DAFTAR ISI

DAFTAR TABEL................................................................................................................3

DAFTAR GAMBAR...........................................................................................................4

DAFTAR LAMPIRAN........................................................................................................5

BAB I PENDAHULUAN....................................................................................................6

1.1 Latar belakang......................................................................................................6

1.2 Rumusan Masalah................................................................................................8

1. 3 Tujuan Penelitian.................................................................................................8

1.3.2 Tujuan Khusus.............................................................................................8

1.4 Manfaat................................................................................................................8

1.4.1 Manfaat Teoritis...........................................................................................8

1.4.2 Manfaat Praktis............................................................................................8

BAB II TINJAUAN PUSTAKA..........................................................................................9

2.1 Pembentukan Urin................................................................................................9

2.2 Glomerulus Filtrartion Rate (GFR)....................................................................11

2.3 Kontrol Fisiologis GFR......................................................................................11

2.3.1 GFR menurun yang dipengaruhi oleh saraf simpatis.................................12

2.3.2 Kontrol GFR secara hormonal...................................................................12

2.4 Reabsorpsi dan Sekresi......................................................................................12

2.4.1 Reabsorpsi..................................................................................................12

2.4.2 Sekresi........................................................................................................13

2.5 Kalsium..............................................................................................................13

2.5.1 Metabolisme dan Ekskresi Kalsium...........................................................13

2.6 Batu Saluran Kemih (Urolithiasis).....................................................................16

2.6.1 Etiologi.......................................................................................................17

2.6.2 Patofisiologi...............................................................................................17

2.6.3 Batu Kalsium..............................................................................................18

2.7 Asam Sitrat.........................................................................................................19

2.7.1 Kimia..........................................................................................................19

2.7.2 Kadar Normal Sitrat...................................................................................20

2.7.3 Mekanisme kerja........................................................................................21

BAB III KERANGKA KONSPETUAL DAN HIPOTESIS.............................................24

1

4.1 Kerangka Konseptual.........................................................................................24

4.2 Hipotesis.............................................................................................................25

BAB IV METODE PENELITIAN....................................................................................26

4.1 Fokus Penelitian.................................................................................................26

4.2 Bahan Yang Diteliti...........................................................................................26

4.3 Waktu dan Tempat Penelitian............................................................................26

4.4 Variabel dan Definisi Operasional.....................................................................26

4.5 Populasi dan Besar Sampel................................................................................27

4.6 Alur Penelitian...................................................................................................29

4.7 Peralatan dan Bahan Penelitian..........................................................................30

4.8 Rancangan Penelitian.........................................................................................30

4.9 Teknik Pengumpulan Data.................................................................................30

4.10 Teknik Analisis Data..........................................................................................31

4.11 Jadwal Kegiatan.................................................Error! Bookmark not defined.

DAFTAR PUSTAKA........................................................................................................32

LAMPIRAN.......................................................................................................................35

2

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 .......................................................................................................................... 10

Tabel 2.3.2 ....................................................................................................................... 12

Tabel 2.5.1 ....................................................................................................................... 16

3

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.5.1a ………………………………………………………………….. 14

Gambar 2.5.1b ………………………………………………………………...... 15

Gambar 2.7.1 …………………………………………………………………… 20

4

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 …………………………………………………………………………… 32

5

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar belakang

Dewasa ini kasus batu saluran kemih (urolithiasis) menjadi masalah yang

cukup besar di dunia, mengingat pola hidup masyarakat yang semakin modern

karena faktor pekerjaan, makanan dan minuman yang di konsumsi masyarakat

sehari-hari. Batu saluran kemih sebenarnya sudah di kenal sejak 4800 tahun

sebelum masehi pada mumi di Mesir. Penyakit ini terdapat di seluruh dunia, tak

terkecuali Indonesia yang termasuk dalam stone belt [Purnomo, 2003]. Biasanya

di negara-negara maju (USA, Inggris, German) yang lebih sering terjadi adalah

batu saluran kemih bagian atas dan kebalikannya lebih sering terjadi di negara

yang berkembang (Indonesia, Thailand, India). Etiologi dari penyakit ini

bermacam-macam mulai dari gangguan metabolik, sampai idiopatik [Purnomo,

2003]. Jenis batu saluran kemih ini bermacam-macam, ada yang terdiri dari

kalsium, oksalat, struvit, asam urat, dan batu jenis lainnya (sistin, xanthine,

triamteren, dan silikat) [Stoller, 2008] dan kasus batu kalsium merupakan kasus

yang paling sering ditemui yaitu sekitar 70-80% [Purnomo, 2003].

Teori terjadinya batu saluran kemih sendiri masih belum sempurna, tetapi

para ahli menemukan bahwa pembentukan batu saluran kemih membutuhkan

supersaturated urin. Urin yang tersupersaturasi (superasturated urin) sangat

tergantung pada pH urin, kekuatan ikatan ion, konsentrasi dan kerumitan zat-zat

yang terlarut [Stoller, 2008]. Pada awalnya inti batu (nukleasi) yang terbentuk

akan mengadakan agregasi dan menarik kristal-kristal di sekitar untuk membentuk

inti batu yang lebih besar, namun agregat kristal ini masih sangat rapuh untuk

dapat membuntu saluran kemih. Oleh karena itu, agregat kristal yang sudah

terbentuk ini akan menempel pada epitel saluran kemih sehingga bisa

mengagregasi kristal-kristal yang lebih besar dan cukup untuk membuntu saluran

kemih [Purnomo, 2003].

Tubuh sendiri sudah memiliki banyak inhibitor untuk terjadinya batu

saluran kemih dengan bekerja sebagai penghambat kristalisasi, agregasi kristal,

6

maupun retensi kristal. Senyawa-senyawa itu adalah Tamm-Horsfall Protein

(THP), nefrokalsin, osteopontin dan Glikosaminoglikan (GAG). Selain itu, sudah

banyak tindakan preventif yang dilakukan untuk menghindari terjadinya batu

saluran kemih diantaranya asupan makanan yang dibatasi, penggunaan diuretic,

penggunaan allopurinol dan membuat urin menjadi basa [Finkielstein Goldfarb,

2006]. Ada juga penggunaan ion Mg+ yang akan berikatan dengan oksalat

sehingga membentuk ikatan magnesium oksalat dan menghindari terjadinya

ikatan dengan kalsium dan ada pula yang menyebutkan bahwa sitrat dapat

berikatan dengan Ca+ kemudian membentuk kalsium sitrat yang melibatkan

kalsium lepas yang keluar melalui urin akan turun secara signifikan [Purnomo,

2003]. Berbagai jenis tindakan prevensi ini sudah dapat dikatakan cukup efektif

terutama dengan cara membatasi asupan makanan sesuai dengan batu saluran

kemih pasca operasi [Stoller, 2008].

Dari penelitian lain menyebutkan bahwa asam sitrat ini tidak hanya

berpengaruh pada batu saluran kemih jenis kalsium saja, tetapi juga berpengaruh

terhadap batu asam urat [Pak Sakhaee, Successful Management of Uric Acid

Nephrolithiasis with Potassium Citrate , 1986]. Hal ini diawali dari penelitian

sebelumnya yang menunjukkan perubahan yang bermakna pada penggunaan

jangka panjang potassium sitrat sebagai tindakan preventif dan pengobatan dari

batu saluran kemih jenis kalsium yang menurunkan rasio pembentukan batu

sekitar 1,1 ± 0,4 pada pasien per tahun [Barcello Wuhl, 1993].

7

1.2 Rumusan Masalah

Apakah ada pengaruh dari penggunaan Asam Sitrat terhadap perubahan

kadar kalsium total pada urin?

1. 3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan Umum

Menjelaskan pengaruh asam sitrat terhadap pembentukan batu saluran

kemih (Urolithiasis)

1.3.2 Tujuan Khusus

1. Menganalisis perubahan kalsium dalam urin pasca pemberian asam

sitrat

1.4 Manfaat1.4.1 Manfaat Teoritis

Sebagai informasi ilmiah tentang hubungan antara pemberian asam sitrat

dengan tindakan prevensi batu saluran kemih (urolithiasis)

1.4.2 Manfaat Praktis

Membuktikan efek penggunaan asam sitrat terhadap tindakan prevensi

batu saluran kemih (urolihiasis)

8

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Pembentukan Urin

Ginjal memiliki berbagai macam mekanisme dalam membentuk urin baik

yang pekat maupun yang encer, bila terdapat cairan yang berlebih serta

konsentrasi cairan ekstrasel yang menurun maka ginjal akan mengekskresikan

urin dengan konsentrasi sebesar 50 mOsm/L. Sedangkan jika cairan di dalam

tubuh kurang dan konsentrasi cairan ekstrasel meningkat maka ginjal akan

mengekskresikan urin dengan konsentrasi sebesar 1200 sampai 1400 mOsm/L.

Dalam mekanisme ini Hormon Anti Diuretik (ADH) atau yang kita sebut juga

vasopressin memegang sistem umpan balik yang kuat untuk mengatur kondisi

cairan plasma serta konsentrasi natrium, ADH ini mempengaruhi ekskresi urin di

ginjal tetapi hal ini tidak bergantung pada kecepatan ekskresi zat yang terlarut.

Kemampuan ginjal untuk memekatkan cairan secara maksimal menunjukkan

bahwa ginjal harus mengeluarkan urin dalam jumlah banyak untuk membuang

hasil metabolisme tubuh, di analogikan pada orang yang memiliki berat sekitar 70

kg harus mengeluarkan urin sekitar 600 mOsm dan bila kemampuan maksimal

ginjal untuk memekatkan urin adalah 1200 mOsm, maka urin yang diekskresikan

dapat dihitung sebagai berikut:

600 mOsm/ L1200 mOsm/ L

=¿0,5L/hari

Kehilangan volume urin ini juga ikut berperan pada dehidrasi, kehilangan cairan

melalui kulit, saluran pencernaan, dan saluran pernafasan jika tidak ada air yang

dapat diminum [Guyton, 2006].

Urin dihasilkan oleh 3 proses di ginjal yaitu filtrasi glomerulus reabsorpsi

zat dari tubulus renal ke dalam darah, dan sekresi zat dari darah ke tubulus renal

yang dapat dituliskan secara matematis [Guyton, 2006].

Laju Filtrasi – Laju Reabsorpsi+Laju Sekresi=Kecepatan EkskresiUrin

9

Zat Berat Molekul Kemampuan Filtrasi

Air 18 1,0

Natrium 23 1,0

Glukosa 180 1,0

Insulin 5.500 1,0

Mioglobin 17.000 0,75

Albumin 69.000 0,005

Tabel 2.1. Kemampuan bahan-bahan yang di filtrasi di ginjal [Guyton, 2006].

Urin dibentuk dengan dimulainya filtrasi cairan dalam jumlah yang besar dari

aliran darah glomerulus ke kapsula bowman. Kebanyakan cairan plasma yang

bebas protein secara bebas di filtrasi sehingga konsentrasi antara filtrat glomerulus

dan kapsula bowman kurang lebih sama, oleh karena itu jumlah cairan yang di

filtrasi sama dengan jumlah laju ekskresinya. saat cairan yang di filtrasi melewati

bagian tubulus maka cairan ini akan mengalami perubahan yang diakibatkan dari

reabsorpsi air dan zat terlarut spesifik kembali ke dalam darah. Hasil buangan

tertentu seperti kreatinin, diperlakukan oleh ginjal tanpa direabsorpsi, sehingga

pada dasarnya mengakibatkan ekskresi semua bahan yang difiltrasi [Guyton,

2006].

Reabsorbsi pada tubulus sebenarnya lebih penting dari sekresi di tubulus pada

pembentukan urin, tetapi pada sekresi sangat berperan penting dalam mengatur

ion kalium dan hidrogen serta zat-zat lainnya yang diekskresikan. Zat-zat yang

harus dibersihkan terutama urea, kreatinin, garam-garam asam urat serta asam urat

hanya direabsorbsi sedikit dan lebih banyak di ekskresikan pada urin, sebaliknya

ion-ion seperti natrium, klorida dan bikarbonat di reabsorbsi dalam jumlah yang

besar [Guyton, 2006].

Sudah diketahui bahwa pori-pori membran glomerulus adalah sebesar 8

nanometer (80 angstrom) dan jika ada molekul dengan besar sekitar 6 nanometer

seperti albumin akan lebih mudah masuk, tetapi hal ini tidak terpengaruh oleh

pori-pori saja melainkan juga terpengaruh oleh muatan negatif dan elektrostatik

yang dibentuk oleh proteoglikan pada dinding kapiler glomerulus, sehingga

10

molekul dengan besar yang sama akan lebih sulit masuk jika bermuatan negatif

[Sherwood, 2001]

2.2 Glomerulus Filtrartion Rate (GFR)

Rasio filtrasi pada glomerulus adalah suatu tes untuk mengetahui kerja

ginjal dengan menghitung jumlah darah yang melewati glomerulus [David C.

Dugdale, 2011]. Hal ini sangatlah dipengaruhi oleh daya hidrostatik dan osmotik

koloid pada glomerulus dan koefisien filtrasi glomerulus yang bisa di

matematiskan sebagai berikut:

GFR=K1 ×Tekanan Filtrasi Akhir

Tekanan filtrasi akhir adalah daya osmotik koloid dan hidrostatik yang

mendorong atau melawan filtrasi yang terjadi di glomerulus. Daya ini meliputi (1)

tekanan hidrostatik dalam kapiler glomerulus(mendorong filtrasi); (2) tekanan

hidrostatik dalam kapsula bowman (melawan filtrasi); (3) tekanan osmotik koloid

protein plasma di dalam kapiler glomerulus (melawan filtrasi); dan (4) tekanan

osmotik koloid protein plasma di kapsula bowman (mendorong filtrasi) [Guyton,

2006].

Pada keadaan normal tekanan hidrostatik di kapsula bowman adalah sekitar

18mmHg jika terjadi kenaikan tekanan ini akan menurunkan GFR dan jika

tekanan ini turun maka akan meningkatkan GFR. Dalam keadaan patologis

misalnya terdapat batu saluran kemih dapat meningkatkan tekanan hidrostatik

pada kapsula bowman ini, sehingga akan menurunkan GFR secara drastis dan bisa

merusak ginjal kecuali obstruksi tersebut dapat dihilangkan [Guyton, 2006].

2.3 Kontrol Fisiologis GFR

Hal yang paling signifikan mempengaruhi GFR adalah tekanan osmotik

dan tekanan hidrostatik, tetapi kedua hal ini dikaitkan terhadap beberapa faktor

lain, yaitu: sistem saraf simpatis, hormon dan zat vasoaktif yang dilepas ginjal dan

bekerja secara lokal (autakoid) dan kontrol umpan balik lainnya [Guyton, 2006].

11

2.3.1 GFR menurun yang dipengaruhi oleh saraf simpatis

Secara umum diketahui bahwa pembuluh darah ginjal kaya akan

persarafan simpatis di mana jika sekiranya terjadi gangguan akut dalam waktu

beberapa menit biasanya yang bertanggung jawab dalam penurunan GFR adalah

sistem saraf simpatis ini yang secara langsung akan mengkonstriksi arteriol di

ginjal [Guyton, 2006].

2.3.2 Kontrol GFR secara hormonal

Hormon dan Autakoid Pengaruh pada GFR

Norepinefrin Menurun

Epinefrin Menurun

Endothelin Menurun

Angiotensin II Mencegah Penurunan

NO Endothelial Meningkat

Prostaglandin Meningkat

Tabel 2.2. Hormon yang mempengaruhi filtrasi glomerulus [Guyton, 2006].

Hormon memegang peranan penting dalam berbagai aktivitas di ginjal,

terutama terhadap perubahan GFR. Beberapa hormon dapat menyebabkan GFR

meningkat maupun menurun tergantung dari hormon yang mempengaruhi dan

hormon yang mempengaruhi GFR tersebut terdiri dari berbagai macam hormon

yang di sajikan dalam tabel 2.2.

2.4 Reabsorpsi dan Sekresi

Setelah melalui proses filtrasi di glomerulus maka seluruh filtrat yang siap

dikeluarkan dalam urin akan melalu proses selanjutnya yaitu reabsorpsi dan

sekresi [Cappucio Eastwood, 2000].

2.4.1 Reabsorpsi

Reabsorpsi merupakan sebuah proses yang bisa aktif maupun pasif,

sebagai contoh air yang dapat melalui jalur trans seluler, kemudian secara

12

absorpsi akan dikembalikan ke dalam darah dengan cara ultrafiltrasi yang

diperantarai oleh tekanan hidrostatik dan tekanan osmotik koloid [Guyton, 2006].

2.4.2 Sekresi

Beberapa zat disekresi secara transpor aktif sekunder ke dalam tubulus

sebagai contoh sekresi aktif hidrogen dimana bersamaan dgn reabsorpsi natrium

di tubulus proksimal (counter-transport Natrium Hydrogen) [Guyton, 2006].

2.5 Kalsium

Kalsium merupakan sebuah elemen kimia yang disimbolkan dengan Ca2+

yang selalu dijaga homeostasisnya dalam tubuh dan memiliki andil besar dalam

berbagai macam proses fisiologi di tubuh, yang meliputi kontraksi otot,

pembekuan darah, dan lain-lain [Guyton, 2006].

2.5.1 Metabolisme dan Ekskresi Kalsium

Kadarkalsium ekstrasel di dalam tubuh diatur sangat tepat sehingga jarang

sekali terjadi peningkatan maupun penurunan yang secara ekstrim yang melebihi

nilai normalnya yaitu sekitar 9,4 mg/dl, dimana jika terjadi peningkatan kalsium

(hiperkalsemia) dapat menyebabkan depresi progresif pada sistem saraf pusat dan

jika terjadi penurunan kalsium maka akan menyebabkan sistem saraf menjadi

lebih mudah dirangsang [Guyton, 2006].

Kadar kalsium di ekstrasel yang diukur sekitar 0,1 % sedangkan 1 %

terdapat di intra sel, sisanya disimpan dalam tulang yang merupakan reservoir

terbesar untuk kalsium. Di dalam tubuh kalsium terbagi menjadi 3 bentuk yaitu

(a) kalsium yang telah bergabung dengan protein plasma dan bentuk ini tidak

dapat berdifusi melalui membran kapiler, (b) kalsium bergabung dengan anionik

plasma dan dapat melewati membran kapiler, (c) didapat melalui membran kapiler

dan dapat terionisasi [Guyton, 2006].

13

Kalsium (9%)dengan anionKalsiumKalsiumTerionisasiterikat50%(1,2 mmol/L)Protein 41%

Gambar 2.5. gambar ini menggambarkan distribusi kalsium terionisasi, menjadi

kalsium yang terionisasi, kalsium yang terikat protein dan yang tidak dapat

berdifusi dalam plasma darah [Guyton, 2006].

Ion kalsium di plasma dan cairan interstisial sekitar 1,2

mmol/L(2,4mEq/L) dan kadar ini hanyalah separuh dari kadar yang ada dari

keseluruhan konsentrasi kalsium dalam tubuh. Absorpsi kalsium terjadi di usus

dan di ekskresikan melalui feses, normalnya kalsium susah untuk di absorpsi oleh

usus karena berupa ion divalen sehingga membutuhkan vitamin D untuk

membantu absorpsinya di usus [Jackman Kibel, 1999]

14

Gambar 2.2. metabolisme dan ekskresi kalsium di ginjal [Guyton, 2006].

Tetapi tidak semua kalsium yang masuk dalam tubuh akan diekskresikan

melalui feses saja tetapi juga melalui urin, dimana sekitar 10 % dari kalsium yang

di absorpsi akan keluar dalam bentuk kalsium yang terionisasi atau yang

bergabung dengan anion akan difiltrasi oleh glomerulus (59%) [Guyton, 2006].

Dalam keadaan normal, ditubulus ginjal akan mereabsorbsi hampir 99%

kalsium yang terfiltrasi dan kalsium yang akan ikut keluar bersama urin sekitar

100 mg setiap harinya. Sembilan puluh persen dari kalsium yang difiltrasi oleh

glomerulus akan direabsorpsi secara maksimal di tubulus proksimal, ansa henle

dan sebagian awal dari tubulus distal, kemudian terjadi reabsorpsi yang lebih

selektif lagi di bagian akhir tubulus distal dan duktus kolektikus sekitar 10 %

tergantung dari konsentrasi kalsium di dalam darah. Reabsorpsi kalsium sangat

dipengaruhi oleh adanya hormon paratiroid dan benar-benar diatur sesuai dengan

kebutuhan tubuh sesaat [Sherwood, 2001].

Reabsobsi kalsium terjadi bersamaan dengan air dan natrium di tubulus

proksimal, dan jika terjadi peningkatan volume intrasel dan peningkatan tekanan

arteri maka akan terjadi penurunan reabsorpsi kalsium bersamaan dengan

15

menurunnya reabsorpsi air dan natrium. Hal ini akan meningkatkan ekskresi dari

kalsium di urin, dan begitu juga sebaliknya jika terjadi penurunan tekanan arteri

dan volume intra sel maka akan menurunkan ekskresi kalsium di ginjal [Guyton,

2006]. Selain itu hal yang mempengaruhi adalah fosfat plasma yang akan

mempengaruhi hormon paratiroid untuk meningkatkan maupun menurunkan

reabsorpsi kalsium.

Tabel 2.3. Hal-hal yang mempengaruhi peningkatan danpenurunan ekskresi

kalsium pada urin [Guyton, 2006].

2.6 Batu Saluran Kemih (Urolithiasis)

Batu saluran kemih merupakan salah satu dari 3 penyakit yang sering

menyerang saluran kemih selain Infeksi Saluran Kemih dan kondisi patologi pada

prostat [Stoller, 2008]. Batu saluran kemih ini sudah menyerang sejak zaman

kerajaan mesir sekitar tahun 4800 SM, karena ditemukannya spesimen batu

saluran kemih pada salah satu mumi [Purnomo, 2003].

2.6.1 Etiologi

Etiologi dari batu saluran kemih dapat dibagi 2 yaitu dari faktor intrinsik

dan ekstrinsik yang dapat dibagi lagi menjadi [Purnomo, 2003]:

1. Faktor Intinsik:

16

Peningkatan Ekskresi Kalsium Penurunan Ekskresi Kalsium

Hormon paratiroid Menurun Hormon Paratiroid Meningkat

Cairan ekstrasel meningkat Cairan ekstrasel menurun

Tekanan darah meningkat Takanan darah menurun

Fosfat plasma menurun Fosfat plasma meningkat

Alkalosis metabolik Asidosis metabolik

Vitamin D3

a. Herediter

b. Umur

c. Jenis kelamin

2. Faktor Ekstrinsik

a. Geografi

b. Iklim dan temperatur

c. Diet

d. Asupan air

e. Pekerjaan

2.6.2 Patofisiologi

Sebenarnya mengacu pada etiologi dari batu saluran kemih hal ini

mengacu pada supersaturated urin dimana jika konsentrasi ion meningkat, maka

aktifitas produk mereka akan meningkat sampai di satu titik yang diketahui

sebagai solubility product (Ksp). Jika konsentrasi dari ion ini melebihi dari Ksp

maka akan dapat menginisiasi pembentukan batu saluran kemih dengan semakin

terkonsentrasi nya urin dan mencapai Kfp(formation product). Di titik ini

supersaturation sangatlah tidak stabil sehingga dapat terjadi nukleasi

homogeneous secara spontan [Stoller, 2008].

Setelah terjadi nukleasi ini maka batu tidak begitu saja langsung terbentuk

karena inti dari batu ini sangatlah rapuh dan belum cukup untuk menyumbat

saluran kemih [Purnomo, 2003]. Pada keadaan ini, faktor lain pun mulai bekerja,

yaitu sodium berikatan dengan oksalat dan mengurangi bentuknya dalam ion

bebas, begitu juga ikatan sulfat dengan kalsium. Beberapa faktor inhibitor yang

ada seperti magnesium, sitrat, pirofosfat dapat mengurangi hal ini terjadi [Stoller,

2008].

2.6.3 Batu Kalsium

Batu kalsium merupakan batu yang paling banyak ditemukan(80-85%)

pada penderita batu saluran kemih. Biasanya batu kalsium ini berupa ikatan

kalsium oksalat, kalsium fosfat, maupun campuran dari keduanya. Hal ini terjadi

karena peningkatan kalsium dalam urin, peningkatan asam urat dalam urin,

17

peningkatan oksalat dalam urin atau penurunan dari sitrat di dalam urin [Stoller,

2008].

Terdapat 6 mekanisme yang dapat mempengaruhi terjadinya batu kalsium,

yaitu [Stoller, 2008] [Purnomo, 2003]:

1. Hiperkalsiuri nefrolithiasis et causa absorpsi

Normalnya intake kalsium harian manusia sekitar 900-1000 mg/hari dan

sekitar 150-200 mg diekskresikan melalui urin sedangkan sisanya diekskresikan

melalui feses. Jika terjadi peningkatan absorpsi kalsium di jejunum akan

mengakibatkan peningkatan kalsium yang nantinya akan difiltrasi di glomerulus,

sehingga menyebabkan tersupresinya hormon paratiroid yang akan mengganggu

reabsorpsi kalsium di tubulus.

2. Hiperkalsiuri nefrolithiasis et causa resorptif

Sekitar setengah dari pasien hiperparatiroidisme ditemukan adanya

urolithiasis, hal ini dikarenakan hormon paratiroid mempengaruhi kaskade

peningkatan fosfor plasma dan diikuti dengan peningkatan fosfor di urin, serta

dengan peningkatan kalsium plasma dan penurunan kalsium di dalam urin.

Demikian juga kerusakan ginjal terutama karena hiperkalsemia yang akan

menggaggu kemampuan ginjal untuk mengasamkan urin

3. Hiperkalsiuri nefrolithiasis et causa renal induced

Hal ini dikarenakan adanya faktor intrinsik pada ginjal yaitu defek pada

tubulus dimana terdapat gangguan reabsorpsi kalsium pada tubulus, sehingga

meningkatkan hormon paratiroid, yang memobilisasi kalsium tulang dan

peningkatan absorpsi kalsium di ilium.

4. Hiperoksaluri nefrolithiasis

Jika ekskresi oksalat urin meningkat hingga 45 g/hari maka akan

meningkatkan terjadinya batu kalsium, keadaan tersebut sering terjadi pada pasien

yang mengalami gangguan usus maupun terlalu banyak mengkonsumsi oksalat.

5. Hiperurikosuria nefrolithiasis

Jika ekskresi asam urat di dalam urin meningkat hingga melebihi 850

mg/hari, maka asam urat ini akan bertindak sebagai nukleus dalam pembentukan

batu kalsium oksalat. Hal ini disebabkan karena banyak mengkonsumsi makanan

yang mengandung purin.

18

6. Hipositraturia kalsium nefrolithiasis

Terjadi jika ada penyakit asidosis tubuli ginjal, sindrom malabsorpsi, atau

penggunaan diuretik jenis thiazide dalam jangka waktu yang lama.

2.7 Asam Sitrat

Sitrat diketahui sebagai bahan yang dipelajari untuk mengobati dan

mencegah terjadinya batu kalsium [Marshall L. Stoller, 2007]. Penggunaan asam

sitrat pertama kali dilakukan oleh Sabatini pada tahun 1930, selanjutnya pada

tahun 1981 Butz dan Dulce melakukan penelitan lagi dengan mengganti basisnya

menjadi kombinasi potasium sitrat dengan sodium sitrat yang jelas menurunkan

kadar kalsium dalam urin dan meningkatkan kadar sitrat dalam urin.

2.7.1 Kimia

Asam sitrat merupakan asam trikarboksilat yang terdapat pada tumbuhan

citrus (C. Limon) dan dapat terionisasi sempurna pada pH 6.5 di suhu 37 0C,

normalnya sitrat terabsorpsi sempurna di dalam usus, dalam konsentrasi plasma

0,05-0,3 mM. Jika kita mengasumsikan GFR sekitar 125 mL/menit, maka sitrat

akan terfiltrasi sekitar 6,25 – 37,5 μmol/menit [Finkielstein Goldfarb, 2006].

19

Gambar 2.3. Kondisi sitrat di dalam tubuh. A. Dalam kondisi normal B.

Asidosis, C. Alkalosis. [Marshall L. Stoller, 2007]

2.7.2 Kadar Normal Sitrat

Kadar sitrat di dalam tubuh selalu bervariasi setiap harinya dan kadar

normalnya cukup sulit untuk didefinisikan. Pak telah mendefinisikan sitrat yang

dikeluarkan melalui urin oleh orang yang mengalami asidosis (hipositraturia)

yaitu sekitar 320 mg/hari [Marshall L. Stoller, 2007] sehingga bisa disimpulkan

20

pada orang normal kadar sitrat urinnya di atas 320 mg/hari. Menurut penelitian

Parks dan Coe menemukan bahwa kadar sitrat urin normal pada wanita sekitar

729±47 mg/hari dan pada pria sekitar 547±31 mg/hari.

2.7.3 Mekanisme kerja

Sitrat menghambat proses kalkulogenesis. Salah satu caranya adalah

dengan mengikat kalsium bebas di dalam urin, selanjutnya akan menurunkan

kadar kalsium oksalat dan kalsium fosfat [Murahashi, Takasaki, Nagata, 1979].

Garam kalsium yang terbentuk akan segera hancur jika konsentrasi dari garam

urin ini di bawah dari saturasi urin [CY, 1979].

Sitrat menurunkan kemungkinan pembentukan batu kalsium oksalat secara

spontan [MJ, RJ, CY, 1987]. Melalui mekanisme ini, pembentukan inti batu bisa

di inhibisi. Tetapi, jika garam kalsium fosfat yang terpresipitasi karena suasana

basa yang berlebihan di urin, maka batu kalsium dapat terbentuk. Agregasi

kalsium fosfat dan kalsium oksalat dapat digagalkan jika ada sitrat dalam kondisi

normal [Tiselius Fornander, 1993]. Sitrat mengurangi pembentukan kristal

kalsium oksalat sekitar 33% dalam kondisi metastable secara in vitro [Murahashi,

Takasaki, Nagata, 1979]. Dan juga telah di ujikan pada urin dari salah seorang

pasien yang terkena batu kalsium [Grases F G. C., 1989] [Grases F G. C., 1988]

[Grases F G. J., 1989]. Efek ini tergantung dari keasaman urin sendiri yang

dibawa dari konsumsi suplemen pottasium sitrat. Sitrat menginhibisi melalui

berbagai langkah dalam pembentukan batu saluran kemih terutama dalam hal

pembentukan inti (nukleasi), agregasi dan pembentukan kristal.

Dalam penelitiannya, Barcello menggunakan pottasium sitrat sebagai

tindakan prevensi pada pasien dengan batu kalsium disertai dengan hipositraturi.

Hal ini dilakukan pada 57 pasien dengan batu kalsium yg tingkat keparahannya

sedang atau rendah (<342mg/24 jam) dengan konsentrasi sitrat yang

dirandomisasi. Pada penelitian ini, 16 orang mundur karena memiliki masalah

dengan sistem pencernaannya, sedangkan pada pasien lainnya diberikan

potassium sitrat tablet (30-60 meq/hari) selama 3 tahun. Setelah 3 tahun

pemberian, terjadi peningkatan sitrat pada urin dari 1,9 ± 0,5 mmol/hari (359 ± 95

mg/hari) menjadi 2,8 – 3,5 mmol/hari (529 – 661 mg/hari). Sedangkan rasio

pembentukan batu turun drastis dari 1,2 ± 0,6 menjadi 0,1 ± 0,2 pada setiap pasien

21

setelah pemberian potassium sitrat. Pada 13 pasien tidak terjadi pembentukan batu

selama masa percobaan, beberapa pasien yang telah mengalami batu kalsium tidak

menunjukkan adanya pertumbuhan batu selama masa percobaan ini. Sedangkan

pada pasien yang mengkonsumsi plasebo tidak mengalami perubahan rasio

pembentukan batu (1,1 ± 0,4 – 1,1 ± 0,3) dan 20% dari pasien yang diberi plasebo

ini mengalami remisi pembentukan batu selama masa percobaan [Barcello Wuhl,

1993].

Dengan demikian potensi larutan asam sitrat dapat untuk selanjutnya

dievaluasi kembali dengan berbagai pertimbangan seperti pemaksimalan

pemberian larutan asam sitrat yang berupa suplemen (pottasium sitrat) ataupun

dosis yang lebih tinggi, dan penghitungan kadar kalsium ion pada urin sehingga

dapat dipastikan ada tidaknya penurunan kadar kalsium bebas pada urin [Barcello

Wuhl, 1993].

Potassium sitrat juga berguna dalam pengobatan batu asam urat, hal ini

dikemukakan pertama kali oleh Pak pada tahun 1986. 18 pasien dengan batu asam

urat telah dilakukan pengobatan selama 2,8 tahun. Hal ini menyebabkan tingginya

sitrat urin 503 ± 225 mg/hari menjadi 852 – 998 mg/hari. Rasio pembentukan batu

pada pasien tersebut juga mengalami penurunan dari 1,20 ± 1,86 batu/tahun

menjadi 0,01 ± 0,06 batu per tahun (p <0,001). Penelitian ini menggambarkan

pula bahwa suplementasi potassium sitrat juga berpengaruh pada prevensi dan

pengobatan batu jenis lain [Pak Sakhaee, Successful Management of Uric Acid

Nephrolithiasis with Potassium Citrate , 1986].

Penggunaan potassium sitrat ini makin tampak berpengaruh pada

penghancuran fragmen batu pasca ESWL. Salah satu penelitan menyatakan bahwa

pengobatan spesifik (allopurinol atau potassium sitrat) diberikan pada 80 pasien

pasca ESWL dan hal ini menurunkan rasio pembentukan batu hingga 91% pada

pasien bebas fragmen batu serta 81% pada pasien dengan residual batu pasca

ESWL [Fine Pak, 1995].

Pada penelitian lain juga menyatakan pada pasca ESWL dilakukan

pengobatan yang sama dan menunjukkan presentase yang cukup tinggi. Tujuh

puluh lima persen (75%) dari kelompok perlakuan tidak ditemukan batu residual

22

pasca ESWL dibandingkan dengan kelompok kontrol yang hanya 32%. Sitrat

menurunkan rasio pembentukan batu dan reagregasi fragmen batu. Residual

fragmen pasca ESWL dapat tumbuh kembali pada pasien yang diberikan

potassium sitrat dengan presentase 16%, hal ini berbanding terbalik dengan pasien

yang tidak menerima pengobatan asam sitrat dengan presentase 55% terjadinya

pertumbuhan kembali batu saluran kemih [Cicerello Merlo, 1994].

Selain penggunaan sediaan obat, banyak penelitian menggunakan jeruk,

anggur, nanas dan lemon sebagai tindakan preventif. Seltzer menyatakan bahwa

konsumsi lemon per oral sebanyak 2 L/hari dengan peningkatan sitrat urin

mencapai 346 mg/hari (p<0,001). Hal ini diikuti pula dengan penurunan kadar

kalsium urin yang kurang signifikan. Pak dan Wabner telah melakukan penelitian

yang sama dengan membandingkan konsumsi jus jeruk sebanyak 1,2 L/hari

dengan penggunaan potassium sitrat. Pada penelitian ini, pasien yang

mengkonsumsi jus jeruk mengalami peningkatan sitrat urin yang sebanding

dengan penggunaan potassium sitrat. Tetapi, pada pasien yang mengkonsumsi jus

jeruk terdapat peningkatan oksalat. Hal ini diperkirakan karena oksalat yang

terkandung dalam jeruk atau asam askorbat yang diubah menjadi oksalat [Wabner

Pak, 1993]. Hasil yang serupa juga ditemukan pada penelitian menggunakan jus

anggur, pada penelitian ini dilakukan pemberian jus jeruk pada 7 orang tanpa ada

riwayat batu saluran kemih. Setelah mengkonsumsi jus anggur, sitrat urin

meningkat dari 18,7 mg/jam menjadi 25,8 mg/jam sedangkan kalsium mengalami

peningkatan dari 3,3 mg/jam menjadi 6,7 mg/jam [Trinchiery, Lizzano,

Bernardini, 2002].

23

BAB III

KERANGKA KONSPETUAL DAN HIPOTESIS

4.1 Kerangka Konseptual

: Perlakuan

: Yang Diteliti

24

Pemberian Asam Sitrat

Ekskresi Kalsium Pada Urin

Kalsium Tetap Kalsium Menurun atau Meningkat

Mempengaruhi Pembentukan BSK

Asupan Nutrisi

4.2 Hipotesis

H0 :

Tidak terdapat pengaruh dari penggunaan Asam Sitrat terhadap perubahan

kadar Kalsium total pada urin?

H1 :

Terdapat pengaruh dari penggunaan Asam Sitrat terhadap perubahan kadar

Kalsium total pada urin?

25

BAB IV

METODE PENELITIAN

4.1 Fokus Penelitian

Fokus penelitian ini adalah mengidentifikasi potensi Asam Sitrat sebagai

obat penghambat pembentukan batu saluran kemih.

4.2 Bahan Yang Diteliti

Bahan yang diteliti adalah Asam Sitrat yang diberikan melalui minuman

pada tikus galur wistar (Rattus Novergicus).

4.3 Waktu dan Tempat Penelitian

a. Waktu Penelitian

Penelitian dilakukan pada bulan Februari 2013 - Maret 2013

b. Tempat Penelitian

Penelitian akan dilakukan di Laboraturium Farmakologi Fakultas

Kedokteran Mulawarman dan Laboratorium Patologi Klinik Rumah

Sakit Umum Abdul Wahab Sjahranie Samarinda

4.4 Variabel dan Definisi Operasional

a. Variabel

i. Terikat

1. Kadar kalsium dalam urin

ii. Kontrol

1. Makanan

2. Minuman

3. Asam sitrat yang diberikan

iii. Bebas

1. Konsentrasi asam sitrat

b. Definisi Operasional

i. Konsentrasi asam sitrat adalah larutan yang diperoleh dari

pelarutan asam sitrat dengan aquadest (mg/mL)

26

ii. Kadar kalsium dalam urin adalah kadar kalsium yang

didapatkan dari urin post konsumsi dan non konsumsi asam

sitrat

iii. Kadar kalsium urin normal pada tikus adalah 7,5 – 9 mg/dl

iv. Untuk mengetahui kadar kalsium urin akan dilakukan

dengan menggunakan potassium oksalat yang tersaturasi

atau menggunakan metode yang lebih modern dengan

Calcium AF FS untuk mengetahui kadar kalsium pada urin

tampung 24 jam.

4.5 Populasi dan Besar Sampela. Populasi

Populasi yang di gunakan adalah tikus galur wistar (Rattus

Novergicus). Metode pengambilan sampel menggunakan teknik

simple random sampling. Kemudian sampel dibagi menjadi 2

kelompok yaitu kelompok kontrol dan kelompok perlakuan.

Sampel yang digunakan memiliki kriteria sebagai berikut:

Umur : 10-20 minggu

Berat Badan : 200-300 gr

b. Besar Sampel : (Steel and Torrie, 1991)

n =(Z ¿¿α /2+Zβ)σ2

σ2 ¿

α = 0,05

Zα /2 = 1,96

Zβ = 0,84

Pada penelitian eksperimental σ 2 / σ 2 = 1

27

Sehingga n = (1,96 + 0,84)2 = 7,84. Besar Sampel dibulatkan

menjadi 8

c. Kriteria Sampel Urin Rattus Novergicus

i. Kriteria inklusi : Urin yang diambil dari Rattus

Novergicus yang sehat, ditandai dengan rambut yang

bersih, bergerak aktif dengan berat badan 200-300 g

ii. Kriteria eksklusi : Tikus yang tidak dapat

memproduksi urin.

28

4.6 Alur Penelitian

29

Sampel

N = 16

Random Alokasi

Kelompok Kontrol

N = 8

Kelompok Perlakuan

N = 8

Urin tampung 24 jam kelompok

kontrol

Urin tampung 24 jam kelompok

perlakuan

Pengukuran kadar kalsium

urin

Pemberian Larutan Asam

Sitrat

4.7 Peralatan dan Bahan Penelitiana. Peralatan

Alat-alat yang digunakan antara lain kandang hewan coba khusus yang

dibuat sendiri agar dapat menampung kencing dari hewan coba dan spruit

untuk memberikan minum asam sitrat kepada hewan coba.

b. Bahan

Bahan-bahan yang digunakan adalah larutan asam sitrat yang sudah

diencerkan dengan H2O, Tikus Galur Wistar (Rattus Novergicus) yang

digunakan sebagai hewan coba, dan reagen potassium oksalat tersaturasi

untuk mengetahui kadar kalsium pada saat penghitungan setelah penelitian

ini

4.8 Rancangan PenelitianRancangan penelitian ini adalah Test Only With Control Group dan yang

akan dilakukan adalah dengan memasukkan data hasil penelitian yaitu

berupa penilaian kadar kalsium dalam urin.

a. Indikator Kuantitatif

Untuk mengetahui perubahan kadar kalsium pada urin, sebagai

indikator kuantitatif digunakan nilai kadar kalsium dalam urin

setelah penelitian.

4.9 Teknik Pengumpulan Dataa. Data dan Sumber Data Penelitian

Data dalam penelitian ini didapatkan dari hasil analisis data dari

penelitian yang bersumber dari pencatatan hasil kadar kalsium dalam

urin yang dilakukan pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan.

b. Pelaksanaan Penelitian

i. Pembuatan larutan asam sitrat

Pembuatan larutan asam sitrat dilakukan dengan menggunakan

pelarut aquadest, caranya dengan mencampurkan asam sitrat bubuk

dimasukkan ke dalam bejana kemudian dilarutkan dengan

menggunakan aquadest

30

c. Perisapan Hewan Uji

Hewan uji yang sudah disiapkan (kondisi nutrisi & lingkungannya

yang sudah homogen) akan diminumkan larutan asam sitrat dengan

menggunakan spruit setiap 8 jam sekali

d. Jalannya Penelitian

Hewan uji tikus galur wistar (Rattus Novergicus) yang telah disiapkan

akan dibagi menjadi 2 kelompok yaitu kelompok kontrol (tidak diberi

perlakuan), dan kelompok uji, dimana kelompok kontrol dan kelompok

uji masing-masing terdiri atas 8 hewan uji. Jalannya penelitian akan

dimulai dengan aklimasi hewan uji selama 1 minggu. Setelah proses

aklimasi, penelitian dimulai dengan memberikan larutan asam sitrat

pada kelompok perlakuan dan aquadest pada kelompok kontrol

masing-masing 1 ml pada setiap sampel. Pemberian perlakuan akan

dilakukan selama 1 hari dengan 3 kali pengulangan pada tiap sampel.

4.10 Teknik Analisis DataData hasil penelitian dianalisis dengan menggunakan SigmaPlot

Ver. 12.0 untuk kemudian dilakukan pengujian T-test untuk mengetahui

efektivitas asam sitrat terhadap perubahan kadar kalsium dalam urin.

31

DAFTAR PUSTAKA

Arnida, S. (2008). Relationship of Diuretica Activity and AntiUrolothiatic Bulbus Bawang Dayak Fraction (Eleutherine Palmifolia (L) Merr) on White Male Mice. 3.

Barcello, P., & Wuhl, O. (1993). Randomized Double Blind Study of Potassium Citrate in Idiopathic Hypocitraturic Calcium Nephrolithiasis. 150.

Borghi, L., & Schiani, T. (2002). Comparison of Two Diets for Prevention of Reccurent Stones in Idiopathic Hypercalciuria. N Eng J Med .

Cappucio, F., & Eastwood, J. (2000). Unraveling The Links Between Calcium Excretion, Salt Intake, Hypertension, Kidney Stones, and Bone Metabolism. J Nephrol .

Chen, Y., & DeVivo, M. (2000). Current Trend and Risk Factor for Kidney Stones in Persons with Spinal Cord Injury: a Longitudinal Study. Spinal Cord .

Chen, Y., & Roseman, J. (2000). Geographic Variation and Environmental Risk Factor for The Incidence of Initial Kidney Stones in Patients with Spinal Cord Injury. J Urol .

Cicerello, E., & Merlo, F. (1994). Effect of Alkaline Citrate Therapy on Clearance of Residual Fragments on Reccurent Stone Formation Following Shock Wafe Litothripsy. J Urol .

Citric Acid Material Safety Data Sheet. (2006).

Curhan, G., & Willett, W. (2001). Twenty Four Hour Urine Chemistries and The Risk of Kidney Stones Among Woman and Man. Kid Int .

CY, P. (1979). Hypocitraturic Calcium Nephrolithiasisin: Urolithiasis: A Medical and Surgical Reference. In P. C. Resnick MI, Urolithiasis: A Medical and Surgical Reference. Philadelphia: WB. Saunders.

Danpure, C. (2000). Genetic Disorder and Urolithiasis. Urol Clin N .

David C. Dugdale, I. M. (2011, 9 19). Retrieved 11 03, 2012, from MedlinePlus: http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/007305.htm

Fine, J., & Pak, C. (1995). Effect of Medical Management and Residual Fragments on Reccurent Stone Formation Following Shock Wafe Lithotripsy. J Urol .

32

Finkielstein, V. A., & Goldfarb, D. S. (2006). Strategies for preventing calcium oxalate stones. 174.

Grases F, G. C. (1989). Inhibitory Effect of Pryrophospate, Citrate, Magnesium, and Chondrotin Sulfate in Calcium Oxalate Urolithiasis. Br J Urol.

Grases F, G. C. (1988). Variations in the Activity of Urinary Inhibitors in Calcium Oxalate Urolithiasis. BR J Urol.

Grases F, G. J. (1989). Urolithiasis Inhibitors and Calculus Nucleation. Urol Res.

Guyton, A. C. (2006). Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Jakarta: EGC Medical Publisher.

Hall, W., & Pettinger, M. (2001). Risks Factor for Kidney Stones in Older Women in The Southern United States. Am J Med Sci .

Jackman, S., & Kibel, A. (1999). Familial Calcium Stone Disease: Taq 1 Polymorphism and The Vitamin D Receptor. J Endourology .

Jenkins, A., & Dousa, T. (1985). Transport of Citrate Across Renal Brush Border Membrane: Effects of Dietary Acid and Alkali Loading. Am J Physiol .

Loughin, K., & Hawtrey, C. (2003). The Father of Intravenous Urography. Urology .

Marshall L. Stoller, M. V. (2007). Urinary Stone Disease. New Jersey: Humana Press.

Menon, M., & Resnick. (2002). Urinary Lithiasis: Etiology, Diagnosis, and Medical Management. In Campbell's Urology (p. 3242). Philadelphia: WB Saunders.

MJ, N., RJ, S., & CY, P. (1987). Inhibition By Citrate of Spontaneous of Calcim Oxalate In Vitro.

Modlin, M. (1980). A History of Urinary Stones. S Afr Med J .

Murahashi, I., Takasaki, E., & Nagata, M. (1979). A Four Year Retrospective Study of Urolithiasis (Vol. 6). Tokyo: Dokkyo J Med Sci.

Pak, C., & Sakhaee, K. (1986). Successful Management of Uric Acid Nephrolithiasis with Potassium Citrate . Kidney Int.

Pak, C., Oh, M., & Baker, S. (1991). Effect of Meal on Physiological and Physicochemical Action of Potassium Citrate. J Urol .

Purnomo, B. (2003). Dasar-dasar Urologi. Jakarta: Sagung Seto.

33

Reed, B., & Heller, H. (2002). Identification of a Gene with Base Subtitutions Associated with The Absorptive Hypercalciuria Phenotype and Low Spinal Bone Density. J Clin Endocrinol Metab .

Seltzer, M., & Lower, M. (1996). Dietary Manipulation with Lemonade to Treat Hypocitraturic Calcium Nephrolithiasis. J Urol .

Sherwood, L. (2001). Fisiologi Manusia. Jakarta: EGC.

Soygur, T., & Akbay, A. (2002). Effect of Potassium Citrate Therapy on Stone Reccurence and Residual Fragment After Shock Wafe Lithotripsy in Lower Caliceal Calcium Oxalate Urolithiasis. J Endourol .

Stoller, M. L. (2008). Urinary Stone Disease. In Smith's General Urology. New York: McGraw-Hill Companies, Inc.

Tekin, A., & Atsu, N. (2002). Oral Potassium Citrate Treatment for Idiopathic Hypocitraturia in Children with Calcium Urolithiasis. J Urol .

Tiselius, H., & Fornander, A. (1993). The Effect of Citrate and Urine on Calcium Oxalate Crystal Aggregation. Urol Res.

Trinchiery, A., Lizzano, R., & Bernardini, P. (2002). Effect of Acute Load of Grapefruit Juice on Urinary Excretion of Citrate and Urinary Risk Factors for Renal Stone Formation. Dig Liver Dis .

Wabner, C., & Pak, C. (1993). Effect of Orange Juice Consumption on Urinary Stone Risk Factor. J Urol , 149.

日本薬局方(Japanese Pharmacopoeia). (2012). Tokyo: 独立行政法人 医薬品医療機器総合機構 (Pharmaceuticals and Medical Devices Agency).

34

LAMPIRAN

Lampiran 1

Pembuatan Larutan Asam Sitrat

Diketahui bahwa dosis lethal asam sitrat pada penggunaan di tikus coba

adalah 3000 mg/kg, maka akan diberikan dosis sebesar 1500 mg/kg yang nanti

akan dilarutkan dalam aquadest

Larutan Asam Sitrat (mgmL)= massa(mg)

volume (mL)

Sehingga dapat diperhitungkan:

Larutan Asam Sitrat (mgmL

) = 1000 mg

40 mL

= 25mgmL

Larutan ini akan diberikan selama 3 kali selama penelitian berjalan dengan

menggunakan sonde lambung untuk memastikan tikus mengkonsumsi larutan

yang diberikan.

35

Lampiran 2

36