Doc. MVDr. Eva Bártová, Ph.D., [email protected]
© 2017
VÝTRUSOVCI A PARAZITOLOGIE POTRAVIN
(Toxoplasma, Cryptosporidium, Sarcocystis) Aktuálnost problému, cesty infekce,
diagnostika, prevence a možnosti řešení
VýtrusovciVýtrusovci (Apicomplexa)
dříve Protozoa, dnes Chromalveolata
apikální komplex - soubor organel, který umožňuje
invazivním stádiím (sporozoitům a merozoitům) průnik do buňky
Výtrusovci
Rozmnožování
pohlavní a nepohlavní
schizogonie (merogonie) - rozdělení jedince
(sporozoita) na množství dceřiných jedinců, 2–3x
gametogonie - meióza - tvorba gamet, splynutí gamet a
vznik oocysty
sporogonie - nepohlavní množení uvnitř oocysty
Kolik lidí se s infekcí setkalo?
Zdroje infekce pro člověka?
Diagnostika?
Prevence?
Lidi 75% bez příznaků
25% klinické příznaky - rizikové skupiny
Toxoplazmóza - zoonóza
Toxoplazmóza - zoonózauzlinová forma
oční forma
vrozená toxoplazmóza
mozková, plicní, srdeční, svalová
MUDr. Markéta Geleneky,
Klinika infekčních nemocí
3.LFUK a Nemocnice Na
Bulovce, Prahawww.toxoplasmoza.cz
www.tehotenstvi-infekce.cz
Toxoplasma gondii - historieSystematické zařazení (Volf et al., 2007):Doména: EukaryotaŘíše: ChromalveolataSkupina: AlveolataKmen: Apicomplexa (Výtrusovci)Třída: Coccidea (Kokcidie)Řád: EimeriidaČeleď: ToxoplasmatidaeRod: ToxoplasmaDruh: Toxoplasma gondii
Gundi saharský (Ctenodactylus gundii)
(Nicolle a Manceaux, 1908)
Gundi - severoafrický (Maroko, severní
Alžírsko, Tunisko a Libye) hlodavec
velikosti morčete, žije v koloniích.
ČR - koncem roku 2008 import 10
kusů, první odchov v ČR v Zoo Praha v
září 2009.
Toxoplasma gondii – infekční stádia
Sporozoiti 2 x 6 - 8 μm, uvnitřoocyst (více rhoptrií a mikronemnež tachyzoit)oocysta 11 x 13 μmuvnitř dvě sporocysty, každá počtyřech sporozoitech
Bradyzoiti (cystozoiti) 5 - 8,5 x 1-3 μm,nachází se uvnitř cysttkáňová cysta (5 – 100 μm) vevnitřních orgánech a tkáních (CNS,svaly, oko, srdce..)chronická fáze infekce
Definitivní hostitel?
Mezihostitelé?
Infekční stádia?
Tachyzoiti (endozoiti, trofozoiti)2 x 6 μm, dělí se uvnitř jadernýchbuněk endodyogoniíakutní fáze infekce
Toxoplasma gondii – životní cyklus
Prepatentní perioda (dobaod infekce po vylučováníoocyst): 3 - 10 dnů poinfekci TC, > 18 dnů poinfekci oocystami.Vylučování oocyst 1–3 týdnyaž 150 milionů oocyst
(Bártová et al., 2003) –
experiment, vylučování za 3-5
dnů po infekci TC, vylučování
7-18 dnů, max. 5-6 den,celkem 1-47 miliónů oocyst.
Klinika u koček?Opakované vylučování?
Prof. RNDr. Jaroslav Flegr,
CSc., Přírodovědecká
fakulta, Karlova univerzita,
dílo Zamrzlá evoluce
Ig Nobel (za výzkum, které
přinutí k zasmání a poté k
zamyšlení)
http://pokusnikralici.cz/
Manipulační teorie
Toxoplasma gondii
Infikovaní:
2,7x vyšší riziko dopravních nehod
méně vadí pach kočky vliv na vzhled, chování, povahu, reakční časy,
pohlaví plodu, rizikové chování, sexuální
preference …
zvýšení rizika výskytu cca 70 onemocnění
včetně schizofrenie, deprese, infarktu
myokardu, nádorových, psychiatrických,
imunitních a neurodegenerativních.
Založeno pouze na statistickém vyhodnocení
Toxoplasma gondii – cesty šířeníTkáňové cysty, oocysty - perorální infekce
Toxoplasma gondii – cesty šířeníTachyzoiti - transplacentární infekce, transfuze, transplantace, kozí mléko…
Zvířata bez kliniky x klinika
domácí, volně žijící, zoo zvířata
ovce, kozy - aborty, ekon. ztráty
mořské vydry, antilopy, manul - úhyny
Toxoplasma gondii
Diagnostika - průkaz T. gondii
1 Nepřímé metody:
serologie (detekce protilátek, organismus se
setkal s infekcí, titry)
LAT, IFAT, ELISA (dříve používané SFR, KFR)
sérum, masová šťáva
Průkaz T. gondii – nepřímé metodyLatex aglutinační test (LAT, MAT)
- rychlý orientační test
Sada PASTOREX TOXO
pozitivní a negativní kontrola
kapka latexové suspenze (antigen T. gondii) + kapka
ředícího roztoku + 15 μl krevního séra, smíchat tyčinkou,
otáčet aglutinační kartu, po 5 až 7 min - aglutinace
Průkaz T. gondii – nepřímé metodyLatex aglutinační test (LAT, MAT) Výhody?
Nevýhody?
Průkaz T. gondii – nepřímé metodyNepřímý imunofluorescenční test (NIFR, IFAT)
sklíčka s antigenem T. gondii + ředěné sérum
(1:40, 1:50..) - vazba antigen-protilátka
vazba konjugátu (Ab s s fluoresceinem) na protilátky
immunofluorescenční mikroskop
Průkaz T. gondii – nepřímé metodyNepřímý imunofluorescenční test (NIFR, IFAT)
pozitivní
negativní
Výhody?
Nevýhody?
Průkaz T. gondii – nepřímé metodyEnzymová imunoanalýza (ELISA)
mikrotitrační destičky s
antigen T. gondii + ředěné
sérum – vazba antigen-
protilátka
vazba konjugátu (protilátka IgG
konjugovaná křenovou peroxidázou)
na protilátky, přidání
substrátu
spektrofotometr - detekce
peroxidázové aktivity na
substrátu = barevný produkt
Průkaz T. gondii – nepřímé metodyEnzymová imunoanalýza (ELISA)
100xpk.D.O
vzorku.D.O(%)P/S Pozitivní vzorek: S/P % ≥ 40 (50%)
pozitivní
negativní
Výhody?
Nevýhody?
kozy 66 % (n = 251) Bartova a Sedlak 2013
ovce 59 % (n = 547) Bartova et al. 2010
kočky 44 % (n = 286) Sedlak a Bartova 2006
prasata 36 % (n = 551) Bartova a Sedlak 2011
psi 26 % (n = 413) Sedlak a Bartova 2006
pštrosi 25% (n = 298) Bartova et al. non published
koně 23 % (n = 552) Bartova et al. 2010
drůbež 12 % (n = 1108) Bartova et al. 2009
skot 10 % (n = 546) Bartova et al. 2015
králíci 5,5 % (n = 902) Neumayerova et al. 2014
Protilátky u domácích zvířat v ČR(2006-2015)
Protilátky u volně žijících zvířat v ČR(2006-2016)
lišky 100 % (n = 80) Bartova et al., 2016
prase divoké 40 % (n = 656) Racka et al., 2015
26 % (n = 565) Bartova et al. 2006
přežvýkavci 32 % (n = 720) Bartova et al., 2007
exot přežv. 31 % (n = 184) Bartova et al., 2017
zajíci 20 % (n = 333) Bartova et al. 2010
drobní savci 3 % (n = 240) Machacova et al. 2016
Zajíci vysoce vnímaví k infekci – úhyny po
exper. infekci !!
Diagnostika - průkaz T. gondii
2 Přímé metody:
vyšetření trusu (flotace) – detekce oocyst
otiskové preparáty a mikroskopie, histologické
vyšetření – detekce tachyzoitů a tkáňových cyst
izolace – buněčné kultury, myši
molekulární metody – PCR, RFLP, genotypizace
Průkaz T. gondii – přímé metodyFlotace
založena na vyšší specifické váze flotačního
roztoku (cukerný roztok) než parazitárních útvarů
po centrifugaci vyplavou parazitární útvary ve
zkumavce na hladinu
Průkaz T. gondii – přímé metodyMikroskopie
barvené otiskové preparáty (Giemsa, Dif-Quick,
Hemacolor)
histopatologie (haematoxilin-eosin, PAS)
Otiskový preparát – mozeček Otiskový preparát – slezina
Průkaz T. gondii – přímé metody
Experiment, izolace
biologický pokus (Balb myši)
buněčné kultury (Vero) avirulentní x virulentní kmeny
Výhody? Nevýhody?
Průkaz T. gondii – přímé metody
T. gondii oblast TGR1 E
1 - velikostní standard, 2 - pozitivní kontrola (194 pb), 3 -
pozitivní vzorek, 4 - negativní kontrola
1 - 100 bp velikostní standard, 2 -
virulentní kontrola (kmen P-CZ), 3 -
avirulentní kontrola, 4 -izolát K24
Molekulární metody
PCR (TGR1E, B1, SAG1..)
PCR/RFLP, genotypizace
virulentní/avirulentní, genotypy I, II, III…..
V Evropě převážně
genotyp II
Léčba a prevence T. gondii
léky (akutní infekce - sulfonamidy, pyrimethamine,
clindamicin)
vakcíny (ovce, Austrálie), vakcína proti vylučování
oocyst u koček, další vakcíny nejsou
Pokud se infikujete (chronická infekce) - T. gondii
se již nezbavíte !!
Léčba
Léčba a prevence T. gondii
Lidi zabezpečit dětské hřiště
dodržovat hygienu (kočičí záchodky, ovoce, zelenina,
prkýnka v kuchyni při práci se syrovým masem…)
konzumovat tepelně opracované masné výrobky !!tepelné opracování masa (min 67 °C 10 min / -12 °C 48 h)
nasolení (> 2% soli 1 den)
Prevence
Zvířata zamezit přístup koček (hlodavců, ptáků) do chovu
podestýlka, krmivo, voda, pastva – bez oocyst
krmit masem bez TC (labor. myši, hovězí)
jednohostitelská kokcidie, u savců a ptáků uvnitř buněk střeva nebo dýchacího traktu Cryptosporidium parvum, C. hominis, C. canis, C. felis,C. muris, C. meleagridis
akutní průjmové onemocnění, bolest břicha, u HIV závažnější až fatální
Zdroj: kontaminovaná voda, infikovaná zvířata
Kryptosporidióza - zoonóza
Cryptosporidium spp.
Sarkocystóza – zoonóza kokcidie Sarcocystis (svalovky) – vícehostitelské
celý svět (jednotlivé druhy – spec. oblasti)
bylo popsáno více než 200 druhů sarkocyst (u některých
hostitelů je ve svalovině potvrzeno i několik druhů sarkocyst)
DH (masožravci) - požití masa s TC, ve střevě pohlavní
vývoj, produkce oocyst (sporulují před exkrecí!)
MH - oocysty z prostředí - ze střev infekce do kosterních
svalů, plic, mozku (cysty)
Tkáňová cysta
SarkocystyLidi – definitivní hostitel
Sarcocystis hominis
Sarcocystis suishominis
sporocysty (voda, jídlo)
- sporozoiti do střeva,
množí se v cévní
výstelce - srdeční sval
a kosterní svaly (cysty
se rozpadají - bolestivé
otoky svalů a kloubů, zánět
šlach a okostice,
myokarditida, bolest na
hrudi, ztížené dýchaní)
cysty (tepelně
neupravené maso) -
trofozoity se páří a
množí ve střevním
traktu, infekční oocysty
odcházejí stolicí. Příjem
cyst v mase domácích
zvířat není pro člověka
nebezpečný – není klinika.
SarkocystyPrase - mezihostitel tří druhů:
S. miescheriana (DH psi, mývali, vlci, lišky, šakali)
S. suihominis (DH primáti)
S. porcifelis (DH kočky)
DH – gametogonie, sporogonie ve střevě – infekční
sporocysty již v trusu!
MH – infekce sporocystami - merogonie v endotel. buňkách
kapilár vnitřních orgánů - sarkocysty ve svalovině
Přirozená infekce u prasat inaparentně (imunizace
opakovanými nízkými dávkami sporocyst).
Klinika u prasat ve Švýcarsku po přirozené infekci
S. miescheriana (anorexie, snížená kondice,
horečka, dyspnoe, cyanóza rypáku, úhyn), zdroj
kontaminovaná sláma.
Divoké kachny
Sarcocystis rileyi (DH skunk pruhovaný, Severní Amerika)V Evropě poprvé: 2002 Rakousko, 2003 Polsko, 2010 Morava
Jak se nakazily? (skunk jen v zoo)Vysvětlení:
1) import S. rileyi a adaptace na jiné masožravce (psíci mývalovití, norci
američtí nebo mývali severní)
2) nový „evropský“ druh sarkocyst, DH???
Skot - mezihostitel některých druhů
Sarcocystis cruzi (DH psi)
Sarcocystis hirsuta (DH kočkovité šelmy)
Sarcocystis hominis (DH primáti)
Vyřazování masa na jatkách (cysty - abnormální vzhled) - ekonomické ztráty.
Bovinní eosinofilní myozitida - zánětlivá myopatie (šedozelené léze v příčně
pruhované svalovině, zvířata se jeví klinicky zdravá)
Diagnostika: histologické vyšetření tkání, PCR
Sarkocysty
Recommended
