Doc. MVDr. Eva Brtov, Ph.D., bartovae@vfu.cz

2017

VTRUSOVCI A PARAZITOLOGIE POTRAVIN

(Toxoplasma, Cryptosporidium, Sarcocystis) Aktulnost problmu, cesty infekce,

diagnostika, prevence a monosti een

mailto:bartovae@vfu.cz

VtrusovciVtrusovci (Apicomplexa)

dve Protozoa, dnes Chromalveolata

apikln komplex - soubor organel, kter umouje

invazivnm stdim (sporozoitm a merozoitm) prnik do buky

Vtrusovci

Rozmnoovn

pohlavn a nepohlavn

schizogonie (merogonie) - rozdlen jedince

(sporozoita) na mnostv dceinch jedinc, 23x

gametogonie - meiza - tvorba gamet, splynut gamet a

vznik oocysty

sporogonie - nepohlavn mnoen uvnit oocysty

Kolik lid se s infekc setkalo?

Zdroje infekce pro lovka?

Diagnostika?

Prevence?

Lidi 75% bez pznak

25% klinick pznaky - rizikov skupiny

Toxoplazmza - zoonza

Toxoplazmza - zoonzauzlinov forma

on forma

vrozen toxoplazmza

mozkov, plicn, srden, svalov

MUDr. Markta Geleneky,

Klinika infeknch nemoc

3.LFUK a Nemocnice Na

Bulovce, Prahawww.toxoplasmoza.cz

www.tehotenstvi-infekce.cz

http://www.toxoplasmoza.cz/http://www.tehotenstvi-infekce.cz/

Toxoplasma gondii - historieSystematick zaazen (Volf et al., 2007):Domna: Eukaryotae: ChromalveolataSkupina: AlveolataKmen: Apicomplexa (Vtrusovci)Tda: Coccidea (Kokcidie)d: Eimeriidaele: ToxoplasmatidaeRod: ToxoplasmaDruh: Toxoplasma gondii

Gundi saharsk (Ctenodactylus gundii)

(Nicolle a Manceaux, 1908)

Gundi - severoafrick (Maroko, severn

Alrsko, Tunisko a Libye) hlodavec

velikosti morete, ije v kolonich.

R - koncem roku 2008 import 10

kus, prvn odchov v R v Zoo Praha v

z 2009.

Toxoplasma gondii infekn stdia

Sporozoiti 2 x 6 - 8 m, uvnitoocyst (vce rhoptri a mikronemne tachyzoit)oocysta 11 x 13 muvnit dv sporocysty, kad potyech sporozoitech

Bradyzoiti (cystozoiti) 5 - 8,5 x 1-3 m,nachz se uvnit cysttkov cysta (5 100 m) vevnitnch orgnech a tknch (CNS,svaly, oko, srdce..)chronick fze infekce

Definitivn hostitel?

Mezihostitel?

Infekn stdia?

Tachyzoiti (endozoiti, trofozoiti)2 x 6 m, dl se uvnit jadernchbunk endodyogoniakutn fze infekce

Toxoplasma gondii ivotn cyklus

Prepatentn perioda (dobaod infekce po vyluovnoocyst): 3 - 10 dn poinfekci TC, > 18 dn poinfekci oocystami.Vyluovn oocyst 13 tdnya 150 milion oocyst

(Brtov et al., 2003)

experiment, vyluovn za 3-5

dn po infekci TC, vyluovn

7-18 dn, max. 5-6 den,celkem 1-47 milin oocyst.

Klinika u koek?Opakovan vyluovn?

Prof. RNDr. Jaroslav Flegr,

CSc., Prodovdeck

fakulta, Karlova univerzita,

dlo Zamrzl evoluce

Ig Nobel (za vzkum, kter

pinut k zasmn a pot k

zamylen)

http://pokusnikralici.cz/

Manipulan teorie

Toxoplasma gondii

Infikovan:

2,7x vy riziko dopravnch nehod

mn vad pach koky vliv na vzhled, chovn, povahu, reakn asy,

pohlav plodu, rizikov chovn, sexuln

preference

zven rizika vskytu cca 70 onemocnn

vetn schizofrenie, deprese, infarktu

myokardu, ndorovch, psychiatrickch,

imunitnch a neurodegenerativnch.

Zaloeno pouze na statistickm vyhodnocen

http://pokusnikralici.cz/

Toxoplasma gondii cesty enTkov cysty, oocysty - perorln infekce

Toxoplasma gondii cesty enTachyzoiti - transplacentrn infekce, transfuze, transplantace, koz mlko

Zvata bez kliniky x klinika

domc, voln ijc, zoo zvata

ovce, kozy - aborty, ekon. ztrty

mosk vydry, antilopy, manul - hyny

Toxoplasma gondii

Diagnostika - prkaz T. gondii

1 Nepm metody:

serologie (detekce protiltek, organismus se

setkal s infekc, titry)

LAT, IFAT, ELISA (dve pouvan SFR, KFR)

srum, masov va

Prkaz T. gondii nepm metodyLatex aglutinan test (LAT, MAT)

- rychl orientan test

Sada PASTOREX TOXO

pozitivn a negativn kontrola

kapka latexov suspenze (antigen T. gondii) + kapka

edcho roztoku + 15 l krevnho sra, smchat tyinkou,

otet aglutinan kartu, po 5 a 7 min - aglutinace

Prkaz T. gondii nepm metodyLatex aglutinan test (LAT, MAT) Vhody?

Nevhody?

Prkaz T. gondii nepm metodyNepm imunofluorescenn test (NIFR, IFAT)

sklka s antigenem T. gondii + edn srum

(1:40, 1:50..) - vazba antigen-protiltka

vazba konjugtu (Ab s s fluoresceinem) na protiltky

immunofluorescenn mikroskop

Prkaz T. gondii nepm metodyNepm imunofluorescenn test (NIFR, IFAT)

pozitivn

negativn

Vhody?

Nevhody?

Prkaz T. gondii nepm metodyEnzymov imunoanalza (ELISA)

mikrotitran destiky s

antigen T. gondii + edn

srum vazba antigen-

protiltka

vazba konjugtu (protiltka IgG

konjugovan kenovou peroxidzou)

na protiltky, pidn

substrtu

spektrofotometr - detekce

peroxidzov aktivity na

substrtu = barevn produkt

Prkaz T. gondii nepm metodyEnzymov imunoanalza (ELISA)

100xpk.D.O

vzorku.D.O(%)P/S Pozitivn vzorek: S/P % 40 (50%)

pozitivn

negativn

Vhody?

Nevhody?

kozy 66 % (n = 251) Bartova a Sedlak 2013 ovce 59 % (n = 547) Bartova et al. 2010 koky 44 % (n = 286) Sedlak a Bartova 2006 prasata 36 % (n = 551) Bartova a Sedlak 2011 psi 26 % (n = 413) Sedlak a Bartova 2006 ptrosi 25% (n = 298) Bartova et al. non published kon 23 % (n = 552) Bartova et al. 2010 drbe 12 % (n = 1108) Bartova et al. 2009 skot 10 % (n = 546) Bartova et al. 2015 krlci 5,5 % (n = 902) Neumayerova et al. 2014

Protiltky u domcch zvat v R(2006-2015)

Protiltky u voln ijcch zvat v R(2006-2016)

liky 100 % (n = 80) Bartova et al., 2016

prase divok 40 % (n = 656) Racka et al., 2015

26 % (n = 565) Bartova et al. 2006

pevkavci 32 % (n = 720) Bartova et al., 2007

exot pev. 31 % (n = 184) Bartova et al., 2017

zajci 20 % (n = 333) Bartova et al. 2010

drobn savci 3 % (n = 240) Machacova et al. 2016

Zajci vysoce vnmav k infekci hyny po

exper. infekci !!

Diagnostika - prkaz T. gondii

2 Pm metody:

vyeten trusu (flotace) detekce oocyst

otiskov preparty a mikroskopie, histologick

vyeten detekce tachyzoit a tkovch cyst

izolace bunn kultury, myi

molekulrn metody PCR, RFLP, genotypizace

Prkaz T. gondii pm metodyFlotace

zaloena na vy specifick vze flotanho

roztoku (cukern roztok) ne parazitrnch tvar

po centrifugaci vyplavou parazitrn tvary ve

zkumavce na hladinu

Prkaz T. gondii pm metodyMikroskopie

barven otiskov preparty (Giemsa, Dif-Quick,Hemacolor)

histopatologie (haematoxilin-eosin, PAS)

Otiskov prepart mozeek Otiskov prepart slezina

Prkaz T. gondii pm metody

Experiment, izolace

biologick pokus (Balb myi)

bunn kultury (Vero) avirulentn x virulentn kmeny

Vhody? Nevhody?

Prkaz T. gondii pm metody

T. gondii oblast TGR1 E

1 - velikostn standard, 2 - pozitivn kontrola (194 pb), 3 -

pozitivn vzorek, 4 - negativn kontrola

1 - 100 bp velikostn standard, 2 -

virulentn kontrola (kmen P-CZ), 3 -

avirulentn kontrola, 4 -izolt K24

Molekulrn metody

PCR (TGR1E, B1, SAG1..)

PCR/RFLP, genotypizace

virulentn/avirulentn, genotypy I, II, III..

V Evrop pevn

genotyp II

Lba a prevence T. gondii

lky (akutn infekce - sulfonamidy, pyrimethamine,

clindamicin)

vakcny (ovce, Austrlie), vakcna proti vyluovn

oocyst u koek, dal vakcny nejsou

Pokud se infikujete (chronick infekce) - T. gondii

se ji nezbavte !!

Lba

Lba a prevence T. gondii

Lidi zabezpeit dtsk hit

dodrovat hygienu (koi zchodky, ovoce, zelenina,

prknka v kuchyni pi prci se syrovm masem)

konzumovat tepeln opracovan masn vrobky !!tepeln opracovn masa (min 67 C 10 min / -12 C 48 h)

nasolen (> 2% soli 1 den)

Prevence

Zvata zamezit pstup koek (hlodavc, ptk) do chovu

podestlka, krmivo, voda, pastva bez oocyst

krmit masem bez TC (labor. myi, hovz)

jednohostitelsk kokcidie, u savc a ptk uvnit bunk steva nebo dchacho traktu Cryptosporidium parvum, C. hominis, C. canis, C. felis,C. muris, C. meleagridis

akutn prjmov onemocnn, bolest bicha, u HIV zvanj a fatln

Zdroj: kontaminovan voda, infikovan zvata

Kryptosporidiza - zoonza

Cryptosporidium spp.

Sarkocystza zoonza kokcidie Sarcocystis (svalovky) vcehostitelsk

cel svt (jednotliv druhy spec. oblasti)

bylo popsno vce ne 200 druh sarkocyst (u nkterchhostitel je ve svalovin potvrzeno i nkolik druh sarkocyst)

DH (masoravci) - poit masa s TC, ve stev pohlavn

vvoj, produkce oocyst (sporuluj ped exkrec!)

MH - oocysty z prosted - ze stev infekce do kosternch

sval, plic, mozku (cysty)

Tkov cysta

SarkocystyLidi definitivn hostitel

Sarcocystis hominis

Sarcocystis suishominis

sporocysty (voda, jdlo)

- sporozoiti do steva,

mno se v cvn

vstelce - srden sval

a kostern svaly (cystyse rozpadaj - bolestiv

otoky sval a kloub, znt

lach a okostice,

myokarditida, bolest na

hrudi, zten dchan)

cysty (tepeln

neupraven maso) -

trofozoity se p a

mno ve stevnm

traktu, infekn oocysty

odchzej stolic. Pjemcyst v mase domcch

zvat nen pro lovka

nebezpen nen klinika.

SarkocystyPrase - mezihostitel t druh:

S. miescheriana (DH psi, mvali, vlci, liky, akali)

S. suihominis (DH primti)

S. porcifelis (DH koky)

DH gametogonie, sporogonie ve stev infekn

sporocysty ji v trusu!

MH infekce sporocystami - merogonie v endotel. bukch

kapilr vnitnch orgn - sarkocysty ve svalovin

Pirozen infekce u prasat inaparentn (imunizace

opakovanmi nzkmi dvkami sporocyst).

Klinika u prasat ve vcarsku po pirozen infekci

S. miescheriana (anorexie, snen kondice,

horeka, dyspnoe, cyanza rypku, hyn), zdroj

kontaminovan slma.

Divok kachny

Sarcocystis rileyi (DH skunk pruhovan, Severn Amerika)V Evrop poprv: 2002 Rakousko, 2003 Polsko, 2010 Morava

Jak se nakazily? (skunk jen v zoo)Vysvtlen:

1) import S. rileyi a adaptace na jin masoravce (psci mvalovit, norci

amerit nebo mvali severn)

2) nov evropsk druh sarkocyst, DH???

Skot - mezihostitel nkterch druh

Sarcocystis cruzi (DH psi)

Sarcocystis hirsuta (DH kokovit elmy)

Sarcocystis hominis (DH primti)

Vyazovn masa na jatkch (cysty - abnormln vzhled) - ekonomick ztrty.

Bovinn eosinofiln myozitida - zntliv myopatie (edozelen lze v pnpruhovan svalovin, zvata se jev klinicky zdrav)

Diagnostika: histologick vyeten tkn, PCR

Sarkocysty

Kontakt: bartovae@vfu.cz

Zdroj obrzk: autorka, nebo https://www.google.cz/

mailto:bartovae@vfu.cz