of 35 /35
Doc. MVDr. Eva Bártová, Ph.D., [email protected] © 2017 VÝTRUSOVCI A PARAZITOLOGIE POTRAVIN ( Toxoplasma , Cryptosporidium , Sarcocystis ) Aktuálnost problému, cesty infekce, diagnostika, prevence a možnosti řešení

VÝTRUSOVCI A PARAZITOLOGIE · Doc. MVDr. Eva Bártová, Ph.D., [email protected] ... otáčet aglutinační kartu, ... Cryptosporidium spp

  • Author
    lelien

  • View
    223

  • Download
    0

Embed Size (px)

Text of VÝTRUSOVCI A PARAZITOLOGIE · Doc. MVDr. Eva Bártová, Ph.D., [email protected] ... otáčet...

  • Doc. MVDr. Eva Brtov, Ph.D., [email protected]

    2017

    VTRUSOVCI A PARAZITOLOGIE POTRAVIN

    (Toxoplasma, Cryptosporidium, Sarcocystis) Aktulnost problmu, cesty infekce,

    diagnostika, prevence a monosti een

    mailto:[email protected]
  • VtrusovciVtrusovci (Apicomplexa)

    dve Protozoa, dnes Chromalveolata

    apikln komplex - soubor organel, kter umouje

    invazivnm stdim (sporozoitm a merozoitm) prnik do buky

  • Vtrusovci

    Rozmnoovn

    pohlavn a nepohlavn

    schizogonie (merogonie) - rozdlen jedince

    (sporozoita) na mnostv dceinch jedinc, 23x

    gametogonie - meiza - tvorba gamet, splynut gamet a

    vznik oocysty

    sporogonie - nepohlavn mnoen uvnit oocysty

  • Kolik lid se s infekc setkalo?

    Zdroje infekce pro lovka?

    Diagnostika?

    Prevence?

    Lidi 75% bez pznak

    25% klinick pznaky - rizikov skupiny

    Toxoplazmza - zoonza

  • Toxoplazmza - zoonzauzlinov forma

    on forma

    vrozen toxoplazmza

    mozkov, plicn, srden, svalov

    MUDr. Markta Geleneky,

    Klinika infeknch nemoc

    3.LFUK a Nemocnice Na

    Bulovce, Prahawww.toxoplasmoza.cz

    www.tehotenstvi-infekce.cz

    http://www.toxoplasmoza.cz/http://www.tehotenstvi-infekce.cz/
  • Toxoplasma gondii - historieSystematick zaazen (Volf et al., 2007):Domna: Eukaryotae: ChromalveolataSkupina: AlveolataKmen: Apicomplexa (Vtrusovci)Tda: Coccidea (Kokcidie)d: Eimeriidaele: ToxoplasmatidaeRod: ToxoplasmaDruh: Toxoplasma gondii

    Gundi saharsk (Ctenodactylus gundii)

    (Nicolle a Manceaux, 1908)

    Gundi - severoafrick (Maroko, severn

    Alrsko, Tunisko a Libye) hlodavec

    velikosti morete, ije v kolonich.

    R - koncem roku 2008 import 10

    kus, prvn odchov v R v Zoo Praha v

    z 2009.

  • Toxoplasma gondii infekn stdia

    Sporozoiti 2 x 6 - 8 m, uvnitoocyst (vce rhoptri a mikronemne tachyzoit)oocysta 11 x 13 muvnit dv sporocysty, kad potyech sporozoitech

    Bradyzoiti (cystozoiti) 5 - 8,5 x 1-3 m,nachz se uvnit cysttkov cysta (5 100 m) vevnitnch orgnech a tknch (CNS,svaly, oko, srdce..)chronick fze infekce

    Definitivn hostitel?

    Mezihostitel?

    Infekn stdia?

    Tachyzoiti (endozoiti, trofozoiti)2 x 6 m, dl se uvnit jadernchbunk endodyogoniakutn fze infekce

  • Toxoplasma gondii ivotn cyklus

    Prepatentn perioda (dobaod infekce po vyluovnoocyst): 3 - 10 dn poinfekci TC, > 18 dn poinfekci oocystami.Vyluovn oocyst 13 tdnya 150 milion oocyst

    (Brtov et al., 2003)

    experiment, vyluovn za 3-5

    dn po infekci TC, vyluovn

    7-18 dn, max. 5-6 den,celkem 1-47 milin oocyst.

    Klinika u koek?Opakovan vyluovn?

  • Prof. RNDr. Jaroslav Flegr,

    CSc., Prodovdeck

    fakulta, Karlova univerzita,

    dlo Zamrzl evoluce

    Ig Nobel (za vzkum, kter

    pinut k zasmn a pot k

    zamylen)

    http://pokusnikralici.cz/

    Manipulan teorie

    Toxoplasma gondii

    Infikovan:

    2,7x vy riziko dopravnch nehod

    mn vad pach koky vliv na vzhled, chovn, povahu, reakn asy,

    pohlav plodu, rizikov chovn, sexuln

    preference

    zven rizika vskytu cca 70 onemocnn

    vetn schizofrenie, deprese, infarktu

    myokardu, ndorovch, psychiatrickch,

    imunitnch a neurodegenerativnch.

    Zaloeno pouze na statistickm vyhodnocen

    http://pokusnikralici.cz/
  • Toxoplasma gondii cesty enTkov cysty, oocysty - perorln infekce

  • Toxoplasma gondii cesty enTachyzoiti - transplacentrn infekce, transfuze, transplantace, koz mlko

  • Zvata bez kliniky x klinika

    domc, voln ijc, zoo zvata

    ovce, kozy - aborty, ekon. ztrty

    mosk vydry, antilopy, manul - hyny

    Toxoplasma gondii

  • Diagnostika - prkaz T. gondii

    1 Nepm metody:

    serologie (detekce protiltek, organismus se

    setkal s infekc, titry)

    LAT, IFAT, ELISA (dve pouvan SFR, KFR)

    srum, masov va

  • Prkaz T. gondii nepm metodyLatex aglutinan test (LAT, MAT)

    - rychl orientan test

    Sada PASTOREX TOXO

    pozitivn a negativn kontrola

    kapka latexov suspenze (antigen T. gondii) + kapka

    edcho roztoku + 15 l krevnho sra, smchat tyinkou,

    otet aglutinan kartu, po 5 a 7 min - aglutinace

  • Prkaz T. gondii nepm metodyLatex aglutinan test (LAT, MAT) Vhody?

    Nevhody?

  • Prkaz T. gondii nepm metodyNepm imunofluorescenn test (NIFR, IFAT)

    sklka s antigenem T. gondii + edn srum

    (1:40, 1:50..) - vazba antigen-protiltka

    vazba konjugtu (Ab s s fluoresceinem) na protiltky

    immunofluorescenn mikroskop

  • Prkaz T. gondii nepm metodyNepm imunofluorescenn test (NIFR, IFAT)

    pozitivn

    negativn

    Vhody?

    Nevhody?

  • Prkaz T. gondii nepm metodyEnzymov imunoanalza (ELISA)

    mikrotitran destiky s

    antigen T. gondii + edn

    srum vazba antigen-

    protiltka

    vazba konjugtu (protiltka IgG

    konjugovan kenovou peroxidzou)

    na protiltky, pidn

    substrtu

    spektrofotometr - detekce

    peroxidzov aktivity na

    substrtu = barevn produkt

  • Prkaz T. gondii nepm metodyEnzymov imunoanalza (ELISA)

    100xpk.D.O

    vzorku.D.O(%)P/S Pozitivn vzorek: S/P % 40 (50%)

    pozitivn

    negativn

    Vhody?

    Nevhody?

  • kozy 66 % (n = 251) Bartova a Sedlak 2013 ovce 59 % (n = 547) Bartova et al. 2010 koky 44 % (n = 286) Sedlak a Bartova 2006 prasata 36 % (n = 551) Bartova a Sedlak 2011 psi 26 % (n = 413) Sedlak a Bartova 2006 ptrosi 25% (n = 298) Bartova et al. non published kon 23 % (n = 552) Bartova et al. 2010 drbe 12 % (n = 1108) Bartova et al. 2009 skot 10 % (n = 546) Bartova et al. 2015 krlci 5,5 % (n = 902) Neumayerova et al. 2014

    Protiltky u domcch zvat v R(2006-2015)

  • Protiltky u voln ijcch zvat v R(2006-2016)

    liky 100 % (n = 80) Bartova et al., 2016

    prase divok 40 % (n = 656) Racka et al., 2015

    26 % (n = 565) Bartova et al. 2006

    pevkavci 32 % (n = 720) Bartova et al., 2007

    exot pev. 31 % (n = 184) Bartova et al., 2017

    zajci 20 % (n = 333) Bartova et al. 2010

    drobn savci 3 % (n = 240) Machacova et al. 2016

    Zajci vysoce vnmav k infekci hyny po

    exper. infekci !!

  • Diagnostika - prkaz T. gondii

    2 Pm metody:

    vyeten trusu (flotace) detekce oocyst

    otiskov preparty a mikroskopie, histologick

    vyeten detekce tachyzoit a tkovch cyst

    izolace bunn kultury, myi

    molekulrn metody PCR, RFLP, genotypizace

  • Prkaz T. gondii pm metodyFlotace

    zaloena na vy specifick vze flotanho

    roztoku (cukern roztok) ne parazitrnch tvar

    po centrifugaci vyplavou parazitrn tvary ve

    zkumavce na hladinu

  • Prkaz T. gondii pm metodyMikroskopie

    barven otiskov preparty (Giemsa, Dif-Quick,Hemacolor)

    histopatologie (haematoxilin-eosin, PAS)

    Otiskov prepart mozeek Otiskov prepart slezina

  • Prkaz T. gondii pm metody

    Experiment, izolace

    biologick pokus (Balb myi)

    bunn kultury (Vero) avirulentn x virulentn kmeny

    Vhody? Nevhody?

  • Prkaz T. gondii pm metody

    T. gondii oblast TGR1 E

    1 - velikostn standard, 2 - pozitivn kontrola (194 pb), 3 -

    pozitivn vzorek, 4 - negativn kontrola

    1 - 100 bp velikostn standard, 2 -

    virulentn kontrola (kmen P-CZ), 3 -

    avirulentn kontrola, 4 -izolt K24

    Molekulrn metody

    PCR (TGR1E, B1, SAG1..)

    PCR/RFLP, genotypizace

    virulentn/avirulentn, genotypy I, II, III..

    V Evrop pevn

    genotyp II

  • Lba a prevence T. gondii

    lky (akutn infekce - sulfonamidy, pyrimethamine,

    clindamicin)

    vakcny (ovce, Austrlie), vakcna proti vyluovn

    oocyst u koek, dal vakcny nejsou

    Pokud se infikujete (chronick infekce) - T. gondii

    se ji nezbavte !!

    Lba

  • Lba a prevence T. gondii

    Lidi zabezpeit dtsk hit

    dodrovat hygienu (koi zchodky, ovoce, zelenina,

    prknka v kuchyni pi prci se syrovm masem)

    konzumovat tepeln opracovan masn vrobky !!tepeln opracovn masa (min 67 C 10 min / -12 C 48 h)

    nasolen (> 2% soli 1 den)

    Prevence

    Zvata zamezit pstup koek (hlodavc, ptk) do chovu

    podestlka, krmivo, voda, pastva bez oocyst

    krmit masem bez TC (labor. myi, hovz)

  • jednohostitelsk kokcidie, u savc a ptk uvnit bunk steva nebo dchacho traktu Cryptosporidium parvum, C. hominis, C. canis, C. felis,C. muris, C. meleagridis

    akutn prjmov onemocnn, bolest bicha, u HIV zvanj a fatln

    Zdroj: kontaminovan voda, infikovan zvata

    Kryptosporidiza - zoonza

  • Cryptosporidium spp.

  • Sarkocystza zoonza kokcidie Sarcocystis (svalovky) vcehostitelsk

    cel svt (jednotliv druhy spec. oblasti)

    bylo popsno vce ne 200 druh sarkocyst (u nkterchhostitel je ve svalovin potvrzeno i nkolik druh sarkocyst)

    DH (masoravci) - poit masa s TC, ve stev pohlavn

    vvoj, produkce oocyst (sporuluj ped exkrec!)

    MH - oocysty z prosted - ze stev infekce do kosternch

    sval, plic, mozku (cysty)

    Tkov cysta

  • SarkocystyLidi definitivn hostitel

    Sarcocystis hominis

    Sarcocystis suishominis

    sporocysty (voda, jdlo)

    - sporozoiti do steva,

    mno se v cvn

    vstelce - srden sval

    a kostern svaly (cystyse rozpadaj - bolestiv

    otoky sval a kloub, znt

    lach a okostice,

    myokarditida, bolest na

    hrudi, zten dchan)

    cysty (tepeln

    neupraven maso) -

    trofozoity se p a

    mno ve stevnm

    traktu, infekn oocysty

    odchzej stolic. Pjemcyst v mase domcch

    zvat nen pro lovka

    nebezpen nen klinika.

  • SarkocystyPrase - mezihostitel t druh:

    S. miescheriana (DH psi, mvali, vlci, liky, akali)

    S. suihominis (DH primti)

    S. porcifelis (DH koky)

    DH gametogonie, sporogonie ve stev infekn

    sporocysty ji v trusu!

    MH infekce sporocystami - merogonie v endotel. bukch

    kapilr vnitnch orgn - sarkocysty ve svalovin

    Pirozen infekce u prasat inaparentn (imunizace

    opakovanmi nzkmi dvkami sporocyst).

    Klinika u prasat ve vcarsku po pirozen infekci

    S. miescheriana (anorexie, snen kondice,

    horeka, dyspnoe, cyanza rypku, hyn), zdroj

    kontaminovan slma.

  • Divok kachny

    Sarcocystis rileyi (DH skunk pruhovan, Severn Amerika)V Evrop poprv: 2002 Rakousko, 2003 Polsko, 2010 Morava

    Jak se nakazily? (skunk jen v zoo)Vysvtlen:

    1) import S. rileyi a adaptace na jin masoravce (psci mvalovit, norci

    amerit nebo mvali severn)

    2) nov evropsk druh sarkocyst, DH???

    Skot - mezihostitel nkterch druh

    Sarcocystis cruzi (DH psi)

    Sarcocystis hirsuta (DH kokovit elmy)

    Sarcocystis hominis (DH primti)

    Vyazovn masa na jatkch (cysty - abnormln vzhled) - ekonomick ztrty.

    Bovinn eosinofiln myozitida - zntliv myopatie (edozelen lze v pnpruhovan svalovin, zvata se jev klinicky zdrav)

    Diagnostika: histologick vyeten tkn, PCR

    Sarkocysty

  • Kontakt: [email protected]

    Zdroj obrzk: autorka, nebo https://www.google.cz/

    mailto:[email protected]