Presentacin de PowerPoint

AINHOA GUTIRREZ, ISABEL VICIANA, FRANCISCA RIUS Y ALFONSO PINEDOUNIVERSIDAD TECNICA DE AMBATOFACULTAD DE CIENCIA E INGENIERIA EN ALIMENTOS CARRERA DE INGENIERIA BIOQUIMICAINGENIERIA GENETICA

MUTACIONES DE LA REGIN PRECORE, PROMOTOR BASAL DEL CORE Y POLIMERASA VIRAL EN PACIENTES CON HEPATITIS B CRNICA

ARTCULO CIENTFICO:

HOSPITAL VIRGEN DE LA VICTORIAUNIVERSIDAD DE MALAGAMALAGA- ESPAA

22 DE NOVIEMBRE DEL 2011

0,7% DE INCIDENCIA.GENOTIPOS A Y D.5ABREVIATURAS Y TERMINOLOGA VHB: Virus de la Hepatitis B.AgHBe: Antgeno E del VHB.AgHBs: Antgeno de superficie del VHB.AgHBc: Antgeno del core del VHB.EHC: Enfermedad heptica crnica ORF: Marco abierto de lectura.UI: Unidades Internacionales.LHBs: Protena larga del AgHBs.MHBs: Protena mediana del AgHBs.

SHBs: Protena pequea del AgHBs.HNF: Factor heptico nuclear.RVS: Respuesta viral sostenida.TNF: Factor de necrosis tumoral. IFN: Interfern.LMV: Lamivudina.ADF: Adefovir.

La infeccin por el virus de la hepatitis B (VHB) es una de las causas ms frecuentes de enfermedad heptica crnica en el mundo afectando a 400 millones de personas. En Espaa la prevalencia es del 0,7 %, siendo la tercera causa de Enfermedad Heptica Crnica, por detrs de la hepatitis C y el alcohol.INTRODUCCIN VIRUS DE LA HEPATITIS BGRUPO: VII (Virus ADN bicatenario retrotranscrito).FAMILIA: Hepadnaviridae.GNERO: OrthohepadnavirusESPECIE: Virus de la Hepatitis B.

CLASIFICACION DEL VIRUS CARACTERISTICAS GENERALES

REPLICACIN: Transcripcin inversa del ARN pregenmico a ADN genmico, (Pararetrovirus).El VHB es extraordinariamente estable a solventes orgnicos. Tambin es resistente a temperatura y a pH.El VHB es la causa ms frecuente de enfermedad heptica crnica.

EnvueltaADN VHB (3,2Kb)NUCLEOCAPSIDELa partcula vrica presenta una envuelta externa formada por AgHBs, dentro de la cual se encuentra la nucleocpside (icosahedrica) o core, compuesto por AgHBc.Lacpside encierra unADNviral y una ADNpolimerasacon actividad detranscriptasa inversa.ADN bicatenario de 3,2 kb de longitud, con un peso molecular de 1,6 x 10 +4 dalton

6GENOMA DEL VHBCADENA NEGATIVA (-): 3,2 Kb de longitud.PM: 1,6*10+4 D. Acta como molde en la sntesis de los ARNm vricos.Los extremos 5 y 3 tienen una repeticin de 9 nucletidos, por lo que existe una pequea regin donde el genoma es tricatenarioCADENA POSITIVA (+): Posee una longitud menor de 3,2 Kb.Regin Monocatenaria: oscila entre 20%-80% de la longitud de la cadena (-).

5533La estructura circular abierta del genoma se mantiene gracias a que en los extremos 5 de ambas cadenas existe una zona cohesiva de 224 nucletidos.Se localizan dos secuencias directamente repetidas de 11 pb, llamadas DR1 y DR2 que juegan un papel primordial en la replicacin del ADN VBH.7

ORGANIZACION GENOMICA DEL VBH12344 PROMOTORES (Sntesis ARNm del VHB)Promotor SPIActivo para Hepatocitos (Activador: HNF).Caja TATA: ARNm de 2.4Kb- LHBs.Promotor SPII: Transcripcin en 5 mas sitios. Transcrito mas largo para MHBs/SHBs. Promotor CP: Activo para clulas hepticas (Activadores: HNF-Ill y C/EBP).Transcripcin en 2 sitios separados por 4 nt: ARNm de 3.5Kb.Transcrito mas largo para Hbe/HBc.4. Promotor XP: sntesis del ARN de 0.8 Kb. Codifica para la protena X.

ORGANIZACION GENOMICA DEL VBH2 ACTIVADORES O ENHANCERS (Sntesis ARNm Viricos).Enhancer I (En I).Puede activar en uno o dos rdenes de magnitud los 4 promotores.No es especifico del hgado.2. Enhancer II (En II).Activa los promotores S en aproximadamente un orden de magnitud.Es especifico de Hepatocitos y es activado por factores de trasncripcin: C/EBP y HNF-lIl. 129ORGANIZACION GENOMICA DEL VBHCADENA NEGATIVA (-): 4 ORF (Proteinas del virus).1. C: 2 codones de iniciacin que dividen la ORF en las regiones pre-core y core, codifica para las protenas de la nucleocpside.Regin Core: AgHBc. Regin Pre-core: AgHBe.P: Codifica para la ADN polimerasa.ACTIVIDAD:Transcriptasa Inversa.ARNasa H.3. S: Codifica para el antgeno de superficie (HBsAg). Exiten 3 codones de iniciacin: pre-S1: LHBs. pre-S2: MHBs. S: SHBs.4. X: Codifica una protena reguladora HBx con capacidad transactivadora de la expresin gentica viral y celular.

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ORGANIZACION GENOMICA DEL VBHGRE (Elemento que responde frente a la Glucocorticoides).In vitro activa a los 4 promotores alrededor de 5 veces.In vivo se desconoce la funcionalidad.2. TATAAA (Seal de Terminacin).Hexanucleotido conservado en todos los Hepadnavirus.Se encuentra en la regin del genoma del VBH que codifica para el AgHBc. Esta seal es activa cuando se encuentra a ms de 400 bases del promotor.3. (Seal de Encapsidacin).Secuencia de 61 nt. propia de los Hepadnavirus.Dirige la encapcidacin de las protenas del core y la polimerasa viral para formar la nucleocpside.123Glucocorticoide:Hormona esteroidea secretada en la corteza de las glndulas suprarrenales. Participa en la regulacin del metabolismo de los hidratos de carbono, aumenta la glucognesis y tiene un efecto antiinflamatorio. En el ser humano los glucocorticoides producidos son el cortisol (el ms importante), la cortisona y la corticosterona.11Carman et al. (1989) estudiaron el suero de pacientes y descubrieron que estaban infectados por una variante del VBH presentando una mutacin en la regin pre-core.Esta mutacin consiste en una transicin de G a A en la posicin 1896. Esta mutacin da lugar al cambio del codn 28 TGG que codifica para el aminocido triptfano por un codn de terminacin TAG, que impide la sntesis del AgHBe.Posteriormente, el aislamiento de este mismo mutante por parte de otros grupos de investigadores de otros pases demostr que esta variante est ampliamente distribuida en todo el mundo.

MUTANTES DEL VHB EN LA REGION PRECORE

MATERIALES Y MTODOSUna de las regiones del genoma del virus de la hepatitis B ms analizadas y que presentan mayor frecuencia de mutaciones, es la regin PRECORE/CORE y el promotor correspondiente (SPI: Caja TATA).La doble mutacin A1762T/G1764A del promotor es la de mayor impacto sobre la replicacin del virus de la hepatitis B y la RESPUESTA A LA TERAPIA ANTIVIRAL.Los FRMACOS analizados para este estudio fueron: INTERFERN ALFA.LAMIVUDINA. ADEFOVIR. ENTECAVIR.TENOFOVIR.

RESULTADOS

RESULTADOSInicialmente el estudio realizado en el Hospital Virgen de la Victoria, inici con 168 pacientes, de los cuales 114 eran hombres y 54 eran mujeres comprendiendo una edad entre 17-83 aos presentando algn posible indicio de hepatitis B como enfermedad principal para este estudio. Sin embargo de los 168 pacientes, 11 no presentaron ninguna mutacin y en 31 pacientes no se logr amplificar la muestra. Por esta razn el estudio se realiz con 126 pacientes que si presentaron algn tipo de mutacin asociada. PCR DE LA REGIN PRE-CORE DEL VHB

Gel de Agarosa al 2% teido con bromuro de etidio en el que se observa la banda de 198pb correspondiente al fragmento de PCR de la region pre-core del VHB, procedente de muestras de suero de los pacientes.RESULTADOS EN FUNCIN A LOS FARMACOS EMPLEADOSEl interfern alfa se utiliza para tratar la hepatitis B crnica pero su uso se encuentra limitado, ya que la tasa de respuesta es inferior al 50 % y las recadas son frecuentes. Generalmente si no existe ninguna mejora a los 3-4 meses de tratamiento, debe suspenderse el interfern alfa.Pertenece a una clase de medicamentos llamados inhibidores nucleosdicos de la transcriptasa inversa. Acta disminuyendo la cantidad de VIH y hepatitis B en la sangre.

INTERFERON ALFALAMIVUDINAADEFOVIREl adefovir pertenece a una clase de medicamentos llamados anlogos nucletidos. Funciona al reducir la cantidad de VHB en el cuerpo. El adefovir no cura la hepatitis B y no puede prevenir las complicaciones de la hepatitis B crnica como la cirrosis del hgado o el cncer heptico. Cuando deja de tomar adefovir la hepatitis puede empeorar. ENTECAVIRSe usa para tratar la hepatitis B crnica de largo plazo en las personas que presentan daos en el hgado.

TENOFOVIREs un medicamento antiviral que previene que las clulas del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) o del virus de hepatitis B se multipliquen en el cuerpo.

De esta nueva muestra (126), 81 pacientes con mutaciones Core y Precore recibieron tratamiento antiviral, y de ellos, 35 pacientes mantuvieron respuesta viral sostenida (RVS) 12 meses tras finalizar el tratamiento.

RESULTADOS

TABLA 2. RESPUESTA AL TRATAMIENTO ENTRE LOS PACIENTES CON MUTACIONES CORE Y PRECORE DE VHBRESULTADOS

TABLA 3. DISTRIBUCION DEL GENOTIPO EN LOS 126 PACIENTES CON MUTACIONES CORE Y PRECORE MAS PREVALENTES DE LOS PACIENTES CON HEPATITIS B CRNICA. DISCUSINSe realiz una cohorte de seguimiento en los pacientes con mutaciones core/precore en el Hospital Virgen de la Victoria de la ciudad de Mlaga, obtenindose a travs de esta investigacin una relacin entre las 3 principales mutaciones asociadas al Virus de la Hepatitis B predominantes en Espaa, siendo estas: G1896A, A1762T/G1764A y A1762T/G1764A, G1896A. En este estudio, se demuestra una vez mas que Espaa presenta los genotipos de VHB A y D, predominando principalmente el genotipo D en una relacin 7:5.Adems se determin que el TENOFOVIR es el mejor frmaco de eleccin para el tratamiento inicial de la Hepatitis B como en el rescate incluso de los pacientes con mutaciones de resistencia a otros frmacos.CONCLUSIONESLok AS, Heathcote EJ, Hoofnagle JH. Management of hepatitis B: 2000-summary of a workshop. Gastroenterology. 2001;120:182853.Lai CL, Yuen MF. The natural history and treatment of chronic hepatitis B: a critical evaluation of standard treatment criteria and end points. Ann Intern Med. 2007;147:5861.Surez Gonzlez A, Sols Snchez G, Otero Guerra L, Viejo de la Guerra G, lvarez Navascus C, Garca Lpez R. Prevalencia de la inmunidad frente a los virus de la hepatitis, en gestantes del rea Sanitaria de Gijn. Gastroenterol Hepatol. 2004;27:34752.Jammeh S, Tavner F, Watson R, Thomas HC, Karayiannis P. Effect of basal core promoter and pre-core mutation on hepatitis B virus replication. J Gen Virol. 2008;89:9019.Liu CJ, Chen BF, Chen PJ, Lai MY, Huang WL, Kao JH, et al. Role of Hepatitis B viral load and basal core promoter mutation in hepatocellular carcinoma in hepatitis B carriers. J Infect Dis. 2006;193:125865.Rivas E, Baena P, Garca M. Tratamiento de la resistencia al VHB. Gastroenterol Hepatol. 2006;29:5964BIBLIOGRAFIA