Presentacin de PowerPoint

IFAT

(inmunofluorescencia directa e indirecta) Universidad de la Salle ColombiaFacultad de ciencias agropecuariasMedicina VeterinariaBogot-Colombia

Luis G. PerezYeili lvarez NioAndrs Ricardo Avellaneda

CONCEPTOS CLAVES

ANTGENO (Ag): Un antgeno es aquella sustancia que siendo reconocida como extraa por el sistema inmune, es capaz de inducir en este una respuesta especfica encaminada a su neutralizacin.ANTICUERPO (Ac):Sustancia segregada por los linfocitos de la sangre para combatir una infeccin de virus o bacterias que afecta al organismo.

QU ES ?La inmunofluorescencia es una tcnica utilizada para visualizar la distribucin de una protena o antgeno especfico en clulas o secciones de tejido utilizando la especificidad de los anticuerpos por su antgeno para dirigir marcadores fluorescentes a las biomolculas dianas de forma especfica.

Tomado de http://goo.gl/YCMIkKEs una tcnica de inmunoensayo en la cual un antgeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como cambio de color o algn otro tipo; en ocasiones, con el fin de reducir los costos del ensayo, nos encontramos con que existe un anticuerpo primario que reconoce al antgeno y que a su vez es reconocido por un anticuerpo secundario que lleva enlazado la enzima anteriormente mencionada.

3TIPOS DE INMUNOFLUORESCENCIAINMUNOFLUERESCENCIA DIRECTA:el marcaje directo en el que el anticuerpo primario est marcado con un marcador fluorescente.

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA:el marcaje indirecto en el que un anticuerpo secundario marcado con un fluorocromo se utiliza para reconocer un anticuerpo primario.

NOTA: Las muestras marcadas inmunofluorescentemente se examinan bajo un microscopio de fluorescencia o un microscopio confocal.INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTAUsa una unin covalente entre fluorforo con el anticuerpo primario.Requiere de una etapa de incubacin con el antgeno y una sola etapa de lavado.PROCEDIMIENTOEl marcador fluorescente produce una sustancia colorada que identifica si el antgeno est presente. (En caso de no estar presente el antgeno, la fluorescencia no identificara nada.).INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA

Tomado de http://goo.gl/jgO6TOINMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTASe divide en dos etapas:El anticuerpo primario no marcado, se une con el antgeno diana. El anticuerpo secundario, lleva el fluorforo, identifica al anticuerpo primario y se une a l. Nota: varios anticuerpos se pueden unir al anticuerpo primario y la seal aumentara. INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA

Tomado de http://goo.gl/jgO6TOTomado de http://goo.gl/jgO6TO

APLICACIONES CLNICAS:La prueba IFAT, ayuda a reconocer el diagnstico de sfilis por medio de la bacteria Treponema pallidum. La prueba de IFAT se puede utilizar en: Renibacterium Salmonirarum.Vibrio OrdaliiEhrlichia Canis

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Introduccin. El diagnstico de la leptospirosis es difcil debido al amplio espectro de sntomas clnicos que presenta. Varias pruebas diagnsticas serolgicas se han desarrollado, pero su aplicacin y utilidad en Colombia no han sido determinadas. Objetivos. Evaluar la prueba de inmunofluorescencia indirecta para el diagnstico de leptospirosis humana y determinar as los anticuerpos de las clases inmunoglobulina G y M producidos contra Leptospira. Materiales y mtodos. Se establecieron tres grupos de estudio. El primero incluy 19 muestras positivas para leptospirosis de pacientes con diagnstico clnico y prueba de microaglutinacin positiva; el segundo, 40 muestras de personas sin antecedentes de leptospirosis y con microaglutinacin negativa, y el tercero con 96 muestras de pacientes con otras enfermedades diferentes a leptospirosis. Todas las muestras fueron procesadas por inmunofluorescencia indirecta. Resultados. Se determin que la inmunofluorescencia indirecta tiene sensibilidad de 89,47%, especificidad de 100%, valor predictivo negativo de 95,2% (IC95%82,6 a 99,2) y valor predictivo positivo de 100%. En forma paralela, un estudio exploratorio en 27 muestras de suero que haban sido remitidas para diagnstico de diferentes sndromes febriles encontr que 11% de ellas fueron positivas por inmunofluorescencia indirecta para anticuerpos IgM contra Leptospira. Conclusiones. La inmunofluorescencia indirecta es una alternativa que complementa el diagnstico de leptospirosis y los estudios seroepidemiolgicos. La presencia de anticuerpos dirigidos contra Leptospira en las muestras de sndrome febril del estudio indica que la leptospirosis es una de las causas de este sndrome que el clnico debe explorar.BIBLIOGRAFA. Kassirer JP. Our stubborn quest for diagnostic certainty. A cause of excesive testing. N Engl J Med 1989; 320: 1489-91.http://encontroiberico.no.sapo.pt/docs/Serologia_UHofle.pdfhttp://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/12/tema-14.pdfEguiarte L. et all., Ecologa Molecular. Mxico 2007; cap. 17: 517-40Merchant. I.A. & Packer, R. (1980). Bacteriologa y Virologa Veterinarias. Zaragoza : Acribia.Anaya, Elizabeth, Morn, Cecilia, Arias, Patricia, Chauca, Johann, Romn, Ral. EVALUACIN DE PRUEBAS DE ELISA E INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA PARA LA DETECCIN DE ANTICUERPOS IgM CONTRA RICKETTSIOSISRevista Peruana de Medicina Experimental y Salud Pblica [en linea] 2008, 25 (Sin mes) : [Fecha de consulta: 19 de noviembre de 2014] Disponible en: ISSN 1726-4642.

AGUDELO-FLOREZ, Piedad; RESTREPO, Marcos y LOTERO, Mara Amparo. Evaluacin de la prueba de inmunofluorescencia indirecta para el diagnstico de leptospirosis humana. Biomdica [online]. 2006, vol.26, n.2, pp. 216-223. ISSN 0120-4157.