DIAGNOSTICUL GESTATIEI PRIN DIAGNOSTICUL GESTATIEI PRIN METODE DE LABORATORMETODE DE LABORATOR

Metode fiziceMetode fizice

Metode chimiceMetode chimice

Metode histologiceMetode histologice

Metode biologiceMetode biologice

Metode imunologiceMetode imunologice

Metode fiziceMetode fizice

1.1. Radiografia si radioscopia:Radiografia si radioscopia:- La animalele de talie mica si mijlocieLa animalele de talie mica si mijlocie- Permit diagn. gestatiei tardiv, dupa Permit diagn. gestatiei tardiv, dupa

initierea osificarii scheletului fetalinitierea osificarii scheletului fetal Avantaje:Avantaje: precizeaza nr. produsilor, precizeaza nr. produsilor,

asezarea si dispunerea lor in uter, diagn. asezarea si dispunerea lor in uter, diagn. malformatiilor si monstruozitatilor fetale. malformatiilor si monstruozitatilor fetale. Riscuri: aproape nule, atata timp cat Riscuri: aproape nule, atata timp cat organogeneza este terminataorganogeneza este terminata

Golden Retriever, gestatie 49 zile- Rx lateral si dorsalGolden Retriever, gestatie 49 zile- Rx lateral si dorsal

2. 2. ElectrocardiografiElectrocardiografi

aa Inregistrarea grafica a activitatii cardiace materne Inregistrarea grafica a activitatii cardiace materne

(secusele mari) peste care se suprapun secusele (secusele mari) peste care se suprapun secusele mici (activitatea cardiaca fetala)mici (activitatea cardiaca fetala)

Martor al viabilitatii fetale- clinica animalelor miciMartor al viabilitatii fetale- clinica animalelor mici

3. Metoda Sokolovskaia3. Metoda Sokolovskaia Vaca, fidelitate 80%: cresterea densitatii mucusului Vaca, fidelitate 80%: cresterea densitatii mucusului

cervical la vacile gestante evidentiata printr-o cervical la vacile gestante evidentiata printr-o reactie cu sulfat de cuprureactie cu sulfat de cupru

Cu(SO4)2 sol.+ 1 pic mucus in 5-6 sec. mucusul Cu(SO4)2 sol.+ 1 pic mucus in 5-6 sec. mucusul cade la fundul paharului (react.+,femela gestanta)cade la fundul paharului (react.+,femela gestanta)

4. CRISTALIZAREA MUCUSULUI CERVICAL 4. CRISTALIZAREA MUCUSULUI CERVICAL LA VACALA VACA

Metoda de diagn. a starii de negestatie, Metoda de diagn. a starii de negestatie, fidelitate fidelitate

Se realizeaza un frotiu din mucusul cervical- se Se realizeaza un frotiu din mucusul cervical- se examineaza la microscop:examineaza la microscop:

o In proestru si estru: mucusul cristalizeaza sub In proestru si estru: mucusul cristalizeaza sub forma unei frunze de feriga, excluzandu-se forma unei frunze de feriga, excluzandu-se gestatiagestatia

Frotiu din mucus cervical- imagine de “feriga”Frotiu din mucus cervical- imagine de “feriga”

5. Examinarea ecografica5. Examinarea ecograficaDiagnosticul ecografic reprezintă o metodă Diagnosticul ecografic reprezintă o metodă neinvazivă şi nedureroasă de vizualizare a diferitelor neinvazivă şi nedureroasă de vizualizare a diferitelor structuri ale organismului.structuri ale organismului.

Ultrasunetele- se propaga liniar (f. bine in mediu Ultrasunetele- se propaga liniar (f. bine in mediu lichid, nu si in aer sau mediu solid) si genereaza un lichid, nu si in aer sau mediu solid) si genereaza un ecou la suprafata de separare intre doua medii cu ecou la suprafata de separare intre doua medii cu densitate diferita.densitate diferita.

Efectul Doppler:Efectul Doppler: la limita de separare intre cele doua la limita de separare intre cele doua medii exista particule in miscare (circulatie fetala, medii exista particule in miscare (circulatie fetala, placentara, cord fetal, circ. materna) ce det. placentara, cord fetal, circ. materna) ce det. modificarea frecventei undei ultrasonicemodificarea frecventei undei ultrasonice

Efectul puls-ecou: Efectul puls-ecou: ecoul este captat si convertit in ecoul este captat si convertit in semnal acustic/luminossemnal acustic/luminos

Frecventa sondei mare = imagine mai clara = Frecventa sondei mare = imagine mai clara = penetrabilitate mai redusapenetrabilitate mai redusa

Diagnosticul ecografic al gestatiei la cateaDiagnosticul ecografic al gestatiei la catea

Aspect ecografic DopplerAspect ecografic Doppler

Diagnosticul ecografic al gestatiei la cateaDiagnosticul ecografic al gestatiei la catea

Gestaţie, 24 zile: se observă ecoul Gestaţie, 24 zile: se observă ecoul hiperecogen dat de embrionhiperecogen dat de embrion

Gestaţie, 35 de zile: se observă Gestaţie, 35 de zile: se observă capul şi corpul fetal, precum şi capul şi corpul fetal, precum şi brâul placentarbrâul placentar

Gestaţie, 35 de zile: secţiune Gestaţie, 35 de zile: secţiune transversală la nivelul fetusului, transversală la nivelul fetusului, vezicula vitelină, brâul vezicula vitelină, brâul placentar şi ampula fetalăplacentar şi ampula fetală

GESTAŢIE 31 ZILE – SE POT GESTAŢIE 31 ZILE – SE POT DECELA BCF, SEMN AL DECELA BCF, SEMN AL VIABILITĂŢII FETALEVIABILITĂŢII FETALE

GESTAŢIE 32 ZILE – SAC GESTAŢIE 32 ZILE – SAC GESTAŢIONAL ÎN CONTACT GESTAŢIONAL ÎN CONTACT CU APEXUL VEZICII URINARECU APEXUL VEZICII URINARE

GESTAŢIE 35 ZILE – BRÂUL PLACENTAR UŞOR DE EVIDENŢIATGESTAŢIE 35 ZILE – BRÂUL PLACENTAR UŞOR DE EVIDENŢIAT

Diagnosticul ecografic al gestatiei la iapaDiagnosticul ecografic al gestatiei la iapa

Gestatie iapa, 57 zileGestatie iapa, 57 zile Gestatie gemelara iapa, 30 zileGestatie gemelara iapa, 30 zile

Diagnosticul ecografic al gestatiei la scroafaDiagnosticul ecografic al gestatiei la scroafa

Gestatie scroafa, 28 zileGestatie scroafa, 28 zile Embrioni 28 zileEmbrioni 28 zile

Metode chimiceMetode chimice Reactia CuboniReactia Cuboni

-evidentierea calitativa a hormonilor estrogeni, printr--evidentierea calitativa a hormonilor estrogeni, printr-o reactie de fluorescenta a estrogenilor in prezenta o reactie de fluorescenta a estrogenilor in prezenta acidului sulfuricacidului sulfuric

-folosita la iapa intre lunile 4-9 de gestatie (estrogeni -folosita la iapa intre lunile 4-9 de gestatie (estrogeni la nivel urinar), fidelitate 98%la nivel urinar), fidelitate 98%

-15 ml urina+ 3 ml HCl – (incalzire, filtrare, decantare, -15 ml urina+ 3 ml HCl – (incalzire, filtrare, decantare, racire)- examinare la UV-fluorescenta verde= racire)- examinare la UV-fluorescenta verde= reactie+reactie+

Metode histologiceMetode histologice1.Metoda Benesch-Kurasava1.Metoda Benesch-Kurasava, folosita la iapa, folosita la iapa

- Evidentierea in - Evidentierea in frotiulfrotiul de la nivelul mucusului cervical de la nivelul mucusului cervical a celulelor epiteliate ciliate,in mici conglomerate, fara a celulelor epiteliate ciliate,in mici conglomerate, fara leucociteleucocite

2. Metoda Ciurea2. Metoda Ciurea la scroafa si oaie, fidelitate precoce- la scroafa si oaie, fidelitate precoce- 95%95%

-aprecierea modificarilor histologice ale epiteliului -aprecierea modificarilor histologice ale epiteliului vaginal anterior (vaginal anterior (recoltare biopsicarecoltare biopsica, includere in , includere in gheata, sectiuni, colorare) gheata, sectiuni, colorare)

-la scroafa: in estru epiteliul =20-25 straturi, in -la scroafa: in estru epiteliul =20-25 straturi, in metestru 4-5 straturi, in gestatie 2-3 straturimetestru 4-5 straturi, in gestatie 2-3 straturi

-la oaie: 10-12 strauturi la negestante, la gestante 3-4 -la oaie: 10-12 strauturi la negestante, la gestante 3-4 straturi, cu celule cubice (dupa ziua 40 de gestatie)straturi, cu celule cubice (dupa ziua 40 de gestatie)

Metode biologiceMetode biologicePrincipiuPrincipiu: evidentierea modificarilor specifice induse : evidentierea modificarilor specifice induse de gonadotropina serica asupra aparatului genital la de gonadotropina serica asupra aparatului genital la animalele de laboratoranimalele de laborator

--gonadotropina serica = h. glicoproteic secretat de gonadotropina serica = h. glicoproteic secretat de cel. trofoblastului fetal ce invadeaza cupele cel. trofoblastului fetal ce invadeaza cupele endometriale in intervalul 36-120 de zile de gestatie, endometriale in intervalul 36-120 de zile de gestatie, cu un maxim intre 55-75cu un maxim intre 55-75

Metoda Animal de experienta

Reactie pozitiva= femela de testat gestanta

1. Ascheim –Zondeck Soricele impubere 3-4 saptamani

Ovare cu foliculi maturi, edem tract genital

2. Freidman- Schneider Iepuroiace impubere Foliculi numerosi, hipertrofie uterina

3. Brouha-Hinglais Simmonet

Soareci masculi impuberi

Hipertrofia vez.sem. & testiculara

4. Zavadovschi-Nesmeianova

Cocosi impuberi Hipertrofia crestei si a testiculelor

5. Galli- Mainini Broscoi ex.microsc.al urinii: spermatozoizi

6. Allen-Doisy Soricele impubere/castrate

Frotiu din fluidul vaginal:cel Schollen

Metode imunologiceMetode imunologice1.1. Inhibarea reactiei de aglutinareInhibarea reactiei de aglutinare dintre dintre

eritrocitele de oaie si un ser antiPMSG, daca eritrocitele de oaie si un ser antiPMSG, daca aceste eritrocite sunt puse in prealabil in aceste eritrocite sunt puse in prealabil in contact cu serul provenit de la iapa de testat, contact cu serul provenit de la iapa de testat, cand aceasta este gestantacand aceasta este gestanta

ERITROCITE

ERITROCITE

ERITROCITE

Ser anti PMSG

Ser iapa de testat

Ser iapa de testat

Ser anti PMSG

Aglutinare (martor)

Fara reactii vizibile

Aglutinare=reactie -

Lipsa aglutinarii=reactie+

(iapa gestanta)

2.Imunoforeza in gel de geloza2.Imunoforeza in gel de geloza

-ser antiPMSG concentrat si specific se -ser antiPMSG concentrat si specific se introduce intr-un godeu central, intr-o placa introduce intr-un godeu central, intr-o placa Petri, seruri de la iepele de testat introduse in Petri, seruri de la iepele de testat introduse in godeuri perifericegodeuri periferice

-camp electroforetic - proteinele vor migra -camp electroforetic - proteinele vor migra specific in functie de masa lor moleculara, specific in functie de masa lor moleculara, intensitatea liniilor de precipitare ce se intensitatea liniilor de precipitare ce se formeaza este d.p. cu cant. de PMSG din serul formeaza este d.p. cu cant. de PMSG din serul de analizatde analizat

Ser antiPMS

G

ser 4

ser 3

ser 2

ser 6

ser 1

ser 5

3.Determinarea factorului de gestatie timpurie3.Determinarea factorului de gestatie timpurie

-complex proteic dependent de gestatie, produs -complex proteic dependent de gestatie, produs de ovar si oviduct care impiedica rejectia de ovar si oviduct care impiedica rejectia embrionului de catre mamaembrionului de catre mama

-se identifica la 24 de ore dupa monta la oaie si 4 -se identifica la 24 de ore dupa monta la oaie si 4 ore la scroafaore la scroafa

4. RIA- Ac.antiP se obtin prin inj.repetata a P la 4. RIA- Ac.antiP se obtin prin inj.repetata a P la iapaiapaAc.antiPAc.antiP+ + AgAg(P din ser,lapte) (P din ser,lapte) AcAc--AgAg++Ac.antiPAc.antiP (excesul(excesul))Ac.antiP Ac.antiP + + Ag (P marcat cu tritiu) Ag (P marcat cu tritiu) Ac - Ac - AgAg + + Ag (excesul)Ag (excesul)

-cu ajutorul unui spectometru de scintilatie se determina numarul -cu ajutorul unui spectometru de scintilatie se determina numarul dezintegrarilor radioactive- se raporteaza la o curba etalon si se dezintegrarilor radioactive- se raporteaza la o curba etalon si se precizeaza astfel cantitatea de P (ng/ml) din ser sau lapte.precizeaza astfel cantitatea de P (ng/ml) din ser sau lapte.

5. ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent 5. ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)Assay)

Acelasi principiu ca RIA, doar Ag este marcat Acelasi principiu ca RIA, doar Ag este marcat cu o enzima.cu o enzima.

Ag+enzima - determina degradarea unui Ag+enzima - determina degradarea unui substrat, apare o reactie de culoare, a carei substrat, apare o reactie de culoare, a carei intensitate se determina spectofotometricintensitate se determina spectofotometric

Diverse valori ale progesteronemiei la cateva specii domestice

P ng/ml IAPA VACA SCROAFA OAIE

NIVEL BAZAL 0.5 0.5 0.3 0.2-0.3

Faza luteala >5-6 >5 2

In gestatie >2 >2 9 7-8

Mom.recoltarii dupa monta

18-23 zile

23-24 zile 17-24 zile >50 zile

1. Godeurile sunt captusite cu un anticorp specific.1. Godeurile sunt captusite cu un anticorp specific.2. Se adauga proba (Ac poate capta Ag din proba).2. Se adauga proba (Ac poate capta Ag din proba).3. Se adauga un Ac secundar de detectie, care se 3. Se adauga un Ac secundar de detectie, care se fixeaza pe Ag capturat de primul Ac.fixeaza pe Ag capturat de primul Ac.4. Se adauga substratul enzimatic, care se fixeaza pe 4. Se adauga substratul enzimatic, care se fixeaza pe complexul format. complexul format. 5. Intensitatea culorii complexului format este d.p. cu 5. Intensitatea culorii complexului format este d.p. cu cant. de Ag din proba de analizat.cant. de Ag din proba de analizat.6. Intensitatea se apreciaza spectofotometric la 450 6. Intensitatea se apreciaza spectofotometric la 450 nm.nm.