12-05-2015

Turbarea Virusul Rabic CanideSolomon Livia Subgrupa 3-3605

Introducere:

Importan: Rabia este una dintre cele mai mortale zoonoze cu un tablou clinic foarte dur pentru cei afectai. Ea ucide anual n jur de 70.000 de oameni. Contaminarea se face prin intermediul salivei de la un animal infestat, cel mai adesea de la cine. Odata cu apariia simptomelor, boala devine fatal.

Nivel actual de cunoatere:

Eradicarea rabiei la cini este singura cale prin care putem opri transmiterea bolii la om. Metoda preferat de control si eradicare a rabiei, la nivel mondial, este vaccinarea cinilor. Pentru ca aceasta s fie eficienta, trebuie s acopere cel puin 70% din populaia de cini n care rabia este prezent.

Eventuale probleme nerezolvate sau contradictorii referitoare la tema abordat:

Rabia este prezent pe toate continentele, Asia i Africa fiind cele mai afectate.Supraveghera i raportarea cazurilor de rabie detectate pe teritoriile naionale, prin intermediul OIE World Animal Health Information System (Organizaia Mondial a sntii Animalelor), sunt eseniale pentru controlul bolii.OIE dezvolt standarde tiinifice de baz i ghiduri pentru controlul bolilor animalelor i previne rspndirea lor. Astfel au ajutat la eradicarea bolii n unele ri, datorit implementrii unor masuri sanitar veterniare foarte stricte. Totui, n unele ri, rabia este n continuare prezent att la animalele slbatice ct i la cele domestice.

1) Virusul rabic:a) ncadrare taxonomic

Agentul etiologic al encefalitei rabice aparine ordinului Mononegavirus, familia Rhabdoviridae, genul Lyssavirus.b) CaracteristiciLyssavirus prezint un genom ARN nesegmentat cu o lungime de 12 kb de polaritate negativ cu 5 proteine virale: nucleoprotein N, fosfoprotein P, protein matriceal M, glicoprotein G i polimeraz L. Particula de lyssavirus are form de glonte, 100-300nm lungime i 75nm n diametru. Este compus din uniti morfo-funcionale: (1) nveliul extern care este acoperit cu proiecii spinoase (circa 10mm), corespunztor aranjamentului din protein G, care recunoate receptorii virali specifici membranelor celulelor succeptibile.(2) Capsida intern ribonucleic, care este compus dintr-un genom ARN asociat cu proteina N, polymeraza L i cofactorul su de protein P (numit formal M1). Complexul de capsid ribonucleic asigur transmiterea i replicarea genomului n citoplasm.

1) Patogeneza infeciei cu virusul rabic

Pentru realizarea infeciei rabice, ajuns n organism, virusul se fixeaz pe filete nervoase recent lezionate. La locul de ptrundere, prin intermediul miocitelor, atinge terminaiile tendinoase bogat inervate, ptrunde n nervi, se propag centripet, pasiv, lent, invadnd treptat nervii periferici. Ajunge n ganglionii spinali de unde cuprinde encefalul determinnd encefalit rabic. Pe msur ce se multiplic n sistemul nervos central, se disperseaz din nou n organism, n sens centrifug, tot pe traiectul nervilor, producnd septinevrit. Difuzarea n organism se mai face i pe cale sanguin i limfatic. Modificrile au loc n sistemul nervos central n celulele nervoase senzitive i n pereii vasculari. Apariia semnelor prodromale este determinat de iritaia celulelor nervoase senzitive. Activitatea funcional a neuronilor este exaltat, animalul prezentnd stri de excitaie psihic, motorie, senzitiv, exagerare reflexelor, excese de furie i agresivitate. n ultima faz sunt distrui neuronii motori, animalul suferind paralizii progresive sfrite prin moarte prin asfixie (paralizia centrilor respiratori). n unele cazuri, virusul ajuns n centrii nervoi poate rmne n stare latent pn cnd este reactivat de anumii factori favorizani. Se mai poate ntmpla ca dup multiplicare, virusul s fie distrus de forele de aprare ale organismului. Totui leziunile deja provocate vor conduce la moartea animalului.

Tablou clinic i epidemiologic

Turbarea la cine: Cinele este animalul care face cel mai frecvent infecie rabic, toate rasele fiind egal receptive. Simpotmele clinice difer de la caz la caz i sunt polimorfe. Evoluia acut are dou forme clinice principale: furioas i paralitic. Forma furioas este caracterizat de o stare de excitaie i de excitabilitate extrem, manifestate prin furie i prin agresivitate, fiind forma ce caracterizeaz ntocmai boala. Ea dureaz ntre 8 i 12 zile. Evoluia bolii are trei etape: prodromal, de stare de excitaie, terminal paralitic. Faza prodromic poate trece neobservat. Singurele semne clinice sunt schimbrile de comportament: animalul devine capricios, irascibil, mai afectuos fa de stpn, sau din contr, indiferent. Devine trist, se retrage n locuri ntunecoase, izolate. Strile se accentueaz, animalul se mic ncontinuu, rscolete aternutul, scormonete pmntul, reacioneaz brusc i exagerat la orice excitaie din mediul extern. Uneori pare s aib halucinaii auditive i vizuale. Nu i poate menine atenia dect un timp foarte scurt. Apetitul este conservat la nceput i se diminu treptat, gustul se pervertete i animalul nghite obiecte necomestibile. La locul mucturii poate s apar prurit, de aceea animalul i linge, freac sau muc regiunea pn la mutilare. Apetitul hidric este diminuat sau crescut, fr hidrofobie. La masculi se poate observa o exagerare a instinctului genezic. Vocea devine rguit cu ltrat scurt i sacadat. Aceast perioad are o durat de aproximativ 1-3 zile. Faza de stare numit i perioada de excitaie, caracterizat de furie i de agresivitate. La nceput, cinele devine agresiv fa de cellalte animale fr motiv. Reacioneaz furios la stimuli minori. Accesele de furie sunt de scurt durat la nceput, crescnd progresiv o dat cu avansarea n boal. Alterneaz cu perioade de linite, dar sunt din ce n ce mai dese. Fora cu care muc este foarte mare. Adesea i provoac rupturi dentare i fracturi maxilare. Fasciesul devine caracteristic: privire fix, pnditoare, feroce n timpul acceselor i rtcit, inexpresiv n perioada dintre crize. Animalul prezint dromomanie: fuge de acas, parcurge distane mari fr nicio int i atac fiinele care i ies n cale. Cinii turbai au vocea rguit iar ltratul sfrete printr-un urlet lung. Uneori se constat strabism divergent sau convergent, mioz sau midriaz, inegalitate pupilar, vom, diaree cu snge. Aceast stare dureaz ntre 2 i 6 zile. Faza final, paralitic, este caracterizat de paralizia muchilor linguali, maseteri, oculomotori, laringieni. Cinele nu mai poate degluti, muca, devine afon, maxilarul inferior devine inert. Gura este ntredeschis cu saliv filant i vscoas n cantiti mari. Ochii sunt imobili cu pleoapa a treia proeminent. Paralizia se extinde treptat, accesele de excitaie fiind din ce in ce mai rare i mai terse. La un moment dat se instaleaz paraplegia, animalul nu se mai poate deplasa, iar dup cateva ore de agonie, acesta moare prin asfixie.Aceast faz dureaz de regul 1-3 zile, rar ajungand la o durat de 5 zile. La cine exist i o form gastrointestinal, cu caractere intermediare i cu manifestri monosimptomatice. Animalul manifest colici, vom, enterit hemoragic, fr agresivitate sau paralizie. Alte forme intermediare sunt cea meningeal, supraacut i cea atrofic, caracterizat doar prin slbire progresiv. n Africa exist o form unic de turbare canin, cu o perioad de incubaie scurt, lipsit de faza furioas, exprimat clinic prin diaree i paralizie progresiv, apreciat c ar fi determinat de un virus rabic atenuat.

Caractere epidemilogice: Datorit sursei i modului de contaminare i de transmitere, turbarea poate avea caracter sporadic, enzootic sau epizootic, vectorul principal fiind biologia speciei. Surse de contaminare: Exist dou tipuri de rezervoare naturale: domestic (urban) i slbatic (silvatic), ntre cele dou existnd relaii de reciprocitate. Cinele are principalul rol n turbarea urban, pe cnd vulpea l are pe cel din mediul slbatic (60% din cazurile de contaminare), alturi de lilieci. Acetia triesc n colonii, favoriznd contaminarea rapid a tuturor membrilor i a locurilor pe unde stau. La aceast specie, virusul nu invadeaz sistemul nervos central, animalul nu face encefalit i nu moare, dar excret virusul prin glandele salivare. Existena cinilor comunitari n toate regiunile unei ri confer bolii un caracter foarte dispersat, cu inciden sezonier n perioada de mperechere. La vulpi, cea mai mare inciden de cazuri este nregistrat n primele sptmni ale lunii martie (perioada de mperechere are loc n decembrie-februarie) i n perioadele de deplasare pentru cutarea unui domeniu vital. O alt surs de infecie o reprezint cadavrele animalelor bolnave. Contaminarea se produce ori n timpul necropsiei sau n timpul recoltrii creierului, ori cnd animalul este devorat. Obiectele contaminate pot servi ca surs de infecie atunci cnd vin n contact imediat cu o plag recent, virusul distrugndu-se rapid n mediul extern.Succeptibilitate Sunt succeptibile la infecia cu virusul rabic toate speciile de mamifere domestice i slbatice, indiferent de ras, vrst, sex sau ali factori posibili determinani. n funcie de modul de via i de posibilitile de contaminare, frecvena bolii variaz de la o specie la alta, cel mai des fiind ntlnit la caine, n proporie de 80%. Acesta, trind n libertate sau semilibertate, are cele mai multe posibiliti de contaminare. Urmtoarea specie dup cine, este pisica. Urmeaz rumegtoarele la care evolueaz adesea sub form de enzootii, mai ales n sezonul de punat. La psri apare doar n cazuri excepionale, datorit sistemului propiu de aprare. Animalele tinere sunt mai sensibile la infecie dect cele adulte. Factorii care influeneaz receptivitatea sunt insuficient cunoscui. Astfel, n cadrul speciilor foarte sensibile, au fost ntlnii indivizi care au rezistat la infecie chiar i n cazul inoculrii intracerebrale. Animalele cu snge rece sunt rezistente la infecie. Mamiferele hibernante, n perioada activ fac o form asemntoare cu cea a celorlalte mamifere, n perioada latent, evoluia bolii este mult ncetinit. Virusul rabic se conserv numai n organismul animalelor infectate, ce constituie rezervoarele naturale. Astfel, animalele bolnave i cele infectate, aflate n ultima faz a perioadei de incubaie sunt surse naturale de infestare. Virusul se gsete n sistemul nervos central i periferic, dar repartiia lui nu este uniform. Cea mai mare cantitate de virus se gasete n creier, mduva spinrii i ganglionii nervoi coninnd o cantitate mic de virus. Virusul este prezent n saliv pe tot parcursul bolii, pe cnd n urin se gsete rar i n cantitate mic, iar n lapte nu se gsete deloc.Transmitere: Transmiterea infeciei se face pe cale direct, prin muctura animalelor turbate care inoculeaz n plgile respective virusul aflat n saliv. Aceasta este infectat nc din perioada de incubaie, cu 1-5 zile naintea apariiei vreunui semn de turbare. Eliminarea virusului prin saliv se produce numai la 60-70% din cazuri la cini. Virusul poate fi inoculat i prin zgrieturi, dac sunt murdrite ghearele cu saliv proaspt virulent. Cele mai periculoase sunt cele profunde care lezioneaz un numr mare de filete nervoase, cum ar fi cele de pisic. Virusul mai poate fi depus i prin lins, la nivelul diferitelor plgi sau eroziuni proaspete, fie chiar i de dimensiuni microscopice, nehemoragice. Virusul rabic nu penetreaz mucoasele intacte, infecia transplacentar de la mam la ft fiind rar semnalat. Un studiu efectuat n America, ntr-o peter cu lilieci infectai, au artat c infecia se poate realiza si pe cale aeriana cu picturi de saliv, mucoasa cilor respiratorii permind contaminarea cu acest virus.

Metode de diagnostic n caz de infestaie cu virusul rabic

1) Metodologii oficiale de confirmare

Perioada de incubaie este dependent de patogenitatea tulpinii, de sediul i gravitatea leziunii. Este mai scurt la animalele tinere, mucate n regiunile cefalice sau cu mucturi multiple. Pentru a fi introdus n statisticile O.I.E. (Organizaia Mondial pentru Sntatea Animalelor), perioada a fost aproximat la 6 luni. Tabloul clinic i leziunile macroscopice sunt nespecifice. Ele difer foarte mult de la un animal la altul, n funcie de forma clinic a bolii i de momentul n care intervine moartea. Acestea furnizeaz date care determin suspiciunea de turbare. Singura cale de a stabili un diagnostic cert, este evidenierea virusului sau a antigenului viral prin teste de laborator.

Tablou anatomopatologic:

Leziunile macroscopice:Cadavrele sunt emaciate, cu prul murdar, prezint numeroase plgi externe, botul este uscat, acoperit uneori cu saliv cleioas, murdar. Se observ plgi recente la nivelul buzelor, limbii, al feei. Incisivii i molarii sunt rupi, maxilarul inferior poate fi fracturat. La deschiderea cadavrului se constat o staz venoas general cu snge slab coagulat de culoare negricioas, asfixic. Stomacul lipsit de alimente poate conine corpi strini. Meningele, creierul i mduva spinrii pot prezenta congestie i edem. Leziuni microscopice:Pentru diagnosticul turbrii, foarte importante sunt modificrile microscopice de la nivelul sistemului nervos central, cu caracter de encefalomielit limfocitar nepurulent. Aceste leziuni pot fi specifice sau nespecifice. Cele nespecifice sunt infiltraii limfocitare i monocitare din sistemul nervos central i ganglionar. Acestea pot fi difuze, pericelulare sau perivasculare, sub form de manoane. Leziunile aparatului conjunctiv vascular se manifest prin dilatarea vaselor de calibru mic, hemoragii prin diapedez i perivascularit infiltrativ. n esutul glial se observ hiperplazia celulelor gliale i satelite, mai ales n jurul celulelor fibrelor nervoase degenerate, nsoit de neuronofagie total sau parial, urmat de nlocuirea celulei degenerate i fagocitate cu elemente neoformate. Aa apar nodulii rabici ai lui Babe. Acetia sunt celule rotunde, cu aspect nodular. Se gsesc i n alte boli de natur viral (boala Carr, Aujeszky, pesta porcin, etc.), fiind descoperite de Babe n turbare.n celulele nervoase se produc modificri distrofico-necrotice, manifestate prin tumefierea celulelor, degenerarea gras i hidropic, cromatoliz (dispariia corpilor Nissl), picnoz (micorarea nucleului prin modificarea cromatinei), cariorex (fragmentarea nucleului). Aceste modificri sunt urmate de fenomenul de neuronofagie cu formarea nodulilor rabici ai lui Babe. Leziunile se gsesc i n sistemul nervos periferic: stroma ganglionar este puternic infiltrat cu celule hiperplaziate. Se observ i un edem pericelular pronunat cu degenerarea celulelor nervoase i neuronofagie cu acumularea unor celule satelite de form rotund, denumite nodulii lui Van Gehuchten-Nelis. n nervii periferici se produc endoleziuni i perinevrit, degenerarea tecilor de mielin i se observ i infiltrat celular limfoid. Cele mai evidente leziuni sunt cele de la locul mucturii. Tocmai de aceea apar pruritul i senzatia de durere la animalele turbate.Leziunile specifice sunt incluziile oxifile din celulele nervoase. Acestea sunt denumite corpusculii Babe-Negri i sunt caracteristici n turbare. Se gsesc n citoplasma celulelor nervoase din cornul lui Ammon (Hipocampus) i n alte pri ale sistemului nervos central i periferic i n unele organe sau n glande. Ele au form rotund sau oval i conin granulaii bazofile n substana bazal care este oxifil i omogen. Numrul i dimensiunea corpusculilor Babe-Negri variaz n funcie de durata evoluiei, fiind mai mari i mai muli cnd boala evolueaz lent. Acetia nu se observ n toate cazurile de turbare. Incluziile oxifile din creierul animalelor moarte de turbare pot avea i aspect de coci, fiind intra- i extracelulare, fiind formate numai din substana bazal. Acestea reprezint faza iniial de dezvoltare a corpusculilor Babe-Negri.

Diagnostic de laborator:

Laboratoarele care lucreaz cu virusuri lyssa sau cu materiale suspecte, trebuie s respecte reglementrile i directivele naionale pentru sigurana biologic, stabilite n articolul Boli de Risc de Gradul 3, din capitolul 1.1.3: Sigurana i securitatea biologic n laboratoarele pentru diagnostic microbilogic veterinar i alte faciliti ale Manualului pentru Teste de Diagnostic i Vaccinare pentru Animalele Terestre al O.I.E. (Manualul Terestrial O.I.E.). Pentru efectuarea diagnosticului se vor trimite la laborator probe biologice recoltate conform normelor O.I.E. de la animalele suspecte de turbare: se recolteaz probe bilogice din sistemul nervos central al animalului suspectat, imediat dup deschiderea craniului. Dac nu poate fi deschis craniul, exist alte dou metode alternative pentru colectarea probelor encefalice: gaura occipital i canalele retro-orbitale. Transportul probelor este inclus n procedura de diagnosticare a Rabiei inclus n Manualul Terestrial O.I.E.

Metode de evideniere: Pentru a stabili un diagnostic pozitiv, este absolut necesar evidenierea antigenului viral pentru virus,lp rabic, a acidului nucleic sau a virusului. Metodele de identificare se aplic pe probele de hipocamp i de bulb cerebral. Cele pentru identificare imuno-chimic a antigenului rabic constau n tehnica anticorpilor fluoresceni (FAT), testul imunoenzimatic rapid (PREID - rapid rabies enzyme immunodiagnosis/ RIDT - Rapid immunodiagnostic test), testul imuno-chimic i testul pentru detectarea antigenului rabic (ELISA - Enzyme-linked immunosorbent assay). ELISA este un test rapid, simplu i economic cu rezultate corelate cu cele obinute prin imunofluorescen n 95% din cazuri. Testul de imonofluorescen este specific i rapid i asigur o certitudine pn la 98-100% din cazuri, n 24 de ore. Poate fi folosit ca metod unic de diagnostic i pot fi identificate toate genotipurile de virus. Prin testul PREID se identific numai genotipul 1. Evidenierea celulelor nervoase intacte se face prin amprentare de hipocamp proaspt pe lame de sticl colorate prin metoda Sellers. Se pot face i seciuni histologice prin metoda Mann. Corpusculii Babe-Negri apar colorai n rou, confirmnd existena infeciei. Absena lor nu infirm diagnosticul de turbare, datorit posibilitii de pn la 15% de a obine rezultate fals-negative. Simultan se execut proba biologic. Se inoculeaz intracerebral oareci nou nscui sau tineri, cu o suspensie din hipocamp. Sunt inui sub observaie 21 de zile. Cei care au murit ntre a 10-a i a 21-a zi de la inoculare se examineaz prin imunofluorescen. Totodat se inoculeaz i o cultur monocelular de neuroblastoame. Antigenul nucleocapsidei virale poate fi pus n eviden dup 18-24 de ore tot prin imunofluorescen. Pentru diferenierea tulpinilor vaccinale de cele slbatice i pentru identificarea originii geografice a tulpinilor, se pot folosi: antiser monoclonal, probe cu acizii nucleici specifici sau reacia n lan a polimerazei (RT-PCR) urmat de segmentarea acizilor dezoxiribonucleici n zonele genomice. Aceste determinri trebuiesc executate n laboratoare specializate cum sunt OIE sau WHO Reference Laboratories.

2) Alte metode de evideniere a virusului

Imunoperoxidaza indirect are o specificitate de 100% i o sensibilitate de 92,85% dar nu este utilizat.Amprentele de la nivelul epiteliului cornean, cel nazal i cel bucal tratate prin tehnica anticorpilor fluoresceni, permit stabilirea diagnosticului cu aproximativ 5 zile naintea apariiei primelor semne clinice, dar nu au fost impuse ca metode de diagnostic pentru c sunt dificil de aplicat la animale.

3) Diagnosticul rabiei la animalele n via

Pentru controlul statusului imunologic al animalelor vaccinate, se fac urmtoarele teste serologice standardizate, pentru controlul reactanilor serologici:- test de neutralizare a virusului rabic dintr-o cultur celular de ctre anticorpii aflai ntr-o prob de ser sanguin; - test imunoenzimatic ELISA cu anticorpi contra proteinei G- test de seroneutralizare pe oareci. Acesta se practic n cazul n care primele dou nu sunt posibile. Rezultatele se exprim n uniti internaionale sau echivalente, raportate la un ser standardizat internaional.

Cazurile suspecte de rabie, mai ales cele din rile indemne, trebuiesc testate printr-un kit de confirmare recunoscut O.I.E. (precum neutralizarea virusului rabic din cultur celular sau testul de seroneutralizare pe oareci), de fiecare dat cnd testarea FAT genereaz un rezultat pozitiv. Testul serologic este foarte rar utilizat pentru stabilirea unui diagnostic ante-mortem, datorit seroconversiei intarziate i a ratei de deces foarte ridicat a purttorilor, dar este folosit pentru a evalua seroconversia ulterioar vaccinrii i pentru studii epidemiologice.

Diagnostic diferenial

n cadrul diagnosticului diferenial trebuie luat n considerare orice suspiciune de encefalit sau afeciune neurologic cu manifestri nervoase. Formele de turbare cu evoluie supraacut vor fi difereniate de meningoencefalita din boala Carr: diferenierea se face pe baza anamnezei, dup catarul mucoaselor i prin faptul c n infestaia cu virusul bolii Carr are i alte localizri. n boala Carr apare doar paralizia maxilarului inferior, fr alte semne de boal, luxaia temporo-mandibular se instaleaz brusc, regiunea articulaiei respective este deformat i foarte sensibil, maxilarul inferior este imobil, neputnd fi apropiat de cel superior, iar animalele nu prezint tulburri psihice, simptomele instalndu-se brusc.

Bibliografie

(1) Tratat de boli infecioase ale Animalelor vol.II Tudor Perianu & Co.(2) WHO Expert Consultation on Rabies Geneva 2004(3) Contribuie la studiul enzootic al Rabiei n Lyon Michel Dizien(4) http://www.oie.int/infographic/rabies/index.html