 5-10 20,0

Kucing (3 Kg) 5-10 1,0 10-20 5-10 50,0

Anjing (5 Kg) 10-20 5,0 20-50 10,0 100,0

Dikutip dari: Ritschell. 1974. Laboratory Manual of Biopharmaceutics. Hamilton:

Drug Intellegence Publication.

46

B. Tabel Konversi Perhitungan Dosis Untuk Berbagai Jenis (Spesies) Hewan Uji Menurut Laurence & Bacharah, 1984

Mencit

20 gr

Tikus

200 gr

Marmut

400 gr

Kelinci

1,5 Kg

Kucing

2 Kg

Kera

4 Kg

Anjing

12 Kg

Manusia

70 Kg

Mencit

20 gr

1,0 7,0 13,25 27,8 29,7 64,1 124,2 387,9

Tikus

200 gr

0,14 1,0 1,74 3,9 4,2 9,2 17,8 56,0

Marmut

400 gr

0,08 0,57 1,0 2,25 2,4 5,2 10,2 31,5

Kelinci

1,5 Kg

0,04 0,25 0,44 1,0 1,08 2,4 4,5 14,2

Kucing

2 Kg

0.,03 0,23 0,41 0,92 1,0 2,2 4,1 13,0

Kera 4

Kg

0,016 0,12 0,19 0,42 0,45 1,0 1,9 6,1

Anjing

12 Kg

0,008 0,06 0,10 0,22 0,24 0,52 1,0 3,1

Manusia

70 Kg

0,0026 0,018 0,031 0,07 0,076 0,16 0,32 1,0

47

C. Data Hasil Penelitian

49

D. Hasil Analisis Data

Tests of Normality

kelompok Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

SGPT

kontrol normal .165 4 . .991 4 .962

kontrol negatif .155 4 . .994 4 .975

kontrol positif .284 4 . .900 4 .433

dosis 2800 .219 4 . .973 4 .862

dosis 4200 .223 4 . .945 4 .686

dosis 5600 .212 4 . .956 4 .757

a. Lilliefors Significance Correction

Test of Homogeneity of Variances SGPT

Levene

Statistic

df1 df2 Sig.

1.920 5 18 .141

ANOVA SGPT

Sum of

Squares

df Mean Square F Sig.

Between Groups 44318.333 5 8863.667 4.241 .010

Within Groups 37619.000 18 2089.944

Total 81937.333 23

50

Multiple Comparisons Dependent Variable: SGPT

LSD

(I) kelompok (J) kelompok Mean

Difference (I-

J)

Std. Error Sig. 95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound

kontrol normal

kontrol negatif -119.500* 32.326 .002 -187.41 -51.59

kontrol positif -87.250* 32.326 .015 -155.16 -19.34

dosis 2800 -33.000 32.326 .321 -100.91 34.91

dosis 4200 -25.250 32.326 .445 -93.16 42.66

dosis 5600 -10.500 32.326 .749 -78.41 57.41

kontrol negatif

kontrol normal 119.500* 32.326 .002 51.59 187.41

kontrol positif 32.250 32.326 .332 -35.66 100.16

dosis 2800 86.500* 32.326 .015 18.59 154.41

dosis 4200 94.250* 32.326 .009 26.34 162.16

dosis 5600 109.000* 32.326 .003 41.09 176.91

kontrol positif

kontrol normal 87.250* 32.326 .015 19.34 155.16

kontrol negatif -32.250 32.326 .332 -100.16 35.66

dosis 2800 54.250 32.326 .111 -13.66 122.16

dosis 4200 62.000 32.326 .071 -5.91 129.91

dosis 5600 76.750* 32.326 .029 8.84 144.66

dosis 2800

kontrol normal 33.000 32.326 .321 -34.91 100.91

kontrol negatif -86.500* 32.326 .015 -154.41 -18.59

kontrol positif -54.250 32.326 .111 -122.16 13.66

dosis 4200 7.750 32.326 .813 -60.16 75.66

dosis 5600 22.500 32.326 .495 -45.41 90.41

dosis 4200

kontrol normal 25.250 32.326 .445 -42.66 93.16

kontrol negatif -94.250* 32.326 .009 -162.16 -26.34

kontrol positif -62.000 32.326 .071 -129.91 5.91

dosis 2800 -7.750 32.326 .813 -75.66 60.16

dosis 5600 14.750 32.326 .654 -53.16 82.66

dosis 5600

kontrol normal 10.500 32.326 .749 -57.41 78.41

kontrol negatif -109.000* 32.326 .003 -176.91 -41.09

kontrol positif -76.750* 32.326 .029 -144.66 -8.84

dosis 2800 -22.500 32.326 .495 -90.41 45.41

dosis 4200 -14.750 32.326 .654 -82.66 53.16

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

51

Correlations

SGPT dosis

SGPT

Pearson Correlation 1 -.984

Sig. (2-tailed) .113

N 3 3

dosis

Pearson Correlation -.984 1

Sig. (2-tailed) .113

N 3 3

52

E. Ethical Clearance

54

F. ambar Penelitian

Daun katuk yang dikeringkan

Maserasi ekstrak

Rotary evaporator

Proses pembuatan ekstrak

55

Hewan coba

NB : Ukuran kandang : 35 x 45 x 2,5

cm

Perlakuan per oral pada hewan

coba

Pemberian CCl4 secara intraperitoneal

Pengambilan serum dari ventrikel

kanan

Documents

Revisi (Repaired) Kuarto