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Práctico 6

SINCRONIZACIÓN DE CELOS

Una de las biotecnologías que se emplea corrientemente en los trabajos de inseminación artificial es la sincronización de celos. Se está ajustando a los distintos rodeos: lechero o de cría. Todo esto tiene un componente de conocimiento fisiológico.

Dentro de la metodología de sincronización de celos y dentro de estas tecnologías vamos a ver los distintos tratamientos y dentro de cada tratamiento vamos a ver los productos utilizados, las vías de administración y también una pequeña evaluación de costos; cuales son los beneficios y cuales las desventajas.

Se asocia siempre la sincronización de celos con la inseminación artificial; es decir que cuando se utiliza la biotecnología de sincronización de celos conviene emplear la inseminación artificial.

Los 2 objetivos fundamentales que hicieron a la difusión de la inseminación artificial (IA):

-Uno de los primeros objetivos que antes se lo tenía como objetivo y hoy se lo tiene como ventaja era controlar efectivamente las enfermedades venéreas (campilobacteriosis (vibriosis)).

-Permite la utilización de material genético superior en forma masiva, de estos reproductores previamente fueron sometidos a distintas pruebas: de producción y de progenie.

Paralelamente a cuando ocurría la difusión de la inseminación artificial, en la década del 70, surgen una serie de estudios y trabajos que apuntaban a mayor conocimiento sobre la fisiología reproductiva. Y surgen de esta década algunos métodos que permiten el efectivo control del ciclo estrual: surge entonces la sincronización de celos y el primer objetivo que tuvo fue el de permitir realizar la transferencia de embriones, dado que entre la vaca donante (ovocitos o embriones) y la vaca receptora debían sincronizarse fisiológicamente los ciclos para poder transferir y que esa transferencia sea efectiva.

Más adelante comenzó a vislumbrarse otras posibilidades de la sincronización de celos.

Concepto de sincronización de celos: “método de reproducción que permite hacer que un grupo de vientres tenga un celo fértil en un día o días programados, realizando inseminación artificial, si se quiere,

sin detección de celos” y permitiendo la reanudación de la actividad cíclica posparto al menos en forma parcial dentro del rodeo.

Una de las metodologías permite sacar a las hembras del anestro fisiológico posparto.

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Los objetivos de la sincronización de celos son: *Acortar los el período servicios y por ende el período pariciones. Ya vamos a ver que con las distintas metodologías lo que podemos normalmente lograr para inseminación artificial nosotros en un ciclo de 18-20-24 días, lo podríamos estar logrando en 1-2días. Por ende va a tener un impacto muy grande en las tareas reales de campo *Permite hacer servicios artificiales sin detección de celo. Hemos llegado hasta hacer inseminación artificial en un solo momento, porque hoy podemos no solamente sincronizar celos sino también las ovulaciones y descargar la dosis de semen en un momento y lograr un muy buen % de preñez, esto se logró gracias a los estudios que se hicieron de la fisiología reproductiva y más específicamente al conocimiento que se incorporó hace varios años sobre las ondas de crecimiento folicular. Yo creo que este fue el impacto mayor en fisiología reproductiva (atendiendo a lo que es la fisiología del ciclo estrual), al haber descubierto que habían ondas de crecimiento folicular y cual era la dinámica folicular. *Inducción de actividad sexual cíclica de animales en anestro. Ventajas de la sincronización de celos:

-El cuello de botella o limitante de la inseminación artificial es la detección de celos, hay ciertas metodologías de sincronización donde elimina el problema de detección de celos. -Al reducir el período de servicio y por ende de parición se concentran las tareas de manejo. -Posibilita un mejor manejo del forraje debido a que vamos a manejar grupos de animales en el mismo estado fisiológico y por lo tanto teniendo los mismos

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requerimientos. Entonces lo que nosotros podríamos estar haciendo a campo es hacer coincidir la época de mayores requerimientos de la vaca con la mayor oferta de forraje (por ejemplo en cría). En rodeo lechero lo que buscaría sería la producción constante de leche. -Aumenta la cabeza de parición y de destete. -Se aumentan los pesos promedio de terneros al destete. -Vamos a tener lotes parejos de terneros. -Se reducen el intervalo entre partos, y al hacerlo tanto en rodeo de cría como en tambo se produce un aumento en la eficiencia de producción de carne y leche respectivamente. -Permite mejorar la eficiencia reproductiva en aquellos rodeos donde la detección de celos es la limitante. Por ejemplo durante los últimos años se logró mejorar los índices de preñes en los rodeos ya sea de índicas y cruzas con índicas y también en los rodeos lecheros. -Ciertas metodologías de sincronización que van a permitir la reanudación de la actividad cíclica postparto. Para lograr tener éxito en los programas de sincronización de celos debemos tener un acabado conocimiento en: -Fisiología del ciclo estrual. Bases biológicas sobre dinámica folicular ovárica, regresión del cuerpo lúteo, y ovulación. -Productos hormonales y sus efectos sobre el ciclo estrual. -Y los factores de manejo del rodeo que van a reducir el anestro e incrementar la tasa de preñez. FISIOLOGÍA DEL CICLO ESTRUAL

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Ciclo estrual con las diferentes etapas: veníamos viendo c/u proestro, estro, metaestro y diestro, con una definición de lo que pasa en cada una. Antiguamente era la fase folicular y la fase luteal. La fisiología resulta más fácil explicarla a través de los eventos que suceden entre una ovulación y la otra. Después de la ovulación viene el metaestro que es un “período de organización del cuerpo lúteo”, y si se esta organizando el cuerpo lúteo luego de la ovulación obviamente se están incrementando los niveles de progesterona. Este el momento en el que el ovario se está formando un cuerpo lúteo (está creciendo a partir de lo que era la estructura del folículo), las células de la granulosa comienzan a luteinizarse bajo la acción de una hormona gonadotrófica que es la LH, ese folículo ya ovulado (el ovocito ya depositado en el oviducto) comienza a transformarse y las células de la granulosa comienzan a formar una estructura distinta que va organizando un cuerpo lúteo que va a sintetizar niveles crecientes de progesterona. Paralelamente a que esto está ocurriendo en otra parte del ovario ocurre un reclutamiento de folículos antrales (terciarios) (cohorte de folículos) bajo el soporte gonadotrófico de la FSH (folículo estimulante) en los días 5-7 estamos en un metaestro tardío y ya llega a cierto nivel de organización el cuerpo lúteo los niveles que fueron crecientes de progesterona se estabilizan (van llegando a la meseta). Esta cohorte de folículos al 1,5 día aproximadamente o 2 días (36-48 hs) de inciado el crecimiento uno de estos folículos empieza a diferenciarse (empieza a crecer más) y lo vamos a llamar DOMINANTE. En la medida que este folículo dominante va creciendo más el grupo de folículos que lo acompañaban comienzan a regresar (regresión prematura) y hay niveles crecientes de estrógeno. La relación de progesterona en alta concentración y de estrógeno en baja concentración es captada por el hipotálamo que descarga GnRH con pulsos de baja frecuencia y gran amplitud. La LH se descarga con la misma frecuencia y gran amplitud que la GnRH, que alcanza para sostener un cuerpo lúteo pero no alcanza para llevar a un folículo dominante a la ovulación, ya que para madurar o desarrollarse este folículo necesita mayor frecuencia de la LH; por ello durante la FASE LUTEAL los folículos se sostienen un tiempo y luego regresionan. Cuando este folículo comienza la etapa de regresión hay una caída en los valores de estrógeno, y como los estrógenos estaban causando un feedback (-) con respecto a la hipófisis y descarga FSH, y ese nuevo impulso de FSH sirve para estimular un nuevo reclutamiento folicular teniendo una 2º onda de crecimiento folicular, probablemente los estrógenos que producirá el folículo dominante de esta onda estén causando a nivel de la mucosa uterina ciertos sitios receptores oxitocina. Hacia el día 17 aproximadamente (16-19) termina el diestro y el cuerpo lúteo comienza a lisarse, empieza a ocurrir un mecanismo de luteólisis, esos estrógenos que originaron los sitios receptores para oxitocina permiten que la oxitocina sea captada a nivel del endometrio uterino se transforma por medio de unas enzimas en prostaglandinaF2alfa (PF2alfa) y la PF2alfa en una acción bastante rápida lisa el cuerpo lúteo, caen los niveles de progesterona, y para ese momento otro folículo dominante de otra onda que estaba produciendo estrógeno, el hipotálamo capta el descenso de progesterona y ciertos niveles de estrógeno y comienza a aumentar los pulsos de frecuencia (unidades de descarga) y por ende aumente la frecuencia de descarga de la LH y va a ocurrir un mecanismo de feedback (+) en el momento en el que el estrógeno alcanza el nivel máximo en sangre hacia final del proestro y activan un área del hipotálamo que aún no había entrado en juego que es el centro cíclico, y este centro cíclico responde con una

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descarga masiva de GnRH (aumento de la frecuencia de los pulsos) y por lo tanto de LH, y el pico de LH se da en las primeras 6 horas del ESTRO, y como consecuencia la ovulación 24 horas después (en el comienzo del metaestro) En vaca cebu hay una tendencia a tener más de tres ondas, por lo general 4 ondas de crecimiento folicular y el ciclo (ovulación-ovulación) era de 24-25 días

El impulso para que se de esta ovulación es el pico de LH que se da 6 horas de iniciado el celo, por lo tanto 6+24=30 horas de iniciado el celo que es cuando la vaca ovula. Un folículo antral desde que es reclutado hasta que alcanza la ovulación tarda (día 15-22) unos 6-8 días. Esto es importante porque cualquier tratamiento de sincronización que varíe este tiempo se obtiene MENOS PREÑES. Nosotros lo que vamos hacer con los tratamientos de sincronización es tratar que un grupo de vientres coincidan en el momento del ciclo estrual El cuerpo lúteo fisiológicamente tarde en lisarse 24-36 horas (1-1,5 días) lo que quiere decir que los niveles de progesterona desde que el cuerpo lúteo es funcional y comienza la lisis hasta que alcanza los niveles menores de 1 nanogramo (ng) y dejando de tener efecto fisiológico ya la progesterona (valor mínimo) tenemos 24-36 horas. Esto también se tiene en cuenta en algunos tratamientos de sincronización.

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La longitud del ciclo de 21 días es teórico, no existe en la práctica, ya que dura 18-19-20 días (dos ondas) y saltamos a 22-23días (3 ondas) Al ciclo estrual si lo dividimos en las diferentes fases: cuerpo lúteo en formación, cuerpo lúteo funcional, fase folicular y una pequeña fase de celo y ovulación. Si vamos a un rodeo en cualquier momento deberíamos tener un 5% en fase celo y ovulación (30hs, redondeamos en 1 día aprox.); un 25-28 % va a estar en la fase de

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cuerpo lúteo incipiente o en formación; el 52-60 % de rodeo lo vamos a tener con un cuerpo lúteo funcional y un 15% en la fase folicular (día 17 hasta el celo). Todo esto es bueno tenerlo en cuenta porque realmente es lo que sucede en la práctica.

Hay 3 metodologías de sincronización de celos: -La que apela al uso de la prostaglandina F2alfa (PGF2alfa), fue una de las primeras, tal es así que en la década del ´70 se logró sintetizarla y se llegó al primer tratamiento. La fundamentación es que la PGF2alfa lisa el cuerpo lúteo funcional. Esta técnica se usaba como única, cuando no se conocía lo de ondas de crecimiento folicular.

Cuando se descubre que existen ondas de crecimiento folicular surge otra metodología - Progesterona y Estrógeno. - Y la última que surgió es la que utiliza GnRH + PGF (OVSYNCH)

La PGF2alfa lisa el cuerpo lúteo funcional. El primer tratamiento que se elaboró (década ´70) se basaba en la aplicación de 2 dosis de PGF2alfa y que por primera vez permitía la inseminación artificial con ciertos logros sin detección de celos. El primer tratamiento consistía en la aplicación de una primera dosis PF2alfa el primer día, y una segunda dosis el día 11. La PGF2alfa se aplica por inyección intramuscular

profunda con la aguja 1.2x40 cargamos 2 cm3 con 500 microgramos de cloprostenol (PGF2alfa).

La inseminación se hace en forma sistemática a las 72 hs (día 3) y se repetía a las 96 hs (día 4) (sin detección de celos). Es decir que en un rodeo de 100 vientres tenemos 200 dosis de PGF2alfa y 200 dosis de semen, 100 a las 72 hs y otras 100 a las 96 hs. Juntamos las vacas por manga y a medida que van pasando le aplicamos la 1º dosis, desde el punto de vista

fisiológico va a ejercer efecto en el grupo de animales con cuerpo lúteo funcional, a

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todo este grupo que tiene un cuerpo lúteo que está sintetizando progesterona, hace que caigan los niveles de progesterona, y con esta caída sobreviene la fase folicular y es como si a todos estos animales los condicionara a punto de entrar en fase folicular. Solo esta 1º dosis afecta solo a este grupo de hembras (grupo B) (52-60% del rodeo), y las lleva a la fase folicular (C). Las hembras del grupo A y grupo C al

momento de aplicación de la primer dosis de PGF2 alfa no se ven afectadas. 11 días después vamos a aplicar una 2º dosis de PGF2alfa a todos los animales (ya que no sabemos en que fase está cada uno); al momento de esta 2º dosis el grupo que reaccionó a la 1º dosis de PGF2alfa y que fue llevado a fase folicular va a estar en su totalidad en fase de cuerpo lúteo funcional (grupo B) y por lo tanto va a reaccionar por 2º vez a las dosis de PGF2alfa. Las hembras que al momento de la 1º dosis

estaban en fase de cuerpo lúteo en formación (grupo A) y que no reaccionaron ante esa primer dosis van a estar 11 días después en fase de cuerpo lúteo funcional (grupo B); y por último las hembras que inicialmente, al momento de la 1º dosis de PGF2alfa, estaban en fase folicular (Grupo C) y que obviamente no reaccionaron a la 1º dosis de PGF2alfa, 11 días después estarán en fase de cuerpo lúteo funcional (grupo B). Es decir que al momento de la 2º dosis de PGF2alfa todas las hembras que se encuentran ciclando van a reaccionar a la 2º dosis de PGF2alfa, ya que todas las hembras están en la fase de cuerpo lúteo funcional (grupo B) y por ende se van a lisar sus cuerpos lúteo funcionales llevando a todo este grupo de hembras al inicio de la fase folicular (grupo C). Y se determino inseminar sistemáticamente a la hora 72 y hora 96 después de esta segunda dosis (día 14 y día 15) y lograron buenos % de preñez. En algunos rodeos se obtuvieron buenos % de preñez (48-56% después de un primer ciclo) y en otros rodeos un 20-30% de preñez. Y la explicación de esta diversidad de resultados se ve que depende de al no detectar celos no distinguimos las vacas en anestro de las que están ciclando. Cuando se obtuvieron buenos resultados (48-56% de preñez) este resultado proviene de si la retención normalmente es de un 60-70 % y yo para comenzar a inseminar debo tener un % de celo diario del 4% (80% de ciclicidad), esto resulta en 0,6retención x 80ciclicidad= 48% de preñez y 0,7retención x 80ciclicidad= 56% de preñez. Entonces la ventaja de este tratamiento es la no detección de celos pero los % de preñez obtenidos eran variables: algunos buenos (rodeos con buen estado corporal) y la mayoría malos (mal estado corporal).

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Tratamiento que se hizo en el campo experimental sobre rodeo de cría (aberdeen angus), seleccionaron un grupo de vaquillonas. De acuerdo al período óptimo de inseminación que es de 12 horas es difícil preñarla. Se puede observar la curva de distribución de celos y nos lleva a deducir que la PGF2alfa sincroniza los celos, pero no el momento de presentación del celo (ya que no es homogenea, hay una dispersión)

Cuando surgió este tratamiento se dedujo que había que entrar a inseminar a la hora 72 porque la mayor cantidad de las vacas entraban en celo a la hora 60 y 12 horas después de entrar en celo una vaca debo inseminar (hora 72) y otro grupo para inseminar a la hora 96 (entraban en celo a la hora 84). El intervalo de tiempo entre la aplicación de la dosis de prostaglandina y la presentación del celo; va a depender del momento de la onda en el cual está el folículo dominante cuando se lisa el cuerpo lúteo, quiere decir que si la descarga de prostaglandina se da en una vaca cuyo folículo dominante está en fase de crecimiento o fase estática temprana va a presentar celo rápidamente (36-48 horas); pero si la prostaglandina fue aplicada en una vaca que está en la fase estática tardía o fase de regresión ese folículo no va ir a ovular y tenemos que esperar una nueva onda folicular, y desde que es reclutado hasta la ovulación este folículo antral tarda de 6-8 días, por ello en este tratamiento la dispersión es de 6-7 días. En los tratamientos de sincronización de celo con PGF2alfa existe: -Dispersión en la presentación de celos. -No podemos hacer inseminación a tiempo fijo ya que el % preñez va a ser desastroso.

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En consecuencia la siembra sistemática resulta no del todo convincente en cuanto a los % de preñez, por lo que sería necesario detectar celo, para tener eficiencia biológica, durante 6-7 días -Los tratamientos con PGF2alfa para obtener buenos resultados están basados en la “buena detección de celos”

Algunas investigaciones llegaron a concluir que es más eficiente una segunda dosis de PGF2alfa a los 14 días. Detección de celos 6-7 días. Con esto se logra si bien las dosis de prostaglandinas son iguales (200 dosis) pero abaratamos las dosis de semen (100 dosis de semen) el costo es relativo, lo que economizo en semen lo tengo que pagar en operario que me detecte celos. Y con este tratamiento si no son razas índicas ni cruzas vamos a tener buena eficiencia (osea con aberdeen angus, shorton, Hereford demuestran claramente los signos de celo).

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Ejercicio 1: Tratamiento con prostaglandina a dos dosis (día 1 y día 11) con detección de celo e inseminación artificial después de cada inyección. 100 animales 4% celo diario. 80% ciclicidad Buen semen, no hay errores de exactitud e intensidad. Retención de siembra del 60%. Calcular: nº dosis de semen y número de dosis de PGF2alfa. Costo actual de una dosis de PGF2alfa= $4 (con iva) Costo estimativo de dosis de semen= $50 La concentración de los celos de los tratamientos con PGF2alfa ocurre a la hora 60 pero la dispersión es grande (de 6-8 días). Primera dosis de Prostaglandina F2alfa, todos los animales que estaban en el grupo B con cuerpo lúteo funcional lo llevan al día 17 (lisis luteal, caída de los niveles de progesterona, y a punto de entrar en fase folicular). 60% de los animales entran en fase folicular y hay un 15 % (grupo C) que ya están en fase folicular, esto quiere decir que 75% van a entrar en celo en ese ciclo 100 animales x 0,8 (ciclicidad) x 0,75 (entran en celo) = 60 animales detecto celo e insemino (primera parte), (primeros 6-8 días). Segunda dosis de Prostaglandina F2alfa (40 dosis), se le aplica a los animales que no se inseminaron es decir a 40 animales (ya que no sabría distinguir entre el 20% de animales en anestro y el otro 20% ciclando (que al momento de la primera dosis de PGF2alfa estaban en el grupo A). Insemino 20 animales que son los que me entran en celo. Desde el momento en que se aplica la prostaglandina el grueso de vacas que entran en celo son a las 60 horas. A la hora 36 entrarían las primeras vacas en celo, mayor cantidad a la hora 48 y hora 60 el grueso de las vacas. Por ende el grueso de las inseminaciones las voy a tener entre el 3-4 día. Detección de celo e inseminación artificial en rodeos chicos (100 vientres) es factible de hacerlo. En un rodeo grande (500 vacas) hay que analizar la posibilidad de poder hacerlo: abría que ver la viabilidad de hacerlo ya que si queremos sincronizar con prostaglandina debemos detectar celo, sino debería elegir otro tipo de tratamiento. Dosis de PGF2alfa= 100 + 40 = 140 140 dosis x $4 = $560 Dosis de Semen= 60 + 20 = 80 80 dosis x $50 = $4000 Mano de obra del técnico= ¿? Vacas preñadas: 60 x 0,6 (retención) + 20 x 0,6 36 vacas preñadas + 12 vacas preñadas = 48 vacas preñadas Otro tratamiento que se utiliza solo cuando hay una buena detección de celo es el siguiente:

Se sincroniza en el término de 12-13 días.

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Detectamos celo durante 7 primeros días, el día 7 a la tarde vamos a descargar una dosis de PGF2alfa a las vacas que no hemos inseminado, y luego seguir detectando celo. Ejercicio 2 100 vacas 4 % de celo diario. Ciclicidad del 80 % (en 20 días) (las insemino entre el día 1 y el día 13 inclusive) 4 vacas/día entran en celo, entonces en los primeros 7 días x 4 =28 vacas inseminadas Las dosis de PGF2alfa que compro son 100-28= 72 dosis PGF2alfa (dentro de los cuales 20 van a estar en anestro y por ende los que vamos a inseminar van a ser 80-28= 52 animales) Fundamentación: Los primeros días van entrando de a poco en celo (4% celo diario), y después del día 7-8 van a entran un montón de vacas en celo. Los primeros 7 días de detección de celo, van a entrar en celo las vacas que estan desde el día 13 del ciclo estrual. Cuando descargo la dosis de PGF2alfa (simultaneamente detecto celos) (el día 7), está entrando en celo la vaca del día 12, y se ha producido un amontonamiento de vacas, ya que van a quedar vacas del grupo B más las vacas del grupo A no quedan vacas del grupo C ya que presentaron celo y las inseminamos. No quedan animales en fase de formación del cuerpo lúteo. Es decir que vamos a estar inseminando después de la dosis de PGF2alfa 52 animales, lo que quedó del grupo B (parte en fase folicular y parte en fase luteal) y grupo A (ahora esta en fase luteal). La concentración de celos se va a dar a la hora 60. Entonces uso: Dosis de PGF2alfa= 72 72 dosis PGF2alfa x $4 = $288 Dosis de semen = 80 80 dosis semen x $50= $4000 Para este tratamiento debo detectar muy bien celo. Los programas de sincronización con PGF2alfa: -El intervalo entre la dosis de PGF2alfa y la aparición del celo dependerá del desarrollo folicular al momento de lisarse el cuerpo lúteo -Hay una gran dispersión en el momento de presentación del celo (7 días). -En los tratamientos a 2 dosis, en la segunda dosis va a encontrar a todos los grupos con cuerpo lúteo funcional. La respuesta al celo puede ser superior al 90 % pero nunca al 100%. El grado de sincronía de los celos será mayor después de la 2º dosis de PGF2alfa (menor dispersión, pero a pesar de esto no voy a tener buenos resultados con inseminación sistemática (72 y 96 horas) ya que las que entran antes y las que entran después no las voy a poder preñar). -En razas índicas y cruzas con cebu (cebu, bramhan, nelore, que hay mucho en corrientes, chaco, en el norte con el fin de hacer más rústicas las razas en esas zonas (calor, garrapata, etc)) es difícil la detección de los signos de celos (por ende no sería bueno utilizar este tipo de tratamiento (PGF2alfa) por lo importante que es la detección de celos para obtener buenos resultados. Los productos para sincronización con PGF2alfa que se utilizan son lo sintéticos: naturales y análogos. Mayormente son utilizados los análogos (son más potentes y se utilizan en dosis muy pequeñas).

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Las marcas comerciales de estos productos son:

Lutalyse: sintética natural (dosis de 15-30 mg) Diaprost: sintética analoga (dosis de 0,75 mg) Ciclar: Espumate: sintética análoga (dosis de 500 micro gramos o 0,5 mg)

El avance del estudio de la fisiología reproductiva permitió el desarrollo de nuevas técnicas de sincronización (no significa que los tratamientos de PGF2alfa hayan desaparecido, siguen vigentes para rodeos pequeñitos, ya que es económico), se idearon métodos que no solo controlaran la viabilidad o la vida media del cuerpo lúteo sino también que involucrara las ondas de crecimiento folicular.

SINCRONIZACIÓN CON PROGESTERONA Y ESTRÓGENOS En principio vamos a ver los productos utilizados: MGA: se utiliza en los EEUU, es de difícil uso dado que en la Argentina los no manejamos a los animales en condiciones estables (estabulares), en definitiva no podemos administrar correctamente el acetato de melengestrol que es algo similar a como actúa la progesterona.

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PRID: se coloca en lo profundo de la vagina, 11 cm de largo, mientras esté colocado va a liberar progesterona, se comercializó primariamente en Europa

SINCRO-MATE-B: Dispositivo subcutáneo (implante) en la oreja, 2 cm largo y diámetro como el de una birome. Va ir liberando un producto que es similar a la progesterona (progestágeno) que se denomina Norgestomet (3mg), se utiliza este implante junto con una inyección que lleva 5 mg de valerato de estradiol. Este implante puede liberar Norgestomet por más de 20 días, pero hay deficiencia en la sincronización cuando uno lo deja mucho tiempo. CRESTAR: implante subcutáneo similar al anterior CIDR: dispositivo neozelandés similar al DIB, se coloca en lo profundo de la vagina. Hoy está costando unos $60-$70 cada uno.

DIB (dispositivo intravaginal bovino): dispositivo nacional similar al CIDR pero más económico ($20). Lo hemos utilizado para la sincronización tanto en el rodeo de cría como en las vacas de tambo. Este producto sirve para 2 usos (un ciclo y después el retorno)

PROCICLAR: dispositivo más reciente en el mercado. Intravaginal.

Todos los dispositivos intravaginales son similares, liberan progesterona y van acompañados de una dosis de benzoato de estradiol. Se coloca en el PVC que tiene un embolo, se introduce por vagina y se presiona para liberarlo. Una vez dentro se empieza a liberar la progesterona y las mucosas la absorben y va pasando al torrente sanguíneo y pasan al órgano blanco de la

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progesterona que es el centro superiores (hipotálamo e hipófisis), empieza a causar un mecanismo de feedback (-), (tratamientos de 7-8 días, es decir que en el día 10 ya tenemos todos inseminados)

PRIMEROS TRATAMIENTOS UTILIZADOS Lo primero que se utilizó fue el PRID, se comercializó en Europa y Argentina durante 2-3 años, el dispositivo se coloca al día cero en el protocolo de trabajo y se lo retira el día 12 (límite aceptado para no afectar la fertilidad de los celos inducidos), la inseminación artificial se puede efectuar en forma sistemática a las 48 horas (todo el rodeo) y 72 horas (todo el rodeo). Quiere decir que si retiramos el dispositivo el día 12, el día 14 (todo el rodeo) y el día 15 (repito todo el rodeo) estamos inseminando. Este dispositivo esta recubierto en silicona y esta impregnada en progesterona. El día cero que aplicamos el dispositivo aplicamos una dosis de 2mg de benzoato de estradiol (inyección intramuscular) se deja el PRID durante 12 días y la inseminación a las 48 y 72 horas (día 14 y 15). Lo dejamos 12 días y mientras haya progesterona (niveles altos) no va haber ovulación, quiere decir que cuando colocamos el PRID 12 días transcurren no permite que maduren los folículos (entrar en fase folicular) y animales en fase luteal (desde el día 5 al día 17 (12 días)) cuando se les retire el dispositivo van a ovular (coincide este periodo con la fase luteal). Los animales con cuerpo lúteo en formación, van a ser afectados por el benzoato de estradiol que actúa como antiluteotrófico (reacción de feedback (-) sobre la liberación de LH) y asegura la atresia folicular e induce una nueva onda y luteolítico (estimula la síntesis de PGF2alfa por la mucosa uterina) en el 50% que tienen cuerpo lúteo en formación, si en el momento que iniciamos el tratamiento alguna vaca ovuló el benzoato de estradiol le impide la formación del cuerpo lúteo es ANTILUTEOTRÓFICO, y por otra parte actúa como LUTEOLÍTICO en el 50% de los animales con cuerpo lúteo en formación (es decir de un 28% de animales, afecta a un 14% de animales). Lo que se hace con estos dispositivos es simular la acción del cuerpo lúteo a aquellos animales sin cuerpo lúteo (como liberador de progesterona) durante 12 días con niveles de progesterona altos (en realidad son subluteales) entonces cuando retiramos el PRID van a estar en fase folicular, hay un 50% de animales con cuerpo lúteo en formación que no reaccionan al benzoato de estradiol y van a estar al final del tratamiento con un cuerpo lúteo funcional y tenemos que aplicar PGF2alfa (a todos los animales porque no sabemos cuales son estos). Lo que estamos haciendo es agregar niveles subluteales de progesterona (más lo que producen los cuerpos lúteos funcionales presentes) y 17-beta-estradiol (estrógeno natural) (más el estrógeno que producen los folículos dominantes) y el feedback (-) se acentúa, lo que quiere decir que los pulsos son de más baja frecuencia y mayor amplitud (GnRH), bajan el soporte gonadotrófico a los folículos de LH y los folículo dominantes va a la atresia (ya que entran forzadamente a la fase estática tardia o fase de regresion folicular) y en otra parte del ovario se recluta una nueva onda hacia los 4-4,3 días. Entonces lograron sincronizar la onda de crecimiento folicular a través de la lisis sincronizada de todos los folículos dominantes independientemente del estado del ciclo en que estaba la vaca. Después de la atresia surge una nueva onda (hay dos caminos para crear una nueva onda de crecimiento folicular son: ovulación y atresia de un folículo dominante), Cuando utilizo el benzoato de estradiol en este tratamiento nuevo reclutamiento de folículos antrales para la nueva onda se reclutan entre el día 4-5 (más cercano al día 5).

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Cuando se utiliza otra sal de estrógeno que es el valerato de estradiol el nuevo reclutamiento se produce entre el día 5-6. Entonces en cualquier parte del ciclo ya sea el 17-beta-estradiol, benzoato de estradiol o valerato de estradiol aplicado con progesterona o progestágenos suprimen el desarrollo folicular e inducen el crecimiento sincrónico de una nueva onda de crecimiento folicular (por el feedback (-) hay un golpe de FSH). (2mg de estrógeno). El folículo dominante de esta nueva onda sincrónica va a ovular entre las 60-84 horas (IATF 48 y 72hs) por retiro del dispositivo. Entonces la explicación fisiológica más importante es la anteriormente nombrada; lo otro es que lo mencionamos con el benzoato de estradiol es que actúa como antiluteotrófico (aquellas vacas que recién han ovulado) y en aquellas vacas que ya estaban con un cuerpo lúteo incipiente (28 % del rodeo) lisa el cuerpo lúteo pero no a todos sino al 50% de las que están en este grupo es decir un 12,5% del rodeo, lisa tambien los cuerpo lúteo avanzados (día 15-16 del ciclo estrual, por mecanismos de luteólisis, se crean receptores para oxitocina…). El otro 50% (14% del rodeo) 12 días después cuando retiro el dispositivo van a tener cuerpo lúteo, si no le aplico PGF2alfa para lisarle el cuerpo lúteo las pierdo; por eso una vez retirado el dispositivo aplico a todo el rodeo una dosis de PGF2alfa (si el productor tiene para invertir en PGF2alfa se recupera la inversión con un porcentaje de estas preñeces logradas gracias a su aplicación)

Un folículo cuando va a pasar a la ovulación tiene unos 20-22 mm, está deformando bastante la superficie del ovario

TRATAMIENTOS MEJORADOS ACTUALES Nosotros en el campo escuela en distintos rodeos, de cría en vaca, vaquillonas y en tambo. Se hace un tratamiento corto, dejemos el dispositivo durante 8 días (el que utilizamos es el DIB, pero podríamos utilizar el PROCICLAR o cualquier dispositivo que libere progesterona). El primer día colocamos el dispositivo intravaginal +

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inyección de benzoato de estradiol 2mg sabemos que hacia el día 4 va haber un reclutamiento folicular sincronizado en todo el rodeo que es cíclico (se va a dar un feedback (-), bajan los pulsos de GnRH y por lo tanto de LH y los folículos dominantes van a la atresia sincronicamente) y sabemos que aquellas vacas que ovularon anteriormente (2-3 horas antes) se le impide la formación del cuerpo luteo (4%-5% del rodeo) y por otro lado también el benzoato de estradiol lisa los cuerpos lúteos incipientes (en un 50%) y, el día 8 hay casi un 30% de vacas con cuerpo lúteo funcional (que son el 50% de las que tenían cuerpo lúteo incipiente + las que estaban en fase de cuerpo lúteo funcional temprano (dia 6-7-8-9 del ciclo estrual)) retiramos el DIB colocamos una dosis de PGF2alfa, el día 9 (24 horas después de retirado el DIB y colocado la dosis de PGF2alfa) vamos a colocar una dosis de benzoato de estradiol (en vez de ser 2mg coloco 1mg) (intramuscular) y 28 horas después de colocado el benzoato de estradiol vamos a inseminar artificial a tiempo fijo. Este tratamiento es muy efectivo para la preñez. Cada día tenemos un 4 % de vacas que están en algún día en particular del ciclo estrual. Por ejemplo aquellas que iniciado el tratamiento estaban en el día 6, 7,8 y 9 en un ciclo de 20 días, corresponderán a 4 x 4% = 16% del rodeo que sumado al 14% de las que conservaron cuerpo lúteo que estaban con cuerpo lúteo incipiente da 16% + 14%= 30% con cuerpo lúeo funcional en el momento que retiro el DIB. El otro 70% de las vacas que restan fueron mayormente las que lisaron cuerpo lúteo: muchas naturalmente a medida que iban pasando por el día 17 y otros por acción del benzoato de estradiol (luteolítico) que tenían cuerpo lúteo incipiente (14% del rodeo cíclico). Y un 4% de ese 70% no se les formo por la acción antiluteotrófica del benzoato de estradiol. Lo que van a tener en común todos los grupos de vacas es la NUEVA ONDA DE CRECIMIENTO FOLICULAR. Y después de aplicado la PGF2alfa también van a tener en común que no van a tener cuerpo lúteo funcional. Es decir que luego de retirado el DIB y aplicada la PGF2alfa voy a tener a todas las vacas ciclantes en igualdad de condiciones. Las diferencias pueden deberse a la edad de la vaca y por ende a la velocidad de crecimiento folicular. Suponiendo que el reclutamiento folicular fue el día 4, el día 9 ya tengo en todas las vacas un folículo más o menos grande (si bien es cierto que no son todos exactamente del mismo tamaño, pero sí son similares), cuando le coloco el benzoato (1mg) de estradiol (día 9) estoy en el día 5 de la onda de crecimiento folicular (24 horas después de haber retirado el DIB), este dosis de benzoato de estradiol me va a activar el centro cíclico (debido también a las bajas concentraciones endógenas de progesterona) se produce una descarga de alta frecuencia de GnRH que va a conducir a una alta frecuencia en los pulsos de LH y que horas mas tarde conducen a la ovulación (sincronizar la ovulación), y la inseminación la vamos a estar realizando 28 horas después de la descarga del benzoato de estradiol para caer en el período optimo de IA (ya que la ovulación se produce a la hora 40 de aplicada la dosis de benzoato de estradiol y por ende insemino 12 horas antes)

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Si la distancia de la ovulación y la aplicación del benzoato de estradiol es de 40 horas (40-12=28). Esto asegura los mejores índices de fertilidad. La implicancia que tiene este tratamiento desde el punto de vista práctico es enorme, porque los días de trabajo fueron: 1 día de trabajo: para 100 animales, para introducir el DIB + benzoato de estradiol (3 horas) + 1 días de trabajo para sacar el DIB (2 horas) e inyectar PGF2alfa + 1 día de trabajo aplicación benzoato de estradiol (2 horas) + 1 día IATF. En 4 días de trabajo nos aseguramos más del 50 % de preñez. Con este tipo de trabajo en rodeo de cría en vaquillonas se puede lograr entre 56-60% de preñez. En vacas lecheras en lactancia a los 60-80 días de paridas (buena producción lechera en ese momento) tenemos aproximadamente entre 39-45% de preñez. En vaquillonas tanto en cría como en tambo 56-58% de preñez.

Gracias a esta sincronización podemos realizar IATF (inseminación a tiempo fijo) gracias a que estamos sincronizando ondas de crecimiento folicular y como si esto fuera poco además sincronizamos la ovulación (con la última dosis de benzoato de estradiol). Todo esto con una eficiencia biológica más que aceptables (preñeces) siempre y cuando tenga una buena alimentación asegurando un buen porcentaje de ciclicidad del rodeo (estado corporal de 3 en una escala del 1-5) 50-56% de preñez, recordando que para lograr esos valores necesito un 80% de vacas ciclando y un 70% de retención ((80x70)/100). Esto sería una muy buena solución cuando hay tenemos rodeos con problemas en la detección de celos (ya sea por exactitud o intensidad), y en

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aquello rodeos donde es difícil la detección por más que el personal para la detección sea muy bueno (hacienda cruza o cebu). En tambo se logra acortar el intervalo entre partos y prolongar un poco el período de espera voluntaria (después del parto) que vamos a lograr un mejor porcentaje de retención, y sin perder tiempo en la detección de celo.

Supongamos que logramos un 50-52% de preñez, podríamos los retornos reinseminarlos y esto también lo podemos sincronizar reusando el DIB (hay que lavarlos y cambiarle las colillas (azules primero y verde las reusadas) (1g de progesterona) (si usé PROCICLAR que es con un nivel menor de progesterona (0,75g) y un solo uso debería emplear uno nuevo. Ahora para competir con PROCICLAR se largó el DIB de 0,5g con 1 solo uso.) fue usado en la IATF y en el retorno, los retornos se resincronizan reinsertando el DIB 16 días después de la IATF a todas las vacas (ya que aún no se puede determinar cuales están preñadas) en las vacas preñadas el día 16 se va a estar produciendo el reconocimiento fisiológico materno de la preñez (se ve favorecido)y el por lo tanto la progesterona liberada por este DIB va a colaborar en estas vacas a la quietud uterina y además estas también tiene un cuerpo lúteo funcional sintetizando altos niveles de progesterona que es la hormona que mantiene la preñez. Las vacas vacías estarían en el día 16 del ciclo estrual y coloco el DIB, estas vacas naturalmente van a ir lisando sus cuerpos lúteos, van a estar entrando en fase folicular, pero ninguna puede alcanzar la ovulación mientras se mantenga este nivel subluteal alto de progesterona liberado por el DIB, este dispositivo lo dejo 5 días es decir que el día 31, en el protocolo de trabajo, retiramos el DIB y se da una sincronía de celo en los retornos en 4-5 días DC+IA y en vacas de tambo un poquito mas (mayor dispersión) 5-6 días DC+IA. Con este protocolo de trabajo yo podría estar obteniendo entre el primer ciclo y el segundo porcentajes de preñez de entre 70-80% cómodamente, en rodeo de cría hemos alcanzado hasta el 88%, en tambo como buen porcentaje 74-75% de preñez.

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La ventaja que tiene esto en principio es que hemos eliminado la detección de celos que es un cuello de botella para la eficiencia reproductiva, y lo otro es que tiene un mejor porcentaje de preñez con muy pocos días de trabajo (10 días). Permite reducir el movimiento de los rodeos frente a la IA con detección de celos y con ello se reducen los daños que se producen en las pasturas (cosa que pocas veces se tiene en cuenta). Es bueno utilizar la ultrasonografía (el corazón empieza a latir a los 22 días) a los 25-26 días de preñez, en este caso pone a los 68 días para contemplar las preñeces de los retornos. Con este tratamiento logro acortar el intervalo parto-concepción y al acortar este intervalo acorto lógicamente el intervalo entre partos, y aumenta la eficiencia tanto en producción de leche como en producción de carne. Todos los dispositivos liberadores de progesterona, la liberan con niveles subluteales. Los niveles de progesterona en plena etapa luteal son de 7 nanogramos (ng)/ml sangre. Niveles subluteales significa entre 2-4 ng. Supongamos que ahora en vez de hacer un tratamiento en 8 días lo hacemos en 7 días, es decir dejamos el DIB un día menos (7 días). Con esta alternativa corremos el riesgo de que el folículo llegue demasiado chico al momento de retirado del DIB, y 24 hs después de retirado el dispositivo colocamos benzoato de estradiol; el folículo puede no ser de un tamaño adecuado y puede no ovular (porque tiene que haber una sincronía entre el tamaño folicular y el momento en que colocamos el estrógeno). 7 días es lo más corto que puedo hacer para conservar en mayor medida el tamaño folicular. Un folículo desde que es reclutado hasta que alcanza la ovulación tarda 6-8 días. Estos tratamientos se pueden utilizar en vaquillonas, vacas, vacas en lactancia; en rodeos de cria, lechero, vacas índicas, etc.

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SINCRONIZACIÓN CON GnRH Y PROSTAGLANDINAS (OVSINCH)

Este protocolo de trabajo se utiliza mucho en los EEUU, y no tanto en la Argentina sobre todo por el costo de la hormona. En general fisiológicamente vamos a lograr lo mismo que con el protocolo anterior que es inseminar a tiempo fijo (IATF). En este tratamiento no se utiliza progesterona ya que en EEUU esta prohibida sobre todo en las vacas de tambo que producen leche para consumo humano, y se basa esta decisión en que la progesterona en sangre se encuentra en símil concentración en la leche, pero esto esta discutido ya que los niveles de estos dispositivos liberadores de progesterona trabajan a niveles subluteales por lo que no aumentaría en gran proporción estos niveles de progesterona. Estos tratamientos se usan en tambos donde las altas temperaturas no permiten la clara manifestación del celo y expresión de la líbido por dicho estrés. Con este protocolo se pretende sincronizar las ondas de crecimiento folicular para realizar la IATF . La GnRH es sintetizada por el hipotálamo y hace que se libere LH y FSH, si aplico GnRH aumenta la frecuencia de la misma, produce un aumento en la liberación de la frecuencia de LH y va a llevar a la ovulación (en el 85% de los animales que están ciclando); después de la ovulación se genera una nueva onda de crecimiento folicular (36-48 horas o 1,5-2 días de indiciado el tratamiento). Entonces el día cero se aplica una dosis de GnRH, no sabemos en que período del ciclo se encuentra el animal, a los 7 días aplicamos una dosis de PGF2alfa ya que al generar la ovulación (en todos los folículos dominantes con por lo menos 9mm de diámetro, hay algunas hembras que no le afecta la GnRH por tener un folículo muy pequeño) con la GnRH generamos también un nuevo cuerpo lúteo, entonces necesitamos la PGF2alfa para lisar el cuerpo lúteo generado y el cuerpo lúteo que puede ya tener el animal (si al aplicar la dosis de GnRH estaba en fase luteal) y de esta forma sincronizar la ovulación, pero se vio que aplicando una segunda dosis de GnRH a las 48 horas después de aplicada la PGF2alfa, lograban que todas esas ondas foliculares ovularan en el mismo momento (que es lo que en el protocolo anterior lo hacía la segunda dosis de benzoato de estradiol), esta 2º dosis de GnRH al ya no tener progesterona va hacer que todas las ondas foliculares que pueden presentar cierta dispersión ovulen en el mismo momento. 16 horas después de la segunda dosis de GnRH realizamos la IATF.

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La primer dosis de GnRH no va a afectar al los animales que se encuentran en los días 14,15 del ciclo estrual, porque el tamaño pequeño de los folículos hace que no se vean afectados por la GnRH, estos animales son los únicos que van a expresar celo al día 7 (cuando aplico PGF2alfa) y los voy a inseminar a los que pueda detectar y no van a recibir la segunda dosis de GnRH (10-15% de los animales que se escapan del protocolo) el resto de los animales siguen el protocolo común. Los animales de este grupo que no reaccionaron a la primera dosis de GnRH y que no les vi celo, los voy a IATF y no van a preñar. Se realizaron estudios de IATF después de la aplicación de la 2º dosis de GnRH a las 0 horas, 8 horas, 24 horas y a las 36 horas y se llegó a la conclusión de que las mayores tasas de preñez se dieron a las 16 hs pero hay un margen de 8-24 horas, de aplicada la 2º dosis de GnRH tenemos 30 horas hasta que se produzca la ovulación. Este tratamiento tiene tres inconvenientes: -No es un tratamiento que resulta en vaquillonas (la fertilidad está reducida con respecto a vacas en lactancia). No se sabe bien porque esto sucede. -El costo de la hormona GnRH. Hay que ver como hacemos con los retornos ya que aplicar nuevamente GnRH sería caro. -No es efectivo en animales en anestro, ya que con estos protocolos su anestro queda encubierto y aunque ya haya pasado el período de espera voluntaria no lo podemos sacar del anestro. Nosotros estamos usando mucho el OVSINCH en vacas que tienen quistes foliculares

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Es muy importante contemplar que para usar estas tecnologías que son costosas, debemos tener muy presente la alimentación ya que influye enormemente en la

ciclicidad del rodeo, debemos tener los animales con una buena condición corporal para que estos tratamientos realmente den resultado.

Por ejemplo en vaquillonas que en el rodeo de cría es la categoría que más se emplea estos protocolos de inseminación artificial, fundamentalmente para introducir

genética, la condición corporal es fundamental y también que tenga un 75% del peso adulto como también que su tracto reproductivo esté maduro.

Hay siempre que tener en cuenta los PILARES: NUTRICIÓN, SANIDAD, Y MANEJO

RESUMEN OVSINCH (MENAJOVSKY): Sincronización de celos con GnRH y PGF2alfa, que también permite la sincronía de las ondas de crecimiento folicular (OVSINCH: “ovulación sincronizada”) (lo vemos la clase que viene) EJERCICIO: sincronizar un ciclo

200 vacas 4% celo diario

70% de retención % preñez ¿?

Nº dosis de semen¿? Nº dosis de hormoma (tratamiento con progesterona y estrógeno)¿?

Estradiol en cualquiera de las marcas, para 100 vacas sería 200cm3+100cm3=300cm3 (3 frascos de estradiol) PGF2alfa: supongamos frascos 20 cm3 y cada dosis es de 2 cm3 es decir que tenemos 10 dosis por frasco (5mg prostaglandina/ml) Paquete de vainas para inseminar con pajuelas: $17,50 c/u (viene con 50 pajuelas)

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Desinfectante para DIB a reutilizar Plasticos para poner los DIB Rollo de papel cocina: para secar pajuelas cuando la saco del termo (luego de descongelar) Precio de pajuelas: de acuerdo a la genética hay desde $10, $25, $30, $50, $100, $150. Valores normales obtenidos: %preñez: 77%: 44% IATF y 33% vacas repaso Dosis de semen: 160 pajuelas ($25) Indice sevicio-concepción: en rodeo lechero debería tenderse a 1,8 (dosis utilizadas/concepciones logradas)