TEST DE ELISA PARA DENGUE - IVD DENV Detect IgM Captue ELISA Insert (Spanish Printable Version)

7/30/2019 TEST DE ELISA PARA DENGUE - IVD DENV Detect IgM Captue ELISA Insert (Spanish Printable Version)

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DDMS1IVDDengueDetectIgMCaptureELISA N.depieza 900108 Pgina1de16

DENVDetectTMIgMCAPTUREELISA

USOPREVISTO

LapruebaDENVDetectIgMCaptureELISAestdiseadaparaladeteccincualitativadeanticuerposIgMcontraantgenosrecombinantesDEN(DENRA)ensueroparadiagnsticoprovisionalenlaboratorioclnicodeinfeccionesporelvirusdeldengue.Lapruebaestdestinadanicamenteapacientesconsntomasclnicosindicativosdefiebredeldengueofiebrehemorrgicapordengue.Losresultadospositivossedebenconfirmarmediantelatcnicadereduccindeplacasporneutralizacin(PRNT)omediantelaspautasactualesdelosCentrosparaelControlylaPrevencindeEnfermedades(CDC)paraeldiagnsticodeestaenfermedad.

Annosehanestablecidolascaractersticasderendimientodelapruebaensangredelcordnumbilical,enneonatos,enexamensistemticoprenataloenexamensistemticodelapoblacinengeneral.EsteensayonoestautorizadoniaprobadoporlaAdministracindeAlimentosyMedicamentos(FDA)paraelexamenendonantesdesangreoplasma.

Advertencia:sehaconstatadoqueseproduzcareactividadcruzadaconIgMdelvirusdelNiloOccidentalyotrosflavivirusconelensayoInBiosDengueIgM.LosresultadosconreactivossedebeninformarconunadeclaracindeprecaucinconrespectoalaposiblereactividadcruzadadeIgMconotrosflavivirus.

RESUMENYEXPLICACIN

DELAPRUEBA

EldengueesunaenfermedadviralagudaquetransmitemscomnmenteelmosquitoAedesaegyptiy,enmuchamenormedida,otrascepasdemosquitos.Eldenguesecaracterizaclnicamenteporfiebrebifsica,erupcin,depresinhematopoyticayporsntomasconstitutivos,comomalestar,artralgia,mialgiaycefaleas(1,2).Conmenorfrecuencia,sevencuadrosmsgraves,quesemanifiestanatravsdeunafiebrehemorrgica(FHD)quepuedesermortal(24).Esendmicoenlaszonastropicalesysubtropicalesdetodoelmundo,dondesecalculaqueanualmenteseproducenentre50y100millonesdecasos(5).Durante2002,msde30paseslatinoamericanosinformaronmsde10,000,000casosdefiebredeldengue(FD)conunagrancantidaddecasosdeFHD.EnlosterritoriosestadounidensesdePuertoRicoylasIslasVrgenesdelosEstadosUnidos,loscasosdedenguealcanzaronniveleshistricamentealtosen2010.EnPuertoRico,seinformaron21,000casosen2010.Tambinen2010,Floridainform65casosautctonosdedengueyunestudioserolgicoenKeyWest,

Florida,mostrunatasadeinfeccindel5%.(6)TambinenHawi(7)yLaredo,Texas,sehanconstatadobrotesepidmicosdedengue.

DurantelaprimeraysegundainfeccinseproducentransitoriamenteanticuerposIgMcontraelvirusdeldengue.Enpacientesconunaprimerainfeccinporelvirusdeldengue,losanticuerposIgMsedesarrollanconrapidezysepuedendetectarenlosdas3a5delaenfermedadenlamitaddelospacienteshospitalizados. LosnivelesdeIgMcontraelvirusdeldenguealcanzansumximoaproximadamentealas2semanasdelainfeccinydesciendenhastanivelesindetectablesentrelos2y3meses(8.9).

Enlospacientesconunasegundainfeccinporelvirusdeldengue,sibienlacinticadelaproduccindeIgMessimilaralaqueseobservaenpacientesconunainfeccinprimaria,losnivelesdeIgMsonsignificativamentemenores(8.9).LosanticuerposIgMcontraelvirusdeldenguetambinalcanzansumximoaproximadamente2semanasdespusdelainfeccin,comienzanadisminuirapartirdeentoncesyansepuedendetectarenaproximadamenteel30%delospacientes2mesesdespusdecomenzadoslossntomas.Adiferenciadelaprimerainfeccin,lasegundainfeccinporelvirusdeldenguemuestraunaaparicinmstempranadealtosnivelesde

anticuerposIgGcapacesdemostrarreactividadcruzadaantesdelasrespuestasdelaIgMosimultneamenteconestas(9).

DENVDetectIgMCaptureELISAanalizalosanticuerposIgMensuerohumanocontraantgenosrecombinantesderivadosdeldengue(DENRA).

PRINCIPIODELAPRUEBA

DENVDetectIgMCaptureELISAconstadeuninmunoensayointercaladoamplificadoenzimticamente.Enesteensayo,elcontrolnegativodeIgMcontraeldengue,elcontrolpositivodeIgMcontraeldengueylasmuestrasdesuerodesconocidassediluyenconunasolucinamortiguadoradedilucindelamuestraDENV,luegoseincubanenpocillosdemicrotitulacinquesehanrecubiertoconanticuerposIgMantihumanos,aloquesigueunaincubacinconantgenosrecombinantesderivadosdeldengue(DENRA)yantgenosdeclulasnormales(NCA)demaneraindependiente.Traslaincubacinyellavado,lospocillossetratanconunanticuerpomonoclonaldeDENespecficoetiquetadoconlaenzimaperoxidasaderbano(HRP).Trasunsegundopasodeincubacinylavado,lospocillosseincubanconelsustratodetetrametilbencidina(TMB).Luegoseagregaunasolucindecorteacdicaysedeterminaelgradoderecambioenzimticodelsustratomediantemedicindelaabsorbanciaa450nanmetros.Porencimadeciertoumbral,larelacindeabsorbenciasdelospocillosdeDENRAydelantgenodecontroldeterminasiexistenanticuerposdeldengue.

MATERIALSUMINISTRADO

ElkitdeDENVDetectIgMCaptureELISAcontienereactivossuficientesparaunaplacade96pocillos(tirasde12x8)cadauna.Ekitcontienelosreactivossiguientes:

MaterialesespecficosparaDENVDetectIgMCaptureELISA:

1. TirasdemicrotitulacinrecubiertasparaIgMhumana:soportedetirasenbolsashermticascon96pocillosmicrotituladosdepolietilenorecubiertosconanticuerposIgMantihumanosdecabraencadapocillo.Estableentre2Cy8Chastalafechadevencimiento.

2. SolucinamortiguadoradedilucindelamuestraDENV:

unfrascode25mllistoparausar.SolucinamortiguadoratrisHCl(pH7.2a7.6)conTween20(0.05%),conservante(proclin300al0.05%)yaditivos.Parausarenladilucindelasmuestrasdepruebayloscontrolespositivoynegativo.Estableentre2Cy8Chastalafechadevencimiento.

3. ControlnegativodeIgMcontraeldengue:unvialde50l.Sueronegativo.Elcontrolnegativoayudaracontrolarlaintegridaddelkit.Estableentre2Cy8Chastalafechadevencimiento.


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4. ControlpositivodeIgMcontraeldengue:unvialde50l.Sueropositivoquecontieneproclin300al0.05%.Elcontrolpositivoayudaracontrolarlaintegridaddelkit.Estableentre2Cy8Chastalafechadevencimiento.

5. AntgenorecombinantedeldenguelistoparausarparaIgM:unfrascode3mllistoparausar.SolucinamortiguadoratrisHCl(pH7.2a7.6)conTween20(


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Paraminimizarlaposibledesviacindelensayodebidoaunavariacineneltiempodeincubacindelsustrato,procureagregarlasolucindecorteenlospocillosenelmismoordenyalamismavelocidadqueagreglasolucindeTMB.

Evitelacontaminacinmicrobianadelosreactivos,enespecialenelcasodelconjugadoenzimticoHRPlistoparausarparaIgMcontraeldengue.EvitelacontaminacindelasolucindesustratodeTMBconelconjugadoenzimticoHRP.

Useunapuntadepipetalimpiaydesechableparacadareactivo,estndar,controlomuestra.

Cubraelreadetrabajoconpapelabsorbentedesechable.ADVERTENCIA:MATERIALCONPOSIBLERIESGOBIOLGICOEstekitcontienereactivosfabricadosapartirdesuerooplasmahumanos.Elsuerooelplasmausadossehaninactivadoporcalor,amenosquesedeclarelocontrario.Manipuletodoslossuerosykitsempleadoscomosicontuvieranagentesinfecciosos.Cumplaconlasprecaucionesestablecidasfrentealosriesgosmicrobiolgicosalrealizartodoslosprocedimientosysigalosprocedimientoshabitualesparadesecharcorrectamentelasmuestras.

RIESGOQUMICO:Todosloscomponentesdeestekitcuentanconunahojadedatos

deseguridaddelosmateriales(MSDS).RevisetodaslasMSDScorrespondientesantesderealizaresteensayo.Evitetodocontactoentrelasmanosylosojosolamucosadurantelaprueba.Encasodeproducirsecontacto,consultelaMSDScorrespondienteparaconocereltratamientoadecuado.

OBTENCINYPREPARACINDEMUESTRAS

Solosedebeusarsueroparaesteensayo,yestedebecumplirconlasprecaucioneshabitualescorrespondientesalapuncinvenosa.Lasangrequeseobtengamediantepuncinvenosasedebedejarcoagularatemperaturaambiente(20Ca25C)durante30a60minutosyluegosedebecentrifugarde

acuerdoconelInstitutodeEstndaresClnicosydeLaboratorio(CLSIApprovedGuideline ProceduresfortheHandlingandProcessingofBloodSpecimens;SecondEdition.H18A2ISBN1562383884).

Lapruebasedeberealizarloantesposibledespusdelapuncin.Nodejelossuerosatemperaturaambienteduranteperodosprolongados.Elsueroseparadosedebemantenerentre20Cy25Cpornomsde8horas.Sinocompletalosensayosdentrodelas8horas,elsuerosedeberefrigerarentre2Cy8C.Sinocompletalosensayosdentrodelas48horasosidebealmacenarelsueroseparadomsalldelas48horas,elsuerosedebecongelara20Comenos.

Evitecongelarydescongelarrepetidamentelasmuestras,yaqueestoprovocarundeteriorodelanalito.Loscongeladores

defroseconosonaptosparaalmacenarlasmuestras. Lasmuestrascongeladassedebendescongelaratemperatura

ambienteymezclarporcompletoagitandosuavementeomedianteinversinantesdeusar.Centrifuguesiempreantesdeusar.

Sivaatransportarlossueros,sedebenembalardeconformidadconlasregulacionesfederalesrelativasaltransportedeagentesinfecciosos.

Noutilicesuerossiseobservanindiciosdecrecimientomicrobiano.

PROCEDIMIENTODEPRUEBAPRECAUCIN:debeseguirestrictamenteelprocedimientodeprueba.Todadesviacindelprocedimientopuedearrojarresultadoserrneos.Dejequetodoslosreactivosdelkitylasmuestrasalcancenlatemperaturaambiente(~25C)antesdeusarlos.Inviertasuavementelosreactivosylasmuestrasantesdeusarlosparamezclarlosporcompleto.NOTA:encasodealmacenamientoalargoplazo,lasmuestrasdesueronosedebencongelarydescongelarmsdetresveces.Adems,lossuerossedebendividirproporcionalmenteen

volmenesmenores

yalmacenar

a

20

C.

Preparacindelosreactivos:

Preparacindelasolucinamortiguadoradelavado1X:Diluyalasolucinamortiguadoradelavado10Xa1Xconaguabiolgicaodealtogrado.Paraprepararunasolucinamortiguadoradelavado1X,mezcle120mldesolucinamortiguadoradelavado10Xcon1080mldeaguadestilada(odesionizada)yenjuagueloscristalesrestantes.Agitehastaqueestbienmezcladoytodosloscristalessehayandisuelto.Trasladilucina1X,almaceneatemperaturaambientehastaunperodode6meses.Compruebelacontaminacinantesdeusar.Desechelasolucinsisospechaqueestcontaminada.

Pocillosdelatirademicrotitulacin:Seleccioneelnmerodepocillosrecubiertosnecesariosparaelensayo.Debevolveracolocarrpidamentelospocillosrestantesenlabolsa,sellarlayalmacenarlaentre2Cy8Chastaqueestnlistosparausarohastaelvencimiento.

Procedimientodelensayo:

1. LoscontrolespositivoynegativosedebenanalizarenduplicadotantoenelcasodeldenguecomodelNCA.LasmuestrasdesconocidasdesueroquesevanausarparalapruebasedebenanalizarindividualmenteoenduplicadotantoparaenelcasodelDENRAcomodelNCA.Consulteeldiagramadeflujoalfinaldeestaseccinparaconocerunejemplodeesteprocedimiento.Sepuedenprobar44muestrasenunaplacade96pocillos.

2. Marquelastirasdemicrotitulacinquevaaemplear.3. Diluyalossuerosdepruebayloscontroleshasta1/100mediantee

diluyenteparamuestrasquesesuministra.Uselospequeostubos

depolipropilenoparalasdilucionesyalmenos4ldesuerosy

controlespositivoynegativo.Porejemplo,mezcle4ldela

muestradesueroy396ldesolucinamortiguadoradedilucindelamuestradeDENVparalograrunadilucin1/100.

4. Aplique50lporpocillodelossuerosdepruebadiluidos1/100,controlnegativodeIgMcontraeldengueycontrolpositivodeIgMcontraeldenguealaplacamedianteunapipetadeunoovarioscanales,segncorresponda.EneldiagramaEjemplodeaplicacindelamuestradesueroalfinaldelprospectosemuestraunejemplodeladisposicindelas44muestrasdesuerodeprueba.Nota:todaslasmuestrasdesuerosedebenprobarconDENRAyNCA.

5. Cubralaplacaconparafilmsoloenlasuperficiedelaaperturadelpocillo,demodoquelaparteinferiordelasplacasnoquedecubierta.

Nota:elobjetivoesgarantizarunadistribucinuniformedelatemperaturaentodoslospocillosdesdelaparteinferioryloslados;elparafilmenexcesosepuedecortarunavezquelapartesuperiorestselladaparaasevitarlaevaporacin.


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6. Dejeincubarlaplacaa37Cdurante1horaenunaincubadora.Nota:noapilelasplacasunaencimadelaotra.Sedebencolocarcomounasolacapa.Estoesmuyimportanteparalograrunadistribucinuniformedelatemperatura.NouseincubadorasdeCO2nideningnotrogas.Nocoloquelasplacasencontactoconningunasustanciahmeda,comotoallasdepapelhmedas,etc.

MTODOCORRECTO

7. Traslaincubacin,lavelasplacas6vecesconunalavadoraautomticadeplacasyunasolucinamortiguadoradelavado1X.Use300lporpocilloencadaciclo.

8. Agregue50lporpocillodeDENRAenlasfilasAaDy50lporpocillodeNCAenlasfilasEaHmediantepipetasdevarioscanales.AlfinaldelprospectosemuestraunejemplodeaplicacindeDENRAyNCA.

9. Cubralaplacaconparafilmsoloenlasuperficiedelaaperturadelpocillo.Laparteinferiordelaplacanodebequedarcubierta(veaelpaso5).

10. Dejeincubarlaplacaa37Cdurante1horaenunaincubadora(veaelpaso6).

11. Traslaincubacin,lavelasplacas6vecesconunalavadoraautomticadeplacasyunasolucinamortiguadoradelavado

1X.Use300lporpocilloencadaciclo.

12.

Agregue

50

l

por

pocillo

de

conjugado

enzimtico

HRP

listo

para

usarentodoslospocillosmediantepipetasdevarioscanales.

13. Cubralaplacaconparafilmsoloenlasuperficiedelaaperturadelpocillo.Laparteinferiordelaplacanodebequedarcubierta(veaelpaso5).

14. Dejeincubarlaplacaa37Cdurante1horaenunaincubadora(veaelpaso6).



16. Agregue150lporpocillodeEnWashentodoslospocillos

mediantepipetasdevarioscanales.

17. Dejeincubarlaplacaatemperaturaambientedurante5minutossinningnrecubrimiento.



19. Agregue75lporpocillodesustratolquidodeTMBentodoslospocillosmediantepipetasdevarioscanales.

20. Dejeincubarlaplacaatemperaturaambiente(20Ca25C)enunlugar(orecipiente)oscurodurante10minutossinningnrecubrimiento.

21. Despusdelaincubacin,agregue50lporpocillodesolucindecorteentodoslospocillosmediantepipetasdevarioscanalesydejeincubaratemperaturaambientedurante1minutosincubrirlaplaca.

22. Despusdelaincubacin,leaelvalorOD450nm(densidadpticaa450nm)SINPROCESARconunalectorademicroplacas.AsegresedequelalectorademicroplacasNOresteninormalicelosdatosencasodevaloresenblancoopocillosvacos.


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DiagramadeflujodelprocedimientodeDENVDetectIgMCaptureELISA:

CONTROLDECALIDAD

Cadakitcontienesuerosdecontrolpositivoynegativo.Loscontrolespositivoynegativosedebenanalizarencadaplacadeprueba.Losvaloresaceptablesdelndicedeestadoinmune(ISR)deestoscontrolesseencuentranenlatabladeespecificacionesacontinuacin.Elobjetivodeloscontrolesnegativoypositivoescontrolarunerrorsustancialenelreactivo.Elcontrolpositivonogarantizarlaprecisindelcortedelensayo.Lapruebanoser

vlida

y

se

deber

repetir

si

alguno

de

los

controles

no

cumple

con

lasespecificaciones.Silapruebanoesvlida,losresultadosdelospacientesnosepuedenusarconfinesinformativos.Debecumplirconlosrequisitosdecontroldecalidaddeconformidadconlasnormaslocales,estatalesy/ofederalesolosrequisitosdeacreditacinylosprocedimientoshabitualesdecontroldecalidaddelpropiolaboratorio.SerecomiendaqueelusuarioconsulteCLSIC24Ay42CFR493.1256paraconocerloslineamientosacercadelasprcticasapropiadasdecontroldecalidad.

Losresultadosacontinuacintienennicamentefinesinformativos.Elanlisisseaplicacuandoseusanlecturasespectrofotomtricassinprocesarnicamenteycuandonoseempleelarestaautomticadelosdatosenblancodelaguaylosreactivos.

Clculodelcontrolnegativo:calculelosvalorespromediodelcontrolnegativodeIgMcontraeldengueconDENRAyelantgeno(NCA)decontrol:

Ejemplo1:ControlnegativodeIgMcontraeldengue

DensidadpticaDENRA NCA

Rplica1 0.108 0.066Rplica2 0.082 0.061Suma 0.190 0.127

Promedio(DENRA)=0.1902=0.095Promedio(NCA)=0.1272=0.064

CalcularelndiceDENRA/NCA(ISR):0.0950.064=1.48

TodondiceDENRA/NCAdelcontrolnegativocontraeldenguesuperiora1.65indicaquesedeberepetirelprocedimientodelaprueba.

Clculodelcontrolpositivo:CalcularlosvaloresdelControlpositivodeIgMcontraeldengueconDENRAyconNCA.

Ejemplo2:ControlpositivodeIgMcontraeldengue

DensidadpticaDENRA NCA

Rplica1 0.635 0.105Rplica2 0.655 0.115Suma 1.290 0.220

Promedio(DENRA)=1.2902=0.645Promedio(NCA)=0.2202=0.110

CalcularelndiceDENRA/NCA(ISR):0.6450.110=5.86

Agregaralasplacas50l/pocillo

de

control

negativo,

control

positivoysuerosdepruebadepacientes,todosdiluidos1/100(enladilucindelamuestra)

PlacarecubiertaybloqueadadeIgMantihumanadecabra

Aplicarenlaplaca50l/pocillodeDENRAyNCAlistosparausar

Dejarincubarlaplacaa37Cdurante1horaylavarlaplaca6vecescon300l/pocillo

Aplicarenlaplaca50l/pocillodeconjugadoenzimticoHRPlistoparausar

Dejarincubarlaplacaa37

oCdurante1horay

lavarlaplaca6vecescon300l/pocillo

LeerelvalorOD450SINPROCESARenlalectoradeplacas.Norestarlaslecturasdefondo.

Agregaralaplaca150ldeEnWash

Dejarincubarlaplacaa37Cdurante1horaylavarlaplaca6vecescon300l/pocillo

Agregaralaplaca75l/pocillodesustratolquidodeTMB

Dejarincubarlaplacaatemperaturaambiente(20Ca25C)enunlugaroscurodurante10minutos.

Agregaralaplaca50l/pocillo

desolucindecorte

Dejarincubarlaplacaatemperaturaambientedurante1minuto

Dejarincubarlaplacaatemperaturaambientedurante5minutosylavarlaplaca6vecescon300l/pocillo


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TodondiceDENRA/NCAdelcontrolpositivodeIgMcontraeldengueinferiora5.0indicaquesedeberepetirelprocedimientodelaprueba.

Sedebenobtenerlosvaloresdelatabla1quesemuestraacontinuacinparapublicarlosresultadosdelanlisis.Elincumplimientodeestoscriteriosesunindiciodeldeteriorodelosreactivosodeunerrorenelprocedimientodelapruebaydeberepetirseelanlisis.

Tabla1

Factor(paraverificacindelensayo) Tolerancia

MediadeladensidadpticadelControlnegativocontraeldengueenDENRA

0.350

ndicedeestadoinmune(ISR)delControlpositivodeIgMcontraeldengue

>5.000

ndicedeestadoinmune(ISR)delControlnegativocontraeldengue


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Noseestablecieronlascaractersticasderealizacindelensayoparaotrasmatricesdiferentesalsuero.

Losresultadosdepacientesconinmunodeficienciadebeninterpretarseconcuidado.

Losresultadosdelensayodebeninterpretarseexclusivamenteenelcontextodeotroshallazgosdellaboratorioyelestadoclnicoglobaldelpaciente.

Losnivelesaltosdecolesterol(>300mg/dL)parecendarresultadosvariablesypuedenafectarlosvaloresdedensidadpticadelDENRA.

Losnivelesaltosdetriglicridos(>3000mg/dL)parecencausarunpequeoaumentoenlosISRdelossuerospositivosbajos.

Lahemoglobina(>1600mg/dL)parecedisminuirlosISRdeciertasmuestrasdesuero.

VALORESESPERADOS

Poblacinendmica

LapruebaDENVDetectIgMCaptureELISAsellevacaboenunaclnicaenunpasendmicodeSudamricaenelao2009paraanalizarprospectivamentemuestrasdesuerodepersonasquepresentabansntomassimilaresalosdelainfeccindeldengue.Seexaminaronsesentayseispersonasenlaconsultadelaaparicindelafiebre.Lasmuestrascomprendaninfeccionesprimariasysecundarias.Enlastablas3y4queaparecenacontinuacinseresumelareactividaddelasmuestrasconlapruebaDENVDetectIgMCaptureELISA.

Tabla3:Resultadosesperadosdereginendmicadepacientessintomticos

ResultadosdelapruebaDENVDetectIgMCapturea

Edad

(aos)

Cantidadde

hombres

Cantidad

demujeres

No

reactivos

Ambiguo

Reactivos

Prevalencia

1020 3 10 12 0 1 7.7%

2130 5 7 8 1 3 25%

3140 6 14 13 2 5 25%

4150 7 6 9 2 2 15.4%

5160 2 3 3 0 2 40%

6170 2 0 2 0 0 0%

7180 1 0 1 0 0 0%

Total 26 40 48 5 13 19.7%

a:todaslasmuestrasreactivasseconfirmaronconlapruebadePRNT.

Poblacinnoendmica

Lasmuestrasdesuero(n=200)depersonasquenopresentabansntomasseobtuvieronenFlorida,TexasyPennsylvaniaenmarzode2004.Lasmuestrasrepresentanunavariedaddeedades,tantodehombrescomomujeres.Lareactividaddelasmuestrasdesueroqueseexaminaronseresumeacontinuacinenlatabla4.

Tabla4:Resultadosesperadosdereginnoendmicadepersonasquenopresentabansntomas

ResultadosdelapruebaDENVDetectIgMCapture

Edad(aos)

Cantidaddehombres

Cantidaddemujeres

Noreactivos Ambiguo Reactivos Prevalencia

1020 5 13 18 0 0 0.0%

2130 38 30 68 0 0 0.0%

3140 27 38 64 1 0 0.0%

4150 23 20 42 0 1a 2.3%

5160 5 1 6 0 0 0.0%

Total 98 102 198 1 1 0.5%

a:estamuestraarrojunresultadopositivodedengueconlapruebaPRNT.


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CARACTERSTICASDEREALIZACIN

EstudiodegrupodelaOMSSecreungrupodemuestrasdereferenciaconcaractersticasdeterminadasenunproyectoencomndelFondoInternacionaldelasNacionesUnidasparaEmergenciasdelaInfancia,elProgramadelasNacionesUnidasparaelDesarrollo,elBancoMundial,elProgramaEspecialdeInvestigacinyFormacinenEnfermedadesTropicalesdelaOrganizacinMundialdelaSaludylaIniciativadelaVacunaPeditricacontraelDengue.Elgrupodereferenciasecremedianteelestablecimientodeunareddesietelaboratoriosquecontribuyeronconmuestrasdesueroyelanlisisdelasmismas(10).

UnsubconjuntodelgrupodereferenciaestuvodisponibleparasuexamenmediantelapruebaInBiosDENVDetectIgMCaptureELISA.LosCDCdePuertoRicoanalizaronelgrupodemuestras;losresultadosobtenidosseofrecenacontinuacinenlatabla5.

Tabla5ReactividaddelasmuestrasdelgrupodereferenciadelaOMSconlaprueba

InBiosDENVDetectIgMELISA

CategoraCantidadanalizada

Resultadodelaprueba

DENVDetectIgMELISA

Conteo CategoraCantidadanalizada

Resultadodelaprueba

DENVDetectIgMELISA

Conteo

IgMcontradengue

negativo

27

Negativo 27Encefalitisde

St.Louis

(SLE)

2

Negativo 1

Ambiguo 0 Ambiguo 1

Positivo 0 Positivo 0

IgMcontradenguepositivo

109

Negativo 4IgGcontralaenfermedadde

Lyme9

Negativo 9

Ambiguo 5 Ambiguo 0


IgGcontraelvirusdelNilo

Occidental11

Negativo 10

Factorreumatoide(FR) 10

Negativo 10

Ambiguo 1 Ambiguo 0


IgMcontraelvirusdelNilo

Occidental25

Negativo 21

Lupuseritematososistmico 2

Negativo 2

Ambiguo 2 Ambiguo 0


IgMcontrala

fiebre

amarilla

(FA) 4

Negativo 3IgMcontraelhantavirusdel

nuevomundo

(HTN)

7

Negativo 7

Ambiguo

1

Ambiguo

0


Lacoincidenciadeporcentajepositivo(PPA)ylacoincidenciadeporcentajenegativo(NPA)estntabuladasconsiderando"elpeordeloscasos".Esdecir,lasmuestrascuyosresultadossonambiguosseconsideranfalsosnegativosparalaPPAyseconsideranfalsospositivosparalaNPA.

Coincidenciadeporcentajepositivo:(100/109)91.7%(ICdel95%:84.995.8%).Coincidenciadeporcentajenegativo:(90/97)92.8%(ICdel95%:85.696.7%).


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Estudiosclnicos

Sitiodelestudio1:Elpresenteestudioretrospectivoemplemuestrasarchivadasobtenidasdepersonasquepresentabanindiciosysntomasdelainfeccindeldengue.Lasmuestrasseobtuvieronapartirdeunafechaenadelantehastaquesellegalacantidadpredeterminadademuestrasreactivas.Elestudioserealizconelsueroobtenidode197sujetosenunlaboratoriodereferenciaenelSudesteAsitico.Sedisponadedosextraccionesdemuestras(totalde394muestrasobtenidasconentre1y2semanasdediferencia)ylaconfirmacindelvirusdeldengue(DENV)seevalumediantedistintosmtodosenellaboratoriodereferencia.Eldiagnsticodefinitivodecadasujetoseefectuenellaboratoriodereferenciamedianteunalgoritmodediagnstico(resultadodelapruebadeIgMvalidadoenplanta,y/oelresultadodelaPCR,y/ounaumentodelatitulacindeIgG,y/ounaumentodecuatrovecesdelatitulacindelainhibicindelahemaglutinacin(HAI)entrelaextraccindesangreenlafaseagudaylaconvaleciente).Seemplelapruebadecualquieraparaconfirmarundiagnsticopositivo.

TodaslasmuestrasmencionadasseobtuvieronyanalizaronensecuenciaconelkitdeInBiosDENVDetectIgMCaptureELISA.Lascoincidenciasdeporcentajepositivoynegativoconlosdiagnsticosdefinitivosdellaboratoriodereferenciaestntabuladasacontinuacincomofuncindelacantidaddedasposterioresalcomienzodelafiebre.

Tabla6RealizacindelapruebaDENVDetectIgMCaptureELISAdelSitiodelestudio1

Lacoincidenciadeporcentajepositivo(PPA)ylacoincidenciadeporcentajenegativo(NPA)estntabuladasconsiderando"elpeordeloscasos".Esdecir,lasmuestrascuyosresultadossonambiguosseconsideranfalsosnegativosparalaPPAyseconsideranfalsospositivosparalaNPA.

Nota:el

resumen

presentado

compara

los

resultados

de

la

prueba

del

ensayo

InBios

con

los

diagnsticos

definitivos

que

efectu

el

laboratoriodereferenciamediantelapruebadePCR,HAI,elaumentodelatitulacindeIgGylapruebadeIgMELISAenplanta.Sitiodelestudio2:Unestudioretrospectivoanalizenunlaboratoriodereferenciaal

oestedelosEstadosUnidos212muestrasarchivadasobtenidasenseriedepersonasquepresentabansntomasdelainfeccindeldengue.Lasmuestrasdelperodo20082009seobtuvieronapartirdeunafechaenadelantehastaquesellegalacantidadpredeterminadademuestrasreactivas.LamayoradelasmuestraspertenecaalCaribeylasregionesdelsurysurestedelosEstadosUnidos(TexasyFlorida);noobstante,unaminoradelasmuestrastambinprovenadefricayAsia.Delas212muestrasanalizadas,116resultaronnegativas,67positivas.Veintinueveseincluyeron

dentrodelintervaloderesultadosdudososyserepitilapruebadeacuerdoconlasespecificacionesdelprospecto.Unavezrepetidalaprueba,13muestrascuyosresultadoshabansidoambiguosseclasificaroncomonegativas,11obtuvieronresultadosdudososnuevamentey5seclasificaroncomopositivas.

Debidoalafaltadelvolumendemuestrasodeacceso,soloserealizunapruebaPRNTconfirmatoriaen5delas11muestrasdudosas(delascualesseconfirmaron3/5oel60%comoDENVpositivas)yen70delas72muestraspositivas(delascualesseconfirmaron62/70oel88.6%comoDENVpositivas).Untotal

de130muestrasnosesometialapruebaPRNT.Las130muestrasquenoseanalizaronconlapruebaPRNTfueronexaminadasporCDCDengueMACELISAenlosCDCyclasificadascomonegativas,ambiguas,inconclusasopositivassegnloestipuladoporelprotocoloCDCMACELISA.TrecedelasmuestrasanalizadasporCDCMACELISAseclasificaroncomoinconclusas(n=9)oambiguas(n=4)yluegofueronsometidasalapruebaPRNTparacorroborarsuestado.Solamente3delas9(33.3%)muestrasinconclusasy2delas4(50%)muestrasambiguasanalizadasconlapruebaPRNTresultaronpositivas.

Dasposterioresalaaparicinde

lafiebre

Coincidenciadeporcentajepositivo

Coincidenciadeporcentajenegativo

Cantidaddemuestrascon

resultadosambiguoscon

diagnstico

definitivopositivo

Cantidaddemuestrascon

resultadosambiguoscon

diagnstico

definitivonegativo

2a3das 28.6%(2/7) 100.0%(4/4) 1 04a5das 40.3%(27/67) 78.8%(26/33) 19 7

6a7das 75.9%(63/83) 88.6%(31/35) 14 38a10das 88.8%(71/80) 97.1%(33/34) 7 1

11a15das 91.7%(22/24) 100.0%(21/21) 2 0

16a19das 100.0%(5/5) 100.0%(1/1) 0 0


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Tabla7aReactividaddelasmuestrasdelSitiodelestudio2ConfirmadasmediantePRNT

Tabla7bReactividaddelasmuestrasdelSitiodelestudio

2ConfirmadasmedianteCDCMACELISAa

ResultadodelapruebaCDCMACELISAa

DENVpositivos(cantidad

demuestras)

DENVnegativos(cantidad

demuestras)

Total(cantidad

demuestras)

ResultadodelapruebaDENVDetectIgMCapture

ELISA

Positivo 1 1 2

Ambiguo 1 5 6

Negativo 4 118 122

Total 6 124 130

a:13muestrasresultaroninconclusasoambiguasconCDCMACyseanalizaronconlapruebaPRNTparaclasificarenltimainstanciasuestado.LascoincidenciasdeporcentajepositivoynegativosecalcularonmediantelatabulacindelosresultadosdePRNT(Tabla7a)ydeCDCMACELISA(Tabla7b).Coincidenciadeporcentajepositivo:(63/75)84.0%(ICdel95%:73.990.8%).Coincidenciadeporcentajenegativo:(121/137)88.3%(ICdel96%:81.892.8%).

EnlosclculosanterioresdelaTabla7b,lacoincidenciadeporcentajesincorporalosdatosdelatabladePRNTydeCDC

MACELISA.LasmuestrasambiguaseinconclusasdeCDCMACELISA(n=13)fueronclasificadasmediantePRNT.

Sitiodelestudio3:

LaespecificidaddelapruebaDENVDetectIgMCaptureELISAseanalizenunlaboratoriodesaludpblicaubicadoenlapartenortedelOesteMediodelosEstadosUnidos.Elpresenteestudioretrospectivoemple289muestrasarchivadas(obtenidasenelperodo20052008)depersonasquepresentabansntomasyquepadecanonootrasenfermedades(entreellos136pacientesestabaninfectadosconelvirusdelNiloOccidental,hepatitisA,BoC,

VIH,legionelosis,FMMRoenfermedaddeLyme).Todaslaspruebasylosdiagnsticosseefectuaronenellaboratoriodesaludpblica.TodaslasmuestrasseobtuvierondepersonasdelmismoestadoenlapartenortedelOesteMedio endondenuncahubounaepidemiadelvirusdeldengue.Porconsiguiente,sesuponequelasmuestrasdelvirusdeldenguenegativasestnbasadasenelhistorialdeincidenciasdeldengueenestazonageneral(http://doh.sd.gov/ID/AnnualReport/1997 2007.pdf).

Luegodelanlisisinicialylarepeticindelapruebadelasmuestrasambiguas,215tuvieronresultadosnegativos,22muestrasresultaronambiguasnuevamentey52positivas.LasmuestrasquetuvieronresultadospositivosoambiguosenelanlisisinicialseincluyeronenlapruebaPRNT(74muestras).SeobservqueprcticamentetodalareactividadcruzadasedebealvirusdelNiloOccidental.

Tabla8Reactividaddelasmuestrasretrospectivasdereadedengue

noendmica(Sitio3)enlosEE.UU.

Diagnsticosdefinitivos

DENVnegativos,sin

presenciadeotra

enfermedad(cantidadde

muestras)

DENV

negativos,

conpresenciade

otraenfermedad(cantidadde

muestras)

DENVPRNT

positivosa

Resultadodela

pruebaDENVDetect

IgMCapture

ELISA

Positivo 1 40b 11

Ambiguo 0 16b 6

Negativo 100 115 0

Total

101 171 17

a:prcticamentetodaslasmuestrasdelapruebaDENVPRNTquetuvieronunresultadopositivorevelarontitulacionesbajasdePRNTyseidentificaroncomomuestrasdesueroconresultadospositivosparaelvirusdelNiloOccidental,locualindicareactividadcruzadaconDENVPRNT(11).b:Nota:TodoslosfalsospositivosobservadosylagrancantidaddemuestrasambiguassedebensolamentealareactividadcruzadaqueseobservenlasmuestrasqueresultaronpositivasparaelvirusdelNiloOccidental(vealaTabla9).Lasmuestraspuedensubdividirsesegnelestadodelaenfermedaddelpaciente.Porejemplo,laspersonasqueresultaronpositivasparaelvirusdeNiloOccidental(WNV)puedenpresentarreactividadcruzadaconlapruebaDENVDetectIgMCaptureELISA.EnlassiguientestablassemuestranlosresultadosdelSitiodelestudio3.

DiagnsticosdefinitivosdePRNT

DENVpositivos

(cantidaddemuestras)

DENVnegativos


Total(cantidadde

muestras)

Resultadodela

pruebaDENVDetect

IgMCapture

ELISA

Positivo 62 8 70

Ambiguo 3 2 5

Negativo 4 3 7

Total 69 13 82


11/16


Tabla9ReactividadcruzadadelapruebaDENVDetectIgMCapture

ELISAmediantemuestrasdelSitiodelestudio3

Estadodelasmuestras

WNVnegativos,sinpresenciadeotraenfermedad

(cantidad

de

muestras)

WNVpositivos

(cantidadde

muestras)

Resultadodela

pruebaDENV

DetectIgMCapture

ELISA

Positivo 0 40

Ambiguo 0 16

Negativo 35 80

Total 35 136

Coincidenciadeporcentajenegativodemuestrasenlasquenosedetectenfermedad:(100/101)99.0%(ICdel95%:94.1100%).[VealaTabla8,arriba].CoincidenciadeporcentajenegativodemuestrasconotrasenfermedadesdiferentesalvirusdelNiloOccidental:

(35/35)100%(ICdel95%:88.2100%).CoincidenciadeporcentajenegativodemuestrasenlasquesedetectelvirusdelNiloOccidental:(80/136)58.8%(ICdel95%:50.466.7%).

Ningunadelas35muestrasdelaspersonassinDENVperoconFMMR(n=5),legionelosis(n=2),enfermedaddeLyme(n=2),VIH(n=8),hepatitisA(n=2),hepatitisB(n=5)ohepatitisC(n=11)resultaronambiguasopositivasenlapruebaInBiosDENVDetectIgMCaptureELISA.Delos136pacientessinDENVperoquehabancontradoelvirusdelNiloOccidental,80muestrasresultaronnegativasparalapruebaDENVDetectIgMCaptureELISA,16seincluyerondentrodelintervaloderesultadosdudososy40fueronpositivas.

Sitiodelestudio4:LaespecificidaddelapruebaDENVDetectIgMCaptureELISAseanalizenunDepartamentoEstataldeSaludubicadoenelsurdelosEstadosUnidosrecurriendoa199muestrasarchivadas(obtenidasduranteelperodo20042008)depersonasquepresentabansntomasperoquesesuponaeranDENVnegativos.Lamayoradelospacientespresentabasntomasdedolordecabezayfiebremientrasqueotrosmostrabansntomasneurolgicos.Enlapruebainicial,183muestrasresultaronnegativas,10seincluyerondentrodelintervaloderesultadosdudososdeacuerdoconlasespecificacionesdelprospectoy6fueronpositivas.Unavezrepetidalaprueba,las10muestrasdelintervaloderesultadosdudososseclasificaroncomonegativas.

Las199muestrasseexaminaronademsenlosCDCconlapruebaCDCDengueIgM(MAC)ELISAparaclasificarlascomodenguenegativo,ambiguo,positivooquenopudieroninterpretarse(antecedentesnoespecficosdemasiadoaltos).DebetenerseencuentaqueestasclasificacionessonlasclasificacionesdelosCDCparaelkit.DiecisismuestrasnopudieroninterpretarsesegnlapruebaCDCDengueIgM(MAC)ELISA,peroelanlisisPRNTlasconfirmcomonegativas.Lasmuestrasconsideradasnegativassemuestranenlasiguiente

tabla.UnamuestratuvoresultadosdudososyotradiopositivoconlapruebaCDCDengueIgMELISA.

Tabla10Reactividaddelasmuestrasretrospectivasdereadedengue

noendmica(Sitiodelestudio4)

PruebaCDCDengueIgM(MAC)ELISA

DENVpositivos


DENVambiguos


DENVnegativos


Resultadodela

pruebaDENVDetect

IgMCapture

ELISA

Positivo 0 0 6

Ambiguo 0 0 0

Negativo 1 1 191

Total

1 1 197

Coincidenciadeporcentajenegativo:(191/197)97.0%(ICdel95%:93.498.7%).

Sitiodelestudio5:Enunestudioprospectivode55personasquepresentabansntomas(edadmedia:35.1aosmuestrasobtenidasenelao2009)realizadoenunareginendmicadedengueenSudamrica),serecolectaronmuestrasdecadaindividuoenlapresentacinascomoenlasegundavisitaentrelos4y14(media9)dasposteriores;ambasmuestrasseanalizaronconlapruebaDENVDetectIgMCaptureELISA.LasmuestrasdeambasvisitascuyosresultadosfuerondudosossevolvieronaanalizarconlapruebaDENVDetectIgMCaptureELISA.ElanlisisPRNTconfirmatorioserealizenlamuestradelaprimeraysegundavisitas.SeadvirtieroncambiosenlapruebaPRNTdeunaumentodecuatrovecesoms entrelasvisitas1y2,locualindicaunainfeccindedengueactual(12)en39personas.SeconsideraquelasmuestrastienenunincrementodecuatrovecesenlosnivelesdePRNTsilosvaloresdePRNTincrementande,porejemplo,PRNT=10enlaprimeravisitaaPRNT=40enlasegundavisitaparaunsubtipodedenguedeterminado.NoseconsiderquelasmuestrasquerevelaronunvalordePRNT


12/16


Tabla11Reactividaddelasmuestrasprospectivasdereaendmicade

dengue(Sitio5)enlaprimeravisitaa

Diagnsticosdefinitivos

Infeccionesdedengue

recientes

b


Ningnindiciode

infecciones

recientes

de

denguec(cantidadde

muestras)

Resultadodela

pruebaDENV

DetectIgMCapture

ELISA

Positivo 13 0

Ambiguo 4 1

Negativo 22 15

Total: 39 16

a:coincidenciadeporcentajepositivo:(13/39)33.3%(ICdel95%:20.649.1%).Coincidenciadeporcentajenegativo:(15/16)93.8%

(ICdel95%:69.7100%).b:PRNTpositivo yaumento a cuatro vecesenPRNTentre laprimeraylasegundavisitac:PRNTpositivoyaumento


13/16


Tabla13ReproducibilidaddelapruebaDENVDetectIgMCaptureELISAdeInBios

Intraensayo(duranteel Daada

Operadoraoperador

Sitioasitio Total

IDdelamuestra

nMediadeISR

Swr %CVwr SDD %CVDD SOO %CVO SSS %CVSS ST %CVT

PanelA

90 1.133 0.148 13.06 0.056 4.96 0.066 5.86 0.064 5.63 0.158 13.97

PanelB 90 1.587 0.245 15.41 0.187 11.79 0.182 11.44 0.081 5.11 0.308 19.40

PanelC 90 2.433 0.621 25.52 0.668 27.46 0.522 21.44 0.207 8.52 0.912 37.49

PanelD 90 5.821 1.18 20.28 2.014 34.59 1.072 18.41 0.693 11.91 2.334 40.10

Controlpositivo

90 11.944 1.692 14.17 2.437 20.40 2.085 17.46 1.546 12.94 2.967 24.84

Controlnegativo

90 1.148 0.152 13.25 0.088 7.67 0.064 5.61 0.051 4.47 0.176 15.31

TodoslosvaloressecalculancomondicesdeDENRA/NCASx=desviacinestndardex(wroDD)wr:duranteelensayo,DD:daada,OO:entreoperadores,SS:entresitios

%CV:=%delcoeficientedevariacin

Estudiodereactividadcruzada:SeexaminelensayoDENVDetectIgMCaptureELISAconunnmerodemuestrasdesueroquecontenananticuerposIgMdevariasenfermedadesdiferentes(vealasiguientetabla).Inicialmente,lasmuestrasseanalizaronporduplicado.Cualquiermuestraambiguaopositivaseanalizabaportriplicado.Lasmuestrasqueresultaronpositivasfueronevaluadasparadeterminarlaexposicinalvirusdeldenguemediantelapruebadeneutralizacinporreduccindeplacas.SoloseobservunareactividadcruzadasignificativaenelcasodelvirusdelNiloOccidental.

Tabla14ReactividadcruzadadelapruebaDENVDetectIgMCaptureELISAdeInBios

EnfermedadoagenteinfecciosoNmerodemuestras

DengueN.totalderesultadospositivosoambiguos

%deresultadospositivosoambiguos

detectadoporELISA

Ambiguo Positivo

Encefalitisequinaoriental(EEE)a 10 0 0 0/10 0%Encefalitisjaponesa(JE)a 2 0 0 0/2 0%

EncefalitisdeSaintLouis(SLE)a 4 0 0 0/4 0%VirusdelahepatitisBa 10 0 0 0/10 0%VirusdeEpsteinBarra 15 0 0 0/15 0%Factorreumatoide 7 0 0 0/7 0%

VirusdelahepatitisCa 10 0 0 0/10 0%Citomegalovirusa 10 0 0 0/10 0%

Anticuerposantinucleares(AAN)a 10 0 0 0/10 0%Virusdelavaricelazstera 10 0 0 0/10 0%


14/16


EnfermedaddeLymea 5 0 0 0/5 0%Leptospirosis

a,b 11 0 0 0/11 0%VirusdelNiloOccidentala 24 4 8 12/24 50%

Total 112 4 8 12/128 9.4%(12/128)a:lasmuestrasanalizadascontenananticuerposIgMespecficosdesurespectivoanalito.LareactividadcruzadaconanticuerposIgMdemalarianosehaevaluadoconelensayodeIgMdedenguedeInBios.

b:seanalizunamuestradeleptospirosisqueresultserreactivaconelensayodeIgMdedenguedeInBios mediantePRNTyresultserpositivaenelensayoPRNT(noseincluyeenestatablayaqueseconsideraunamuestrapositivafiable).Elnmerototaldemuestrasanalizadasenrelacinalsuerodereactividadcruzadafuede128trasextraertressueros(unoWNVpositivo,unoJEVpositivoyunamuestradeleptospirosispositiva)quetambinresultaronpositivosparaelvirusdeldenguemediantePRNT.DocemuestraspositivasdeIgMdelvirusdelNiloOccidentalde24analizadasresultaronserpositivasoambiguastrasunnuevoanlisismediantelapruebaDENVDetectIgMCaptureELISA.ElporcentajegeneraldelareactividadcruzadaconelIgMdelvirusdelNiloOccidentalfuedel50%.

Estudiodeinterferencia:SeanalizaroncuatrosustanciasdeinterferenciapotencialquesuelenaparecerenelsueroparaobservarsuefectomediantelapruebaDENVDetectIgMCaptureELISA.Seutilizaronunamuestranegativaycuatromuestraspositivasdelvirusdeldenguesegnsupotencia,deunpositivodbilaunoslido.Lascuatrosustanciasdeinterferenciapotencialfueronlabilirrubina(1y2mg/dL),lostriglicridos(500y3,000mg/dL),lahemoglobina(1,600y16,000mg/dL)yelcolesterol(300y500mg/dL).Labilirrubinanomostrningnefectosobrelosresultadosdelaprueba.Losnivelesaltosdetriglicridos(3,000mg/dL)mostraronunefectodbilparaaumentarelISRdelsueropositivobajo.LahemoglobinaafectaalgunasmuestrasdesueroaldisminuirelISRennivelesdehemoglobina

altosyposiblementeennivelesdehemoglobinabajos.Elcolesteroldioresultadosvariablesapartirdeestudiosrepetidos.Porlotanto,solosepuedeafirmarqueesposiblequeelcolesterolafectelosvaloresDENRAdedensidadpticaenambosnivelesdecolesterol(300y500mg/dL).LatablaqueapareceacontinuacinmuestraelporcentajedecambioenelISRobservadodelasustanciadeinterferenciacuandosecomparaconlamuestradereferencia.

Tabla15PorcentajedecambiodelvalorISCDENRAenpresenciadesustanciasdeinterferencia

Bilirrubina Triglicrido Hemoglobina Colesterol

ValorISRdecontrol

1mg/dL 2mg/dL500

mg/dL3,000mg/dL

1,600mg/dL

16,000mg/dL

300mg/dL

500mg/dL

Controlpositivo

20.84 16.4% 1.0% 1.7% 9.8% 67.2% 80.6% 21.8% 1.9%

Controlnegativo 1.181.0% 4.8% 0.4% 7.2% 1.3% 3.7% 7.0% 29.4%

MuestraD 14.40 0.9% 2.6% 20.8% 31.6% 43.5% 62.6% 10.8% 17.3%

MuestraE 6.36 25.1% 8.4% 19.4% 28.6% 59.8% 69.6% 49.5% 5.1%

MuestraF 0.94 15.5% 0.1% 7.5% 12.9% 0.1% 12.2% 4.0% 1.1%

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Ejemplo de aplicacin de la muestra de suero

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A

Controlnegativo

Muestra1 Muestra5 Muestra9 Muestra13 Muestra17 Muestra21 Muestra25 Muestra29 Muestra33 Muestra37 Muestra41

BControlnegativo

Muestra2 Muestra6 Muestra10 Muestra14 Muestra18 Muestra22 Muestra26 Muestra30 Muestra34 Muestra38 Muestra42

CControlpositivo Muestra3 Muestra7 Muestra11 Muestra15 Muestra19 Muestra23 Muestra27 Muestra31 Muestra35 Muestra39 Muestra43

DControlpositivo Muestra4 Muestra8 Muestra12 Muestra16 Muestra20 Muestra24 Muestra28 Muestra32 Muestra36 Muestra40 Muestra44

EControlpositivo

Muestra4

Muestra8

Muestra12

Muestra16

Muestra20

Muestra24

Muestra28

Muestra32

Muestra36

Muestra40

Muestra44

FControlpositivo

Muestra3

Muestra7

Muestra11

Muestra15

Muestra19

Muestra23

Muestra27

Muestra31

Muestra35

Muestra39

Muestra43

G Controlnegativo

Muestra2

Muestra6

Muestra10

Muestra14

Muestra18

Muestra22

Muestra26

Muestra30

Muestra34

Muestra38

Muestra42

HControlnegativo

Muestra1

Muestra5

Muestra9

Muestra13

Muestra17

Muestra21

Muestra25

Muestra29

Muestra33

Muestra37

Muestra41

Ejemplo de la aplicacin del RA y del NCA del dengue

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

RA deldengue

RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue

BRA deldengue

RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue

CRA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue

DRA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue RA deldengue

E NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA

F NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA

G NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA

H NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA NCA

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TEST DE ELISA PARA DENGUE - IVD DENV Detect IgM Captue ELISA Insert (Spanish Printable Version)