ASPECTOS INMUNOLÓGICOS EN EL

DIAGNOSTICO Y CONTROL DE LA

EPIDEMITIS CONTAGIOSA DEL CARNERO

POR B.OVIS

FAUSTO BLADIMIR PANTOJA

tatosfbpe@gmail.com

B. ovis es un cocobacilo encapsulado, carece de pilis y

flagelos, es Gram negativo.

Crece en medios sólidos como el Agar tripticasa soya o agar

Columbia, con suero equino,bovino,u ovino al 10% y en una

atm con 5-10% de CO2

Para aislar muestras a partir de semen, de mucus o de

necropsias se util izan medios de cultivo sólidos selectivos

como el Thayer Martin o el Agar Skirrow que permiten el

crecimiento de B.ovis inhibiendo la presencia de otros M.O

de la flora normal de vagina y prepucio.

MORFOLOGIA Y CARACTERISTICAS

CULTURALES

Las colonias visibles después de una incubación de 3 -5 días,

se aprecian pequeñas, circulares, opacas, granulares y con

tonalidades de blanco a marrón

Puede observarse la morfología rugosa de B ovis por trans-

iluminación oblicua amarillas,aspecto seco, opaco y

granular

confirmación acriflavina

. Colorante que aglutina las colonias

Otras pruebas que permiten identificar y/o aglutinar las

colonias de B ovis: tinción de colonias con el cristal violeta

ESTRUCTURA ANTIGENICA

la estructura de la Envoltura celular de las bacterias gram negativas presenta:

1.-Membrana plasmática interna

2.- Espacio periplasmico: (P, PG)

3.- ME

Estas envolturas se dist inguen por ser más resistentes a la acción de detergentes, proteólisis de enzimas y digestión de l isozima

ESTRUCTURA ANTIGÉNICA

MI: proteínas de membrana

interna

E. periplasmico:P. solubles y

peptidoglucano.(PG)

ME:LPS- rugoso y proteínas

de ME (epitopos)

LPS: complejo-

lipido A, (restos)

Nucleo o core ( sacaridos de

glucosa, galactosa , manosa)

ANTIGENOS

ESTRUCTURA LIPOPOLISCARIDO (LPS)

ME:

PME mayores: 36-38 KDa--- o--

porinas—LPS

PME: 25-27 KDa y 31-34 KDa--- PG

proteina de 25-27 KDa ..

Conformación diferente se

distingue de otras Brucellas.

Las PME varian en las distintas

especies, en B.ovis, las de 25-27

KDa y 31-34 KDa son

predominantes…en vesículas

l iberadas

PME menores : 10 KDa,16.5

KDa 19 KDa 89 KDa 89-94 KDa

Lipoproteina: 8 Kda---

determinantes antigenicos

comunes con la lpoproteina de

Braun.. E. coli .

Espacio periplasmico….P 26

KDa caracterizada

En citoplasma: P 18 KDa

especifica del genero Brucella.

Pruebas serológicas

Western blot… identificar antígenos individuales y su

inmunodominancia.

Estudios (infección experimental y natural):

Respuesta humoral LPS y PME (25 -27 y 31-34 KDa)

Epidídimo- orquitis… rta mas intensa a mas proteínas (+

estimulación Ag)

RESPUESTA INMUNITARIA HUMORAL Y

CELULAR

OTROS ESTUDIOS

5 Ag IMD (fases aguda y

crónica)…LPS,PME -17,19 y 29 KDa

proteína de estrés térmico (63 KDa).

Estudios Posteriores:

suero de carnero infectado…western

blot:

Ag contra PME,y P periplasmicas y

citoplasmáticas

Raton ( rex inmune a B. ovis )

Inyeccion Ac anti PMEs Y LPS previa… usado como protección

PME menores y 34 KDa blancos inmunidad Humoral

…opsonizacion… muerte intracelular de B.ovis .. Ac

muerte extracelular= cel. NK

B ovis es un Parasito Intracelular facultativo

Capaz de sobrevir y multiplicarse en el interior de los

macrófagos

Transferencia de suero, mejor que transferencia de células

sensibilizadas

Suero anti B. abortus confirió mayor protección que células

inmunes para B. ovis

Inmunidad humoral brinda mas protección que la celular

El diagnostico: examen clínico y su

confirmación mediante el aislamiento de

B.ovis en el semen y/o resultados + en

pruebas serológicas

Se debe tener en cuenta la situación

epidemiológica, datos reproductivos

(vacunaciones, antecedentes)

DIAGNOSTICO

Palpación del contenido escrotal

Se examina muestras de semen en m. óptico

(animalidades morfológicas y de motilidad)

Coloración de Giemsa: presencia de células

inflamatorias

Si Hay M.O sospechosos….muestra se incuba

a una Atm 5-10% Co2 y se examina durante

10 días

examen clínico

Fijación del complemento combinado con la

palpación escrotal… ideal en Australia y

Nueva Zelanda

Tº (1-4ºC)….rx positivas en etapas tempranas

pero la prueba es poco especifica a

diferencia de la aplicad a 37ºC

muy compleja….reactivos…. Prozona

Menos sensible y especifica que la ELISA

ELISA , inmunodifusion en gel y fijación de

complemento utilizan como ag al extracto HS

obtenido a partir de la cepa B. ovis REO 198…

fácil obtención y es rico en Ag in.domiantes

Rx cruzada con B melitensis (áreas o animales

vacunados)

INMUNODIFUSION EN GEL…referencia en

América del sur, es sencilla, de bajo costo,

fácil de interpretar

ELIS…mas sensibilidad y especificidad que

las anteriores, procesa muestras de manera

simultanea.

Las mejores resultados se han obtenido por

combinación de inmunodifusion en gel y

ELISA.. Sensibilidad del 100%.

Otra alternativa: prueba alérgica

Usa como alérgeno a la brucelina del INRA

Detectar infección en un rebaño

Vigilancia epidemiológica, de rutina

Interferida por la infección con otras

especies de Brucella