UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD

CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA

LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA

Profesor: Bioq. Farm. Carlos García MSc.Alumno: Fernández Valarezo Gisela KatherineCurso: Quinto Paralelo: A Grupo N° 5

Fecha de Elaboración de la Práctica: Lunes 16 de junio del 2014 Fecha de Presentación de la Práctica: Lunes 23 de Junio del 2014

PRÁCTICA N° 3

Título de la Práctica: Intoxicación por metanol.Animal de Experimentación: Cobayo.Vía de Administración: Intraperitonial

Tiempos:

o Inicio de la práctica: 8:20am

o Hora de administración del toxico al cobayo: 8:25 am

o Deceso del animal: 9: 45 am

o Inicio de la destilación: 10:30 am

o Finalización de la destilación: 11:00 am

o Final de la práctica: 11:30 am

OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA

1. Observar la reacción que presenta el cobayo ante la Intoxicación por metanol.2. Observar cuidadosamente las manifestaciones y controlar el tiempo en que actúa el

toxico.3. Adquirir la destreza para realizar las reacciones de identificación, mediante la

transformación del metanol a metanal.4. Reconocer mediante la observación de los colores características, la presencia de

metanal indicativo de la presencia del metanol.

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MATERIALES

o Jeringa de 5 cc

o Varilla

o Espátula

o Probeta

o Campana

o Panema

o Perlas de vidrio

o Bureta

o Soporte universal

o Cinta plástica

o Lámpara de alcohol

o Fosforo

o Pinzas

o Cocineta

o Porta tubo

o Tabla de disección

o Cronómetro

o Equipo de disección

o Bisturí

o Vasos de precipitación 200 y

500 ml.

o Erlenmeyer

o Equipo de destilación.

o Tubos de ensayo

o Pipetas

o Guantes de látex

o Mascarilla

o Mandil

o Gorro

o Zapatones en caso de usar

sandalias

SUSTANCIAS

Metanol. Acido tartárico. Coluro de Fenilhidracina al 4%. Nitroprusiato de sodio al 2.5 %. Hidróxido de Sodio 0.1 N Ferricianuro de potasio. Hidróxido de potasio 12%. Ácido cromotrópico. Agua destilada. Ácido sulfúrico concentrado. Leche. Cloruro férrico

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PROCEDIMIENTO

1. Limpiar y desinfectar la mesa de trabajo.2. Colocamos el cobayo en el panema.3. Tener todos los materiales a utilizar listos.4. Administramos al cobayo, 5 ml de metanol por vía intraperitoneal y anotamos

el tiempo.5. Observamos los efectos que produce en el cobayo.6. Luego inyectamos 15 ml del toxico en tres dosis durante el lapso de 35 minutos

hasta la muerte del animal.7. Procedimos a la apertura del cobayo con la ayuda del bisturí.8. Observamos el estado de las vísceras. 9. En un vaso de precipitación recolectamos la sangre y colocando las vísceras

(picadas lo más finas posibles).10. El contenido del vaso anterior lo pasamos al balón para proceder a la destilación.11. Armamos correctamente el equipo de destilación (método de soxhleth),

asegurando que no existan fugas que conlleven a pérdidas del destilado.12. Adicionamos a las vísceras acido tartárico (25 ml) y calentamos con la lámpara

de alcohol esto con movimiento circular.13. Al producto de la destilación (destilado), le colocamos una lámina de cobre al

rojo vivo hasta que se observe el desprendimiento de partículas de color gris, con esto convertimos el metanol a metanal y procedimos a realizar las reacciones de identificación.

14. Una vez terminada la práctica se limpia todo el material y el área utilizada.

REACCIONES DE REACIONES DE RECONICIMIENTO

1. REACCIÓN DE SCHIFF: A una pequeña porción de la muestra, se añade 1ml de permanganato de potasio al 1% después de mezclar se adiciona unas gotas de ácido sulfúrico puro, se deja reposar por tres minutos y agregan algunas gotas de solución saturada de ácido oxálico (hasta que decolore la mezcla); la mezcla adquiere un color madera que se decolora totalmente luego de agregarle nuevamente algunas gotas de ácido sulfúrico puro. Finalmente se le añade 1ml de fushina bisulfatada (Reactivo de Schiff), con lo cual se produce un intenso color violeta en caso de positivo.

2. REACCIÓN DE RIMINI: A 5 ml de destilado se agregan 10 gotas de cloruro de fenilhidracina al 4 %, 4 gotas de solución de nitroprusiato de sodio al 2.5% recién preparado y 1ml de solución de hidróxido de sodio, se produce una coloración azul intensa.

3. CON LA FENILHIDRACINA: En un medio fuertemente acidificado con ácido clorhídrico a una pequeña cantidad de muestra se agrega un pedacito de cloruro de fenil hidracina, 2-4 gotas de solución de ferricianuro de potasio al 5 – 10% y algunas gotas de hidróxido de potasio al 12% se obtiene una coloración rojo grosella.

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4. CON EL ÁCIDO CROMOTRÓPICO: Con este ácido en un medio fuertemente acidificado con ácido sulfúrico, el formaldehido produce una coloración roja después de calentarla ligeramente.

5. REACCIÓN DE HEHNER: Se mezcla una gota de destilado con algunos mililitros de leche, se estratifica con ácido sulfúrico concentrado al que se le han agregado trazas de cloruro férrico (5 gotas de cloruro férrico en 500ml de ácido sulfúrico); en caso positivo, en la zona de contacto se produce un color violeta o azul violeta.

GRÁFICOS:

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Animal de experimentación cobayo

Extraer las vísceras del cobayo

Inyectar 10 ml el toxico (metanol)

Preparar el equipo de destilación

Triturar las vísceras

Observar los síntomas del cobayo luego de la administración del toxico

Obtener el destilado para realizar el análisis

Colocar al cobayo en la tabla de disección

1

4

852

7

3

6

9

Transformación del metanol en metanal para su identificación

REACCIONES DE RECONOCIMIENTO EN MEDIOS BIOLÓGICOS

REACCIÓN DE SHIFF: Reacción positivo no característico cambio de coloración

REACCIÓN DE RIMIDI Reacción positivo no característico cambio de coloración

CON LA FENIL HIDRACINAReacción positivo se observó el color rojo grosella.

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Antes Después

Antes Después

Antes Después

CON ÁCIDO CROMOTRÓPICOReacción negativo no se observó la coloración roja.

REACCIÓN DE HEHNER

Reacción negativo no se formó el anillo violeta.

OBSERVACIONES

Hemos observado que al administrar el toxico (metanol) por vía intraperitoneal el cobayo presentó cierta inmovilidad, depresión del SNC, a los 3 minutos se le cayeron las orejas pero permanecía estable, a los 7 minutos el ritmo respiratorio disminuyo, a los 11 minutos no responde a estímulos oculares, con la sobredosis que se le fue administrado murió inmediatamente a los 70 minutos. Presentó necropsia de las vísceras.

CONCLUSIONES

Al término de esta práctica podemos concluir que el veneno utilizado (metanol) es muy tóxico debido a las manifestaciones como la poca movilidad, convulsiones y coma que se presentaron en el animal, en primera instancia no se logró la muerte ya que la dosis fue muy baja pero al administrarle un total de 20 ml del toxico el deceso fue inmediato y mediante las reacciones para el reconocimiento de éste podemos concluir que si hubo presencia de metanol.

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DespuésAntes

Antes Después

RECOMENDACIONES

Realizar la asepsia del área a trabajar. Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, guantes,

mascarilla. Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio. Utilizar la cámara de gases para realizar las pruebas y evitamos así

intoxicaciones. Al someter calor en el tubo de ensayo para las reacciones, realizarlo de lado y

que no esté alguna persona en esa dirección, ya que puede haber salpicadura del toxico.

CUESTIONARIO

¿QUE ES EL METANOL?

El compuesto químico metanol, también conocido como alcohol de madera o alcohol metílico (o raramente alcohol de quemar), es el alcohol más sencillo. A temperatura ambiente se presenta como un líquido ligero (de baja densidad), incoloro, inflamable y tóxico que se emplea como anticongelante, disolvente y combustible. Su fórmula química es CH3OH (CH4O).

¿DÓNDE SE ENCUENTRA?

Anticongelante Fuentes de calentamiento enlatadas Líquidos para copiadoras Líquido descongelante Aditivos para combustibles (mejoradores del octanaje) Removedor o disolvente de pintura Goma laca Barniz Líquido limpiador de parabrisas

¿CUÁLES SONLOS SINTOMAS ANTE UNA INTOXICACION?

Los síntomas pueden abarcar:Pulmones y vías respiratorias Dificultad respiratoria, paro respiratorio Ojos Ceguera, visión borrosa y dilatación de las pupilasCorazón y vasos sanguíneos Convulsiones y presión arterial bajaSistema nervioso: Comportamiento agitado, coma, dolor de cabeza y epiléptica

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Piel y uñas Uñas y labios azulados Estómago e intestinos Dolor abdominal (fuerte), diarrea, problemas con la función hepática, náuseas, pancreatitis y vómitos.

¿TOXICIDAD DEL METANOL?

El metanol es extremadamente tóxico. Tan solo dos cucharadas pueden ser mortales para un niño y alrededor de 2 a 8 onzas pueden ser mortales para un adulto. La ceguera es común y a menudo permanente a pesar de los cuidados médicos. El pronóstico para la persona depende de la cantidad de tóxico ingerida y de la prontitud con que se reciba el tratamiento.

COMPRACIONES

USOSEl metanol tiene varios usos. Es un disolvente industrial y se emplea como materia prima en la fabricación de formaldehído. El metanol también se emplea como anticongelante en vehículos, combustible de estufetas de acampada, solvente de tintas, tintes, resinas, adhesivos, biocombustibles y aspartame. El metanol puede ser también añadido al etanol para hacer que éste no sea apto para el consumo humano (el metanol es altamente tóxico) y para vehículos de modelismo con motores de combustión interna.

BIBLIOGRAFÍA

Toxicología Médica Dr. Phil, Dr. Med. H. Funher. Editorial Científico-Médico. Madrid. España. 2010.

WEBGRAFÍA

https://www.google.com.ec/?gfe_rd=cr&ei=I72nU8_2Ca_Q8gfx7IDgBQ&gws_rd=ssl#q=metanolhttp://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/002680.htmhttp://es.wikipedia.org/wiki/Metanol

AUTORIA

Bioq. Farm. Carlos García MSc.

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FIRMAS DE LOS INTEGRANTES

__________________ __________________Elizabeth Guzmán Geovanny Ramón

_________________________Gisela Fernández

GLOSARIO

Embalsamamiento.- es una práctica que utiliza generalmente sustancias químicas, en especial resinas o bálsamos, y cuyo objetivo es preservar de la putrefacción la integridad de los cadáveres.

Aspartame.- es un edulcorante no calórico descubierto en 1965 por la multinacional farmacéutica G.D. Searl and Company. Que se emplea en numerosos alimentos en todo el mundo bajo varias marcas como Natreen y Canderel, además de NutraSweet, y que corresponde al código E 951 en Europa.

Emanaciones: Desprendimiento o emisión de sustancias volátiles de un cuerpo hacia su alrededor.

Mosto.- es el zumo de la uva que contiene diversos elementos de la uva como pueden ser la piel, las semillas, etc. Se considera una de las primeras etapas de la elaboración del vino.

Acidosis.- Es una dolencia en la cual hay demasiado ácido en los líquidos del cuerpo. Es lo opuesto a alcalosis (una afección en la cual hay exceso de base en los líquidos corporales).

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ANEXOS:

METANOL

El metanol (CH3OH) es un líquido incoloro ay volátil a temperatura ambiente. Por si mismo es inofensivo, pero sus metabolitos son tóxicos.

Fuentes de Exposición

Tiene una amplia utilización industrial como disolvente, utilizándose en la fabricación de plásticos, material fotográfico. Componente de la gasolina, anticongelantes, liquido limpia cristales, líquido para fotocopias, limpiadores del hogar, etc.

La intoxicación se produce generalmente por ingesta accidental o intencionada. También se han dado casos de intoxicación por adulteración de bebidas alcohólicas.

Toxicocinética

Cuando se ingiere, se absorbe rápidamente a partir del tracto gastrointestinal y los niveles en sangre alcanzan su pico a los 30-60 minutos de la ingestión, dependiendo de a presencia o ausencia de comida. La intoxicación usualmente se caracteriza por un periodo de latencia (40

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minutos a 72 horas), durante el cual nos e observan síntomas. Esta fase sigue de acidosis con anión gap elevado y de síntomas visuales.

El metabolismo del metanol comprende la formación de formaldehido por una oxidación catalizada a través del alcohol deshidrogenasa. El formaldehido es 33 veces más toxico que el metanol, pero es más rápidamente convertido a acido fórmico, que es 6 veces más toxico que el metanol. Los niveles de ácido fórmico se correlacionan con el grado de acidosis y la magnitud del anión gap. También la mortalidad y los síntomas visuales se correlacionan con el grado de acidosis.

Mecanismos de acción

El metanol se absorbe por vía oral, a través de la piel, y por vía respiratoria. Su volumen de distribución es 0.6 l/kg. Se distribuye en el agua corporal y es prácticamente insoluble en la grasa. El hígado lo metaboliza en su mayor parte, a través del alcohol-deshidrogenasa, el formaldehido, que es rápidamente convertido a acido fórmico por el aldehído-deshidrogenasa, el cual es finalmente oxidado a dióxido de carbono. El 3-5% se excreta por el pulmón y el 12% por vía renal. La vida media es de unas 12 horas, que puede reducirse a 2.5 mediante hemodiálisis. La eliminación sigue una cinética de primer orden a bajas dosis y durante la hemodiálisis, mientras que sigue una cinética de orden cero a altas dosis.

Se piensas que el ácido fórmico es el responsable de la toxicidad ocular asociada a la intoxicación por metanol, como el ácido láctico, parecen ser los responsables de la acidosis metabólica y del descenso del bicarbonato.

El metanol afecta principalmente al SNC, produciendo deterioro del nivel de consciencia convulsiones y coma. La dosis toxica es de 10-30ml, considerándose potencialmente letal una dosis de 60-240ml; los niveles plasmáticos tóxicos son superiores a 0.2g/l, y potencialmente mortales los que superan 1l/g.

Cuadro clínico

La intoxicación por metanol habitualmente se produce por ingestión, pero también puede ocurrir por absorción cutánea y por inhalación. El inicio del cuadro puede ser precoz, o retrasarse hasta 24 horas, si se han ingerido también alimentos. Los principales signos y síntomas son:

a) Perdida de agudeza visual con adema de papila. Además puede aparecer nistagmus (movimiento involuntario de los ojos. Usualmente es de lado a lado pero sa veces es de arriba abajo o en forma circular: es un movimiento rotatorio incontrolable) y alteración de los reflejos pupilares. Asimismo, puede desarrollarse pérdida de visión y ceguera irreversible por atrofia del nervio óptico.

b) Taquipnea medida por acidosis y parada respiratorio súbitac) Síntomas digestivos como dolor abdominal, anorexia, náuseas y vómitos, acompañados

a veces, de aumento de transaminasas y enzimas pancreáticos

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d) Síntomas neurológicos que van desde la confusión hasta el coma profundo, convulsiones, cefalea vértigo, infarto de ganglios basales, etc.

e) Alteraciones hemodinámicas como bradiarritmias, hipotensión y depresión miocárdica.f) La acidosis metabólica es un hallazgo constante en todos los casos graves, y se debe

principalmente al ácido fórmico. También esta aumentado el anión gap.

DiagnósticoEl diagnostico puede hacerse por la historia clínica a través del paciente o de los acompañantes. Sin una historia clínica de ingestión de metanol, el diagnóstico diferencial es amplio, e incluye cetoacidosis diabética, pancreatitis, nefrolitiasis, meningitis, hemorragia subaracnoidea, etc.

En estos pacientes, está indicado realizar al ingreso analítica de sangre y orina de rutina. Además es importante obtener una gasometría arterial para determinar acidosis metabólica. El diagnostico de certeza nos lo dará el nivel de metanol en sangre.

Tratamiento

El tratamiento inicial de la intoxicación aguda por metanol es de soporte. Es prioritario asegurar la vía aérea y mantener una ventilación y circulación adecuadas. La recuperación del paciente parece estar directamente relacionada con el intervalo de tiempo transcurrido entre la ingestión del toxico y el inicio del tratamiento. También depende del grado de acidosis, que a su vez, es también en parte, función del tiempo.

Para prevenir la absorción se hará gástrico, a ser posible en las dos primeras horas o en las 4 primeras horas si la ingesta se acompaño de alimentos. El carbón activado y los catárticos son ineficaces. Puede realizarse infusión de etanol para bloquear la metabolización hepática del metanol por inhibición competitiva del alcohol deshidrogenasa, y forzar la eliminación del toxico por rutas extra hepáticas. Para conseguir los niveles plasmáticos óptimos de etanol (entre 1 y 2g/l), se administra un bolo i.v. de 1.1 ml/kg disuelto en 100ml de suero glucosado al 5% pasar en 15 minutos; a continuación 0.1ml/kg/h disueltos cada vez en 100ml de suero glucosado al 5% se si trata de un alcohólico crónico, la dosis de mantenimiento es de 0.2 ml/kg/h. La perfusión de etanol deben hacerse por vía central para evitar tromboflebitis. Deben controlarse periódicamente los niveles de etanol y ajustar la dosis de perfusión.

Es necesario el aporte de volumen por la deshidratación y la inhibición de la hormono antidiurética, que se realiza con suero salino. Se administrara bicarbonato para corregir la acidosis. Se debe administrar ácido fólico, que aumenta la oxidación del ácido fórmico a dióxido de carbono y agua.

La diuresis forzada no es eficaz, pero con la hemodiálisis se consigue depurar tanto el metanol como el ácido fórmico y el formaldehido. Los criterios para indicar la diálisis serian cualquiera de los siguientes: metanol >0.5 g/l, acidosis metabólica con pH< 7.20 trastornos visuales o disminución del nivel de consciencia. Si se indica diálisis debe mantenerse durante varias horas, y no interrumpirse hasta que el metanol sea <0.2g/l. Para controlar las convulsiones se utiliza diazepan y fenitoína.

Reacciones de reconocimiento

Reconocimiento en medios biológicos

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Las reacciones particulares para reconocer al metanol como tal, prácticamente no existen, por lo que es necesario transformarlo en el respectivo aldehído con tal propósito. Esto se consigue mediante un sencillo método que consiste calentar al rojo una lámina de cobre (exenta de grasa y otras impurezas) e introducirla en el destilado, repitiéndose la operación hasta cuando la lámina comienza a desprender pequeñas partículas color gris en el destilado, lo cual nos indica que hemos conseguido el propósito de trasformar el metanol en metanal.

En consecuencia, las reacciones que se practican son las mismas que se realizan para el reconocimiento del formaldehido, así:

1. Reacción de Shiff: Se produce color violeta.2. Reacción de Rimini: Origina color azul intenso3. Con la fenil hidracina: Da color rojo grosella4. Reacción de Marquis: Se obtiene un color violeta5. Con el ácido cromotrópico: Da color rojo6. Reacción de Hehner: Se produce color violeta o rojo violeta.

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