Vanilil Salisilat

7/23/2019 Vanilil Salisilat

1/22

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Vanilin (4-hidroksi-3-metoksibenzaldehida) merupakan kristal berwarna

putih atau putih kekuningan yang banyak digunakan sebagai pewangi

makanan. Vanilin dihasilkan dari buah panili (Vanilla fragrans). Tanaman

panili dapat tumbuh dengan baik di kawasan tropis. Vanilin merupakan

senyawa aldehida aromatik dengan rumus molekul C!"3. #ilihat dari

struktur kimianya$ %anilin merupakan senyawa fenol tersubstitusi gugus

metoksi pada posisi orto dan gugus aldehida pada posisi para$ sehingga

%anilin dapat dikelompokkan sebagai senyawa antioksidan dan &uga

mempunyai akti%itas antibakteri ('itzgerald et al. 4) *pabila %anilin

dikenai reaksi reduksi akan diperoleh senyawa %anilil alkohol menurut

persamaan reaksi berikut (+udimarwanti ,)

Vanilil alkohol &uga merupakan senyawa fenolik$ sehingga memiliki

potensi sebagai antioksidan. enyawa Vanilin biasa digunakan sebagai zat

pengaroma pada makanan dan sediaan farmasi. +eberapa riset menun&ukkan

bahwa turunan %anillin memiliki beberapa akti%itas$ antara lain akti%itas

antimikroba (/umar et al. 01 !arini et al 0) dan antioksidan ("li%eira

et al. 04). *kti%itas antimikroba turunan %anillin meliputi gram positif dan

negatif (2akhoy et al. ,)$ dalam penelitian ini bakteri u&i yang digunakan

adalah Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.

#wi inarto dan C. +udirmanwati tahun 03 telah berhasil mensintesis

turunan %anillin yaitu %anilil sinamat dari %anilil alkohol. 2eaksi esterifikasi

dipengaruhi beberapa faktor$ salah satunya halangan atom sterik. enyawa

1


2/22

%anillin direduksi terlebih dahulu men&adi %anilil alkohol untuk

meminimalisasi gangguan halangan sterik pada reaksi esterifikasi. 2eaksi

esterifikasi merupakan reaksi yang penting. /arena produk senyawa ester

banyak digunakan untuk aplikasi farmasi$ industri makanan5minuman dan

industri parfum. 6ster dapat disintesis dengan ara mereaksikan asam

senyawa asam karboksilat dengan alkohol yang dikenal dengan reaksi

esterifikasi. 7ada dasarnya reaksi esterifikasi memiliki energi akti%itasi yang

tinggi dan membutuhkan waktu yang lama untuk menapai

kesetimbangannya. 7roses esterifikasi dapat berlangsung dengan ataupun

tanpa katalis ('essenden$ 0,8).

*sam salisilat merupakan senyawa yang asam karboksilat memiliki

beberapa akti%itas diantaranya antiinflamasi$ fungsitatik$ bakteriostatik$

analgetik$ dan efek tabir surya (ri /. et al. 0)

7enelitian tentang pengembangan senyawa antibakteri telah banyak

dikembangkan baik terhadap bahan dari senyawa alam ataupun senyawa

sintetik. 7ada penelitian ini akan dilakukan sintesis senyawa ester %anilil

salisilat dengan mereaksikan %anilil alkohol dengan asam salisilat$ dimana

%anilil alkohol diperoleh dari reduksi senyawa %anillin$ dengan persamaan

reaksi sebagai berikut

enyawa ester %anilil salisilat yang diperoleh diharapkan memiliki akti%itas

antibakteri yang lebih baik dibandingkan senyawa %anillin.

2


3/22

BAB II

PERUMUSAN MASALAH

7enelitian ini bertu&uan melakukan modifikasi struktur %anillin dengan

asam salisilat dan mengukur akti%itas antibakterinya terhadap Escherichia

coli*TCC 9, dan Staphylococcus aureus *TCC 9,3..

#ari latar belakang di atas maka dirumuskan masalah :+agaimaha

struktur senyawa yang diperoleh dari hasil modifikasi %anillin dengan asam

salisilat dan apakah %anilil salisilat memiliki efek antibakteri terhadap

Escherichia coli*TCC 9, dan Staphylococcus aureus *TCC 9,3; dan tidak lebih dari 03$ >

C!"3$ dihitung terhadap zat yang telah dikeringkan. 7emerian zat berupa

hablur halus berbentuk &arum 1 putih hingga agak kuning1 rasa dan bau khas.

/elarutan zat sukar larut dam air$ larut dalam air panas mudah larut

dalam etanol (,9 >) 7$ dalam eter 7 dan dalam larutan alkali hidroksida dan

larutan dalam gliserin (#epkes 2? 0,,9). truktur Vanilin sebagai berikut

Vanilin (4-hidroksi-3-metoksibenzaldehida) merupakan kristal berwarna

putih atau putih kekuningan yang banyak digunakan sebagai pewangi

makanan. Vanilin dihasilkan dari buah panili (Vanilla fragrans). Tanaman

panili dapat tumbuh dengan baik di kawasan tropis (astraprad&a. $ 0,=).

Vanilin merupakan senyawa aldehida aromatik dengan rumus molekul

C!"3. #ilihat dari struktur kimianya$ %anilin merupakan senyawa fenol

tersubstitusi gugus metoksi pada posisi orto dan gugus aldehida pada posisi

para$ sehingga %anilin dapat dikelompokkan sebagai senyawa antioksidan

(arifudin$ ).

B. Asam Salisilat

*sam salisilat telah digunakan sebagai bahan terapi topikal se&ak lebih dari

tahun yang lalu.0 #alam bidang dermatologi$ asam salisilat telah lama

dikenal dengan khasiat utama sebagai bahan keratolitik. !ingga saat ini asam

salisilat masih digunakan dalam terapi %eruka$ kalus$ psoriasis$ dermatitis

4


5/22

seboroik pada kulit kepala$ dan iktiosis. 7enggunaannya semakin berkembang

sebagai bahan peeling dalam terapi penuaan kulit$ melasma$ hiperpigmentasi

pasainflamasi$ dan akne.4$9 #i *merika erikat$ berbagai sediaan

mengandung preparat asam salisilat dalam konsentrasi 0-4>.8 7enggunaan

asam salisilat topikal relatif aman. 6fek samping lokal yang sering di&umpai

pada penggunaan asam salisilat adalah dermatitis kontak (ri /aton . et al.

0). truktur *sam alisilat sebagai berikut

*sam alisilat mengandung tidak kurang dari

,,$9> dan tidak lebih dari 00$> C=!8"3 dihitung

terhadap zat yang telah dikeringkan. 7emerian asam salisilat berupa hablur

putih$ biasanya berbentuk &arum halus atau serbuk hablur halus putih$ rasa

agak manis$ ta&am dan stabil di udara. /elarutan asam salisilat adalah sukar

larut dalam air dan dalam benzene$ mudah larut dalam etanol$ dan dalam eter$

larut dalam air mendidih$ agak sukar larut dalam kloroform. ifat /imia

*sam salisilat$ dikenal &uga dengan -hydro@y-benzoi aid atau

orthohydrobenzoi aid$ memiliki struktur kimia C=!8"3. *sam salisilat

memiliki p/a $,= dan &arak lebur 09A dan 080A (#epkes 2? 0,,9)

*sam salisilat dapat diekstraksi dari pohon willow bark$ daun wintergreen$

spearmint$ dan sweet birh. ,$0 aat ini asam salisilat telah dapat diproduksi

seara sintetik. +entuk makroskopik asam salisilat berupa bubuk kristal putih

dengan rasa manis$ tidak berbau$ dan stabil pada udara bebas. +ubuk asam

salisilat sukar larut dalam air dan lebih mudah larut dalam lemak. ifat

lipofilik asam salisilat membuat efek klinisnya terbatas pada lapisan

epidermis. Banfaat dan Bekanisme /er&a *sam alisilat Topikal 6fek

/eratolitik dan #esmolitik *sam salisilat telah digunakan seara luas dalam

5


6/22

R C

O

OH

H+

R' OH R C

O

OR' H2O+ +

asam

karboksilat

suatu alkohol suatu ester

terapi topikal sebagai bahan keratolitik. at ini merupakan bahan keratolitik

tertua yang digunakan se&ak 0=4. +erbagai penelitian menyimpulkan bahwa

asam salisilat memberikan banyak efek antara lain efek analgetik$

antipruritus$ analgesi$ antiinflamasi$ bakteriostatik$ fungsitatik$ efek tabir

surya$ dan lain-lain (ri /aton . et al. 0)

C. 2eduksi

Benurut 'essenden dan 'essenden (0,8) suatu aldehida atau keton dapat

direduksi men&adi suatu alohol$ suatu hidrokarbon atau suatu amina. 7roduk

reduksi tergantung pada bahan pereduksi dan struktur senyawa karbonilnya.

*da 3 pereaksi pereduksi yaitu hidrogenasi$ hidrida logam dan aminasi

reduktif. 7roses reduksi dengan hidrogenasi agak merepotkan karena

memerlukan tanki gas dan be&ana bertekanan. uatu prosedur alternati%e

melibatkan penggunaan hidrida logam. #ua zat pereduksi yang

bermanfaatadalah litium alumunium hidrida (D*!) dan natrium borohidrida

(Ea+!4)$ keduanya mereduksi aldehida dan keton men&adi alohol.

Eatrium borohidrida merupakan zat pereduski yang lebih lembut daripada

D*!. 2eaksinya dapat dilakukan dalam air atau alohol berair sebagai pelarut.

Fntuk mereduksi suatu aldehida atau keton dipilih Ea+!4karena lebih mudah

penanganannya dan tidak reaktif terhadap air. Ea+!4mereduksi aldehida dan

keton dengan epat tetapi sangat lambat mereduksi ester.

#. 6sterifikasi

Benurut 'essenden dan 'essenden (0,8) ester merupakan senyawa

organik yang sangat berguna$ strukturnya dapat diubah men&adi bentuk

senyawa lain. uatu ester dapat dibentuk dengan reaksi langsung antara suatu

asam karboksilat dengan suatu alkohol yang disebut dengan reaksi esterifikasi.

6ster asam karboksilat ialah suatu senyawa yang mengandung gugus GC""2

dengan 2 dapat berbentuk alkil$ aril maupun lakton atau ester siklik . 2eaksi

esterifikasi seara umum dapat digambarkan sebagai berikut

6


7/22

R1 C

R3

R2

OH R1

HC

R2

OH R1

H2C OH H3C OH

R1 C C

R3

R2 O

OH

R1

HC C

R2

O

OH

R1

H2

C C

O

OH

H3C C

O

OH

HC

O

OH

Hambar 9. 7ersamaan reaksi esterifikasi seara umum ('essenden

dan 'essenden$ 0,8).

Da&u reaksi esterifikasi suatu asam karboksilat tergantung pada

a. !alangan atom sterik

Benurut 'essenden dan 'essenden (0,8) halangan sterik dari alkohol dan

asam karboksilat merupakan faktor yang paling berpengaruh terhadap la&u

reaksi esterifikasi. Frutan kereaktifan alkohol terhadap la&u pembentukan

ester adalah sebagai berikut

+ertambahnya kereaktifan

Frutan kereaktifan asam karboksilat terhadap la&u reaksi esterifikasi

adalah sebagai berikut

+ertambahnya kereaktifan

b. /atalis

Eukleofil lemah seperti alkohol memiliki la&u yang sangat lambat

dalam menyerang atom karbonil 2C""! yang kurang reaktif. ifat

kereaktifan karbonil ini dapat ditingkatkan dengan ara protonasi$

ontohnya dengan menggunakan katalis asam. /atalis asam akan

meningkatkan kemudahan lepasnya gugus pergi$ yaitu pelepasan ! " dari

gugus asam karboksilat (ykes, 0,,).

7


8/22

E. Karakterisasi Hasil Sintesis

1. Krmatgra!i La"is Ti"is

/romatografi adalah teknik pemisahan berdasarkan perbedaan

interaksi komponen-komponen dalam sampel terhadap fasa diam dan fasa

gerak. 'asa diam kromatografi dibuat dalam bentuk lapisan tipis. Dapisan

tipis ini berupa bahan kolom (fasa diam) yang dilapisi seara tipis dan

merata pada permukaan lembaran kaa$ kertas$ plastik atau logam

alumunium. 'asa diam yang biasa digunakan dalam /DT adalah silika dan

alumunia$ fasa diam lain yang yang digunakan adalah selulos$ resin$

penukar ion dan gel. edangkan fasa gerak yang digunakan tergantung

pada sifat kepolaran sampel yang akan dipisahkan. /adang-kadang

digunakan ampuran dua atau lebih pelarut untuk mendapatkan pemisahan

yang lebih baik. Cara ini banyak digunakan karena adanya beberapa

keuntungan yaitu peralatan yang digunakan sedikit$ penger&aannya

sederhana$ waktu analisis epat$ pemisahannya ukup baik.

eara dasar proses pemisahan pada /DT disebabkan adanya

keseimbangan yang berurutan dari komponen yang dipisahkan dalam dua

fasa yaitu fasa diam dan fasa gerak. Teknik penger&aan /DT sebagai

berikut$ fasa diam (pengadsorb) dilapisi pada suatu lembaran kaa atau

media yang lain sebagai pendukungnya. at yang akan dipisahkanditotol

pada lempengan fasa diam tersebut. Dempengan ini diletakkan tegak (agak

miring) di dalam wadah dengan sedikit pelarut (fasa gerak) (unardi$

8).

7elarut naik melalui lapisan adsorben karena gaya kapiler dan

ampuran dalam sampel bergerak dengan keepatan yang berbeda

tergantung kekuatan interaksinya dengan adsorben. +ila komponen

ampuran memiliki sifat kepolaran yang mirip dengan adsorben maka

pada akhir kromatografi akan tertahan pada plat dan sebaliknya &ika sifat

kepolarannya lebih mendekati fase gerak$ komponen ampuran akan

terikat oleh fase gerak sehingga memiliki nilai retardation factor (2f) yang

8


9/22

besar. 2etardation fator adalah nilai perbandingan &arak yang ditempuh

oleh komponen ampuran terhadap &arak yang ditempuh oleh eluen dalam

waktu yang sama (7admawinata 0,,0).

pelarutditempuhyangIarak

spotditempuhyangIarak2f =

!arga 2f dipengaruhi oleh beberapa faktor$ yaitu &enis fasa diam$

ketebalan lapisan$ kadar ampuran yang dipisahkan$ &enis pelarut yang

digunakan dan &umlah zat yang ditotolkan (unardi 8). /romatografi

lapis tipis biasanya digunakan untuk menentukan &umlah komponen dalam

sampel$ memonitor &alannya reaksi$ menentukkan efektifitas pemurnian$

menentukan kondisi yang sesuai untuk kromatografi kolom dan

memonitor kromatografi kolom.

#eteksi kromatogram merupakan tahap akhir yang penting dalam

kromatografi. /romatogram yang diperoleh dapat seara langsung

ditentukan seara kualitatif dan kuantitatif menggunakan densitometer$

yaitu TDC anner. 7engukuran densitometer dapat dilakukan berdasarkan

ara absorpsi$ refleksi dan transmisi. inar dari sumber ahaya dibentuk

men&adi sinar monokromatis ini difokuskan dan diarahkan ke plat

kromatografi. inar dikon%ersi dalam bentuk punak-punak (Chernalia

)

#. S"ektrsk"i In!ra Mera$ %&T'IR(

pektroskopi infra merah merupakan teknik spektrokopi yang

digunakan untuk mengidentifikasi gugus-gugus fungsional yang terdapat

pada suatu senyawa organik. 7ada dasarnya inti-inti atom yang terikatoleh ikatan ko%alen dapat mengalami getaran (%ibrasi) atau osilasi. +ila

suatu molekul menyerap radiasi infra merah$ energi diserap akan

menyebabkan kenaikan dalam amplitudo getaran atom-atom di dalamnya.

*tom dalam molekul ber%ibrasi seara konstan baik berupa uluran

(strehing) maupun tekukan (bending). #engan demikian molekul berat

akan dalam keadan %ibrasi tereksitasi sehingga energy yang terserap ini

akan dilepas kembali dalam bentuk panas bila molekul itu kembali ke

9


10/22

keadaan dasar. +anyak energy yang diserap oleh suatu ikatan bergantung

pada perubahan dalam momen ikatan seperti %ibrasi atom-atom yang

saling berikatan. "leh sebab itu$ tipe ikatan yang berbeda akan menyerap

radiasi infra merah pada pan&ang gelombang yang berbeda pula$ sehingga

spektroskopi infra merah dapat digunakan untuk u&i kualitatif yaitu untuk

mengidentifikasi berbagai gugus fungsi yang terdapat dalam senyawa

yang diu&ikan (illiams et al. 0,).

pektrum infra merah meliputi pan&ang gelombang antara $9 G 08

nm setara dengan bilangan gelombang$ % J 4 G 89 m -0. #aerah

antara 03 G 0 m-0sering disebut daerah sidik &ari dimana se&umlah

serapan pada daerah ini merupakan karakteristik dari tiap-tiap senyawa$

tetapi pada daerah ini sulit untuk menentukkan gugus fungsi di dalam

suatu senyawa karena ter&adi uluran dan tekukan suatu atom dalam

molekulnya. #aerah yang tepat untuk menentukkan gugus fungsi yang

spesifik dari tiap senyawa adalah daerah gugus fungsional yang terdapat

pada bilangan gelombang 4 hingga 03 m-0.

). S"ektrsk"i L*'MS

Liquid cromatograpy Mass spectroscopy adalah dua alat yang di

gabungkan men&adi satu$ yang berfungsi untuk memisahkan beberapa

senyawa atau ampuran senyawa berdasarkan kepolarannya$ dimana

setelah ampuran senyawa tersebut terpisah$ maka senyawa yang murni

akan teridentifikasi berat molekulnya. #ata yang didapatkan adalah berat

molekul ditambah beberapa muatan dan berat molekul pelarut (+owers$

0,,).

+. S"ektrsk"i UV'VIS

pektrofotometri inar Tampak (FV-Vis) adalah pengukuran

energi ahaya oleh suatu sistem kimia pada pan&ang gelombang tertentu

(#ay$ ).inar ultra%iolet (FV) mempunyai pan&ang gelombang antara

-4 nm$ dan sinar tampak (%isible) mempunyai pan&ang gelombang

10


11/22

4-=9 nm./onsentrasi dari analit di dalam larutan bisa ditentukan

dengan mengukur absorban pada pan&ang gelombang tertentu dengan

menggunakan hukum Dambert-+eer (illiams$ 0,).

&. Tin,a-an Um-m Bakteri

0. +akteri (#wi&oseputro 3)

+akteri adalah sel prokariotik yang berukuran keil terdiri dari satu sel$

memiliki #E* maupun 2E*$ hanya dapat dilihat dengan mikroskop dan

berkembang biak dengan membelah diri atau aseksual. 7ada umumnya ada

tiga bentuk sel bakteri$ yaitu kokus$ basilus$ dan spiral.

+erdasarkan pewarnaan Hram maka bakteri dibedakan men&adi dua$

yaitu bakteri Hram (K) dan bakteri Hram (-). 7ada pewarnaan bakteri Hram

(K)$ sel berwarna ungu dengan pengeatan kristal %iolet dan larutan iodium$

alkohol dan safranin$ ontohnya Bacilllus subtilis, Staphylococcus aureus.

edangkan bakteri Hram (-) pada pewarnaan bakteri$ sel berwarna ungu

dengan kristal %iolet dan larutan iodium. el bakteri akan berubah warna

pada saat menggunakan alkohol karena lipid akan terekstraksi dari dinding

sel sehingga pori-pori mengembang dan komplek kristal %iolet akan keluar.

7ada saat sel bakteri diat dengan safranin maka sel akan men&adi

merah$ ontohnya Escherichia coli, Salmonella thyposa, Shigella.

a. +akteri F&i (Chatib 0,,31 *lama 6. 0,3)

Escherichia coli adalah bakteri oportunis yang banyak ditemukan di

dalam usus besar manusia sebagai flora normal. +akteri ini berbentuk

batang pendek (kokobasil)$ Hram negatif berukuran $4 G $= Lm M 0$4

Lm$ tidak berspora dan bergerak aktif. +akteri ini dapat menyebabkan

penyakit diare dan infeksi kemih. 7engobatan ini efektif dengan

antibiotik golongan aminoglikosida$ tetrasiklin dan kloramfenikol.

/lasifikasi bakteri ini sebagai berikut

#i%isi izomyetales

ubdi%isi +ateria

"rdo 6ubakteria

'amili 6sherihieae

Henus 6sherihia

pesies Escherichia coli

Staphylococcus aureus adalah bakteri Hram (K) ditun&ukkan dengan

pewarnaan Hram yang menghasilkan warna ungu. +akteri berbentuk

11


12/22

bulat bergerombol seperti anggur dengan diameter antara .9-0$9 Lm.

+akteri ini tidak bergerak$ tidak berspora dengan suhu optimum

pertumbuhan 39oC dan p! optimum adalah =$4.

usunan koloni biasanya tidak teratur ditemukan pada sediaan yang

terbuat dari pembenihan padat$ sedangkan pada pembenihan kaldu

biasanya ditemukan tersendiri atau tersusun sebagai rantai pendek. 7ada

pembenihan padat koloni berbentuk bulat halus$ diameter 0- mm$

embung$ buram$ mengkilat$ konsistensinya lunak berwarna kuning

keemasan dengan intensitas warna yang ber%ariasi.

Staphylococcus aureus merupakan flora normal pada kulit manusia.+akteri ini &uga ditemukan pada pakaian$ sprei dan benda lain

dilingkungan manusia. S. aureus patogenik dan bersifat invasive

menghasilkan koagulans dan enderung untuk menghasilkan pigmen

kuning dan men&adi hemolitik. S. aureus menyebabkan infeksi lokal

&erawat$ infeksi folikel rambut atau abses.

+akteri Staphylococcus aureus diklasifikasikan sebagai berikut

/ingdom 7lantae

#i%isi hizophyta

/elas +ateria

"rdo 6ubateriales

'amili Birooaeae

Henus taphyloous

pesies Staphylococcus aureus

. Antiakteri(Haniswara 0,,9)

*ntibakteri adalah zat yang dapat membunuh ataupun menghambat

pertumbuhan bakteri$ khususnya bakteri yang merugikan manusia.

+erdasarkan khasiatnya terhadap bakteri$ antibakteri dibedakan men&adi duagolongan yaitu zat yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri

(bakteriostatik) dan zat yang dapat mematikan bakteri (bakterisida).

+erdasarkan luas akti%itas terhadap banyak atau sedikit bakteri$

antibakteri dibedakan men&adi dua golongan$ yaitu zat dengan akti%itas

sempit (narrow spectrum) dan zat dengan akti%itas luas (broad spectrum).

at dengan akti%itas sempit terutama aktif terhadap beberapa &enis bakteri

sa&a yaitu Hram positif$ Hram negatif atau terhadap &amur sa&a. at dengan

akti%itas luas.

12


13/22

Bekanisme ker&a antibakteri$ yaitu

a) *ntibakteri yang menghambat metabolisme sel bakteri

b) *ntibakteri yang menghambat sintesis dinding sel bakteri) *ntibakteri yang mengganggu keutuhan membran sel bakteri

d) *ntibakteri yang menghambat sintesis protein sel bakteri

e) *ntibakteri yang menghambat sintesis asam nukleat sel bakteri

3. Peng-,ian Antiakteri(/atzung 0,,=)

F&i antibakteri ada beberapa maam$ yaitu

a. Betode difusi

7ada metode ini zat antibakteri berdifusi pada lempeng agar yang

telah diinokulasi dengan bakteri. #asar pengamatannya adalah terbentuk

zona hambat di sekeliling akram atau silinder yang berisi antibakteri.

Betode ini dipengaruhi faktor fisik dan kimia$ selain antara obat dan

organisme.

0)Cara parit (ditch)

7ada medium agar yang telah diinokulasi dengan bakteri dibuat

parit kemudian diisi dengan zat antibakteri dan diinkubasi pada suhu

dan &angka waktu sesuai dengan &enis bakteri u&i. 7engamatan

dilakukan atas ada atau tidaknya hambatan di sekeliling parit.

) Cara silinder

7ada medium agar yang telah diinokulasi dengan bakteri dibuat

lubang$ diletakkan silinder kemudian diisi dengan zat antibakteri$

setelah itu diinkubasi pada suhu dan &angka waktu yang sesuai dengan

&enis bakteri u&i. 7engamatan dilakukan atas dasar ada atau tidaknya

hambatan disekeliling silinder.

3)Cara akram

/ertas akram yang mengandung zat antibakteri diletakkan di

atas lempeng$ setelah diinkubasi pada suhu dan &angka waktu yang

sesuai dengan bakteri u&i. 7engamatan dilakukan atas ada atau

tidaknya hambatan di sekeliling akram.

b. Betode difusi

Betode ini menggunakan antibakteri yang turun seara bertahap$

baik dengan media air atau padat$ kemudian media diinokulasi bakteri

u&i dan dieramkan. #asar pengamatannya adalah dengan melihat tumbuh

atau tidaknya bakteri.

0) Cara pengeneran tabung ( Betode /irby-+auer)

13


14/22

7ada metode ini zat yang akan diu&i kepekaan antibakterinya

dienerkan seara serial dengan pengeneran kelipatan dua dalam

medium air$ kemudian diinokulasikan dengan bakteri u&i$ inkubasi

pada suhu 3=oC selama 0-0 &am (untuk bakteri) dan pada suhu

kamar 0- minggu (untuk &amur). *kti%itas antibakteri ditentukan

sebagai konsentrasi terendah yang masih dapat menghambat

pertumbuhan bakteri.

)Cara penapisan lempeng

7ada metode ini zat yang akan diu&i antibakterinya dienerkan

seara serial dengan pengeneran kelipatan dua dalam medium agarpada suhu 4-9oC$ kemudian dituang dalam awan 7etri. etelah

lempeng agar membeku ditanam inokulum bakteri dan diinkubasi

pada suhu dan &angka waktu yang sesuai dengan pertumbuhan bakteri

u&i. /adar hambat minimum zat antibakteri yang diu&i$ ditentukan

sebagai konsentrasi terendah yang masih dapat menghambat

pertumbuhan bakteri.

. Turbidimetri

7ada metode ini pengamatan akti%itas didasarkan atas kekeruhan yang

ter&adi pada medium pembenihan. 7ertumbuhan bakteri &uga dapat

ditentukan dari perubahan yang ter&adi sebelum dan sesudah inkubasi$

yang dilakukan dengan mengukur serapannya seara spektrometer.

*danya pertumbuhan bakteri ditandai dengan peningkatan &umlah sel

bakteri$ yang mengakibatkan meningkatnya kekeruhan. /ekeruhan yang

ter&adi umumnya berbanding lurus dengan serapan.

14


15/22

BAB III

TUJUAN PENELITIAN

*dapun penelitian ini bertu&uan untuk mendapatkan senyawa baru dari

turunan %anillin dan mengetahui profil antibakteri senyawa %anilil salisilat.

15


16/22

BAB IV

MET/DE PENELITIAN

A. Alat 0an Ba$an

Dabu leher dua$ hot plate dan stirrer$ kondensor$ termometer$ spatula$

orong pisah$ ing Stand$ Cawan 7etri$ pipet ukur$ 6rlenmeyer$ +ea!er

"lass$ tabung reaksi$ gelas ukur$ perangkat ekstraksi$ autoklaf$ ?nkubator$

o%en$ rotary evaporator$ timbangan analitik$ &arum ose$ pinset$ &angka sorong$

mikropipet (brand)$ laminar air flow$ labu ukur. alumunium foil$ kapas$ spatel$

silinder$ dan lain-lain.

+ahan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi +akteri

Escherichia coli *TCC 9, dan Staphylococcus aureus *TCC 9,3

diperoleh dari Daboratorium Bikrobiologi 'akultas /edokteran Fni%ersitas

?ndonesia. Bedium yang digunakan medium T* (#ryptone Soya $gar) dan

medium T+ (#ryptone Soya Broth). +ahan kimia meliputi Vanilin$ *sam

alisilat$ 6tanol$ *seton$ !"4 pekat$ Ea!C"3 0>$ Ea"4 anhidrat$

Ea+!4$ C!Cl$ etil asetat$ n-heksana dan aNuades.

B. Prse0-r ker,a

0. 2eduksi Vanilin dengan Eatrium +orohidrida./e dalam labu leher tiga kapasitas 9 mD yang dilengkapi dengan

termometer$ pendingin balik dan pengaduk magnet serta penangas air

dimasukkan 0$9 gram ($4 mol) Ea+!4dan 3 gram ($0,= mol) %anilin

dalam pelarut etanol. Campuran diaduk selama 4 menit pada suhu kamar.

Campuran kemudian diasamkan dengan !Cl $9 B sampai p! 4$9$

kemudian diekstraksi dengan C!Cl$ ditambah dengan Ea"4anhidrous$

disaring dan die%aporasi. *nalisis senyawa hasil dilakukan dengan 'T-?2.

. 6sterifikasi

2eaksi esterifikasi dilakukan dengan ara memasukan 0$3 gram

%anilin alkohol ($ mol)$ $=83 gram asam salisilat ($ mol)$ ml

pelarut aseton dan 0 tetes katalis asam sulfat pekat ke dalam labu bulat

yang dilengkapi dengan kondensor$ hiller dan hot plate stirrer pada suhu

98-8 AC selama 4 &am.

3. 7emurnian hasil reaksi

etelah hasil reaksi$ filtrat kemudian ditambahkan dengan larutan

Ea!C"3 0> sampai tidak terbentuk lagi C". 'iltrat kemudian

16


17/22

dimasukkan dalam orong pisah yang telah berisi kloroform lalu dikook.

Campuran diui sebanyak 3 kali. !al ini bertu&uan agar ester yang

terbentuk dipisah dari pengotor yang bersifat polar. /emudian fasa organi

dipisahkan dari fasa airnya$ ditambahkan dengan Ea"4$ lalu disaring.

etelah disaring kemudian pelarutnya diuapkan.

4. F&i !asil 2eaksi 6sterifikasi

enyawa ester yang dihasilkan diu&i dengan /DT menggunakan

pelarut pengembang etil asetat dan n-heksana. etelah produk ester

dilakukan pemurnian dianalisis dengan instrumentasi 'T-?2$ DC-B$

pektofotometer FV-Vis dan penentuan titik leleh. 2endemen hasil

sintesis dapat diperoleh dengan teoretis

0))>etis+obot teor

sintesishasil+obot2endemen =

. Bakteri U,i

Staphylococcus aureus merupakan bakteri gram positif berbentuk kokus

yang merupakan bakteri patogen bagi manusi. Staphylococcus aureus dapatmenyebabkan infeksi pada kulit dan &aringan lunak seara in%asif seperti

pneumonia$ osteomielitis$ meningitis dan endoarditis (+artlett O !ulten

0). Staphylococcus aureus merupakan bakteri yang telah banyak resisten

terhadap beberapa antibiotik antara lain golongan penisilin$ metisilin$ kuinolon

dan %ankomisin (Dowy 3).

2. U,i Akti3itas Antiakteri

F&i akti%itas antibakteri dengan menggunakan metode difusi agaryang dinilai

melalui diameter zona hambatnya (#a%is O tout 0,=0). +erikut adalah

prosedur pengu&ian akti%itas antibakteri

17


18/22

a( Pem-atan Me0i-m TSA %Tryptone Soya Agar( 0an Me0i-m TSB

%Tryptone Soya Broth(

+ubuk T* dan T+ dimasukkan ke dalam 6rlenmeyer masing-masing

sebanyak 0 gram dan =$9 gram$ lalu masing-masing dilarutkan dengan

menambahkan 9 ml aNuades. /emudian dipanaskan hingga mendidih di

atas hot plate sambil dihomogenkan dengan menggunakan magnetic stirer.

etelah itu medium di sterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 00PC

dengan tekanan 09 lbs selama 09 menit.

( Perema,aan Bakteri

+iakan bakteriE. colidan S. aureussebanyak satu ose diinokulasikan ke

dalam medium agar miring T* seara terpisah dan aseptis dengan

meletakkan &arum ose yang mengandung biakan pada dasar kemiringan

agar dan ditarik dengan gerakan zig-zag. +akteri E. coli dan S. aureus

sebanyak dua ose diinokulasikan kedalam medium T+ yang terpisah.

elan&utnya masing-masing diinkubasi pada suhu 3=PC selama 4 &am.

7erema&aan dilakukan setiap minggu.

4( Peng-,ian Akti3itas Antiakteri

F&i akti%itas antibakteri dilakukan terhadap dua &enis bakteri yaitu bakteri

E. coli dan S. aureus. 7engu&ian antibakteri dilakukan dengan metode

difusi agar. Cara ker&a metode difusi agar adalah bakteri u&i yang telah

direma&akan diinokulasikan kedalam T* sebanyak Ql lalu diratakan

ke dalam medium yang berisi bakteri lalu dimasukkan kertas akram 8

mm dan ditetesi dengan larutan %anillil salisilat dengan konsentrasi 0>

sebanyak Ql (9 Qg). etelah itu di simpan selama 4 &am pada suhu

3=oC di ukur diameter hambatan yang terbentuk menggunakan &angka

sorong.

0( Peneta"an Nilai Knsentrasi Hamat Minim-m %KHM(

etelah diketahui bahwa %anillin salisilat memiliki akti%itas antibakteri

selan&utnya dilakukan penetapan konsentrasi hambat minimum dari

%anillin salisilat tersebut. Tu&uannya untuk mengetahui kadar terendah dari

%anillin salisilat yang masih memberikan akti%itas antibakteri terhadap

18


19/22

bakteri u&i. Betode penetapan yang dilakukan adalah dengan metode agar

padat. ampel %anillin salisilat dibuat dengan berbagai konsentrasi mulai

dari yang besar hingga yang keil.

e( Diameter 5na $amat

#iameter zona hambat yang terbentuk karena adanya daya antibakteri

%anillin salisilat yang diukur dari sisi sebelah kiri sampai sisi sebelah

kanan dengan menggunakan &angka sorong.

19


20/22

BAB VI

JAD6AL PELAKSANAAN

7enelitian ini akan dilakukan di Daboratorium /imia Terpadu dan

Daboratorium Bikrobiologi '' Fni%ersitas Buhammadiyah 7rof. #2. !*B/*

aktu penelitian mulai dilakukan pada bulan Eo%ember 09 sampai dengan Bei

08.

Tabel ???. Iadwal penelitian

Kegiatan Tanggal Keterangan

7engumpulan dan penyediaan bahan

penelitian

Eo%ember

09

7+'

Toko /imia2eduksi Vanilin men&adi Vanilil *lkohol dan

F&i ?dentifikasi 'T-?2

09 #esember

09

F!*B/*

intesis Vanilil alisilat$ 7emurnian dan

?dentifikasi senyawa

0 Ianuari 08 F!*B/*

'armalab

7embuatan medium$ pembiakan bakteri F&i$

pembuatan suspensi$ u&i /!B

0 Baret 08 F!*B/*

7engamatan !asil F&i /!B 09 Baret 08 F!*B/*

*nalisa data hasil penelitian 0 *pril 08 F!*B/*

7enulisan Daporan 7enelitan 0 Bei 08

20


21/22

DA&TAR PUSTAKA

*lama$ 6. 0,3. Fundamental of Microbiology. *ddison G esley 7ublishingCompany. Dondon. !al 934 G 938

*ugustine$ 2.D. 0,,8. %eterogeneus &atalysis 'or #he Synthtic &hemistry.Eew

Rork Barel #okker ?n.

*tkins$ 7..0,,=.(imia 'isi!a )ilid*.Iakarta 7enerbit 6rlangga.

+adarinath$ a. V. et al.$ 0. * re%iew on ?n-%itro antio@idant methods

Comparisions$ orrelations and onsiderations. +nternational ournal of

-harm#ech esearch$ ()$ pp.0=8G09.

+artlett$ *.!. O !ulten$ /.H.$ 0. taphyloous aureus pathogenesis

seretion systems$ adhesins$ and in%asins. #he -ediatric infectious disease

)ournal$ ,(,)$ pp.8G80.+udimarwanti$ C. ,. intesis enyawa 4-!idroksi -9-#imetilaminometil-3-

Betoksibenzil *lkohol dengan +ahan #asar Vanilin Belalui 2eaksi

Bannih. Iurusan 7endidikan /imia 'B?7*. Fni%eristas Eegeri Rogyakarta.

#a%is$ .. O tout$ T.2.$ 0,=0. #is plate method of mirobiologial antibioti

assay.$pplied microbiology$ (4)$ pp.89,G889.

Chatib$ F. 0,,3. B-k- A,ar Mikrilgi Ke0kteran. 6disi 2e%isi. +inarupa

*ksara. Iakarta. !al 03 G 000

Chuenhit +oonhird and T. . 'legel.+n itro antifungal activity of eugenol and

vanillin against &andida albicans and &ryptococcus neoformans.

#epartement of Birobiology$ faulty of siene$ Bahidol Fni%ersity$ 2ama

V? 2oad$ +angkok$ Thailand.#wi&oseputro$ 7. 3. Dasar'Dasar Mikrilgi.#&ambatan. Iakarta. !al -

4

#ep/es 2?$ 0,,9$ 'armakope ?ndonesia 6disi ?V. #epartemen /esehatan

2epublik ?ndonesia

#wi .$ C. +udimarwanti. 03. intesis Vanili sinamat dari Vanilil *klohol dan

*sam inamat Belalui 2eaksi 6sterifikasi 'isher.kripsi Fni%ersitas

Eegeri Rogyakarta

'essenden dan fessenden. 0,8.(imia organi!.&ilid . Iakarta penerbit 6rlangga.

'itzgerald #.I. $ tratford B.$ Hasson B.I. $ Fekert I. $ +os *. and Earbad *.

4. Bode of antimirobial ation of %anillin against 6sherihia oli$

Datobaillus plantarum and Disteria innoua. Iournal of *ppliedBirobiology ,= 04G003

Haniswara$ . H. 0,,9. &armaklgi 0an Tera"i. E0isi IV. +agian 'armakologi

'akultas /edokteran Fni%ersitas ?ndonesia$ Iakarta. !al. 9=0 G 9=3

!oking$ B.+. 0,,=. I. Chem. 6du. =4$ 099-09,. #he Merc! +nde/. $n

Encyclopedin 0f &hemicals, drugs, and biological4thed. Berk O Co.$ ?n.

hitehouse station$ ER$F*. !al 000.

Iawetz$ 6.$ Belnik$ I.D dan *delberg. 0,,9. Mikrilgi Ke0kteran6d .

7ener&emah Eani idorini. +uku /edokteran 6HC$ Iakarta. !al. 33-39

Iones$ Chem. 0,9. #he Merc! +nde/. $n Encyclopedin 0f &hemicals, drugs, and

biological4thed. Berk O Co.$ ?n. hitehouse station$ ER$F*. !al 34.

21


22/22

/atzung$ +. H. 0,,=. &armaklgi Dasar 0an Klinik. 6d. . 7ener&emah

taf #osen 'armakologi 'akultas /edokteran Fni%ersitas riwi&aya.

alemba Bedika$ Iakarta. !al. = G =4/umar$ 2.$ harma$ 7./. O Bishra$ 7..$ 0. * re%iew on the %anillin

deri%ati%es showing %arious biologial ati%ities. +nternational ournal of

-harm#ech esearch$ 4(0)$ pp.88G=,.

Dowy$ '.#.$ 3. *ntimirobial resistane the e@ample of taphyloous

aureus.ournal of &linical +nvestigation$ 000(,)$ pp.089G0=3.

"li%eira$ C.+.. et al.$ 04. Comparati%e study on the antio@idant and anti-

To@oplasma ati%ities of %anillin and its resorinarene deri%ati%e.Molecules$

0,(9)$ pp.9,G9,0.

"neil$ B. 8. #he Merc! +nde/. $n Encyclopedin 0f &hemicals, drugs, and

biological4thed. Berk O Co.$ ?n. hitehouse station$ ER$F*. !al 983.

7elzar$ B dan Chan. 6.C.$ 0,8. Dasar'Dasar Mikrilgi. Ter&emahan2atna ari !adioetomo dkk. F? 7ress. Iakarta. !al 0, G 0,,

2a%endra /umar$ 7./. harma$ 7rem hanker Bishra$$ eview on the anillin

derivates showing various Biological activities. #epertement of

7harmaeutial Tehnology$ Beerut ?nstitute of 6ngineering O Tehnology$

E!-9$ +aghpat rossing$ #elhi-!aridwar !ighway$ Beerut 99$ F.7.$

?ndia.

2akhoy$ .$ uppakul$ 7. O Iinkarn$ T.$ ,. *ntimirobial effets of %anillin

oated solution for oating paperboard intended for pakaging bakery

produts.$s. . 'ood $g1+nd.$ (4)$ pp.0,G0,8.

ri /aton $ !anny Eilasari$ dan 6%ita !alim. 0. 7enggunaan *sam alisilat

dalam #ermatologi . +ndon. Med. $ssoc. 8(=). 'akultas /edokteran .

Fni%ersitas ?ndonesia

unardi. 8.2i!tat (uliah &ara1&ara -emisahan. #epok #epartemen /imia

'B?7* F?.

ykes$ 7. 0,,. 7enuntun Bekanisme 2eaksi /imia "rganik. Hramedia. Iakarta.

Tai$ *. et al.$ 00. 6%aluation of antio@idant ati%ity of %anillin by using multiple

antio@idant assays.Biochimica et Biophysica $cta$ 00()$ pp.0=G0==.

illiams$ #.!. O 'leming$ ?. 0,.Spectroscopic methods in organic chemistry3

Dondon Bgraw-!ill.

Rogesh /umar Vaghasiyaa$ 2athish Eaira$ Bayur onib$ hipra +alu&ab$ and

umitra Chandaa

$ Synthesis, structural determination and antibacterialactivity of compounds derived from vanillin and 41

aminoantipyrine.#epartement of +iosienses and #epartement of Chemistry$

aurashtra Fni%ersity$ 2a&kot 389$ ?ndia.

22

Documents

Vanilil Salisilat