CICLO CELULAR. CROMOSSOMOS COMPACTAÇÃO DA CROMATINA

CICLO CELULARCICLO CELULAR

CROMOSSOMOSCROMOSSOMOS

COMPACTAÇÃO DA CROMATINACOMPACTAÇÃO DA CROMATINA

NÍVEIS DE COMPACTAÇÃO DA NÍVEIS DE COMPACTAÇÃO DA CROMATINACROMATINA

1ª: NUCLEOSSOMA - octâmero de histonas H2A, H2B, H3 e H4. H1. Redução no tamanho DNA entre 6 a 7 vezes.

2ª: SOLENÓIDE- 6 nucleossomos. 3ª :ALÇAS - solenóide- alças unidas - proteínas

não-histônicas (cromômeros). 4ª CROMOSSOMOS- enrolamento final.

1º NÍVEL: NUCLEOSSOMO1º NÍVEL: NUCLEOSSOMO

SOLENÓIDE

SOLENÓIDE

COMPRIMENTO DO CROMOSSOMO 1COMPRIMENTO DO CROMOSSOMO 1

DNADNA 15cm15cm NUCLEOSSOMANUCLEOSSOMA 1,5cm (1:10)~ 200pb1,5cm (1:10)~ 200pb SOLENÓIDESOLENÓIDE 0,3cm (1:50)~1200pb0,3cm (1:50)~1200pb

10a 100kb10a 100kb PRÓFASEPRÓFASE 5050m (1:3000)m (1:3000) METÁFASEMETÁFASE 1515m (1:10000)m (1:10000) BANDABANDA 10 a 20 milhões pb10 a 20 milhões pb

PRINCIPAIS CONSTITUINTES PRINCIPAIS CONSTITUINTES CROMOSSÔMICOSCROMOSSÔMICOS

Elementos Fundamentais de um Cromossomo:

Origens de Replicação;Origens de Replicação;

Um centrômero;Um centrômero;

Telômeros;Telômeros;

ORIGENS DE REPLICAÇÃO DO ORIGENS DE REPLICAÇÃO DO DNADNA

Cada cromossomos é replicado pelo início simultâneo da replicação em regiões múltiplas dentro do cromossomo Réplicons.

O processo replicação é controlado cada cromossomo será replicado totalmente apenas uma vez na fase S

CENTRÔMEROSCENTRÔMEROS

Constrição Primária seqüências DNA repetitivas + proteínas ( CENP-B).

Cópias seqüências múltiplas com 171 pb = DNA alfa.

Classificação da forma cromossomo. Sítio de ligação das cromátides irmãs.

CENTRÔMEROCENTRÔMERO

CENTRÔMEROCENTRÔMERO Formação cinetócoro= complexo DNA+

proteínas, durante a prófase.

Cinetócoro- interação complexa;

- microtúbulos;

CENTRÔMEROCENTRÔMERO

CLASSIFICAÇÃO CROMOSSÔMICACLASSIFICAÇÃO CROMOSSÔMICA

TELÔMEROSTELÔMEROS

Telômeros extremidades cromossômicas; DNA + proteínas, seqüências repetidas (TTAGGG)n

Função : Integridade cromossômica; estabilidade; evitam a degradação dos cromossomos (nucleases); replicação correta dos telômeros (telomerase).

Telomerase presente células embrionárias e germinativas; células somáticas parecem ter telomerase inativa morte celular por encurtamento telômero antes de ocorrer alteração cromossômica.

Redução : associação ponta a ponta; quebras ; translocações.

Telomerase ativa célula somática poderá indicar condição neoplásica.

SATÉLITESSATÉLITES

Cromossomos Acrocêntricos: 13, 14, 15, 21 e 22.

Ligado ao braço curto: Constrição secundária.

Sítio formação ribossomo (genes RNAr)

Regiões organizadoras nucleolares (RON/NOR)

TIPOS DE CROMATINATIPOS DE CROMATINA

EucromatinaEucromatina : ativa, menos : ativa, menos condensada, replica cedo na fase S.condensada, replica cedo na fase S.

HeterocromatinaHeterocromatina : seqüências : seqüências repetidas, mais condensada, replica repetidas, mais condensada, replica tarde na fase S.tarde na fase S.

H. ConstitutivaH. Constitutiva : sempre inativa : sempre inativa (pericentromérica e braço longo do (pericentromérica e braço longo do cromossomo Y ).cromossomo Y ).

H. FacultativaH. Facultativa : inativa e ativa : inativa e ativa (cromossomo X)(cromossomo X)

CULTURA CELULARCULTURA CELULAR

MEIO DE CULTURA: RPMI 1640, TC 199, HAM F10, dependerá do tipo celular a ser cultivado.

SORO FETAL: Bovino ou humano. Presença de fatores de crescimento celular.

AGENTE MITOGÊNICO: Fito-hemaglutinina, etc ... se for necessário..

AGENTE BLOQUEADOR DA DIVISÃO CELULAR: Inibidores do fuso: Colchicina; vinblastina.

SOLUÇÂO HIPOTÔNICA: Tumefação das células; Solução salina ( KCl; Citrato de sódio; etc...)

Cariótipo - TécnicaCariótipo - Técnica

Sangue perférico (linfócitos); Meio de cultura ( RPMI/199 ,soro, fito-

hemaglutinina) Incubar à 37ª C por 72 horas; Adicionar colchicina; e a solução hipotônica; Fixar o material; Distribuir em lâminas; bandas;

coloração(GIEMSA); Observar em MO; Selecionar, fotografar e montar o

cariótipo; Resultado.

ESQUEMA DO CARIÓTIPO EM SANGUE PERIFÉRICO

METÁFASE HUMANAMETÁFASE HUMANA

BANDAS GBANDAS G

cromossomos submetidos à ação de uma enzima - tripsina que desnatura as proteínas cromossômicas;

coloração posterior com corante de Giemsa;

as bandas G escuras são regiões ricas em AT.

cada cromossomo com padrão típica de regiões claras e escuras.

NOMENCLATURA

NOMENCLATURA DO CARIÓTIPO HUMANO – PADRÃO BG

BANDAS GBANDAS G

CARIÓTIPO FEMININOCARIÓTIPO FEMININO

BANDAS QBANDAS Q

cromossomos corados com corantes fluorescentes (quinacrina-mostarda; DAPI...);

regiões cromossômicas ricas em AT; cromossomos com padrão de bandas

brilhantes e opacas; análise feita em microscópio de

fluorescência (UV); diferenciação longitudinal dos

cromossomos.

BANDAS QBANDAS Q

BANDAS RBANDAS R

cromossomos são desnaturados com o uso de solução salina e calor;

coloração posterior com corante de Giemsa;

cada cromossomo com padrão típica de regiões claras e escuras;

as bandas R escuras são regiões ricas em GC;

padrão inverso das bandas Q e G; diferenciação longitudinal dos

cromossomos.

BANDAS RBANDAS R

COMPOSIÇÃO DAS BANDAS COMPOSIÇÃO DAS BANDAS CROMOSSÔMICASCROMOSSÔMICAS

Padrão de banda BANDAS G/ Q

BANDAS R

Propriedades

Contém DNA rico em AT

(55-60%);Replicação tardia na fase SContém poucos genes;

DNA rico em GC (50-60%)Replicação precoce na fase SContém a maioria dos genes

BANDAS DE ALTA BANDAS DE ALTA RESOLUÇÃORESOLUÇÃO

cromossomos no estágio de pró-metáfase, menos condensados;

técnica de bandas G, Q ou Rcoloração posterior com corante de Giemsa;

maior número de bandas;detecção de alterações cromossômicas estruturais menores.

SÍTIOS FRÁGEISSÍTIOS FRÁGEIS

zonas de instabilidade cromossômicas;

cultura especial com meio pobre em timidina e ácido fólico ou um inibidor da timidina sintetase (metatrexate ou fluordesoxiuridina);

coloração com uso de Giemsa; sítios frágeis visualizados como

falhas ou quebras cromossômicas; regiões susceptíveis a quebras

cromossômicas;

SÍTIO FRÁGIL

BANDAS CBANDAS C

cromossomos submetidos a ação de uma solução de hidróxido de bário;

coloração posterior com corante de Giemsa;

desnaturação da eucromatina e heterocromatina facultativa;

marcação da heterocromatina constitutiva;

regiões centroméricas dos cromossomos e outras regiões que contenham heterocromatina constitutiva (braço longo do Y).

BANDA C

Nomenclatura de Nomenclatura de BandasBandas

HIBRIDIZAÇÃOHIBRIDIZAÇÃO IN SITU IN SITU COM COM FLUORESCÊNCIA (FISH) FLUORESCÊNCIA (FISH) O FISH é a técnica na qual um segmento de O FISH é a técnica na qual um segmento de

DNA cromossômico específico (DNA cromossômico específico (sonda)sonda) é é hibridizado com cromossomos metafásicos, hibridizado com cromossomos metafásicos, profásicos ou interfásicos, e então profásicos ou interfásicos, e então observado com microscopia de observado com microscopia de fluorescência.fluorescência.

Sonda locus específicaSonda locus específica Sonda centroméricaSonda centromérica Sonda para marcar todo o cromossomoSonda para marcar todo o cromossomo

FISH FISH

FISH EM CÉLULA NEOPLÁSICA