LP_6-Rom

Explorarea în laborator a

metabolismului proteic

Clasele de proteine plasmatice

Plasma -amestec

coloidal,

Clasele de proteine

plasmatice:

albuminele şi

globulinele,

indexul de disproteinemie:

raportul de concentraţie

A/G = 0,8 - 1,2.

Proteinemia

concentraţia proteinelor totale din plasmă

Metode:

În ser sau plasmă:

Metodă fotometrică: reacţia biuretului: în mediu alcalin legăturile

peptidice reacţionează cu ionii de Cu(II) cu formarea unui compus

colorat în mov, a cărei întensitate se determină la 546 nm;

metoda Kjeldahl: se bazează pe determinarea conţinutului în azot;

În urină sau LCR:

Metoda Coomassie: utilizarea colorantului Coomassie Brillant Blue

(prag de detecţie: 100-1000 ng proteine)

pyrogallol red ( prag de detecţie: 1μg proteină/ml);

Material biologic : ser, plasmă (heparinată), urină, LCR,

lichide de puncţie;

Proba Rivalta: diferenţiere exsudat vs. Transudat

Proteinemia

Valori normale:

ser sau plasmă:

60 - 80 g/l (adult)

45-75 g/l (nou-născuţi şi sugari)

urină: < 150 mg/zi;

LCR: 0,15- 0,45 g/l

Lichid pleural:

<30 g/l: transudat (origine cardiaca)

>30 g/l: exsudat (pneumonie sau proces malign)

Proteinemia

disproteinemie – modificarea calitativă/cantitativă a

conţinutului în proteine a plasmei;

Valori scăzute (hipoproteinemie):

insuficienţă hepatică, sindrom nefrotic, arsuri, enteropatii,

malnutriţie / malabsorbţie, insuficienţă panceatică;

pseudohipoproteimemie: prin diluţie (recoltare de pe branulă)

Valori crescute (hiperproteinemie):

hiperproteinemii absolute: hipeimunoglobulinemie: cronice, gamopatii

monoclonale;

hiperproteinemii relative: hemoconcentraţie, diabet insipid, diaree.

Albumine

Dozare ser: metode fotometrice (verde de bromcrezol), procentaj relativ din

proteinogramă sau cantitate absolută calculată din valoarea proteinemiei, imunodifuziune radială, nefelometrie imună, imunturbidimetrie;

Dozare urină şi LCR: nefelometrie, turbidimetrie;

Valori normale: ser: 55-65% din totalul proteinelor plasmatice; 0,46 – 0,81 mM/l, 34 - 48

g/l.

Urină: sub 20 mg/l;

LCR: 110-350 mg/l;

Valori scăzute: insuficienţă hepatică, sindrom nefrotic, arsuri, inflamaţii acute şi cronice, enteropatii, tumori maligne.

Probe biologice: ser, urină, LCR;

Microalbuminuria

Apare în anumite stări patologice: DZ, obezitate, hiperlipidemie, hipertensiune arterială, rezistenţă la insulină, consum de alcool.

Valoare normală: prima urină de dimineaţă < 20 mg/l

urină pe 24 ore: <30 mg/zi;

Creşteri uşoare ale microalbuminuriei caracterizează faza reversibilă a nefropatiei diabetice, care răspunde favorabil la terapie.

Metode de dozare: imunoturbidimetrie, inmunonefelometrie.

Microalbuminuria

Valoare normală: prima urină de dimineaţă

< 20 mg/l

urină pe 24 ore: <30 mg/zi;

Creşteri uşoare ale microalbuminuriei caracterizează faza reversibilă a nefropatiei diabetice, care răspunde favorabil la terapie.

Metode de dozare: imunoturbidimetrie, imunonefelometrie.

Albuminuria diabetică

Stadiul Interval Albuminuria

I. Hipertrofie şi

hiperfuncţie

Începutul DZ < 30 mg/zi

II. Modificări

histologice fără

manifestări clinice

2-5 ani <30 mg/zi

III. Nefropatie

incipientă

5-15 ani 30- 300 mg/zi

IV. Nefropatie

manifestă

10-25 ani >300 mg/zi

V. Insuficienţă renală

15-30 ani >300 mg/zi

Proteinuria Bence-Jones

lanţurile uşoare de tip lambda sau kappa

apare în plasmocitoame, macroglobulinemia

Waldenström.

Metode de evidenţiere:

imunofixare (prag de sensibilitate: 20-30 mg/l) sau

electroforeza urinară (prag de sensibilitate: aprox.

100 mg/l).

Electroforeza proteinelor

metodă analitică de

separare a particulelor

sau ansamblurilor de

particule încărcate

electric, sub acţiunea

unui câmp electric extern

o particulă încărcată

electric se va deplasa cu

o viteză constantă

determinată de acţiunea

următoarelor forţe:

Electroforeza proteinelor

viteza electroforetică:

v = Q· E / 6 π· η· r

mobilitatea

electroforetică μ :

μ= v / E,

μ = Q / 6π · η ·r

particulele pentru

care raportul Q/r este identic vor avea

mobilităţi

electroforetice

identice

Electroforeza proteinelor

Mediu de migrare: agaroză,

pH: 8.6 (tampon TRIS

barbital),

Colorant: amido black

Electroforeza proteinelor

Se aplică 5 µl de ser pe gelul de agaroză

Se aşteaptă 10 min. (penetrarea serului în gel)

Se introduce gelul înaparatul de electroforeză

Se aplică tamponul TRIS barbital

Se alege programul de migrare

După migrare şi uscare se transferă gelul în unitatea de colorare

Electroforeza proteinelor

După colorare se

interpretează

Inspecţie

Interpretare

densitometrică

Fracţiunile electroforetice

Clasele proteinelor serice: albumina

α1- globuline: α1- lipoproteină (HDL), α1-glicoproteina acidă, α1-antitripsină, α 1-antichimotripsină,

α2-globuline: haptoglobină, ceruloplasmină, α2-macroglobulină,

β1 şi β2 globuline: β-lipoproteine, hemopexina, factorul C3, transferina, PCR, fibrinogen.

fracţiunea γ-globulinelor: IgM, IgA şi IgG.

Proteinograma

Valori normale (procentual

calculate din densitograme):

albumină 45-60%

α1-globuline: 2.5-7.0 %

α2-globuline: 7.0-14.0 %

β-globuline: 9.0-17.0 %

γ-globuline: 16.0-24.8%

Trasee electroforetice

Ciroză hepatică cu pod

beta-gamma

Ciroză hepatică cu ascită;

Proteine totale: 71 g/l

Albumină: 49 g/l

Hipoalbuminemie;

Pod beta-gamma;

Trasee electroforetice

Sindrom nefrotic Proteinurie 9,5g/24 ore;

Proteine totale: 35 g/l;

Albumină: 18 g/l;

↓ albuminemie;

↑ Alfa1- globulinemie;

↑ alfa2-globulinemie;

↑ beta-globulinemie;

Trasee electroforetice

Sindrom inflamator

cronic /acutizat(sindrom

Crohn)

Proteine totale: 61 g/l;

Albumină: 26 g/l;

↓ albuminemie;

↑alfa1- şi alfa2 globuline;

↑ gammaglobulinemie

policlonală;

Trasee electrofretice

Inflamaţie acută (otită

medie, mastoidită)

Băiat de 2 ani;

Proteine totale: 57 g/l;

Albumină: 36 g/l;

↓ albuminemie;

↑ alfa1- şi alfa2

globulinemie;

↓ gammaglobulinemie;

Trasee electroforetice

Anemie feriprivă

Proteine totale: 73 g/l;

Albumină: 43 g/l;

↑ beta-globulinemie

(transferina!);

Trasee electroforetice

Hipogamaglobulinemie

(leucemie mieloidă acută)

Proteine totale: 61 g/l;

Albumină: 44 g/l;

↓ albuminemie;

↑ alfa1- alfa2 globulinemie;

↑ betaglobulinemie;

↓gammaglobulinemie;

Trasee electroforetice

Hipogamaglobulinemie

(leucemie limfatică

cronică)

Proteine totale: 55 g/l;

Albumină: 49 g/l;

↓ albuminemie;

↓ gammaglobulinemie;

Trasee electroforetice

Mielom multiplu Proteine totale: 109 g/l;

Albumină: 36 g/l;

↓ albuminemie;

Gradient ”M” in gamma2;

Proteinuria: Clasificare:

proteinurii renale:

proteinurie glomerulară: trecerea în urină a proteinelor cu greutate moleculară mare;

proteinurie selectivă: apare doar albumina şi transferina;

proteinurie neselectivă: pe lângă albumină şi transferină apar proteine cu greutate moleculară mera (de ex. Imunoglobuline);

proteinurii tubulare: apariţia proteinelor cu greutate moleculară mică datorită reabsorbţiei tubulare deficitare;

forme mixte: în special în cazurile de afecţiuni renale avansate apare proteinurie glomerulară şi tubulară;

Proteinurii postrenale: infecţii şi hemoragii urogenitale;

Proteinurii prerenale: hiperproteinemii (gamopatie monoclonală);

Electroforeză proteine urinare

Indici de selectivitate a proteinuriilor:

R=UIgG/UAlb x PAlb/PIgG

PAlb sau PIgG- conc. Plasm a Alb. Sau IgG;

UAlb sau UIgG – conc. In urina a Alb. sau IgG;

Interpretare: R<0,2 indică selectivitate mare

Electroforeză urinară

Electroforeza LCR

Valori normale:

Prealbumina: 2-7%

Albumina: 56-76%

α1-globuline: 2-7%

α1-globuline: 3,5-12%

β1 şi β2 globuline: 8-18%

γ globuline: 7-12%

Electroforeza LCR