S. Konaka et al- The Appearance of Noradrenaline and Adrenaline and the Developmental Changes in their Concentrations in the Gut of the Chick

8/3/2019 S. Konaka et al- The Appearance of Noradrenaline and Adrenaline and the Developmental Changes in their Concen

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B r . J . P h a r m a c . ( 1 9 7 9 ) , 6 5 , 2 5 7 - 2 6 0

THE APPEARANCE OF NORADRENALINE AND ADRENALINE ANDTHE DEVELOPMENTAL CHANGES IN THEIR CONCENTRATIONS INTHE GUT OF THE CHICKS . KONAKA, H . OHASHI, T . OKADA & T . TAKEWAKID e p a r t m e n t o f P h a r m a c o l o g y , F a c u l t y o f A g r i c u l t u r e , G i f u U n i v e r s i t y , G i f u , J a p a n

1 T h e t i m e s o f appearance a n d t h e c o n c e n t r a t i o n s o f n o r a d r e n a l i n e a n d a d r e n a l i n e were d e t e r m i n e df l u o r i m e t r i c a l l y i n t h e g u t o f t h e e m b r y o n i c a n d d e v e l o p i n g c h i c k .2 I n t h e duodenum a n d j e j u n u m , n o r a d r e n a l i n e was d e t e c t e d i n i t i a l l y i n e m b r y o s on t h e 1 2 t hd a y o f i n c u b a t i o n . T h e c o n c e n t r a t i o n c o n t i n u e d t o i n c r e a s e t h r o u g h o u t t h e e m b r y o n i c s t a g e a n da t t a i n e d a maximum w i t h i n 3 d a y s o f h a t c h i n g . A f t e r w a r d s , i t d e c r e a s e d t o a b o u t o n e - t h i r d o ft h e p e a k l e v e l . No a d r e n a l i n e was d e t e c t a b l e i n most s t a g e s o f d e v e l o p m e n t .3 I n t h e r e c t u m , n o r a d r e n a l i n e was d e t e c t e d i n e m b r y o s on t h e 1 2 t h d a y o f i n c u b a t i o n ; b o t hn o r a d r e n a l i n e a n d a d r e n a l i n e were i n v a r i a b l y f o u n d on t h e 1 5 t h d a y o f i n c u b a t i o n . T h e concen-t r a t i o n s o f b o t h a m i n e s f l u c t u a t e d a f t e r h a t c h i n g , b u t t h e amount o f a d r e n a l in e was a l w a y s a p p r o x i -m a t e l y 40% o f t h e amount o f n o r a d r e n a l i n e , e x c e p t i n t h e a d u l t .

I n t r o d u c t i o n M e t h o d sP r o o f t h a t t h e n e u r o t r a n s m i t t e r o f a d r e n e r g i c f i b r e si s p r e s e n t i n t h e t i s s u e s w o u l d s e r v e a s i m p o r t a n t e v i -d e n c e f o r d e m o n s t r a t i n g s y m p a t h e t i c i n n e r v a t i o n i no r g a n s . I t h a s b e e n g e n e r a l l y a c c e p t e d t h a t , i n mam-m a l s , t h e p r e d o m i n a n t c a t e c h o l a m i n e f o u n d i n t i s s u e sr e c e i v i n g a s y m p a t h e t i c n e r v e s u p p l y i s n o r a d r e n a l i n e ,a l t h o u g h v a r i a b l e a m o u n t s o f a d r e n a l i n e may b ep r e s e n t .T h e a s s a y o f c a t e c h o l a m i n e s i n t h e b r a i n , h e a r t a n dv a s d e f e r e n s o f t h e c h i c k e n d e m o n s t r a t e d t h a t b o t hn o r a d r e n a l i n e a n d a d r e n a l i n e w e r e p r e s e n t a n d t h ec o n c e n t r a t i o n r a t i o o f a d r e n a l i n e t o n o r a d r e n a l i n ew a s o b s e r v e d t o b e c o n s i d e r a b l y h i g h e r t h a n t h a t i nm a m m a l s ( S j 6 s t r a n d , 1 9 6 5 ; C a l l i n g h a m & C a s s , 1 9 6 6 ;D e S a n t i s , L a n g s f e l d , L i d m a r & L o f f e l h o l z , 1 9 7 5 ) .T h e p r e s e n t e x p e r i m e n t s w e r e u n d e r t a k e n t o d e t e r -m i n e t h e a m o u n t o f n o r a d r e n a l i n e a n d a d r e n a l i n e i nt h e c h i c k g u t , a t i s s u e w h i c h i s r i c h l y s u p p l i e d b ya n u m b e r o f a d r e n e r g i c f i b r e s d e r i v e d f r o m R e m a k ' sn e r v e a n d f r o m t h e c o e l i a c a n d m e s e n t e r i c p l e x u s e s( N o l f , 1 9 3 4 a , b ) . I n a d d i t i o n , a n a t t e m p t h a s b e e nm a d e t o d e s c r i b e t h e t i m e s a t w h i c h c a t e c h o l a m i n e sa p p e a r e d a n d t h e c h a n g e s i n c o n c e n t r a t i o n s o f n o r -a d r e n a l i n e a n d a d r e n a l i n e t h a t o c c u r r e d w i t h i n c r e a s -i n g a g e i n t h e e m b r y o n i c a n d d e v e l o p i n g c h i c k .P a r t o f t h e p r e s e n t p a p e r h a s b e e n c o m m u n i c a t e dt o t h e J a p a n e s e P h a r m a c o l o g i c a l S o c i e t y ( T a k e w a k i ,O h a s h i & O k a d a , 1 9 7 6 ) .

E m b r y o s a n d h a t c h e d c h i c k s ( W h i t e L e g h o r n ) o fv a r i o u s a g e s w e r e u s e d . A f t e r t h e y w e r e d e c a p i t a t e do r s t u n n e d a n d b l e d , t h e i n t e s t i n e s w e r e r e m o v e d . T h ei s o l a t e d i n t e s t i n e s w e r e d i v i d e d i n t o t h e s m a l l i n t e s -t i n e ( i . e . , d u o d e n u m , j e j u n u m ) a n d r e c t u m i n e m b r y o s ,a n d i n t o t h e d u o d e n u m , j e j u n u m a n d r e c t u m i nh a t c h e d c h i c k s . T h e i n t e s t i n a l s e g m e n t s w e r e f r e e df r o m m e s e n t e r y , r i n s e d w i t h i c e - c o l d T y r o d e s o l u t i o n ,b l o t t e d o n f i l t e r p a p e r t o r e m o v e b l o o d a n d t h e nw e i g h e d o n a t o r s i o n b a l a n c e . T h e s e g m e n t s f r o m t h es a m e r e g i o n w e r e c o l l e c t e d f r o m 2 0 t o 1 0 0 e m b r y o sa n d 1 t o 6 h a t c h e d c h i c k s , a n d w e r e s u b j e c t e d t o t h ef o l l o w i n g t r e a t m e n t s : t h e t i s s u e s w e r e h o m o g e n i z e di n i c e - c o l d 0 . 4 N p e r c h l o r i c a c i d a n d k e p t a t -20Co v e r n i g h t ; t h e h o m o g e n a t e w a s c e n t r i f u g e d t o r e m o v ep r e c i p i t a t e d p r o t e i n .T h e c a t e c h o l a m i n e s o f t h e t i s s u e s a m p l e s w e r ea d s o r b e d o n a l u m i n a a t pH 7 . 8 a n d t h e n e l u t e d w i t h0 . 2 N a c e t i c a c i d a s d e s c r i b e d b y C h a n g ( 1 9 6 4 ) . N o r -a d r e n a l i n e a n d a d r e n a l i n e i n t h e e l u a t e s w e r e d e t e r -m i n e d f l u o r i m e t r i c a l l y b y a m o d i f i c a t i o n o f t h em e t h o d d e s c r i b e d b y A n t o n & S a y r e ( 1 9 6 2 ; 1 9 6 4 ) .I n t e r n a l s t a n d a r d s f o r n o r a d r e n a l i n e a n d a d r e n a -l i n e w e r e p r e p a r e d a s f o l l o w s : t h e s t o c k s o l u t i o n s o ft h e s e a m i n e s w e r e f r e s h l y d i l u t e d w i t h 0 . 4 N p e r c h l o r i ca c i d t o g i v e s o l u t i o n s o f a t l e a s t f o u r d i f f e r e n t c o n c e n -t r a t i o n s e m b r a c i n g t h e e x p e c t e d r a n g e . T h e s a m e p r o -c e d u r e w a s f o l l o w e d f o r t h e s o l u t i o n s a s f o r t h e r e -

0 0 M a c m i l l a n J o u r n a l s L t d 1 9 7 90 0 7 - 1 1 8 8 / 7 9 / 0 2 0 2 5 7 - 0 4 $ 0 1 . 0 0


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2 5 8 S . KONAKA, H . OHASHI, T . OKADA & T . TAKEWAKI

s p e c t i v e t i s s u e s a m p l e s . T i s s u e b l a n k s w e r e p r e p a r e db y f o l l o w i n g t h e s a m e p r o c e d u r e s a s f o r t h e s a m p l ee x c e p t t h a t t h e o x i d i z i n g a g e n t w a s a d d e d a f t e r t h ee x p o s u r e t o 1 0 N a c e t i c a c i d . R e c o v e r i e s o f n o r a d r e n a -l i n e a n d a d r e n a l i n e v a r i e d f r o m 7 0 t o 8 0 % . T h e v a l u e sg i v e n a r e u n c o r r e c t e d f o r t h e p e r c e n t a g e r e c o v e r y .T h e c o n c e n t r a t i o n o f n o r a d r e n a l i n e a n d a d r e n a l i n ei n s a m p l e s w a s c a l c u l a t e d b y t h e u s e o f s i m u l t a n e o u se q u a t i o n s a s d e s c r i b e d b y A n t o n & S a y r e ( 1 9 6 2 ) a n de x p r e s s e d a s g i g p e r g o f t i s s u e p r o t e i n , s i n c e i t i sw e l l k n o w n t h a t t h e w a t e r c o n t e n t o f t i s s u e s i s h i g h e ri n e m b r y o s t h a n i n h a t c h e d c h i c k s . T i s s u e p r o t e i n w a sd e t e r m i n e d b y t h e m e t h o d o f L o w r y , R o s e b r o u g h ,F a r r & R a n d a l l ( 1 9 5 1 ) .

R e s u l t sN o r a d r e n a l i n e a n d a d r e n a l i n e c o n c e n t r a t i o n s i n t h ed u o d e n u m a n d j e j u n u mN o r a d r e n a l i n e a n d a d r e n a l i n e c o n c e n t r a t i o n s i n t h es m a l l i n t e s t i n e o f e m b r y o s a r e s h o w n i n T a b l e 1 . N o r -a d r e n a l i n e w a s n o t f o u n d i n s a m p l e s f r o m e m b r y o su p t o t h e 1 0 t h d a y o f i n c u b a t i o n . I n t h r e e o u t o ff o u r s a m p l e s f r o m e m b r y o s o n t h e 1 2 t h d a y o f i n c u -b a t i o n a s m a l l a m o u n t o f n o r a d r e n a l i n e w a s d e t e c t e d ;t h i s l e v e l i n c r e a s e d m a r k e d l y b e t w e e n t h e 1 2 t h a n d1 5 t h d a y o f i n c u b a t i o n . A d r e n a l i n e w a s n o t d e t e c t e di n m o s t s a m p l e s f r o m e m b r y o s . Two s a m p l e s c o n -t a i n e d a v e r y s m a l l a m o u n t o f a d r e n a l i n e w h i c h w a sv e r y c l o s e t o t h e l o w e r l i m i t ( 0 . 2 l g / g p r o t e i n ) o f t h es e n s i t i v i t y o f t h e f l u o r i m e t r i c m e t h o d u s e d .F i g u r e 1 s h o w s c h a n g e s i n t h e c o n c e n t r a t i o n s o f

a1 0 -

5

04-

0

C

0C DC D0 2z ) 1 0

5

3

d f i

7 1 0 2 0 3 0 1 0 0 A d u l tAge ( d a y s )F i g u r e 1 C h a n g e s i n t h e c o n c e n t r a t i o n o f n o r a d r e n a -l i n e w i t h a g e i n t h e d u o d e n u m ( a ) a n d j e j u n u m ( b ) o ft h e d e v e l o p i n g c h i c k . E a c h c o l u m n r e p r e s e n t s t h e m e a no f s i x t o t e n s e p a r a t e d e t e r m i n a t i o n s ; v e r t i c a l l i n e s i n d i -c a t e s . e . m e a n s .

T a b l e 1 N o r a d r e n a l i n e a n d a d r e n a l i n e c o n c e n t r a t i o n sm e a s u r e d f l u o r i m e t r i c a l l y i n t h e s m a l l i n t e s t i n e a n d r e c t u m o f c h i c k e m b r y o

N o r a d r e n a l i n eE m b r y o n i c a g e ( j u g / g p r o t e i n )( d a y s ) S m a l l i n t e s t i n e1 0 < 0 . 2 ; < 0 . 2 ; < 0 . 21 2 0 . 7 ; 0 . 9 ; 0 . 9 ;< 0 . 21 5 5 . 5 ; 4 . 1 ; 6 . 7 ;5 . 5 ; 6 . 3

1 8 7 . 0 ; 7 . 5 ; 7 . 8 ;6 . 4

A d r e n a l i n e( p g / g p r o t e i n )R e c t u m S m a l l i n t e s t i n e

< 0 . 2 ; < 0 . 2 ; < 0 . 22 . 2 ; 4 . 2 ;4 . 0 ; 2 . 4 ;2 . 8 ; 3 . 66 . 1 ; 7 . 0 ;8 . 8 ; 5 . 3 ;5 . 9 ; 4 . 6 ;4 . 97 . 5 ; 8 . 2 ;5 . 6 ; 5 . 7 ;8 . 8 ; 5 . 0 ;6 . 1

< 0 . 2 ; < 0 . 2 ; < 0 . 2 ;< 0 . 20 . 2 ; < 0 . 2 ; < 0 . 2 ;< 0 . 2 ; < 0 . 2

0 . 5 ; < 0 . 2 ; < 0 . 2 ;< 0 . 2

E a c h v a l u e r e p r e s e n t s a s a m p l e p r e p a r e d f r o m 2 0 t o 1 0 0 e m b r y o s .

R e c t u m

< 0 . 2 ; < 0 . 2 ;0 . 8 ; 0 . 4 ;< 0 . 2 ; < 0 . 21 . 2 ; 0 . 8 ;1 . 3 ; 1 . 9 ;2 . 1 ; 1 . 6 ;1 . 53 . 4 ; 2 . 6 ;3 . 4 ; 3 . 7 ;2 . 0 ; 3 . 7 ;5 . 4

. . . . i . . . . . . .

r i l

r i l

1


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CATECHOLAMINES IN THE CHICK GUT 2 5 9

3 1 UAg e ( d a y s )

3 0 1 0 0 A d u l t

F i g u r e 2 C o n c e n t r a t i o n s o f n o r a d r e n a l i n e a n d a d r e n a l i n e ( j g / g p r o t e i n ) i n t h e rectum o f t h e c h i c k a t d i f f e r e n tages a f t e r h a t c h i n g . E a c h c o l u m n r e p r e s e n t s t h e mean o f f i v e t o t e n s e p a r a t e d e t e r m i n a t i o n s ; v e r t i c a l l i n e s shows . e . means. Open c o l u m n s : n o r a d r e n a l i n e ; h a t c h e d c o l u m n s : a d r e n a l i n e .

n o r a d r e n a l i n e a f t e r h a t c h i n g i n c h i c k duodenum a n dj e j u n u m . T h e n o r a d r e n a l i n e l e v e l i n c r e a s e d t o a m a x i -mum on t h e 3 r d d a y a n d t h e n g r a d u a l l y d e c l i n e d upt o t h e 2 0 t h d a y b y w h i c h t i m e i t h a d d e c r e a s e d t oa b o u t o n e - t h i r d o f t h e p e a k l e v e l . T h e d e c r e a s e d l e v e lwas m a i n t a i n e d d u r i n g t h e r e m a i n d e r o f l i f e . A d r e n a -l i n e was n o t d e t e c t e d i n t h e d u o d e n u m . S i m i l a rc h a n g e s i n t h e n o r a d r e n a l i n e c o n c e n tr a t i o n w i t h ag ei n t h e j e j u n u m t o t h o s e seen i n t h e d u o d e n u m wereo b s e r v e d .

N o r a d r e n a l i n e a n d a d r e n a l i n e c o n c e n t r a t i o n s i n t h e r e c -tumA d e t e c t a b l e amount o f n o r a d r e n a l i n e was p r e s e n t i na l l s i x s a m p l e s f r o m e m b r y o s on t h e 1 2 t h d a y o f i n c u -b a t i o n ( t h e e a r l i e s t e m b r y o n i c s t a g e e x a m i n e d ) ,w h e r e a s a d r e n a l i n e was d e t e c t e d i n o n l y two o u t o fs i x s a m p l e s ( T a b l e 1 ) . F i g u r e 2 s h o w s c h a n g e s i n t h en o r a d r e n a l i n e a n d a d r e n a l i n e l e v e l s a t v a r i o u s d a y sa f t e r h a t c h i n g . T h e n o r a d r e n a l i n e c o n c e n t r a t i o na t t a i n e d a maximum on t h e 3 r d d a y a f t e r h a t c h i n g ,d e c l i n e d a n d t h e n rose g r a d u a l l y . T h e a d r e n a l i n e con-c e n t r a t i o n , on t h e o t h e r h a n d , i n c r e a s e d more s l o w l ya f t e r h a t c h i n g , a t t a i n i n g a maximum on t h e 1 0 t h d a ya n d t h e n p r o g r e s s i v e l y d e c l i n i n g d u r i n g t h e r e m a i n i n gp e r i o d o f l i f e .

D i s c u s s i o nT h e s e r e s u l t s i n d i c a t e t h a t t h e n o r a d r e n a l i n e a n da d r e n a l i n e c o n c e n t r a t i o n s i n t h e i n t e s t i n e o f t h e c h i c kvary g r e a t l y w i t h t h e r e g i o n a n d w i t h a g e . T h e pre-d o m i n a n t c a t e c h o l a m i n e i n t h e duodenum a n dj e j u n u m i s n o r a d r e n a l i n e , w i t h a b a r e l y d e t e c t a b l et r a c e o f a d r e n a l i n e . I n c o n t r a s t , b o t h a d r e n a l i n e a n dn o r a d r e n a l i n e are p r e s e n t i n t h e r e c t u m f r o m t h e 1 5 t hd a y o f i n c u b a t i o n a n d s u b s e q u e n t l y a t a l l ages a f t e rh a t c h i n g . T h e a d r e n a l i n e c o n c e n t r a t i o n i s a p p r o x i -m a t e l y 40% o f t h e n o r a d r e n a l i n e c o n c e n t r a t i o n i ny o u n g c h i c k s . I n t h e r e c t u m , n o r a d r e n a l i n e a p p e a r e db e f o r e a d r e n a l i n e ; t h e same o r d e r o f appearance a si n t h e e m b r y o n i c h e a r t ( I g n a r r o & S h i d e m a n , 1 9 6 8 ) .No e x t r a n e u r o n a l source o f c a t e c h o l a m i n e s i n t h ec h i c k g u t h a s b e e n d e m o n s t r a t e d b y f l u o r e s c e n t h i s t o -c h e m i s t r y ( E v e r e t t & M a n n , 1 9 6 7 ) . I f a l a r g e propor-t i o n o f c a t e c h o l a m i n e s f o u n d i n t h e c h i c k g u t i s neur-o n a l i n o r i g i n , t h e n a d r e n a l i n e as w e l l a s n o r a d r e n a -l i n e c o u l d a c t as a n e u r o t r a n s m i t t e r i n t h e rectums i n c e b o t h are f o u n d h e r e b u t o n l y n o r a d r e n a l i n e i no t h e r r e g i o n s o f t h e i n t e s t i n e . A d r e n a l i n e i s l i b e r a t e df r o m t h e c h i c k e n r e c t u m b y s t i m u l a t i o n o f R e m a k ' snerve ( T a k e w a k i , O h a s h i & O k a d a , 1 9 7 7 a ) . A d r e n a -l i n e a l s o f u n c t i o n s a s a n e u r o t r a n s m i t t e r i n a d r e n e r g i cf i b r e s i n t h e c h i c k e n h e a r t ( D e S a n t i s e t a l . , 1 9 7 5 ) . I n -t e r e s t i n g l y , t h e r e are a p p a r e n t d i f f e r e n c e s i n t h e o r i g i n

. 1 04 0 )C

C0a -a ,

a 5Cq

0 )-c

c oc

, . v . 6 , . . I


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2 6 0 S . KONAKA, H . OHASHI, T . OKADA & T . TAKEWAKI

o f a d r e n e r g i c f i b r e s i n n e r v a t i n g t h e d u o d e n u m a n dj e j u n u m f r o m t h o s e s u p p l y i n g t h e r e c t u m ( B e n n e t t &M a l m f o r s , 1 9 7 0 ) . T h i s c o u l d a c c o u n t f o r t h e a b o v e -m e n t i o n e d r e g i o n a l d i f f e r e n c e s i n t h e c a t e c h o l a m i n ed i s t r i b u t i o n .T h e e a r l y a p p e a r a n c e o f c a t e c h o l a m i n e s i n t h e d u o -d e n u m a n d r e c t u m ( E n e m a r , F a l c k & H ' a n k a n s o n ,1 9 6 5 ) a n d i n t h e g i z z a r d ( B e n n e t t & C o b b , 1 9 6 9 ) , o fc h i c k e m b r y o s h a s b ee n o b s e r v e d w i t h t h e f l u o r e s c e n th i s t o c h e m i c a l t e c h n i q u e . T h e a g e a t w h i c h t h e ya p p ea r e d w a s s i m i l a r t o t h a t o b s e r v e d i n t h e p r e s e n te x p e r i m e n t s . I f t h e l e v e l o f e i t h e r c a t e c h o l a m i n e i np e r i p h e r a l t i s s u e s r e f l e c t s t h e e x t e n t o f i n g r o w t h o fa d r e n e r g i c f i b r e s ( E n e m a r e t a l . , 1 9 6 5 ; I v e r s e n , d eC h a m p l a i n , G l o w i n s k i & A x e l r o d , 1 9 6 7 ) , t h e p r e s e n tr e s u l t s s u g g e s t t h a t c a t e c h o l a m i n e - c o n t a i n i n g f i b r e sd i f f e r e n t i a t e a n d d e v e l o p t o s o m e e x t e n t d u r i n g t h et h i r d w e e k o f e m b r y o n i c d e v e l o p m e n t . On t h e o t h e rh a n d , t h e a p p e a r a n c e o f n e u r o e f f e c t o r t r a n s m i s s i o ni n t h e c h i c k h e a r t i s d e l a y e d f o r s e v e r a l d a y s a f t e rt h e i n g r o w t h o f a u t o n o m i c n e r v e s t o t h e h e a r t ( P a p -

p a n o & L o f f e l h o l z , 1 9 7 4 ) . I f t h i s i s a l s o t h e c a s e i nt h e g u t , t h e a d r e n e r g i c i n n e r v a t i o n o f t h e i n t e s t i n emay b e c o m e f u n c t i o n a l a b o u t t h e t i m e o f h a t c h i n g ,w h e n t h e n o r a d r e n a l i n e c o n c e n t r a t i o n a p p r o a c h e s t h ep e a k l e v e l . T h i s a s s u m p t i o n i s s u p p o r t e d b y t h e f a c tt h a t w e l l - d e v e l o p e d v a r i c o s e n e r v e p l e x u s e s a r ep r e s e n t i n t h e g u t o f c h i c k s s o o n a f t e r h a t c h i n g ( B e n -n e t t & M a l m f o r s , 1 9 7 0 ) , a n d b y f i n d i n g s w h i c h s h o wt h a t a n a d r e n e r g i c c o m p o n e n t i s i n v o l v e d i n r e l a x a -t i o n o f t h e r e c t u m i n r e s p o n s e t o n e r v e s t i m u l a t i o n( T a k e w a k i , O h a s h i & O k a d a , 1 9 7 7 b ) .T h e c o n c e n t r a t i o n s o f n o r a d r e n a l i n e i n t h e s m a l li n t e s t i n e d e c r e a s e d i n t h e a d u l t t o l e s s t h a n 5 0 % o ft h e p e a k l e v e l a t t h e 3 r d d a y . T h i s s u g g e s t s t h a t t h e r emay b e a d e c r e a s e i n t h e n u m b e r o f a d r e n e r g i c f i b r e sp e r g p r o t e i n a n d / o r a d e c r e a s e i n t h e c o n c e n t r a t i o no f n o r a d r e n a l i n e i n e a c h f i b r e . T h i s p r o b l e m r e m a i n st o b e s o l v e d .We a r e g r a t e f u l t o D r T . B . B o l t o n f o r h i s h e l p f u l c r i t i c i s mo f t h e m a n u s c r i p t .

R e f e r e n c e sA N T O N , A . H . & S A Y R E , D . F . ( 1 9 6 2 ) . A s t u d y o f t h e f a c t o r sa f f e c t i n g t h e a l u m i n u m o x i d e - t r i h y d r o x y i n d o l e p r o -c e d u r e f o r t h e a n a l y s i s o f c a t e c h o l a m i n e s . J . P h a r m a c .e x p . T h e r . , 1 3 8 , 3 6 0 - 3 7 5 .A N T O N , A . H . & S A Y R E , D . F . ( 1 9 6 4 ) . T h e d i s t r i b u t i o n o fd o p a m i n e a n d DOPA i n v a r i o u s a n i m a l s a n d a m e t h o df o r t h e i r d e t e r m i n a t i o n i n d i v e r s e b i o l o g i c a l m a t e r i a l .J . P h a r m a c . e x p . T h e r . , 1 4 5 , 3 2 6 - 3 3 6 .B E N N E T T , T . & C O B B , J . L . S . ( 1 9 6 9 ) . S t u d i e s o n t h e a v i a ng i z z a r d : T h e d e v e l o p m e n t o f t h e g i z z a r d a n d i t s i n n e r -v a t i o n . Z . Z e l l f o r s c h . , 9 8 , 5 9 9 - 6 2 1 .B E N N E T T , T . & M A L M F O R S , T . ( 1 9 7 0 ) . T h e a d r e n e r g i c n e r -v o u s s y s t e m o f t h e d o m e s t i c f o w l ( G a l l u s d o m e s t i c u s( L . ) ) . Z . Z e l l f o r s c h . , 1 0 6 , 2 2 - 5 0 .C A L L I N G H A M , B . A . & C A S s , R . ( 1 9 6 6 ) . C a t e c h o l a m i n e s i nt h e c h i c k . I n P h y s i o l o g y o f t h e D o m e s t i c F o w l . e d . H o r -t o n - S m i t h , C . & A m o r o s o , E . C . E d i n b u r g h : O l i v e r &B o y d L t d .CHANG C . C . ( 1 9 6 4 ) . A s e n s i t i v e m e t h o d f o r s p e c t r o p h o t o -f l u o r o m e t r i c a s s a y o f c a t e c h o l a m i n e s . I n t . J . N e u r o -p h a r m a c . , 3 , 6 4 3 - 6 4 9 .D E S A N T I S , V . P . , L A N G S F E L D , W . , L I D M A R , R . & L O F F E L -H O L Z , K . ( 1 9 7 5 ) . E v i d e n c e f o r n o r a d r e n a l i n e a n da d r e n a l i n e a s s y m p a t h e t i c t r a n s m i t t e r i n t h e c h i c k e n .B r . J . P h a r m a c . , 5 5 , 3 4 3 - 3 5 0 .E N E M A R , A . , F A L C K , B . & . H A N K A N S O N , R . ( 1 9 6 5 ) . O b s e r v a -t i o n s o n t h e a p p e a r a n c e o f n o r e p i n e p h r i n e i n t h e s y m -p a t h e t i c n e r v o u s s y s t e m o f t h e c h i c k e m b r y o . D e v e l o p .B i o l . , 1 1 , 2 6 8 - 2 8 3 .E V E R E T T , S . D . & M A N N , S . P . ( 1 9 6 7 ) . C a t e c h o l a m i n e r e l e a s eb y h i s t a m i n e f r o m t h e i s o l a t e d i n t e s t i n e o f t h e c h i c k .E u r . J . P h a r m a c . , 1 , 3 1 0 - 3 2 0 .I G N A R R O , L . J . & S H I D E M A N , F . E . ( 1 9 6 8 ) . A p p e a r a n c e a n dc o n c e n t r a t i o n s o f c a t e c h o l a m i n e s a n d t h e i r b i o s y n t h e s i si n t h e e m b r y o n i c a n d d e v e l o p i n g c h i c k . J . P h a r m a c .e x p . T h e r . , 1 5 9 , 3 8 - 4 8 .

I V E R S E N , L . L . , D E C H A M P L A I N , J . , G L O W I N S K I , J . & A X E L -R O D , J . ( 1 9 6 7 ) . U p t a k e , s t o r a g e a n d m e t a b o l i s m o f n o r -e p i n e p h r i n e i n t i s s u e s o f t h e d e v e l o p i n g r a t . J . P h a r m a c .e x p . T h e r . , 1 5 7 , 5 0 9 - 5 1 6 .L o w R Y , O . H . , R O S E B R O U G H , N . R . , F A R R , A . L . & R A N D A L L ,R . J . ( 1 9 5 1 ) . P r o t e i n m e a s u r e m e n t w i t h t h e F o l i n p h e n o lr e a g e n t . J . b i o l . C h e m . , 1 9 3 , 2 6 5 - 2 7 5 .N O L F , P . ( 1 9 3 4 a ) . L e s n e r f s e x t r i n s e q u e s d e l ' i n t e s t i n c h e zl ' o i s e a u . I I . L e n e r f c o e l i a q u e s e t m e s e n t e r i q u e s . A r c h si n t . P h y s i o l . , 3 9 , 1 5 6 - 2 2 6 .N O L F , P . ( 1 9 3 4 b ) . L e s n e r f s e x t r i n s 6 q u e s d e l ' i n t e s t i n c h e zl ' o i s e a u . I I I . L e n e r f d e R e m a k . A r c h s i n t . P h y s i o l . , 3 9 ,2 2 7 - 2 5 6 .P A P P A N O , A . L . & L 6 F F E L H O L Z , K . ( 1 9 7 4 ) . O n t o g e n e s i s o fa d r e n e r g i c a n d c h o l i n e r g i c n e u r o e f f e c t o r t r a n s m i s s i o ni n c h i c k e m b r y o h e a r t . J . P h a r m a c . e x p . T h e r . , 1 9 1 ,4 6 8 - 4 7 8 .S J O S T R A N D , N . O . ( 1 9 6 5 ) . T h e a d r e n e r g i c i n n e r v a t i o n o f t h ev a s d e f e r e n s a n d t h e a c c e s s o r y m a l e g e n i t a l g l a n d s .A c t a p h y s i o l . s c a n d . , 6 5 , S u p p l . 2 5 7 .T A K E W A K I , T . , O H A S H I , H . & O K A D A , T . ( 1 9 7 6 ) . O n t o g e n e -t i c c h a n g e s i n s y m p a t h e t i c i n n e r v a t i o n o f t h e g a s t r o i n -t e s t i n a l t r a c t i n t h e c h i c k e n . J a p . J . P h a r m a c . , 2 6 , S u p p l .1 6 2 .T A K E W A K I , T . , O H A S H I , H . & O K A D A , T . ( 1 9 7 7 a ) . E v i d e n c ef o r t h a t e p i n e p h r i n e i s t h e t r a n s m i t t e r o f a d r e n e r g i cf i b e r s i n R e m a k ' s n e r v e e x t e n d i n g t o t h e c h i c k e n r e c -t u m . J a p . J . P h a r m a c . , 2 7 , S u p p l . 1 1 3 .T A K E W A K i , T . , O H A S H I , H . & O K A D A , T . ( 1 9 7 7 b ) . N o n - c h o -l i n e r g i c a n d n o n - a d r e n e r g i c m e c h a n i s m s i n t h e c o n t r a c -t i o n a n d r e l a x a t i o n o f t h e c h i c k e n r e c t u m . J a p . J . P h a r -m a c . , 2 7 , 1 0 5 - 1 1 5 .

( R e c e i v e d May 3 1 , 1 9 7 8 .R e v i s e d A u g u s t 1 , 1 9 7 8 . )

Documents

S. Konaka et al- The Appearance of Noradrenaline and Adrenaline and the Developmental Changes in their Concentrations in the Gut of the Chick