Diagnóstico LaboratorialDiagnóstico Laboratorial

VIH - SIDAVIH - SIDA

Blgo. Hernan Daniel Cornejo PacherresBlgo. Hernan Daniel Cornejo Pacherres

Laboratorio Laboratorio Referencial Regional de VIH Referencial Regional de VIH

Dirección de Dirección de Laboratorios de Salud PúblicaLaboratorios de Salud Pública

Direccion Regional de Salud - CajamarcaDireccion Regional de Salud - Cajamarca

RNA

TranscriptasareversaProtesa

Integrasa

gp 40

gp 120

BicapaLipidica

p 17

p 24

p 9

CARGA VIRAL DE VIHCARGA VIRAL DE VIH

RECUENTO DE CD4 / CD8RECUENTO DE CD4 / CD8

PRUEBA DE MONITOREO DE PRUEBA DE MONITOREO DE PACIENTES VIH POSITIVOSPACIENTES VIH POSITIVOS

CARGA VIRAL CARGA VIRAL

DE VIH-1DE VIH-1

Carga Viral VIH-DefinicionesCarga Viral VIH-Definiciones

Cuantificación de copias de RNA viral/ml en el Cuantificación de copias de RNA viral/ml en el plasma de personas infectadas por VIH plasma de personas infectadas por VIH

Cuantificación de virus circulante que se Cuantificación de virus circulante que se encuentra en el plasmaencuentra en el plasma

Número de partículas de VIH libres en el plasma Número de partículas de VIH libres en el plasma de los pacientesde los pacientes

CARGA VIRAL VIH = VIREMIACARGA VIRAL VIH = VIREMIA

UTILIDAD Predecir la progresión clínica de la infección VIH-SIDA. Indicar al médico tratante el momento óptimo para iniciar el tratamiento antirretroviral. Monitorizar el tratamiento con antirretrovirales:

•Tratamiento eficaz (reducción a niveles indetectables)• Fracaso terapeutico (resistencia,adherencia)

Estimar el riesgo de transmisión ,especialmente materno-fetal

PRUEBAS RNA DISPONIBLES

Reacción en Cadena de la Polimerasa ( PCR Polimerasa Chain Reaction.) DNA Ramificado (bDNA, branched Chain DNA assay Amplificación basado en ácidos nucleicos ( NASBA, nucleic acid sequence-based amplification).

Reportado como “número de copias” o copias /ml

RECOMENDACIONESRECOMENDACIONES

Se debe escoger sólo un método de ensayo para Se debe escoger sólo un método de ensayo para carga viral de VIH-1 y debe ser utilizado carga viral de VIH-1 y debe ser utilizado consistentemente en un sólo individuoconsistentemente en un sólo individuo

Ensayos deben realizarse despuès de un mes de Ensayos deben realizarse despuès de un mes de vacunados o de un proceso infeccioso agudo vacunados o de un proceso infeccioso agudo (vacunas contra la gripe, hepatitis provocan (vacunas contra la gripe, hepatitis provocan aumento de carga viral)aumento de carga viral)

OBTENCION DE MUESTRAS Y ESTABILIDAD

Obtención de Sangre en tubos con EDTA o Citrato

Tubos con heparina no son aceptables

Preferiblemente se usan tubos con EDTA

La sangre se diluye un 15% en tubos de citrato

Estabilidad del RNA en la sangre es mejor en EDTA que en Citrato

Separa el plasma antes de 3-6 horas desde la centrifugación

Almacenar y enviar el plasma congelado a 2-8C

HIV RNA es estable en plasma a 2-8C durante 5 dias

HIV RNA es estable en plasma durante 3 ciclos de congelación y descongelación

OBTENCION DE MUESTRAS Y ESTABILIDAD

AMPLICOR HIV MONITOR PREPARACION

•200uL Plasma•Estándar Interno de Cuantificación de RNA

AMPLIFICACION•Simple Transcripción reversa y PCR

DETECCION•Formato similar a los ELISA•Resultado colorimétrico

RESULTADOS•24 tests en 6 horas

¿Qué es Citometría de ¿Qué es Citometría de Flujo?Flujo?

Medición simultánea de múltiples Medición simultánea de múltiples características físicas y químicas de características físicas y químicas de células en suspensión.células en suspensión.

Las mediciones son hechas sobre el Las mediciones son hechas sobre el principio célula-por-célula en un principio célula-por-célula en un promedio rutinario de 500 a 4000 promedio rutinario de 500 a 4000 células por segundo.células por segundo.

¿Qué puede decirnos un ¿Qué puede decirnos un Citómetro de Flujo acerca Citómetro de Flujo acerca

de una célula?de una célula? Su tamaño relativo (Forward Scatter—Su tamaño relativo (Forward Scatter—

FSC)FSC)

Su granularidad relativa o complejidad Su granularidad relativa o complejidad interna (Side Scatter—SSC)interna (Side Scatter—SSC)

Su Intensidad fluorescente relativa Su Intensidad fluorescente relativa (FL1, FL2, FL3, FL4, and FL5)(FL1, FL2, FL3, FL4, and FL5)

FACSCountFACSCountPrincipios del ProcedimientoPrincipios del Procedimiento

Muestra: Sangre Completa no lisadaMuestra: Sangre Completa no lisada Método: IF Directa a 02 colores.Método: IF Directa a 02 colores. El instrumento detecta: dos colores y el tamaño celular.El instrumento detecta: dos colores y el tamaño celular. CD3 fluorescencia roja, CD4/CD8 fluorescencia CD3 fluorescencia roja, CD4/CD8 fluorescencia

amarilla.amarilla. Reactivo o facspet contiene Acs. que ligan al Ag. Reactivo o facspet contiene Acs. que ligan al Ag.

linfocitario respectivo.linfocitario respectivo.

FACSCountFACSCountPrincipios del ProcedimientoPrincipios del Procedimiento

ReactivosReactivos: además de los Acs. Específicos poseen un : además de los Acs. Específicos poseen un

número conocido de Beads o perlas de referencia que número conocido de Beads o perlas de referencia que

funcionan como standard de fluorescencia y funcionan como standard de fluorescencia y

cuantificación para calcular recuentos absolutos de CD4, cuantificación para calcular recuentos absolutos de CD4,

CD8 y CD3.CD8 y CD3.

FijaciónFijación: Realizada antes del análisis para preservar la : Realizada antes del análisis para preservar la

integridad de la unión de Acs.integridad de la unión de Acs.