ISPITIVANJE OSETLJIVOSTI BAKTERIJA NA ANTIBIOTIKE I HEMIOTERAPEUTIKE

ta je antibiogram?Postupak za ispitivanje osetljivosti bakterija na antibiotike i hemioterapeutikeMetode antibiograma

Kombinovani metod(E test)Difuzioni metodDilucioni metod

MIK: minimalna inhibitorna koncentracijanajmanja koncentracija antibiotika koja spreava rast i razmnoavanje bakterija

MBK: minimalna baktericidna koncentracijanajmanja koncentracija antibiotikakoja izaziva smrt bakterija

Disk difuzioni metod antibiogramaPravljenje suspenzije odreene gustine od ispitivane bakterijske kultureIz iste bakterijske kulture uzeti 4-5 kolonija ezomPoreenje bakterijske suspenzije sa standardom odreene gustineZasniva se na principu difuzije antibiotika kroz vrstu hranljivu podlogu (agar) prethodno zasejanu ispitivanom bakterijskom kulturom.

Disk difuzioni metod antibiogramaRavnomerno nanoenje bakterijske suspenzije brisem na celu povrinu agara (najee Mueller-Hinton) da bi se dobio konfluentan porastBris natopiti suspenzijom bakterija i ocediti viak tenosti lakim pritiskom o zidove epruvete PravilnoNepravilno

Disk difuzioni metod antibiogramaStavljanje diskova sa odreenim (standardnim) koncentracijama antibiotika pincetomInkubacija u termostatu na 37C od 16 - 24 hRaspored diskova sa antibioticima

ta se deava tokom inkubacije?bakterije se umnoavajuantibiotik difunduje kroz podloguKoncentracija antibiotika postepeno i radijalno opada sa udaljavanjem od diska sve do take gde vie nije inhibitorna i gde se pojavljuje porast bakterija.Nastaje zona inhibicije rasta.24 hvrsta hranljiva podloga zasejana istom bakterijskomkulturomitanjerezultata37CAntibiogram diskovi

Oitavanje rezultata disk difuzionog metoda antibiogramaZona inhibicije rasta: okrugla zona oko diska sa antibiotikom u kojoj nema vidljivog porasta bakterijaMerenje prenika zone inhibicije

Tumaenje rezultata disk difuzionog metoda3 kategorije osetljivosti:

osetljivintermedijarno (umereno) osetljivrezistentan

Tumaenje rezultata disk difuzionog metodaDijametar zone inhibicije rastaUporediti izmerene prenike zona inhibicije ispitivane bakterije sa standardnim preporuenim zonama za odreenu bakteriju i odreeni antibiotikPrimer preporuenih zona

Rezultati disk difuzionog metoda antibiograma

Disk difuzioni metodPrednosti:istovremeno se ispituje osetljivost na vei broj antibiotikajednostavanrelativno brz (24 h)Ogranienja:ne moe se odrediti MIK (odnosno MBK)Kvalitativan metod u rutinskoj upotrebi

Dilucioni metod antibiogramadilucioni: niz dvostrukih razblaenja antibiotika u odgovarajuoj podlozi

Prema podlozi u kojoj se prave razblaenja antibiotika:

bujon dilucioni metod

agar dilucioni metod

100 lBakterijska suspenzijaAntibiotik (g/ml)BujonMBK = 0,5 g/mlMBKMIKMIK = 0,25 g/ml+24 h37C24 h37C0,030,060,1250,250,5Bujon dilucioni metod antibiogramaMIK: najmanja koncentracija antibiotika koja inhibira porast bakterija (bujon ostaje bistar)MBK: presejavanjem svih razblaenja koja inhibiraju porast bakterija

Bujon dilucioni metod antibiogramaPrednosti:mogunost odreivanja MIK i MBK

Ogranienja:ispituje se osetljivost jedne bakterijske vrste na jedan antibiotiksloena tehnika izvoenjatrajanje > 24 h

24 h37CPlastina traka impregniranaantibiotikom u gradijentukoncentracije Zasniva se na principu difuzije antibiotika kroz vrstu hranljivu podlogu (agar) prethodno zasejanu ispitivanom bakterijskom kulturom. Opadajui gradijent koncentracije antibiotika na E test traci.Kombinovani metod antibiograma: E testZona inhibicije: elipsa

E test i disk difuzioni metod: razlike u zoni inhibicije

itanje rezultata E testa

vrednost MIK: oitava se na skali koncentracija na E test traci na mestu gde linija zone inhibicije rasta preseca ivicu E test trakeMIK

Rezultati E testa

E testPrednosti:direktno oitavanje vrednosti MIKistovremeno se ispituje osetljivost na vei broj antibiotikajednostavanrelativno brz (24 h)Ogranienja:visoka cena

konvencionalna dijagnostika:2 do 4 danai transportObradabrza dijagnostika:krae (~ do 24h)

SKRAENICE ANTIBIOTIKAA - AmpicilinConet - ImipenemCef3 - Ceftriakson (Longaceph)Met - MeticilinChl - HloramfenikolG - GentamicinCip - CiprofloksacinB - Trimetoprim+sulfametoksazol (Bactrim)V - Vankomicin