UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD

CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA

LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA.

Profesor: Dr.- Carlos García MSc.Alumno: Oswaldo Luis Silva Oyola.Curso: 5to Bioq. Farm. Paralelo: “B“ Grupo: # 7 Fecha de Elaboración de la Práctica: Martes 30 de Junio del 2015. Fecha de Presentación de la Práctica: Martes 7 de Julio del 2015.

PRÁCTICA N° 5

Título de la Práctica: INTOXICACIÓN POR CETONA .Animal de Experimentación: Rata wistar de color: blanco.Vía de Administración: Vía Parenteral. (INTRAPERITONIAL.)Volumen Administrado: 6 ml

TIEMPOS:

Inicio de la práctica: 8:05 am Dosis adminstrada: 6 ml Animal de experimentacion: Rata wistar de color: blanco. Hora de administración del toxico a la rata wistar : 8:10 am Deceso del animal: 8:24 am Hora de diseccion: 8:30 am Inicio de la destilación: 8:55 am Finalización de la destilación: 9:20 am Final de la práctica: 10:30 am

SÍNTOMATOLOGIA DE LA RATA WISTAR.

Convulciones. Nauseas. Vomito. Cefalias. Muerte.

OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA:

“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 1

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Observar la reacción que presenta el animal de experimentacion ante una intoxicación.

Distinguir la sintomatología de la intoxicación por cetona con relación a otras sustancias toxicas.

Identificar la presencia de acetona en la sangre del animal mediante pruebas de reconocimiento.

MATERIALES. SUSTANCIAS.

Bata de laboratorio Equipo de destilación Mechero Guantes de látex Gorro Campana Zapatones Espátula Mascarilla Pipetas Erlenmeyer Tubos de ensayo Vasos de precipitación Jeringuilla de 10cc Instrumentos de disección

PROCEDIMIENTO:

1.- Primeramente Bioseguridad: Es decir colocarse la mascarilla, bata de laboratorio, gorro, zapatones y los guantes de látex

2.- A continuación se deben tener todos los materiales listos en la mesa de trabajo

3.- Con la jeringuilla tomamos 10 ml de etanol e inyectamos al cobayo (vía parenteral)

5.- Observar la sintomatología del toxico en el animal de experimentación.

6.- Esperamos el tiempo de defunción.

7.- Una vez muerto el cobayo se procede a amarrarlo en la tabla de disección. 8.- Tomamos el bisturí # 11 y lo colocamos en el soporte de bisturí y procedemos a rasurar al animal de experimentacion.

“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 2

Hidróxido de sodio Ácido clorhídrico Reactivo yodo-mercúrico Hidróxido de potasio Acido tartárico Acetona Solución yodo-yodurada Nitroprusiato de Sodio Carbonato de sodio

EQUIPO.

Cocineta

9.- Con mucho cuidado cortar la piel, ejerciendo presión sobre las costillas y con una jeringa aspirar la sangre.

10- Retirar los órganos sin excepción de uno y los colocamos en un vaso de precipitación.

11.- Luego procedemos a trocear muy fino los órganos con unas tijeras.

12.- Transvasamos a un balón y colocamos las perlas de vidrio, agregar además una pequeña cantidad de ácido tartárico y unos 3ml de agua destilada.

13.- Preparar 20 ml de NaOH al 20%, colocarlo en un erlenmeyer.

14.- Armar el equipo de destilación y poner las vísceras a destilar durante 30 minutos y con la ayuda de lámparas de alcohol calentar con movimientos circulares.

15. Finalmente una vez obtenido el destilado se realizan las reacciones de identificación:

1. Reacción de Nessler.

2. Reacción de Yodoformo.

3. Con nitroprusiato de Sodio.

4. Reacción de Fritsh.

5. Reacción de Frommer.

6. Reaccion con 2:4 Dinitrofenilhidracina.

REACCIONES DE RECONOCIMIENTO:

Después de destilar el material de investigación, en el destilado se realizan las reacciones de reconocimiento.

1. REACCIÓN DE NESSLER.- La acetona reacciona con el reactivo yodo-mercúrico en medio alcalino un precipitado blanco, formado por un producto de adición.

2. REACCIÓN DE YODOFORMO.- Al calentar una pequeña cantidad de la muestra con una solución yodo-yodurada en medio alcalino con KOH se produce yodoformo reconocible por su olor particular y su color amarillo.

I2 + 2KOH INA + IOK + H2O

“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 3

CH3 CI3

CO + 3IOK CO + 3KOH

CH3 CH3

CI3

CO + KOH CHI3 + CH3-COOK

CH3

3. CON NITROPRUSIATO DE SODIO.- Con este reactivo, al que se le añade solución de carbonato de sodio o NaOH, orina una coloración amarilla-rojiza que al agregarle ácido acético, dará un color violeta.

4. REACCIÓN DE FRITSH.- Se mezcla la solución problema con un volumen igual de ácido clorhídrico concentrado que contiene 5% de ramnosa, se calienta en baño de vapor. Aparece un color rojo, apreciable aún en concentración de 0.01 g de acetona por ml de solución.

5. REACCIÓN DE FROMMER.- La muestra problema, al ser condensada con aldehído salicílico en medio alcalino, produce un color rojo que permite su determinación colorimétrica o fotométrica por su gran sensibilidad y especificidad.

6. CON LA 2:4 DINITROFENILHIDRACINA: Disuelva una ó dos gotas del compuesto que se va investigar en 2 ml de etanol y añada a 3 ml del reactivo de 2,4-dinitrofenilhidracina. Agite vigorosamente y si no se forma inmediatamente .Un precipitado de color amarillo, anaranjado o rojo, deje reposar la solución durante 15 minutos.

REACTIVO. El reactivo se prepara disolviendo 3 g de 2,4-dinitrofenilhidracina en 15 ml de ácido sulfúrico concentrado. Entonces se añade esta solución, a 20 ml de agua destilada y 70 ml de etanol al 95%. Se mezcla perfectamente la solución y se filtra.

COMENTARIOS: La mayoría de las cetonas producen dinitrofelhidrazonas que son sólidos insolubles. Al principio, el precipitado puede ser aceitoso y al reposar, volverse cristalino. Sin embargo, algunas cetonas dan dinitrofenilhidrazonas que son aceites.

GRÁFICOS DE LA PRACTICA:

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REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN MEDIOS BIOLÓGICOS.

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Animal de experimentación:

“ Rata wistar “.

Inyectar 20 ml el toxico (metanol) en el animal de experimentacion.

Observar los síntomas de la rata luego de la administración del toxico hasta la muerte.

Colocar a la rata en la tablay realizamos la disección.

Colocación de las vísceras (picadas lo más finas posibles) en el vaso.

Se arma el equipo de destilación y comienza la destilacion.

Se recoge el destilado, para las reacciones de identificación.

Aqui esta la solucion madre, para que los grupos hagan las reacciones de reconocimiento.

REACCIÓN DE NESSLER :

Reacción Positivo No característico No hay coloración en medio alcalino debia dar un precipitado blanco.

REACCION DE YODOFORMO:

Reacción Positivo ( + ) caracteristico Se produce yodoformo reconocible por su olor particular y su color transparente.

REACCION DE NITROPRUSIATO DE SODIO: Reacción Positivo ( + ) caracteristico Hay Coloración rojo, café o violeta.

REACCIÓN DE FRITSH:

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Antes (color transparente)

Despues (Positivo caracteristico )

Antes (color transparente)

Despues (Positivo caracteristico )

Antes (color transparente) Despues (Positivo No caracteristico )

Reacción Positivo No caracteristico No hay coloracion rojo.

REACCIÓN DE 2:4 DINITROFENILHIDRACINA:

7.1 Reacción con Etanol Positivo (+) caracteristico Hubo coloracion amarillo.

7.2 Reacción Positivo (+) caracteristico Hubo color anaranjado o rojo.

OBSERVACIONES.

En la realización de ésta práctica al haber administrado los 6 ml de Cetona por vía peritoneal en el cobayo se pudo observar el deceso del animal después de 18 minutos, durante su agonía presentó mareos, perdida de la visión, convulsiones y seguidamente la muerte por la intoxicación con cetona.

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Antes (color transparente) Despues (Positivo No caracteristico )

Antes (color transparente) Despues (Positivo caracteristico )

Despues (Positivo caracteristico )

Antes (color transparente)

Es importante mencionar que a través de la aplicación de las reacciones de identificación en medios biológicos, observamos la coloración de las reacciones lo cual corroboro para determinar la presencia del (toxico) en la rata wistar.

CONCLUSIONES.

En la realización de esta práctica de esta práctica se aprendió a reconocer los efectos o síntomas provocados por la administración del toxico (cetona) al organismo de un animal de experimentación, así como también hemos identificado la presencia de este en la sangre del animal mediante pruebas específicas para el reconocimiento de este compuesto que puede originar a su vez coma o hasta incluso la muerte como se ha demostrado en esta práctica.

RECOMENDACIONES.

Asegurarse que el equipo esté correctamente sellado, ya que de esta forma logramos impedir el escape de los vapores en el proceso de la destilación, evitando así una intoxicación.

Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, gorro, zapatones, guantes, mascarilla.

Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio. Utilizar pipetas específicas para cada reactivo. Preparar correctamente las sustancias a la concentración requerida Acatar las sugerencias y guías expuestas por el ayudante, para de esta

manera obtener muy buenos resultados en la realización de la práctica.

CUESTIONARIO.

1. ¿CUÁLES SON LAS PROPIEDADES FÍSICAS DE LAS CETONAS?

Los compuestos carbonílicos presentan puntos de ebullición más bajos que los

alcoholes de su mismo peso molecular. No hay grandes diferencias entre los

puntos de ebullición de aldehídos y cetonas de igual peso molecular. Los

compuestos carbonílicos de cadena corta son solubles en agua y a medida que

aumenta la longitud de la cadena disminuye la solubilidad.

2. ¿CÓMO ES LA OBTENCIÓN DE LA ACETONA?

Se obtiene como subproducto en la fermentación por medio de la cual se

obtiene alcohol butílico; por oxidación de isopropanol; por ruptura de

hidroperóxido de cumeno en la cual se obtiene, además, fenol; por destilación

de acetato de calcio; por destilación destructiva de madera y a partir de

oxidación por cracking de propano.

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3. ¿EN QUE SE UTILIZA LA CETONA?

Es utilizada como disolvente de grasas, aceites, ceras, hules, plásticos, lacas y

barnices. Se usa en la manufactura de algunos explosivos, rayón, películas

fotográficas, elaboración de removedores de pinturas y barnices, purificación

de parafinas, en la deshidratación y endurecimiento de tejidos, en la extracción

de algunos productos vegetales y animales y como materia prima en una gran

variedad de síntesis en química orgánica.

4. ¿CUÁLES SON LOS NIVELES DE TOXICIDAD DE LA CETONA?

LD50 (en ratas en forma oral): 5800 mg/Kg

LD50 (en piel de conejos): 20 mg/Kg

Niveles de irritación a ojos en humanos: 500 ppm

Niveles de irritación a piel en conejos: 395 mg, leve. 500 mg / 24 h, leve.

Niveles de irritación a ojos en conejos: 3.950 mg, severo. 100 mg/24h,

moderado.

5. ¿ APLICACIONES DE LA ACETONA?

La acetona se utiliza principalmente como disolvente y como compuesto intermedio en la producción de sustancias químicas. Sus principales aplicaciones son la producción de Metil Metacrilato, Acido Metacrílico y Metacrilatos de mayor tamaño, Bisfenol A, Metil Isobutil Cetona, aplicaciones médicas y farmacéuticas (compuesto intermedio y solvente para drogas, vitaminas y cosméticos), como solvente para revestimientos,resinas, tintes, barnices, lacas, adhesivos y en acetato de celulosa.

GLOSARIO.

CETONA . Es un compuesto orgánico caracterizado por poseer un grupo funcional carbonilo unido a dos átomos de carbono, a diferencia de un aldehído, en donde el grupo carbonilo se encuentra unido al menos a un átomo de hidrógeno. Para nombrar a las cetonas por el nombre común, se indican los nombres de los grupos alifáticos o aromáticos unidos al carbono carbonilo, seguido de la palabra cetona.

TOXICOCINETICA . Como el conjunto de fenómenos que experimenta el tóxico desde su entrada a un organismo hasta su eliminación.

TRANSAMINASAS. Las transaminasas son enzimas que cumplen una función metabólica en el interior de las células. Estas enzimas se encuentran presentes en el tejido de muchos órganos (hígado, corazón, riñones, músculos.

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ERITEMATOSA. Es un término médico dermatológico para un enrojecimiento de la piel condicionado por una inflamación debida a un exceso de riego sanguíneo mediante vasodilatación.

NEUROTÓXICA. A toda sustancia capaz de alterar el funcionamiento del sistema nervioso, lo cual aleja al individuo de su estado homeostático y pone en riesgo su vida.

HIPOXIA. Es una familia de afecciones caracterizadas por una falta de oxígeno en los tejidos del cuerpo. La hipoxia puede abarcar el cuerpo general, o un área específica, tal como el cerebro.

BIBLIOGRAFÍA.

LORÍA J .BERMEO A. RAMÍREZ A. FERNÁNDEZ D. Archivos de Medicina de Urgencia de México. Intoxicación por CETONA, reporte de un caso. Mexico 2009 Vol. (Consultado el 19 deJunio del 2014). Disponible en: http://www.medigraphic.com/pdfs/urgencia/aur-2009/aur092f.pdf

Peterson, W.R. Formulación y Nomenclatura Química Orgánica (en

español) (6ta edición). Barcelona-España: Eunibar-editorial

universitaria de Barcelona. pp. 102–106.

Armendaris G, Gerardo (2007). Química orgánica 3 (en

español) (Tercera edición). Quito-Ecuador: Gruleer. pp. 140–141.

WEBGRAFÍA

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/002680.htm

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/002480.htm

http://www.quimica.unam.mx/IMG/pdf/4acetona.pdf

AUTORIA.

Dr.- Carlos García MSc.

FIRMA DEL RESPONSABLE.

ANEXOS:

“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“ Página 10

DATOS OBTENIDOS DE LA PRACTICA DE INTOXICACION POR CETONAS , MEDIANTE LA SINTOMATOLOGIA DE LA RATA WISTAR Y LAS REACCIONES DE RECONOCIMIENTO.

AQUÍ ESTA EL GRUPO # 7

TRABAANDO Y MOSTRANDO LA REACCION DE RECONOCIMEINTO CON 2:4 DINITROFENILHIDRACINA: INTOXICACION POR CETONA.

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