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8/15/2019 PREinforme Corregido C-3
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I .OBJETIVOS
LABORATORIO DE
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
Alumnas:
- LAZARO CAJUSOL Jenifer
- LOPEZ BENITES Anaaria
- OLIVARES CANOVer!ni"a
- SALVADOR RE#ESRe$e"a
- SOTELO %ERRERA
'CULTIVO POR
LOTE ALIENTADOAEREADO DESaccharomyces
Cerevisiae(
PRE
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). *ENERAL:
'Dise+ar , realiar una e/erien"ia &e "ul0i1! "elular /!r l!0es
en alimen0a&!2CLA34 "!n airea"i5n , alimen0a"i5n "!ns0an0e 4
em/lean&! una "e/a &e saccharomyces Cerevisiae ATCC 6)78
.
7. ESPEC9ICOS:
I&en0i;"ar las /ar0es4 a""es!ri!s , ermen0a&!r a ni1el &e la$!ra0!ri!Dise+ar , /re/arar l!s me&i!s &e "ul0i1! /ara
Saccharomyces Cerevisiae ATCC 6)78 . A"0i1a"i5n "elular , &esarr!ll! &el in!"ul!. De0erminar l!s /er;les &e masa "elular4 >uen0e &e
"ar$!n! , !=
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II. ETODOLO*9A EPERIENTAL:
). DISEO DE EDIOS DE CULTIVO
El diseño de un medio de fermentación tiene como nalidad la
ele""i5n &e l!s "!m/!nen0es ne"esari!s /ara l!!rma"i5n &e /r!&u"0!s correspondientes al
proceso a desarrollar. Con tal objeto se debe tener en cuenta todos
aquellos aspectos relacionados con el microorganismo, el proceso y
los sustratos a ser empleados como son los requerimientos
nutricionales del microorganismo y algunos especícos del proceso.
ara la formulación del diseño de culti!o se tiene en cuenta lossiguientes requerimientos nutricionales para el culti!o
Saccharomyces Cerevisiae ATCC 6)78.
Para el Dise+! &el me&i! &e "ul0i1!:
a"r!nu0rien0es : C4 N4 a0! &e am!ni!uen0e &e < .6G , S 47FG : Sul>a0! &e maa0! &iK"i&! &eP!0asi!uen0e &e P 7.G : !s>a0! &iK"i&! &e
P!0asi!
μ Max ".3# $%& en glucosa a 3'(C 2Lane4. , !rrisse,4
7)3. C!n&i"i!nes &e "ul0i1!:
Tem/era0ura : MFC |
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Vel!"i&a& &e a
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s n0e
Sa"ar!sa C ' *.&"' ".'-& 3.*"- 3.*"-2N%637SO6 ) + *&.*&* *.3'# ".+ &.*#3
%7PO6 / ".' *.-#- '#.3'3 "."3' "."'*%7PO6 * **.#+ &&.3+# ".' ".*-3
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).6 SOLUCIN DE SALES:TABLA 8: Composición de la solución de sales &"" !eces concentrado,
utili
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• Encender el mec$ero Aunsen.• 1ostener los matraces. 1i los matraces tienen un tapón de
algodón, s>calo un poco de manera que no est? muy
apretado.• 4lamear en el mec$ero Aunsen, el cual da un >rea de
desinfección de 3" cm a la redonda.• @etirar una tapa con el meñique, mientras sostienes los
matraces. )unca poner las tapas sobre la mesa.• 4lamear la boca de ambos matraces para matar cualquier
microorganismo presente en el aire y que pueda
contaminar la parte superior durante las manipulaciones.• os matraces abiertos deben mantenerse en posición
inclinada para que el riesgo de contaminación sea
mínimo.• 1embrar en el matra< est?ril el inoculo.• 8e nue!o Bamea las bocas de los matraces y t>palos de
nue!o. 9segrate de me
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PESAR
DILUIR
CALENTAR-
A*ITAR
DIVIDIR
ESTERILIZAR
EN:RIAR
RESERVAR
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B.SIEBRA EN EDIO DE ANTENCION 2SOLIDO
SOLIDO3:- a0eriales , eui/!s a u0iliar:
• 9
- El /r!"e&imien0! &e siem$ra se @a"e en l!s 0u$!s &eensa,!s /re/ara&!s "!n me&i! s5li&! 2"!n a
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- La aa&a se realia en el 0u$! &es&e a&en0r! @a"ia>uera.
- Se lle1an a la in"u$a&!ra a MF XC &uran0e 76 a 6@!ras.
C. PREPARACION DEL e&i! liui&! &e a"0i1a"i5n 2M ml3
ara la preparación de este medio líquido, pre!iamente se deben
esterili
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ESTERIZAR2/!r se/ara&!3
EN:RIAR
CALENTAR
AADIR
A*ITAR
ESTERILIZAR
EN:RIAR
RESERVAR
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D.ACTIVACION DE LA CEPA:
- a0eriales , eui/!s:• 0atra< de &""" ml.• 9lgodón Fasa• 9gua destilada• 9
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PESAR
DILUIR
ENRASAR
A*ITAR
ESTERILIZAR
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*.ERENTACION DEL LA CEPA: CL , CLA
a0eriales , eui/!s
• 0atra< de & conteniendo el medio de fermentación• Airreactor 't• pH%metro• Fasa y algodón• ;ubos de ensayo
Pr!"e&imien0!: - Es0eriliar l!s ma0eriales a u0iliar.- En el $i!rea"0!r &e F ml4 ue "!n0iene el me&i! &e;ni&!
27)ml34 a+a&ir l!s Mml &e "al&! 2me&i! [ $i!masa3/re/ara&!s /re1iamen0e.
- e"lar , 0!mar F ml /ara el anKlisis &e $i!masa , sus0ra0!ini"ial.
- Ta/ar "!n un 0a/5n &e
sus0ra0! , &ear "ul0i1an&! la "e/a /!r 6 @!ras en CLA.
|
W0u$! &e ensa,! Y
W /!r )F minu0!sY
WVarilla &e 1i&ri!Y
A
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ENRIAR
CALENTAR
A*RE*AR
A*RE*AR
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M. ONTAJE DEL EUIPO EPERIENTAL4 CULTIVO DEL .O4ETC.
A. DETERINACIN DE AZ\CARES REDUCTORES: ]TODO DELDNS 2^CIDO DINITROSALIC9LICO3
TRATAIENTO PREVIO
a sacarosa es un disac>rido que no posee carbonos anom?ricos librespor lo que carece de poder reductor. 1in embargo, en presencia de HCl yen caliente, la sacarosa se $idroliridos que la forman, glucosa yfructosa, que sí son reductores.
- a0eriales , eui/!s:
• Aarra magn?tica
• Iaso de precipitado *'" ml.
• 0atra< de aforo de &"" ml. |
)a7H
NEUTRALIZ
;ubo de ensayo
Aaño 0aría 2 ' min
&" gotas de HC ;ubo de ensayo
3 ml de
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• apel aluminio
• Aalancido 3,' dinitrosalicílico J8)1K• *"" ml2l de )a7H *)• 3"" g2l de tartrato de sodio y potasio tetra$idratado
- Pr!"e&imien0!:
ara la preparación de este reacti!o, se disuel!e el tartrato enapro=imadamente '"" ó -"" ml de agua, paralelamente sedisuel!e el >cido 8)1. 9mbas soluciones se me
F.- La "!n"en0ra"i5n se !$0iene in0er"e/0an&! la me&i&a&e a$s!r$an"ia en la "ur1a &e "ali$ra&!.
La "ur1a &e "ali$ra&! /ara el a"ar se !$0iene a /ar0ir&e mues0ras &e "!n"en0ra"i5n "!n!"i&a , analia&asse
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De0ermina"i5n &e la "in?0i"a &e "!nsum! &e la >uen0e &e
"ar$!n!.
-&S Q &0 2)Q # QS3 2&Q&03
@eemplau a&!. ˃
EDIR ` A$s!r$an"ia a 86nm , /%
COPLETAR ` Fml en el 0u$! &e "en0ri>u
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C. 8eterminación de la concentración celular por 8.7
a0eriales , eui/!s:• Espectrofotómetro.• Centrífuga.• Estufa.
Rea"0i1!s:• 0uestra del medio.• 9gua destilada.
Pr!"e&imien0!:
-9l medio que contiene la biomasa nal le $acemos diferentes
diluciones en tubos de ensayoD &D& &D* &D3 &D y &D' mas el
blanco que ser> agua.- 0edimos la absorbancia de cada dilución y de!ol!emos lo
utili
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;endremos una absorbancia y un peso Jbiomasa peso secoK paracada capac$o Jpor cada diluciónK. Con ambos se construye la cur!a
de calibrado de biomasa. En esta cur!a se reempla
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D5n&e:
μ J7*K es la !elocidad especíca de respiración y
X , es la concentración de biomasa
a aireación se reinicia en el punto A Jgura &K y la concentración
de o=ígeno disuelto aumenta $asta alcanca de la ecuación anterior, gura *, con cl en
las ordenadas y Rdcl 2dt S μ J7*K X T en las abcisas, es una línea
recta cuya pendiente es igual a J%&2k la K. a recta se construye con
los !alores de las tangentes a la cur!a AC, gura &, correspondiente
a diferentes !alores de cl .
|
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Figura
2. Representación esquemática de la determinación del
coefciente volumétrico de transerencia de o!geno" # l a"
por el método dinámico
E. 0E;7877F:9 9@9 8E;E@0:)9C:Q) 8E 7MUFE)7 8:15E;7
5n m?todo nue!o para la determinación de la tasa de respiración y
del coeciente de transferencia de o=ígeno en bioreactores.
In0r!&u""i5nara conocer la tasa de respiración de los microorganismos y
el coeciente !olum?trico de transferencia de o=ígeno, se
puede utilimico. Es un m?todo que se
realindolo a
tra!?s de tubería a una
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o=ígeno disuelto, debido a que es consumido por los
microorganismos. En condiciones estacionarias, el cambio de la
concentración de o=ígeno disuelto con respecto al tiempo en el
circuito Jdc2dtKC, es igual a la tasa de respiración JV7*=KC. Con estainformación y con la diferencia de concentraciones de
o=ígeno en el bioreactor, en condiciones estacionarias, es posible
conocer el coeciente !olum?trico de transferencia de o=ígeno.
9) 8E 05E1;@E71 L @EF:1;@7 8E 89;71
*ru/!: C% 3
D=a &e la e/erien"ia:
i"r!!r
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N%OR
A
TIEP
O
2@!ras3
A$s!r$an"
ia 286
nm3
O=
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). EDIOS DE CULTIVOS:− E=tracto de e!adura
− eptona
− E=tracto de malta− 9gar
− glucosa
− sacarosa
−
7. REACTIVOS:− /*H7
− J)HK* 17
− 0g17.#H*7
− 8)1 J9C:87 8:):;@719:C::C7K
− )a7H *)
− 1olución de sales
M. INSTRUENTOS
M.) ACTIVACIN CELULAR # DESARROLLO DEL INCULO
• 0atra< de '" ml.
• 9lgodón|
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• Fasa• 9gua destilada• 9
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pHmetro
Fasa y algodón Centrifuga ;ubos de ensayo
Capac$os de papel aluminio @ecipientes para recolección de muestra
IV. CRONO*RAIA DE ACTIVIDADES #QO TAREAS
ACTIVIDADES e"@aI&en0i;"a"i5n &e >ermen0a&!r ,
"ali$ra"i5n &e sens!res
)8 &e !"0u$re
Pre/ara"i!n &e "ur1a &e "ali$ra&! &e
DNS
7M &e !"0u$re
/re/ara"i5n &e me&i! &e man0en"i5n 7M &e !"0u$re
In!"ula"i5n en me&i! &e man0en"i5n 76 &e !"0u$re
Pre/ara"i!n &e me&i! &e a"0i1a"i!n 7H &e !"0u$reIn!"ula"i5n en me&i! &e >ermen0a"i5n 7H &e !"0u$re
Desarr!ll! e/erimen0al &e la "ine0i"a 8 &e n!1iem$re
Analisis &e $i!masa4 "ur1as &e "ali$ra&!
, anKlisis DNS
n!1iem$re
ACTIVIDADES
Tareas e"@aPre/ara"i5n &e /re in>!rme +%3 2&"2&Cali$ra"i5n &e sens!res &- 2&"2&•
Pre/ara"i5n &e rea"0i1!s DNS , !$0en"i5n &e|
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la "ur1a &e "ali$ra"i5n.• Pre/ara"i5n &el me&i! &e man0en"i5n aermen0a"i5n ,
es0erilia"i5n &e me&i! l=ui&! /ara "in?0i"a
&e "re"imien0! mi"r!$ian!.
*+2&"2&
• Es0erilia"i5n &e ma0eriales &e 1i&ri!
ne"esari!.
• De0ermina"i5n &e "ur1as &e "ali$ra"i5n
&e 0?"ni"as anal=0i"as.
• In!"ula"i5n &e me&i!s , se
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ANEOS:
). CALCULOS DE LOS VOLUENES DE ACTIVACION #
ERENTACION:
Se sa$e ue:
V f =4
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7. CALCULO DE LAS CONCENTRACIONES DE BIOASA EN LAACTIVACION # ERENTACION:
El asa $a"0eri!l5ermen0a"i5n es .7 &e nues0r! me&i! &e a"0i1a"i5n &esea&!.
" 1
V 1="
2V
2
" 1=0.22.4 L
0.3 L =1.6 g/ L -Y D!n&e C) es la "!n"en0ra"i5n al ;nal &e
la a"0i1a"i5n.
P!r l! 0an0! el 0iem/! &e a"0i1a"i5n serK
1.6=0.033 e0.37 t
t =10.5horas Tiem/! &e a"0i1a"i5n
ue&an&!:
% 0=0.2
g
l al iniciodela fermentacion
M. CALCULOS PARA:
EDIO DE ANTENCION: VOL F mL
|
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NUTRIENTECONCENTRAC
ION 2
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x&0.05 L
x=0.05∗10
1=0.5g
EDIO DE ACTIVACION:
VOLUEN M ml
NUTRIENTE CONCENTRACION 2
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SOLUCIONES DE SALES:
5g&1 L
x&0.3 L
x= 0.3∗51
=1.5 g
EDIO DE ERENTACION:
ara encontrar las cantidades necesarias para el medio de fermentaciónse necesitaron los siguientes datosD
ELEENTO PESOOLECULAR
2
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6. CALCULO DEL TIEPO DE TRANSICION , S>:
% 0
V 0
eut = * ( Sf )((xs ) t +S0V 0
(x
s + %
0V
0
D!n&e:
% 0=1.8g / L &e$i&! a la >ase la< n! se lle
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estequometricamente equi!alente al consumo de "* y @VX& J 4iec$ter,et al., &+&K. 1in embargo , si la glucosa en la alimentación e=cede lacapacidad respiratoria de la le!adura J Cooney, et al., &++#K se obser!auna ligera tendencia de incremento en el coeciente respiratorio,
comportamiento.
os
Bujos metabólicos in!olucrados en la producción de etanol permiten laestimación de las concentraciones de dic$o metaboli
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reproduciendo m>s cercanamente los !alores e=perimentadosencontrados.
|
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